Штамм вируса эфемерной лихорадки крупного рогатого скота для контроля иммуногенности вакцины

Штамм вируса эфемерной лихорадки крупного рогатого скота для контроля иммуногенности вакцины

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии Целью изобретения яапяется штамм вируса эфемерной лихорадки крупного рогатого скота для контроля иммуногенности вакцины Цель достигается использованием штамма вируса эфемерной лихорадки крупного рогатого скота ВГНКИ N 80. Штамм вызывает у крупного рогатого скота буйволов и сайгаков заболевание с характерными для эфемерной лихорадки признаками. Выращивается на перевиваемой линии клеток ВНК-21.

ОТА ДЛЯ ется на перевиваемой ликии клеток ВНК-21.

1839188

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой новый штамм вируса эфемерной лихорадки.

Известно несколько штаммов вируса эфемерной лихорадки (ЭЛ) в зарубежных странах: в Южной Африке выделены штаммы В 57; 73/1 (Theodoridis et al,//

Onderstepoort J, Vet. Res. — 1973, 40, 3, 7782), в Японии — Ymaguchy (inaba// Bull. Off, Int. Eplz. — 1973, 79, 627-673).

Эти штаммы вируса ЭЛ вызывают заболевание с характерными для ЭЛ признаками, но не размножаются без предварительной адаптации в культуре клеток. Для адаптации их к культуре клеток требуется предварительное размножение в мозгу односуточных мышей, а затем 2-3кратное пассирование в культуре клеток, После таких пассажей штаммы вируса теряют патогенность для KPC и становятся непригодными для контроля иммуногенности вакцин, Известен также штамм ВВ7721 (прототип) вируса ЭЛ, выделенный в Австралии (Tzipori// Austr. Vet, J. — 1975, 51, 5), Штамм ВВ7721, выбранный в качестве прототипа, патогенен для KPC и используется в качестве контрольного при испытании иммуногенности вакцины против эфемерной лихорадки, Недостатком штамма является то, что он не размножается в культурах клеток, нестабилен, хранится в виде вирулентной крови в жидком азоте и это усложняет его транспортировку.

B нашей стране до настоящего времени не был выделен еирулентный и иммуногенный штамм вируса ЭЛ, что затрудняло разработку средств специфической профилактики этого заболевания.

Целью изобретения является получение вирулентного штамма для KOHTpoll$I иммуногенности вакцины против эфемерной лихорадки крупного рогатого скота, Цель достигнута путем выделения вируса на крупном рогатом скоте от больных животных в период эпизоотии эфемерной лихорадки в Монголии, проведения 5 последовательных пассажей на телятах 8-10-месячного возраста и адаптации к культуре клеток ВНК-21.

Полученный штамм М 80/M имеет преимущества перед известными зарубежными штаммами в том, что обладает более высокой патогенностью для крупного рогатого скота, что проявляется более коротким инкубационным периодом и более длительным течением заболевания, более выраженными клиническими признаками.

Кроме того, в отличие от аналогов и прототипа, новый штамм без адаптации размножается в культуре клеток и может храниться

55 в лиофилизированном состоянии при температуре 4 С.

Штамм N 80/M хранится в коллекции лаборатории "Музейные штаммы микроорганизмов" Научно-исследовательского сельскохозяйственного института и имеет следующую характеристику.

Морфологические свойства. Вирус штамма М 80/M представлен частицами пулевидной формы. Средний диаметр основания вириона равен 90 нм, средняя длина—

140 нм. Вирус содержит P HK и имеет липидсодержащую мембрану с поверхностными шипиками, Толщина мембраны вириона 12 нм, высота поверхностных шипиков 16 нм, диаметр шипиков 5,5 нм, диаметр внутреннего компонента (РНК) 14 нм. Плавучая плотность в градиенте хлористого цезия равна 1,20 г/мл, Вирулентные свойства(Рьмь+ признак).

При внутривенном заражении крупного рогатого скота, буйволов и сайгаков в дозе

10000-20000 ТЦД5о вирус этого штамма вызывает резкий подъем температуры тела (до

40,7 — 42 С) на третьи-пятые сутки после введения, угнетение с отказом от корма, истечение из глаз, носа, иногда слюнотечение.

Через одни-двое суток после подъема температуры тела появляется хромота, больные животные обычно лежат и неохотно поднимаются. Часто ртмечают дрожание мышц эаднебедренной группы или всего тела.

Культуральные свойства. Вирус штамма

М 80/М выращивается в культуре клеток

ВНК-21, вызывает хорошо выраженное цитопатогенное действие (ЦПД) на 3 — 6 сут после заражения. В стационарных культурах клеток ВНК-21 вирус накапливается в титрах 10 -10 ТЦДьо/см, а в роллерных культурах клеток ВНК-21 в титрах10 — 10

ТЦД5о/см . Размножается без предварительной адаптации, вызывает ЦПД в культурах клеток Чего и CV (TCvего + ТСсч + признаки) и способен размножаться при температуре 41 С (rct4> + признак), Антигенные свойства. При подкожном и внутривенном введении крупному рогатому скоту вызывает образование вируснейтрализующих, комплементсвязывающих и преципитирующих антител (Ag + признак).

Иммуногенные свойства. Штамм в дозе

1000 ТЦД5о создает стойкий иммунитет у телят (lm + признак).

Сохраняемость. B нативном состоянии вирус штамма М 80/М не снижает своей активности в течение 14 дней при 4 2 С в лиофилиэированном виде в присутствии 3 пептона, 2 $ лактозы и 0,1 поливинилпирролидона, его активность остается на исход88

Ф о р м у л а и э о б р е т е н и я крупного рогатого скота ВГНКИ N 80 для

Штамм вируса эфемерной лихо контроля иммуногенности вакцины.

J !

Редактор

Заказ 3404

Составитель Е, Гусева

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор С. Юско

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

5 18391 ! ном уровне при 4 +. 2 С в течение 12 месяцев, при минус 40 — 70 С 3 года.

Заявляемый штамм успешно использовался в межведомственных комиссионных испытаниях по проверке напряженности и длительности иммунитета у крупного рогатого скота, привитого сухой культуральной вирусвакциной против эфемерной лихорадки.

Пример. Для непосредственного 10 использования лиофилизированный вирус заявляемого штамма разводят физраствором 1:10 и титрованием в культуре клеток

Чего или ВНК-21 определяют его биологическ ю активность(она должна быть не менее 15

10 ТЦДцо/смз) и затем вводят его по 2 см внутривенно вакцинированным и контрольным животным; В ответ на введение вируса у контрольных (невакцированных) животных развивается на 4 — 6 сут. заболевание с выраженными, характерными для эфемерной лихорадки клиническими признаками (гипертермия, угнетение с отказом от корма, хромота, дрожание мышц заднебедренной группы или всего тела). 25

Для получения очередной серии вирулентного вируса берут двух телят 8-12-месячного возраста и заражают их

1 ! внутривенно вирулентным вирусом пред- 30

ылущей серии. На высоте температурной р:кции от телят берут кровь в раствор гепарина из расчета 2 ед его на 1 мл крови, ее быстро охлаждают до 4 С и вносят по 5 см в 3 — 4 матраса с монослойной культурой кле- 35

1 ток ВНК-21, в которые после удаления среды роста и ополаскивания раствором

Хенкса вносят по 50 см поддерживающей э среды.

После двухчасового контакта при 37

2 С инокулят удаляют, монослой трехкратно промывают раствором Хенкса и заливают

100 см поддерживающей среды Игла с 1 f, сыворотки крупного рогатого скота. Матрасы продолжают. инкубировать при 37 + 2 C до появления ЦПД на 4 — 6 сутки. При поражении 60 — 70ф, клеток вируссодержащий материал собирают и заражают им сосуды с круговым монослоем. Культуральную вируссодержащую жидкость, разведенную 1. 10 поддерживающей средой, вносят по 300 см в трехлитровые сосуды с круговым монослоем культуры клеток BHK-21, из которых удалена ростовая среда. Сосуды герметически закрывают резиновыми пробками и помещают в роллерный аппарат, Выращивание вируса проводят при 37 ++

2 С при скорости вращения сосудов 10-12 об/ч. Сбор вируссодержащего материала иэ сосудов проводят через 3 — 6 сут. при поражении клеточного монослоя на 80 — 90 (,, Полученный вируссодержащий материал смешивают со стабилизирующей средой, состоящей иэ Зф, пептона, 2 лактоэы и .

0,1 поливинилпирролидона, и лиофилизируют, Вирулентный штамм М 80/М вируса ЭЛ депонирован под N. 80 в ВГНКИ. Штамм может быть использован для контроля иммуногенности вакцины против эфемерной лихорадки. (56) Tripori S. et al. Studies on the

development of a vaccine against bovine

ephemeral fever. Austr. Vet, J. — 1975, 51, р,5,