Способ профилактики пролиферативных изменений в стекловидном теле в эксперименте

Способ профилактики пролиферативных изменений в стекловидном теле в эксперименте

Реферат

 

Использование: в офтальмологии, при профилактике пролиферативных изменений в стекловидном теле в эксперименте. Сущность изобретения: в стекловидное тело вводят 0,1 мл 2,4% -ного раствора эуфиллина однократно, что позволяет снизить осложнения и повысить эффективность за счет стабилизации клеточных мембран.

Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для лечения заболеваний глаз, сопровождающихся пролиферативными изменениями в стекловидном теле. Подобные изменения встречаются при первичной отслойке сетчатки, диабетической пролиферативной ангиоретинопатии, травматических повреждениях глаз. Однако проблема лечения этих тяжелых заболеваний до настоящего времени недостаточно разработана.

Известно, что для лечения пролиферативной диабетической ретинопатии используются парабульбарные инъекции лекозима в дозе 3-4 Fip в 1 мл раствора по 5-10 инъекций на курс (N 1388029, А 61 F 9/00, 1988, Н. Н. Пивоваров, С. В. Глуходед "Способ лечения пролиферативной диабетической ретинопатии"). Для торможения пролиферации введенных в стекловидное тело фибробластов mvitro используется трипсин (Wiedemann P. , etal. Vitreons Stimulates Proliferation of Fibroblasts and Retinal Pigment Epithelial Cells. Exp. Eеl Res, 1985, 41, 619-628). Эндовитреальное введение цитостатических препаратов (флюороурацил, дауномицин (используется в клинике для улучшения результатов витрэктомии (Wiedemann P. , Evans P. Y. , Wiedemann R. , Meyer - Schwikerath R. , Heimann H. A. fluorescein Angiographic study of patients with proliferative vitreoretinopathy treated by vitrectomy and intraocular daunomycin. Jnt. Ophthalmol. , 1989, 13, 211-216).

Однако вышеперечисленные препараты либо оказывают недостаточное воздействие на развивающуюся пролиферацию, либо, оказывая выраженный цитостатический эффект, становятся токсичными для внутриглазных тканей в случае незначительного превышения дозы введенного вещества.

Целью изобретения является профилактика и торможение развития пролиферативных изменений в стекловидном теле, вплоть до полного устранения.

Поставленная цель достигается путем введения 0,1-0,15 мл 2,4% раствора эуфиллина в стекловидное тело глаза кролика.

Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами.

П р и м е р 1. Берут из краевой вены уха кролика кровь. Получение суспензии монокуклеарных клеток.

Суспензию мононуклеарных клеток выделяли с помощью седиментации в одноступенчатом градиенте (Ficall-Hypague) Вбуит, 1968). 15-20 мл крови кролика разводили раствором Хенкса в соотношении 1 объем крови и 2 объема раствора Хенкса. Разведенную кровь с помощью шприца осторожно наслаивали на раствор фиколл-верографина (плотность раствора 1,077 г/см³ (из расчета: 3 мл разведенной крови на 1 мл раствора Фиколл-верографина, и центрифугировали 45 мин при 400 G в центрифуге с горизонтальным ротором. После центрифугирования мононуклеарные клетки, сконцентрированные в интерфазном кольце, переносили в силиконизированные стаканы и трижды отмывали раствором Хенкса в течение 10 мин при 200 G. Подсчет выделенных клеток осуществляли в камере Горяева после разведения их в меланжере 3% -ной уксусной кислотой. Рабочая концентрация клеток составляла 5 х 10⁶/мл, разведение производили средой 199 с добавлением антибиотиков: 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина.

Получение супернатантов, содержащих лимфокины. Лимфоциты (5 х 10⁶/мл) или лейкоциты (25 х 10⁶/мл) культивировали во флаконах 3 ч при 37^оС в присутствии поликлонального стимулятора ФГА ("Difco-P", США) в концентрации 8-10 мкг/мл. Затем клетки переносили в силиконизированные стаканы и дважды отмывали от ФГА (10 мин при 200 G) средой 199. Отмытые клетки вновь помещали во флаконы со свежей средой инкубации (без ФГА) и культивировали 18-21 ч при 37^оС в среде 199 с антибиотиками. По истечении указанного времени клеточную суспензию центрифугировали в течение 15 мин при 200 G. Осадок клеток отбрасывали, а содержащий лимфокины супернатант использовали для дальнейшей работы.

Полученный супернатант вводили в стекловидное тело в количестве 0,1 мл (20 мкг) вещества по направлению к сетчатке. Не меняя иглы вводили 0,1 мл 2,4% раствора эуфиллина в том же направлении.

Через 24 ч при офтальмоскопическом исследовании не определялось выраженных изменений в стекловидном теле, кроме небольшой деструкции по ходу раневого канала. Не определялось изменений также и при исследовании глаз через 48 ч 0,5 сут, 14 сут, 21 день, через 1 месяц.

П р и м е р 2. Берут из краевой вены уха кролика кровь. По описанной методике получают аутосупернатант из мононуклеаров периферической крови и вводят в стекловидное тело кролика 0,15 мл (25 мкг) вещества по направлению к сетчатке. Не меняя иглы вводят 0,1 мл 2,4% раствора эуфиллина в том же направлении. Через 24 ч при офтальмоскопическом исследовании не определялось выраженных изменений в переднем отрезке глаза и в стекловидном теле.

Через 48 ч обнаруживалось небольшое помутнение в слоях стекловидного тела, прилежащего к сетчатке, 1,5 мл в диаметре.

Облаковидные помутнения почти не увеличивались в размерах и рассасывались к 10 дню, оставляя после себя лишь легкие деструктивные изменения по ходу раневого канала.

П р и м е р 3. Контроль. Берут из краевой вены уха кролика кровь. По описанной методике получают бесклеточный супернатант из мононуклеаров периферической крови и вводят в стекловидное тело кролика 0,1 мл (20 мкг) вещества по направлению к сетчатке. При офтальмоскопическом исследовании через 24 ч было обнаружено: ригидность зрачка, небольшое расширение сосудов радужки и сетчатки. Рефлекс с глазного дна розовый. Через 48 ч сохранялось незначительное расширение перикорнеальных сосудов и ригидность зрачка. Наблюдался отек сетчатки с облаковидным помутнением в прилежащих слоях стекловидного тела. Аналогичное обнаружили также по ходу раневого канала до места введения. Максимальное развитие описанных изменений было зарегистрировано на 5 день с последующей стабилизацией на 7-е сут. С 10 по 30 сут наблюдали обратное развитие процесса.

На 30-е сут частично рассосали очаги на сетчатке, они приобрели более четкие контуры, произошла организация шварт в стекловидном теле с некоторым уменьшением их в размерах.

Предложенный способ применен в эксперименте на 5 кроликах (10 глаз). При этом лишь в 2-х случаях зарегистрировались минимальные пролиферативные изменения перед сетчаткой (пример 2), которые почти полностью исчезли через 7-10 дней.

Вышеописанные изменения характерны для пролиферации у больных с первичной отслойкой сетчатки, диабетической пролиферативной ангиоретинопатией, последствиями травм граза. Учитывая большую распространенность витрео-ретинальных пролиферативных изменений вопрос о профилактике и лечении пролиферативного процесса является чрезвычайно актуальным. К настоящему моменту не известно достаточно эффективных способов достижения этой цели. Предлагаемый нами метод показал свою высокую эффективность в эксперименте, не связан с дорогостоящей аппаратурой, разработкой новых препаратов и разработкой специальных методов его введения и может быть применен как интраоперационно при прямом его введении в стекловидное тело, так и в послеоперационном периоде с использованием неинвазивных для самого глаза методов электрофорез, субконьюнктивальные инъекции, аппликации).

Таким образом, простота воспроизведения метода, отсутствие необходимости специальных разработок и приготовлений для его применения, хорошая переносимость препарата всеми тканями глаза делают его весьма доступным и перспективным для клинического применения.

Эффективность предложенного способа лечения пролиферативных изменений в стекловидном теле глаза заключается в следующем: в отсутствии регистрации пролиферативных изменений в стекловидном теле по сравнению с контрольной группой; в простоте предлагаемой методики, не связанной с разработкой новых препаратов и специальных методов их введения.

(56) Р. Wiedemann etal. Int Ophthalm. , 1989, 13, р. 211-216.

Формула изобретения

СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В СТЕКЛОВИДНОМ ТЕЛЕ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ, включающий введение препарата в стекловидное тело, отличающийся тем, что, с целью снижения осложнений и повышения эффективности за счет стабилизации клеточных мембран, однократно вводят 0,1 мл 2,4% раствора эуфиллина.