Способ получения 1-алкил, 1-алкенил или 1-алкиниларил-2- амино-1,3-пропандиолов или их оптических изомеров, или фармацевтически приемлемых солей и альдегид в качестве промежуточного продукта в синтезе 1-алкил, 1-алкенил или 1- алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолов

Способ получения 1-алкил, 1-алкенил или 1-алкиниларил-2- амино-1,3-пропандиолов или их оптических изомеров, или фармацевтически приемлемых солей и альдегид в качестве промежуточного продукта в синтезе 1-алкил, 1-алкенил или 1- алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолов

Реферат

 

Использование: в качестве противовоспалительных средств. Сущность изобретения: для получения 1-алкинилпиридинил-2-амино-1,3-пропандиола. Пиридинилкарбоксальдегид конденсируют со сложным эфиром амидомалоновой кислоты с последующим в случае необходимости гидрированием полученного продукта или гидролизом. 2 с.п.ф-лы.

Изобретение относится к 1-алкил, 1-алкенил или 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолам формулы I RCH (OR₁)CHN(R₂R₃)P₄ где O S O R₅ -CH₃(CH₂)_m CC, CH₃(CH₂)_mCH=CH-, CH₃(CH₂)_mCH₂-CH₂-, -CH₂(CH₂)_nCC-, -CH₂(CH₂)_n CH= CH или -CH₂(CH₂)_n CH₂-CH₂-, где m = 3-15; n = 0-12; R₁ - водород или R₆, где R₆ - водород, алкил, алкокси, или OCH₂-; R₂ - водород или алкил; R₃ - водород, алкил или R₆, где R₆ - определен выше, R₄ - OR₇, где R₇ - водород или алкил, или СН₂OR₈, где R₈ - водород или R₆, где R₆ - определен выше, R₁ и R₈, взятые вместе с атомом кислорода, с которым они связаны, образуют группу формулы где R₉ и R₁₀ независимо являются водородом или алкилом.

Изобретение относится также к оптическим изомерам указанных соединений или их фармацевтически приемлемым солям, а также использованию этих соединений для лечения воспалительных состояний (поскольку они обладают способностью к ингибированию протеинкиназы С), для лечения псориаза и других кожных заболеваний, для лечения раковых заболеваний (поскольку указанные соединения обладают способностью к ингибированию роста опухолевых клеток), для лечения расстройств памяти, например, таких, как болезнь Альцгеймера, а также в качестве противогрибковых и антибактериальных средств, которые могут быть использованы как отдельно, так и в сочетании с адъювантами.

Предпочтительными 2-амино-1,3-пропандиолами настоящего изобретения являются соединения, в которых R₅; R₁, R₂ и R₃ - водород и R₅ - СН₃(СН₂)_mСН₂=СН₂ или CH₂(CH₂)_nCH₂= CH₂. Предпочтительными также являются соединения, где R представляет собой ; R₁ и R₂ - водород; R₄- ; R₅ - CH₃(CH₂)_mCC.

Изобретение также относится к соединениям формулы R₁CHO (1а), где , где R₅ - CH₃(CH₂)_m CC.

СН₃(СН₂)_mСН= СН, СН₃(СН₂)_mСН₂СН₂ или , где m = 3 - 15, n = 0 - 12, которые используются в качестве промежуточных соединений для получения 2-амино-1,3-пропандиолов.

Термин "алкил", используемый в описании и формуле изобретения, относится к прямому или разветвленному углеводородному радикалу, не являющемуся ненасыщенным и имеющему 10 атомов углерода. Примерами алкильных групп являются метил, этил, 1-пропил, 2-пропил, 1-бутил, 1-пентил, 3-гексил, 4-гептил, 2-октил, 3-нонил, 4-децил и т.п. Термин "алканол" относится к соединению, образованному при объединении алкильной группы и гидроксильного радикала. Примерами алканолов являются метанол, этанол, 1- и 2-пропанол, 2,2-диметилэтанол, гексанол, октанол и т. п. Термин "алкановая кислота" относится к соединению, образованному при объединении карбоксильной группы с атомом водорода или алкильной группой. Примерами алкановых кислот являются муравьиная кислота, уксусная кислота, пропановая кислота, 2,2-диметилуксусная кислота, капроновая кислота, октеновая кислота, декановая кислота и т. п. Термин "галоген" относится к группе соединений, включающей фтор, хлор, бром и йод. Термин "алканоил" относится к радикалу, образованному путем удаления гидроксильной группы из алкановой кислоты. Примерами алканоильных групп являются формил, ацетил, пропионил, 2,2-диметилацетил, гексаноил, октаноил, деканоил, и т.п. Термин "низший" может быть применен к любой из указанных групп, имеющих углеродный скелет и содержащих не более 8 атомов углерода.

Соединения настоящего изобретения, в которых отсутствует элемент симметрии, существуют в качестве оптических антиподов и их рацемических форм. Оптические антиподы могут быть получены из соответствующих рацемических форм с помощью стандартной техники оптического разделения, включая, например, разделение диастереометрических солей соединений, которые характеризуются присутствием основной аминогруппы и оптически активной кислоты, или соединений, которые характеризуются присутствием группы карбоновой кислоты и оптически активного основания, или путем синтеза из их оптически активных предшественников.

Настоящее изобретение включает в себя все оптические изомеры, их рацемические формы и геометрические изомеры, которые будут раскрыты в описании и формуле изобретения. Формулы соединений, представленные в настоящем описании, показывают, что они включают в себя все возможные геометрические и оптические изомеры.

Соединения настоящего изобретения, имеющие смежные хиральные центры, присутствуют в качестве диастереомеров и различаются как эритро- и трео-изомеры. Эритро-диастереомерами являются также соединения, которые могут стать мезоформой, т.е. оптически неактивной формой, благодаря тому, что они имеют элемент симметрии в одной из возможных конформаций, если один из неодинаковых заместителей замещается один другим. Трео-диастереомерами являются такие соединения, которые остаются энантиомером, т.е. оптически активным изомером, благодаря отсутствию элемента симметрии в одном из возможных конформаций, если один из неодинаковых заместителей замещается другим. Например, замещение аминогруппы эритро-2-амино-1,3-пропандиола (9а) настоящего изобретения гидроксильной группой образует мезо-1,2,3-пропантриол (9b), имеющий плоскость симметрии, проходящую через углеродный скелет молекулы, как показано ниже и замещение аминогруппы трео-2-амино-1,3-пропандиола (9с) настоящего изобретения гидроксильной группой образует энантиомер (9d), в котором элемент симметрии во всех конформациях, один из которых представлен формулой 9d Новые 1-алкил-, 1-алкенил- и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолы настоящего изобретения могут быть получены способами, проиллюстрированными в реакционных схемах А, В и С для ряда пиридинов, имеющих аралкильную боковую цепь. Указанные трансформации могут быть использованы при получении соединений настоящего изобретения, в которых арильной группой, среди прочих, является замещенный и незамещенный фенил, фурил, тиенил, изоксазолил, изотиазолил, и пирролил, тиазолил, и оксазолил, имеющий 1-алкильную, 1-алкенильную или 1-алкинильную боковую цепь.

Для получения 1-алкинилпиридинил-2-амино-1,3-пропандиола (7), где W и Х являются водородом, алкилом, алкокси, галогеном или трифторметилом, пиридинилкарбоксальдегид (2), в котором W и Х определены выше, а Y является галогеном, конденсируют со сложным эфиром амидомалоновой кислоты (3), где R₁₁ и R₁₂ являются алкилом, в целях получения пиридинилпропионата (4), где R₁₁ и R₁₂, Х и Y определены выше, который алкинилируют до получения алкинилпиридина (5), где R₁₁ и R₁₂, W и Х определены выше, n=3-15, который в свою очередь восстанавливают до пиридинил-1,3-пропандиола (6), где R₁₂, W и Х определены выше, а затем гидролизуют до соединения (7).

Конденсацию карбоксальдегида (2) и малоната (3) проводят в эфирном растворителе в присутствии третичного амина. Примерами таких растворителей могут быть диэтиловый эфир, 1,2-диметилоксиэтан, 2-метоксиэтиловый эфир, диоксан и тетрагидрофуран. Примерами третичных аминов могут служить пиридины (пиридин, пиколин, лутидин и коллидин) и триалкиламины (триметиламин, триэтиламин, трипропиламин). Предпочтительным растворителем является тетрагидрофуран, а предпочтительным третичным амином является триэтиламин. Поскольку температура конденсации не является критической, то эту реакцию предпочтительно осуществлять приблизительно при комнатной температуре (25^оС), хотя указанная реакция может протекать как при пониженных температурах (около 0-25^оС), так и при повышенных температурах (от около 25^оС до точки кипения реакционной смеси).

Реакцию алкинилирования осуществляют путем обработки галогенпиридина (4) алкином (13) где W и n определены выше, в акцепторе кислоты, например, ди- или триалкиламино, таком, как диэтиламин, дипропиламин, триметиламин, или трипропиламин, и в присутствии дихлорида бис(трифенилфосфин) палладия/иодида меди при температуре около 0-75^оС. Предпочтительным акцептором кислоты является триэтиламин. Предпочтительной температурой алкилирования является температура около 50-60^оС. При этом может быть использован эфирный растворитель. Такими эфирными растворителями являются диэтиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, 2-метоксиэтиловый эфир, диоксан и тетрагидрофуран. Предпочтительным растворителем является тетрагидрофуран.

Реакцию восстановления алкилпиридинилпропионата (5) в пропандиол (6) осуществляют с помощью щелочного борогидрида в эфирном растворителе при температуре восстановления в пределах около 0-50^оС. Такими борогидридами щелочных металлов являются борогидрид кальция, борогидрид лития, борогидрид калия и борогидрид натрия. Примерами эфирных растворителей являются диэтиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, 2-метоксиэтиловый эфир, диоксан и тетрагидрофуран. Предпочтительной является восстановительная система борогидрида лития или борогидрида кальция в тетрагидрофуране при температуре около 0-25^оС.

Гидролиз карбоксамида (6) в аминодиол (7) может быть осуществлен с помощью стандартной гидролизной техники. Например, карбоксамид (6) может быть гидролизован с помощью гидроокиси щелочного металла, например гидроокиси лития, натрия или калия, в водном алканоле, таком, как метанол, этанол или 1- или 2-пропанол, при температуре гидролиза около 0-100^оС.

В целях получения 1-алкилпиридинал-2-амино-1,3-пропандиола (9), где W, Х и m определены выше, 1-алкинилпиридинил-2-амино-1,3-пропандиол (6) гидрогенизируют с получением 1-алкинилпиридинил-2-амидо-1,3-пропандиола (8), который превращают в 1-алкилпиридинил-2-амино- 1,3-пропандиол (9).

Гидрогенизацию осуществляют путем обработки алкина (6) водородом при атмосферном давлении приблизительно до 60 фунт/кв. дюйм (413,6 кПа), предпочтительно около 40 фунт/кв.дюйм (275,7 кПа), в присутствии металлического катализатора, например платинового, палладиевого, родиевого или рутениевого катализатора без подложки или нанесенного на подложку из угля или карбоната кальция, при этом предпочтительным является палладированный уголь, и в присутствии алканола, например, метанола, этанола, или 1- или 2-пропанола, предпочтительно этанола, при температуре гидрирования около 25-50^оС, предпочтительно при 25^оС.

Превращение пиридиниламидодиола (8) в пиридиниламидодиол (9), т.е. гидразинолиз (8) проводят с использованием гидразина в свободной или гидратированной форме, в алканоле, например, таком, как метанол, этанол или 1- или 2-пропанол, при температуре от около 25^оС до температуры перегонки реакционной смеси. Предпочтительным растворителем является этанол. Температура гидразинолиза предпочтительно является температурой перегонки реакционной смеси.

Альтернативно получение систем 1-алкинил- и 1-алкилпиридинил-2-амино-1,3-пропандиола, т. е. систем формул (7 и 9) соответственно, где W, Х и n определены выше, может быть достигнуто путем алкинилирования пиридинилкарбоксальдегида (2), где W, Х и Y определены выше, в алкинилпиридинилкарбоксальдегид (10), где W, Х и m определены выше, с последующей конверсией пиридинилкарбоксальдегида (10) в пиридинилпропионат (5), где R₁₁, R₁₂, W, Х и m определены выше, и гидрогенизацией алкинилпиридина (5), где R₁₁, R₁₂, W, Х и m определены выше, в соединение (11), где R₁₁, R₁₂, W, Х и m определены выше. Реакция алкинилирования, конверсия и гидрогенизации, т.е. трансформаций 2 в 5 и 11 посредством 10, осуществляют способами, в основном аналогичными соответствующим трансформациям 4 в 5, 2 в 4 и 6 в 8.

Алкил 1-алкиопиридинилпропионат (11), где R₁₁, R₁₂, W, Х и m определены выше, может быть восстановлен до 1-алкилпиридинилпропандиол (8) способом, в основном аналогичным способу, используемому для восстановления алкилпиридинилпропионата (5) в пропандиол (6).

Получение ряда 1-алкинилпиридинил-2-амино-1,3-пропандиола, т.е. ряда соединений, представленных формулами 5, 6 и 7, может быть также достигнуто путем восстановления алкилпиридинилпропионата (4), где R₁₁, R₁₂, W, X и Y определены выше, в пиридинилпропандиол (12), и алкинилирования полученного таким образом пиридинилдиола (12) в алкинилпиридиндиол (6). Как было указано выше, амидопропандиол (6) превращают в аминопропандиол (7) путем гидролиза. Аналогично, восстановление 4 в 12 и алкинилирование 12 в 6 осуществляют в основном таким же способом, как и тот, что был использован для конверсии 5 в 6 и 4 в 5.

Производные алкинилпиридинил-2-амино-1,3-диола (7) получают из амидопропандиола (6) путем ацилирования (6), где R₁₂, W, Х и m определены выше, в амидодиацилоксипропан (15) где, R₁₂, R₁₃, R₁₄, W и m определены выше, с использованием, например, ангидрида алкановой кислоты, такого, как ангидрид уксусной кислоты, в присутствии триэтиламина и 4-диметиламинопиридина, и диоксинилирования 6 в амидодиоксан 14, где R₁₂, R₁₅, R₁₆, W, Х и m определены выше, с использованием, например, 2,2-диметоксипропана и в присутствии пара-толуолсерной кислоты. В результате гидролиза (15) (см. превращение 6 в 7) получают аминопропандиол (7). Амидодиацилоксипропан (15) подвергают избирательному гидролизу с получением амидодигидроксипропана 20, например, с помощью карбоната щелочного металла, такого, как карбонат лития, натрия или калия, в алканоле, таком, как метанол, этанол или 2-пропанол. Предпочтительной средой для гидролиза является карбонат калия в метаноле. Процесс гидролиза обычно протекает при комнатной температуре. Можно также использовать и повышение температуры вплоть до температуры перегонки гидролизной смеси.

Ациловые производные амидопропандиола (12), где R₁₂, Х и Y определены выше, получают путем обработки 12 ангидридом алкановой кислоты при тех же условиях, которые описаны для конверсии 6 в 15.

В целях получения 1-алкенил-2-амино-1,3-пропандиола (17), где W, Х и m определены выше, 1-алкинил-2-амино-1,3- пропандиол (6), где R₁₂, W, Х и m определены выше, гидрогенизируют до получения 1-алкенил-2-амино-1,3-пропандиола (16), где R₁₂, W, X и m определены выше, а конфигурация атомов водорода в двойной связи углерод-углерод является цис-конфи- гурацией, который в свою очередь гидролизуют в 17, где W, Х и m также определены выше.

Для получения N, 0,0-трибензилоксикарбонил-2-амино-1,3-пропана (18), где R₁₅ является , 2-амиино-1,3-пропандиол (9) обрабатывают N-бензилоксикарбонилоксисукцинимидом 20 NOOCH в присутствии третичного амина, например триэтиламина в эфирном растворителе, таком, как тетрагидрофуран, приблизительно при комнатной температуре.

Для синтеза 2-амино-1,3-пропандиола (19), 1,3-диациклоси-2-пропанилацетамид (13) гидролизуют с использованием гидразингидрата в присутствии этанола в соответствии с процедурой, описанной для конверсии 8 в 9.

Как правило, конечные 1-алкиларил-2-амино-1,3-пропандиолы получают из 1-алкиниларилкарбоксальдегидов (см. Реакционную схему А для конверсии 10 в 9 пиридинового ряда). В изоксазоловом ряду конечные 1-алкилизоксазолил-2-амино-1,3-пропандиолы могут быть получены например, из 5-(1-алкил)-3-изоксазолкарбок- сальдегида (21), где R₅-додецил.

CHO 3- Изоксазолкарбоксальдегид (21), где R₅ является додецилом, в свою очередь синтезируют, например, путем конденсации 1-нитротридекана с 0-триметилсилилпропи- нолом в присутствии фенилизоцианата и триэтиламина, а затем фторида тетрабутиламмония, в результате чего получают изоксазолметанол 22.

CH₂OH где R₅ - додецил, который может быть окислен до 21 с помощью оксалилхлорида:диметилсульфоксида.

Для получения 2-алкоксикарбониламино-1,3-пропандиола, например, 1-алкинил-2-т-бутилоксикарбониламино-1,3-пропанди- ол (6), где R₁₂представляет собой ОС(СН₃)₃, 1-алкинил-2-амино-1,3-пропандиол (7) ацилируют с ди-т-бутилдикарбонатом в присутствии основания, такого, как бикарбонат натрия в галогенуглеводородом растворителе, таком, как хлороформ, при повышенной температуре (около 60^оС).

Для получения 2-диалкиламино-1,3-пропандиола, например, 1-алкенил-2-диметиламино-1,3-пропандиола (23), 1-алке- нил-2-амино-1,3-пропандиол (17) подвергают восстановительному алкилированию с формальдегидом, таким, как формалин, в присутствии восстанавливающего агента, такого, как цианоборогидрид натрия в растворителе, таком, как ацетонитрил, при комнатной температуре.

1-Алкенил-2-амино-1,3-пропандиол, например, 1-алкенилпиридинил-2-амино-1,3-пропандиол (17), получают путем реакции восстановления 1-алкинилпиридинил-2-ациламино-1,3-пропандиола (6) посредством 1-алкенил-2-ациламино-1,3-пропанди- ола 16 (см. реакционную схему С). Альтернативно 1-алкенил-2-амино-1,3-пропандиол, например, 1-алкенилтиенил-2-амино-1,3-пропандиол (27) может быть получен путем конденсации галогентиофенекарбоксиальдегида (25), где Х является бромом, с три-н-бутил-1-алкенилстаннаном (24) в присутствии 2,6-ди-т-бутил-4-метилфенола и тетракис (трифенилфосфин) палладия (0) в ароматическом растворителе, таком, как толуол, при комнатной температуре с получением 1-алкенилтиофенекарбоксальдегида 26 (см.реакционную схему D), который в свою очередь превращают в 2-амино-1,3-диол (27) и его производные способами, указанными в реакционных схемах А, В и С.

Целевой три-н-бутил-1-алкенилстаннат (24) получают путем восстановительной конденсации алкина (28) с три-н-бутилоловогидридом в присутствии азобисизобути- ронитрила.

1-алкил-, 1-алкенил- и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолы могут быть использованы в качестве лекарственных средств для лечения расстройств памяти, в частности нарушений, связанных с пониженной холинергической активностью, которая, например, имеет место при болезни Альцгеймера. Активность к ослаблению расстройств памяти соединений настоящего изобретения исследовалась с помощью теста на избегание темноты, проводимого на мышах в целях определения восстанавливающего действия рассматриваемых соединений при скополамин-индуцированных расстройств памяти, ассоциированных с пониженными уровнями ацетохолина в головном мозге. В этом тесте были использованы три группы из 15 мышей CFW (самцов), а именно контрольная группа "наполнитель/наполнитель", группа "скополамин/наполнитель" и группа "скополамин/лекарственное средство". За 30 мин до обучения контрольной группе "наполнитель/наполнитель" подкожно вводили обычный солевой раствор, а группам "скополамин/наполнитель" и скополамин/лекарственное средство" подкожно вводили скополамин (3,0 мг/кг, вводимые в виде гидрогидрид скополамина). За 5 мин до начала обучения контрольной группе "наполнитель/наполнитель" и группе "скополамин/наполнитель" вводили дистиллированную воду, а группе "скополамин/лекарственное средство" вводили испытуемое соединение в дистиллированной воде.

Устройство для обучения/испытания содержало камеру из плексигласа приблизительно 48 см длиной, 30 см высотой, которая имеет конусообразную форму, заостренную книзу (шириной от 26 см в верхней части и до 3 см в нижней части). Внутри эта камера разделена с помощью вертикальной перегородки на два равных отделения, светлое отделение (освещенное зеркальной лампой в 25 Вт, подвешенной на высоте 30 см от пола) и темное отделение (покрытое). В нижней части перегородки имеется отверстие шириной 2,5 см и высотой 6 см и дверь-ловушка, которая может опускаться, чтобы помешать животному проходить в соседнее отделение. Приспособление для вызывания шока у мелких животных было соединено с двумя металлическими пластинками, которые могли двигаться по всей длине устройства, а в темном отделении на расстоянии 7,5 см от вертикальной перегородки и 2 см от пола повышался фотоэлемент. Поведение животных контролировалось с помощью миникомпьютера 11/34 с программно- управляемым процессором для обработки данных (РDР).

По окончании периода предварительной подготовки животных помещали в светлое отделение непосредственно под фиксированным источником света, причем так, чтобы животные были обращены мордочкой от двери, ведущей в темное отделение. Затем устройство закрывали и систему приводили в действие. Если мыши проходили через перегородку в темное отделение и прерывали луч фотоэлемента в течение 180 с, то дверь опускалась, блокируя выход в светлое отделение, и мыши подвергались воздействию электрического тока интенсивностью 0,4 мА в течение 3 с. После этого животных тотчас удаляли из темного отделения и помещали в свои клетки. Если животным не удавалось прервать луч фотоэлемента в течение 180 с, то эти животные устранялись из испытаний. Для каждой мыши регистрировалось латентное время в секундах.

Через 24 ч животных снова испытывали в том же самом устройстве, за исключением того, что мышам не вводили инъекции и их не подвергали шоковому воздействию. Для каждой мыши регистрировали скрытое время в секундах за время дневного теста, после чего животных удаляли.

Специалистам хорошо известно, что в одном типе поведения пассивного избегания при испытаниях имеет место высокая степень вариабельности (в зависимости от времени года, условий содержания и ухода). В целях учета указанного фактора для каждого теста были определены отдельные пренебрегаемые величины (СО), компенсирующие указанную вариабельность. Кроме того, было установлено, что 5-7% мышей в контрольных группах "скополамин/наполнитель" оказались нечувствительными к дозе скополамина 3 мг/кг. Таким образом, СО-величины определяли как второй наиболее высокий скрытый период в контрольной группе для более точного отражения 1/15 ожидаемых контрольных ответов в каждой тестируемой группе. Эксперименты с рядом стандартов, которые повторяли при различных окружающих условиях, позволили разработать следующие критерии: для рассматриваемого теста СО-величины должны быть менее 120 с, контрольная группа "наполнитель/наполнитель" должна иметь по крайней мере 5/15 животных со скрытыми периодами, превышающими СО. Для соединения рассматриваемой активности группа "скополамин/соединение" должна иметь по меньшей мере 3/15 со скрытыми периодами, превышающими СО.

Результаты теста на избегание темноты выражали как число животных на группу %, в которой скополамин-индуцированное расстройство памяти является блокированным, измеренное путем увеличения скрытого периода. Активность к восстановлению расстройств памяти характерных соединений настоящего соединения представлена в табл.1.

Восстановление скополамин-индуцированного расстройства памяти достигалось при введении 1-алкил-, 1-алкенил- и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиола и родственных соединений в организм с указанным расстройством перорально, парентерально или внутривенно в дозе от 0,01 до 100 мг/кг тела в день. Особенно эффективным является количество 25 мг/кг тела в день. Однако очевидно, что для каждого конкретного случая может быть установлен определенный режим в соответствии с индивидуальными особенностями организма и способа введения указанного соединения. Само собой разумеется, что указанные выше дозы являются иллюстративными и ни в коем случае не ограничивают объема настоящего изобретения.

1-Алкил-, 1-алкенил- и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолы могут быть также использованы в качестве противовоспалительных средств благодаря их способности к снижению воспалительных процессов у млекопитающих. Испытания противовоспалительной активности соединений проводились с помощью теста на ТРА-индуциро- ванный отек уха и теста на отек уха, вызванный арахидоновой кислотой.

В указанном анализе на ТРА-индуцированный отек уха ТРА (12-0-тетрадеканоилфорбол-13-ацетат) растворяли в смеси пропиленгликоля и этанола (30: 70) и раствор наносили на правое ухо мышей группы, состоящей из 6 мышей (самок) Swiss Webster, которые за 1 неделю до их использования были помещены вместе в клетку при стандартных условиях с пищей и водой по желанию, при этом обработку проводили объемом 20 мкл так, чтобы на внутреннюю и внешнюю поверхности уха приходилось в целом 10 мкг ТРА. Испытуемое соединение растворяли в наполнителе и наносили на правое ухо (внутреннюю и внешнюю поверхности) в объеме 20 мкл так, чтобы на ухо в целом приходилось 10 мкг соединения. Приблизительно через 5 ч животных умертвляли и из каждого уха вынимали вкладыш диаметром 4 мм и взвешивали, после чего определяли разницу между весами правого и левого уха для каждого животного. Противовоспалительную активность испытуемого соединения выражали как среднее изменение в процентах веса ушного вкладыша обработанных животных по сравнению со средним изменением веса вкладыша контрольных животных. Результаты определения противовоспалительной активности характерных соединений настоящего изобретения представлены в табл.2.

В анализе на отек уха, индуцированный арахидоновой кислотой, испытуемое соединение растворяли в смеси пропиленгликоля и этанола (30:70) и наносили на оба уха мышей группы, состоящей из 6 мышей (самок) Swiss Webster, которые за 1 неделю до их использования содержались вместе в клетке при стандартных условиях с пищей и водой по желанию, при этом обработку проводили объемом 20 мкл так, чтобы на каждое ухо (внутреннюю и внешнюю поверхности) приходилось в целом 1,0 мг испытуемого соединения. Мышам контрольной группы каждое ухо обрабатывали таким же объемом наполнителя (20 мкл). Через 30 мин на правое ухо каждой группы наносили арахидоновую кислоту в количестве 4 мг/ухо, а на левое ухо каждой мыши каждой группы наносили наполнитель в количестве 20 мкл/ухо. Еще через 1 ч животных умертвляли и из каждого уха вынимали вкладыш диаметром 4 мм и взвешивали. Для каждого животного определяли разницу между весами вкладышей правого и левого уха. Противовоспалительную активность определяли как cреднее процентное изменение веcа ушного вкладыша обработанных животных по отношению к cреднему процентному изменению веcа ушного вкладыша контрольной группы. Противовоcпалительная активноcть характерных соединений настоящего изобретения в соответствии с проведенным анализом представлена в табл.3.

Ослабление воспалительного процесса достигается при введении 1-алкил-, 1-алкенил- и 1-акиниларил-2-амино-1,3-пропандиолов наружно, например, путем офтальмического введения в качестве эффективной дозы для наружного применения от 0,001 до 100 мг/кг тела в день. Особенно эффективным количеством является доза около 25 мг/кг тела в день. Однако очевидно, что для каждого конкретного индивидуума специалистом может быть установлена конкретная схема применения в зависимости от состояния организма и способа введения. Поэтому указанные выше дозы являются иллюстративными и ни в коем случае не ограничивают объема настоящего изобретения.

1-Алкил-, 1-алкенил- или 1-алкинил-2-аминопропандиолы настоящего изобретения могут быть использованы в качестве ингибиторов роста опухолевых или злокачественных клеток благодаря их особенности к снижению пролиферации клеток, как может быть показано с помощью анализа на протеинкиназу С.

Экстракт протеинкиназы С получали из головного мозга крыс Wistar (самцов) весом 180-200 г и очищали по методу V.Kikkawa и др., ibid 636. Очищенный экстракт хранили при -80^оС и его аликвоты использовали в анализе на протеинкиназу С, который проводили в соответствии с модификацией способа R.M. BeII и др., ibid 354.

Для осуществления анализа использовали дублированные аликвоты дублированных образцов. В каждом анализе участвуют базальная или неактивированная протеинкиназа С, фосфатидилсерин/диацилглицерин-активированная протеинкиназа С и тестируемые образцы. В каждую пробирку, содержащую образец неактивированной протеинкиназы, охлажденной льдом, добавляли экстракт протеинкиназы (1-5 мкг белка; 10 мкл); 8-мкл раствор N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этилсульфоновой кислоты (500 мМ); хлорид магния (40 мМ); этилен-диаминотетрауксусную кислоту (10 мМ); дитиотреитол (20 мМ; 8 мкл) гистон типа III (12 мкг; 8 мкл) и хлорид кальция (11 мМ; 8 мкл). K каждой пробирке с образцом активированной протеинкиназы, охлажденной льдом, добавляли фосфатидин- серин/диацилглицерин (4 мкг; 8 мкл). После этого к пробиркам с образцами, охлажденным льдом, добавляли испытуемое соединение (10^-4-10^-12 М в 4 мкл диметилсуль- фоксида). Затем объем всех испытуемых пробирок доводили до 72 мкл дистиллированной водой (18 мкл для активированных образцов, 26 мкл для неактивированных образцов без 8 мкл фосфатидилсерин/диацилглицерина). Испытуемые пробирки нагревали до 25^оС и к каждой пробирке добавляли 8 мкл смеси аденозин 5 - трифосфата (100 мкМ) и ³²Р-аденозинтрифосфата (1-2х10⁵ отсчетов в 1 мин) до получения конечного объема 80 мкл на каждую пробирку. Через 2 мин реакцию завершали включение фосфора в гистон типа III путем нанесения реакционной смеси на фосфоцеллюлозную бумагу. Пятна, нанесенные на бумагу, вырезали и радиоактивность каждого пятна (число отсчетов в 1 мин) определяли в сцинтилляционном счетчике. Активность к ингибированию протеинкиназы С, т.е. процент ингибирования внедрения ³²фосфора из ³²Р-аденозинтрифосфата в гистон типа III, рассчитывали следующим образом: радиоактивноcть иcпытуемого образца отcч./мин.

х 100 радиоактивноcть активированного образца от/мин - радиоактивноcть неактивированного образца от/мин Активность к ингибированию протеинкиназы С характерных соединений настоящего изобретения, рассчитанная как концентрация испытуемого соединения, вызывающая 50%-ное ингибирование поглощения фосфора (IС₅₀), представлена в табл.4.

Ингибирование протеинкиназы достигается при введении в организм, требующий такого лечения, 1-алкил-, 1-алкенил- и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолов настоящего изобретения или родственных соединений перорально, парентерально, внутривенно или местно в эффективном количестве от 0,001 или 0,01 до 100 мг/кг тела в день. Особенно эффективным количеством является доза 25 мг/кг тела в день. Однако при этом следует учесть, что для каждого организма может быть установлен конкретный режим приема в зависимости от состояния индивидуума и способа введения лекарственного средства. Поэтому очевидно, что указанные выше дозы являются иллюстрированными и ни в коем случае не должны ограничивать объема настоящего изобретения.

1-Алкил-, 1-алкенил- и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолы настоящего изобретения могут быть также использованы в качестве противогрибковых и антибактериальных средств благодаря их способности к ингибированию бактериального и грибкового роста у млекопитающих. Антибактериальная и противогрибковая активность была проиллюстрирована с помощью стандартного анализа на антибактериальную активность. Анализ на чувствительность к аэробным бактериям осуществляли с помощью теста использования разведений в агаре Mueller Hinton. Чашки инокулировали с использованием многоточечного инокулятора, в который вводили 5 х 10⁴КОЕ/пятно стационарных, свежеразведенных культур рассматриваемых штаммов. За минимальную ингибиторную концентрацию МIC принимали наинизшую концентрацию, при которой не наблюдается видимого роста через 24 ч при 37^оС.

Анаэробный анализ, т.е. анализ на чувствительность к облигатным грамположительным и грамотрицательным анаэробам, проводили с использованием разведений в агаре Wilkins-Chalgren. В качестве инокулята использовали ночные культуры соответствующих испытуемых штаммов, разведен- ные 1:10 в свежей тиогликоллатной среде. После того, как чашки инокулировали в течение 48 ч при 37^оС в анаэростате, определяли МIC антибиотиков.

Антибактериальная активность характерных соединений настоящего изобретения, определенная в вышеуказанном анализе, представлена в табл.5 и 6.

Анализ на противогрибковую активность проводили с использованием техники микротитрования U-образный планшет на 96 лунок), при которой испытуемое соединение (10 мг) растворяли в соответствующем растворителе (10 мл дистиллированной воды или 1 мл орг.растворителя + 9 мл дистиллированной воды).

Планшет для микротитрования подготавливали следующим образом. Каждую лунку наполняли (2 ряда/штамм) 50 мкл неопептондекстрозного бульона (12-канальная пипетка). Кроме того, 1 ряд/штамм покрывали 50 мкл смеси дрожжей и азотного основания на лунку для дрожжей и плесневых грибов. Затем в каждую лунку первого ряда добавляли 50 мкл раствора соединения, смешивали и разводили еще 50 мкл соответственно в отношении 1:2. После чего все лунки инокулировали с 150 мкл титрованной суспензией организмов дрожжи: 1 х 10³ организм/мл суспензии; дерматомицеты и плесневые грибы: 1,6 х 10⁵ организм/мл суспензии; полный объем составлял 200 мкл на лунку.

Были также использованы контрольные пробы: по росту (инокулированные, без введения лекарственного средства), по растворителю (инокулированные, без введения лекарственного средства, содержащие растворитель вместо лекарственного средства в соответствующих рядах) и негативные контрольные пробы (не инокулированные), без введения лекарственного средства). Инкубацию проводили в течение 5 дней при 30^оС, после чего осуществляли фотометрическую оценку. Полученные измерения проверяли визуально макроскопически и микроскопически и при необходимости осуществляли надлежащую коррекцию.

Критерий для оценки противогрибковой активности: а) фотометрические измерения (матричный метод); b) рост (макроскопическая оценка); с) рост (микроскопическая оценка - инверсионный оптический микроскоп, увел. 64х).

Противогрибковая активность характерных соединений настоящего изобретения, определенная в результате анализа по методу микротитрования, представлена в табл.7.

Ингибирование роста бактерий и грибков может быть достигнуто путем введения 1-алкил-, 1-алкенил- и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолов или родственных соединений настоящего изобретения в организме, требующий соответствующего лечения, перорально, парентерально, внутривенно или местно, например, путем офтальмического введения в количестве от 0,01 до 100 мг/кг тела в день. Особенно эффективным является доза 25 мг/кг тела в день. Однако следует отметить, что для каждого отдельного организма может быть установлен конкретный режим применения лекарственного средства в зависимости от состояния организма и способа введения вышеуказанного соединения. Поэтому, очевидно, что упомянутые дозы являются иллюстративными и ни в коем случае не ограничивают объем настоящего изобретения.

Соединениями настоящего изобретения являются: а)эритро-2-амино-1-(5-децил-2-фурил)-1,3-дигидроксипропан; b) эритро-2-амино-1-(5-децил-3-изотиазолил)-1,3-дигидроксипропан; с) трео-2-амино-1-[5-децил-3-(2-оксопирролил)]-1,3-дигидроксипропан; d) эритро-2-амино-1-[6-децил-2-(4-метилпиридинил)]-1,3-дигидроксипропан; е) трео-2-амино-1-[6-децил-2-(4-метоксипиридинил)]-1,3-дигидроксипропан; f) эритро-2-амино-1-[6-децил-2-(5-хлорпиридинил)]-1,3-дигидроксипропан; g) трео-2-амино-1-[6-децил-2-(4-трифторометилпиридинил)]-1,3-дигидроксипропан; h) эритро-2-амино-1-[6-(5-фенилпентил-2-п