Способ приготовления противопастереллезной вакцины

Способ приготовления противопастереллезной вакцины

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О

О х (П ( б

ЮЗ СОВЕТСКИХ

ЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК

СУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1) 4844868/1З

2) 21.05.90

) 30.1293 Бел йя 48-47

1) Всесоюзный научно-исследовательский ящуринститут; Государственная днепропетровская офабрика

2) Дудников АИ:, Чамков Н.С„Савельев ВЮ„МиВЗ; Шипилов В.И.; Павленко В.С„Душук

Азарян СЛ„Демченко ЕФ„Скабин ВЯ„Левиця ПГ„Хреновский ВЛ„ Сухарев О.И:„Игнатьев С.В.

) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРОТИВОСТЕРЕПЛЕЗНОЙ ВАКЦИНЫ

Использование: ветеринарная микробиология, технологиц повышение иммуногенности антиых препаратов. Сущность изобретении матрое расплодки вакцинных штаммов Rastenrdla (19) (11) И339О92 Al (51) 5 А61К39 192 А61К39 39 пМобда выращивают в реакторе в течение 15 ч при температуре 36 — 37 С с постоянным перемешиванием и подачей стерильного воздуха. Полученную культуру концентрируют центрифугированием. Концентрат разводят до 20 млрд/мл микробных тел и инактивируют формалином в течение

24 ч. Антиген смешивают в равном соотношении с масляной фракцией, содержащей полиэтилсилоксановую >KHQKOcT6 и flBHoAHH в cooTHoUJQ: 83: 1 7.

Полученная вакцина является стойкой эмульсией белого цвета или с желтым оттенком, вязкой консистенции. При длительном хранении допускается отслоение масляной основы на 05 — 1 см, которое устраняется тщательным встряхиванием флакона с вакциной 2 табл.

1839092

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано в научно-исследовательской работе и биологической промышленности при разработке и производстве средств специфической профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных.

Известно, что физические (вязкость, температура застывания, стабильность) и биологические (иммуногенная активность, реактогенность) свойства вакцин во многом зависят от их формы и состава. В ветеринарной практике обычно используют сорбированные и эмульсионные вакцины.

Известен способ приготовления сорбированной противопастереллезной вакцины, включающий осаждение смеси культур пастерелл восьмисуточного и двухсуточного роста 10 -ным раствором алюминиевых квасцов и инактивацию 0,16-0,18g,-ным формалином в течение 6 сут. (1).

Недостатком вакцины, приготовленной в соответствии с данным способом. является непродолжительность иммунитета у вакцинированных сельскохозяйственных животных, при этом прививки производятся двукратно в относительно высоких дозах, особенно для телят: 50 мл — первая прививка. 10 мл — вторая.

Указанный недостаток устранен в известном способе приготовления эмульсионной противопастереллезной вакцины, включа|ощем смешивание в равном соотношении концентрата инактивированного бактериального антигена с адьювантом, содержащим в качестве масляной основы минеральное масло и в качестве эмульгатора ланолин при соотношении 83:17, и последующее эмульгирование полученной смеси (2).

В качестве масляной основы обычно использовали следующие минеральные масла: масло вазелиновое медицинское, ГОСТ

3164 — 52; масло парфюмерное, ГОСТ 4225-75; вакцинное масло (Ярославский нефтемаслозавод им, Д. И. Менделеева).

Данный способ взят в качестве прототипа как наиболее близкий к заявляемому по технической сущности и достигаемому результату при использовании.

Недостатки способа-прототипа состоят в том, что в настоящее время вакцинное масло не производится в промышленных масштабах. а вакцины, изготовленные на вазелинов м или парфюмерных маслах, о6ладаюг повышенной вязкостью, что существенно затрудняет процесс массовой вакцинации сельскохозяйственных животных против пастереллеза.

Кроме того, препараты, полученные способом-прототипом, обладают сравнительно невысокой иммуногенной активностью.

Целью изобретения является повышеwe иммуногенной активности, снижение вязкости и реактогенности препарата.

10 (и-3-12)

Поэтилсилоксановая жидкость бесцветна и прозрачна, химически инертна, взрыво40 безопасна, нетоксична, не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки, Она растворима в ароматических и хлорированных углеводородах, не растворима в низших спиртах и воде.

Отличительной особенностью полиэтилсилоксановой жидкости является ее хорошая совместимость с минеральными маслами. Жидкость застывает при температуре ниже -б0 С и сохраняет свойства при температуре 150 С. Она не содержит механических примесей, имеет концентрацию водородных ионов (pH) водной вытяжки 6-7.

Для изобретения наиболее целесообразной является полиэтилсилоксановая жидкость марки ПЭС-З, Жидкость марки ПЭС-3 характеризуется вязкостью при 20 С 14 — 17 сСт. плотностью при 20"С 0,95 — 0,97 г/см, Известно использование полиэтилсилоксановой жидкости в приборо- и станкостроении в качестве антифризных присадок

Это достигается тем, что в известном способе приготовления противопастереллезной вакцины, включающем операции смешивания в равном соотношении инакти15 вированного бактериального антигена с адъювантом, содержащим масляную основу и эмульгатор в соотношении 83:17, и последующего эмульгирования полученной смеси, в соответствии с изобретением в

20 качестве масляной основы используют полиэтилсилоксановую жидкость.

В качестве эмульгаторов можно использовать эмульгаторы второго рода — сорбитаноолеат (Спан — 80), пентазритритоолеат, 2 -> эмульгатор ВНИИЖ, ланолин и др„образующие обратные эмульсии.

Полиэтилсилоксановую жидкость готовят в соответствии с требованиями (3).

Полэтилсилгксановая жидкость предЖ ставляет собой полимер линейной структуры общей формулы

1839092 к минеральным маслам и в легкой промышленности в качестве пластификаторов (4).

По результатам опытов на лабораторных и сельскохозяйственных животных обнаружены новые свойства полиэтилсил; оксановой жидкости: не разрушать белко вые антигены. способность выступать в ка: :честве дисперсной среды в эмульсиях, обладать низкой реактогенностью и повышать иммуногенную активность противопастереллезной вакцины.

При изучении физических свойств ,эмульсий на основе полиэтилсилоксановой жидкости (стабильность, вязкость) с различ, ными эмульгаторами установлено, что из из вестных и получаемых в СССР эмульгаторов наиболее подходящими являются ланолин и

,сорбитаноолеат (5).

Таким образом, введение в состав про :тивопастереллезной вакцины полиэтилси- 2 локсановой жидкости в качестве масляной основы придает иммунизирующему препа, рату новые свойства.

Пример 1. Матровые расплодки вак,цинных штаммов Pasteurella Multaclda вы- 2 ращивают в реакторе в течение 15 ч при температуре 36-37 С с постоянным перемеиванием и подачей стерильного воздуха. о окончании выращивания определяют рН концентрацию выращенных пастерелл, 3 икроскопируют и делают высевы на МПА, ПБ и МППБ для последующего подтвержения чистоты роста. Накопление микроных клеток в 15-часовой культуре обычно оответствует 19 млрд/мл. Выращенную 3 ультуру охлаждают до 15 С и концентриру- т центрифугированием. Концентрат разодят до 20 млрд/мл микробных тел на

/15 М фосфатно-буферном растворе и нактивируют формалином в течение 24 ч 4 ри 3? С.

По окончании инактивации суспензию хлаждают до 20 С. После проверки стеильности и безвредности инактивирован-! ую бактериальную суспензию используют 4 ля изготовления эмульсионной вакцины. ля этого инактивированный бактериальый антиген с содержанием 20 млрд/мл икробных тел смешивают путем механиче кого диспергирования в равном соотноше- 5 ии с масляным адъювантом, содержащим олиэтилсилоксановую жидкость в качестве, асляной основы и эмульгатор безводный ланолин в соотношении 83:17. Для пригот вления адъюванта ланолин предварительно 55 сплавляют в автоклаве или сухожаровом кафу при 90 С, Затем смесь полиэтилсил, ксановой жидкости и ланолина загружают в реактор с мешалкой. Смесь стерилизуют

4 мин при 110 С, после чего ее быстро охлаждают до 15 С. Затем осуще""òâëëþò предварительное смешивание. Для этого к полученному адьюванту по стерильному трубопроводу перекачивают необходимое

5 количество бактериального антигена и включают механическую мешалку «а 1 ч со скоростью 150 об/мин. В последующем мешалка включается каждые 60 лин на 10 мин, Продол жительность предварительного

10 смешивания бактериального антигена с адъювантом в реакторе 15 ч при температуре 15 С.

Затем дальнейшее эмульгиронание вакцины ведут на коллоидной мельнице J I/10—

15 75 PS, позволяющей вести паточное приготовление серии вакцины и обеспечивающей ее стерильность, Вакцинная эмульсия из коллоидной мельницы через спусковую трубу поступает непосредствен0 но на расфасовку.

Полученная вакцина является стойкой эмульсией белого цвета или с желтым оттенком, вязкой консистенции, рН 72 — 7,6. При длительном хранении допускается отслое5 ние масляной основы на 0,5 — 1,0 см, которое устраняется тщательнь,м энергичным встряхиванием флакона с вакциной, Срок годности вакцины 12 глесяцев сс дня изготовления.

0 Вязкость вакцины определяли с помощью капиллярного вискозиметра ВПЖ-4 с диаметром капилляра 1,47 мм по ГОСТ

33 — 36 при температуре 20 С, Кинематическую вязкость выражали в мм /c, 5 Текучесть вакцин оценивали путем визуального наблюдения при допустимой температуре хранения 1 — 1 0 С.

Пример 2. Иммуногенную активность противопастереллезных вакцин определя0 ли путем качественной оценки в опытах на взрослых кроликах массой,2,5-3 кг. Препараты вводили внутримышечно однократно пяти кроликам в дозе 1,5 мл в области бедра.

Через 30 дней после вакцинации всем при5 витым и трем контрольным животным вводили заранее подтитрованную смертельную дозу вирулентного штамма пастерелл.

Иммуногенную активность оценивали путем установления процента защиты.

0 Безвредность вакцины определяли на взрослых кроликах массой 1,5-2 кr и на белых мышах массой 8 — 20 r. На каждый препарат использовали 2 кролика и 5 белых мышей, Вакцину вводили внутримышечно в дозе 3 мл (по 1,5 мл в области каждого бедра; мышам подкожно в области спины по 0,3 мл).

Безвредность оценивали по клиническому состоянию животных и по еыживаемости. Безвредной считали вакцину, егли

1839092 напряженный иммунитет, чем вакцина известного состава.

Таблица 1

Влияние состава масляного адьюванта на вязкость эмульсионной противопастереллезной вакцины

Примечание: соотношение антигена и масляного адьюванта 1: 1

Таблица2

Влияние состава противопастереллезной вакцины на ее иммуногенную активность и безвредность

Безв е ность

Иммуногенная активность

Состав вакцины, мас. $

Кролики

Белые мыши

Из 36 серий вакц. процент защиты в среднем составил 77,8, при этом со 100 защитой изготовлено 16,7 g,.

Все серии выпущены послепе вой и ове ки

ПЭС -3 41,5

Ланолин 8,5

Антиген 50 (предлагаемый состав) Безвредна

Безвредна

Из 38 серий процент защиты в среднем составил 73.2 7, при этом со 100,4 защитой изготовлено 5,3, а 13,2 g, серий подвергались повторной прове ке

Вакцинное масло

Ланолин

Антиген (прототип) 41,5

8,5

Безвредна

Безвредна все животные оставались живыми и выглядели клинические здоровыми в течение 10 дней после введения препаратов.

H p и м е р 3. Физические и биологические свойства предлагаемого состава вакцины оценивали при сравнении с прототипом. В табл. 1 и 2 приведены результаты испытаний противопастереллезной эмульсионной вакцины разных составов.

Как видно из табл. 1, вязкость эмульсион ой вакцины предлагаемого состава почти в 2 раза меньше, чем у вакцины с известным составом. Кроме того, предлагаемая вакцина в отличие от вакцины, полученной способом-прототипом, обладает текучестью при 1-10 С, что не потребует ее предварительного подогрева перед применением.

Иэ табл. 2 следует, что вакцина предлагаемого состава безвредна и создает более

Таким образом, предложенный адью5 вант для противопастереллезной вакцины повышает иммуногенность вакцины, обладает слабой реактогенностью и низкой вязкостью, что позволяет испольэовать его в промышленном производстве вакцины.

10 (56) 1. Авторское свидетельство СССР

М 94044, кл. А 61 К 39/00, 1951.

2. ТУ 46-771-72.

3. ГОСТ 13004-77.

15 4. Каталог "Кремнийорганические продукты, выпускаемые в СССР", М.: Химия, 1975.

5. Абрамэон А. А. и др. Поверхностно-активные вещества, Справочник. М.: Химия, 20 1979, с. 376.

1839092

Формула изобретения.

Составитель В.Березин

Техред М.Моргентал

Корректор С.Юско

Редактор Л.Павлова

Заказ 3399 Тираж

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб„4/5

Подписное

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРОТИОПАСТЕРЕЛЛЕЗНОЙ ВАКЦИНЫ, вклюающий смешивание в равном оотношении инактивированного бактерильного антигена с адъювантом, содержаим масляную основу и эмульгатор в соотношении 83; 17. и последующее эмульгирование полученной смеси, отличающийся тем, что, с целью повышения иммуногенной активности, снижения вязкости и реактогенности препарата, в качестве масляной основы используют полиэтилсилоксановую жидкость.