Способ предоперационного определения помутнения задней капсулы хрусталика при экстракции катаракты

Реферат

 

Использование: медицина, офтальмология. Сущность изобретения: определяют уровень антител к коллагену III типа и к гиалуроновой кислоте и, при одновременном возрастании обеих величин на 30%, определяют помутнения задней капсулы хрусталика. Предлагаемый способ позволяет избежать повторной операции.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунодиагностике, и может быть применено в офтальмологии.

Существующие офтальмологические методы обследования больных не позволяют диагностировать фиброз задней капсулы хрусталика на дооперационном этапе, вследствие непрозрачности самого хрусталика (наличие катаракты).

После проведения экстракции катаракты операция в ряде случаев не дает высоких визуальных результатов в связи с фиброзом задней капсулы (ЗК), существующем еще на дооперационном этапе. Вследствие этого таким больным необходима повторная операция - дисцизия задней капсулы.

Биохимическая структура задней капсулы хрусталика включает в себя наряду с другими соединительнотканными элементами и коллаген III типа, и мукополисахарид - гиалуроновую кислоту. (Л.Йегер "Клиническая иммунология и аллергология", М., "Медицина", 1990 г., т. 3 - 527 с.; В.В.Серов, А.Б.Шехтер "Соединительная ткань", М., "Медицина", 1981 г. - 312 с.).

В патологических процессах, индуцирующих помутнение хрусталика и фиброз его задней капсулы, принимают участие иммунологические механизмы. Капсула хрусталика является защитным барьером, препятствующим выходу антигенов их хрусталика. Однако с возрастом и при наличии патологического процесса в соединительной ткани глаза, происходит трансформация соединительнотканных структур: они приобретают антигенные свойства и вызывают образование антител (С.Н. Федоров, А.Ф. Панасюк, Е.В. Ларионов и др. "Аутоиммунная концепция катарактогенеза". - "Офтальмохирургия", 1989 г., N 1-2, с. 4-6).

Целью изобретения является иммунодиагностика фиброза ЗК хрусталика при катаракте на дооперационном этапе.

Поставленная цель достигается тем, что определяют уровень антител к коллагену III типа и к гиалуроновой кислоте, и при одновременном возрастании обеих величин по крайней мере на 30%, делают вывод о возможности наличия помутнения задней капсулы хрусталика.

Предложенный способ реализуется следующим образом.

Диагноз возрастной катаракты ставится на основании комплексного клинико-инструментального обследования больных.

1. Получение сыворотки. У больного берут кровь, 10 мл цельной крови помещают на 2 ч в термостат при 37оС для образования кровяного сгустка. Для ретракции сгусток обводят стеклянной палочкой и помещают на 12 ч в холодильник при температуре 4оС. Сыворотку сливают в центрифужную пробирку и 20 мин центрифугируют при 3000 об/мин для освобождения от свободных единичных эритроцитов. Сыворотку хранят при температуре -30оС.

2. Подготовка антигенов (коллагена III типа и гиалуроновой кислоты) к постановке иммуноферментного метода.

Коммерческие препараты коллагена III типа и гиалуроновой кислоты разводят покрывающим буфером рН 7,5, содержащим 7 мМ СН3СООН, 7 мМ К2НРО4, 0,17 М NaCl до конечной концентрации 50 мкг/мл.

3. Постановка иммуноферментного метода определения специфических антител к коллагену III типа и гиалуроновой кислоте.

Во все лунки полистиролового планшета для ИФА (фирмы "Лайнотек", ФРГ) вносят по 100 мкл предварительно разведенного антигена и инкубируют при температуре 37оС в течение 18 ч. При этих условиях происходит оптимальное свертывание антигена с полистироловой поверхностью планшета.

После инкубации раствор антигена удаляют из всех лунок и вносят 100 мкл 1% -ного раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА) на 0,01М карбонат-бикарбонатном буфере рН 9,6. БСА блокирует свободные места связывания на полистироле.

После инкубации в течение 30 мин при 37оС удаляют раствор БСА и трижды по 3 мин промывают все лунки забуферным физиологическим раствором (ЗФР) с добавлением детергента Твин-20 (0,05%).

Затем в лунки вносят исследуемую сыворотку в рабочем разведении 1:100. Планшет инкубируют в течение 1 ч при 37оС, после чего проводят трехкратную отмывку по 3 мин ЗФР с 0,05% Твин-20, используя автоматическое устройство фирмы "Дайнотек" (ФРГ). Во все лунки планшета вносят диагностические антитела против иммуноглобулинов человека меченые пероксидазой производства НИИЭМИ им. Гамалеи (иммунопероксидазный конъюгат-ИПК). ИПК вносят по 0,1 мл в рабочем разведении, что определено экспериментальным путем. После инкубации (30 мин при 37оС) ИПК удаляют и промывают все лунки трижды по 3 мин ЗФР с 0,05% Твин-20. Во все лунки планшета вносят 0,1 мл субстрат ортофенилендиамина (3 мг ОФДА и 0,005 мл 30%-ного Н2О2 на 10 мл натрий-цитратного буфера рН 4,9) по 0,1 мл. Окраска в контрольных лунках с донорскими сыворотками и в лунках контроля конъюгата не развилась. В опытных лунках при наличии специфических антител развивается красно-оранжевое окрашивание, интенсивность которого возрастала пропорционально количеству этих антител.

Результаты учитывали на спектрофотометре с вертикальным лучом (Миниредер II Дайнотек, ФРГ) при длине волны 490 нМ.

П р и м е р 1 (см.таблицу).

Клинический пример 2. Больной Семенов И.М., 65 лет, И.Б. N5781, находился на стационарном лечении в Волгоградском филиале по поводу: ОД - перезрелая возрастная катаракта, OS - незрелая возрастная катаpакта, макулодистрофия.

Острота зрения: ОД - светоощущение с правильной проекцией OS - 0,2 н/к ВГД: ОД = 23, OS = 21.

Объективно: ОД - роговица прозрачна, радужка субатрофична, хрусталик интенсивно мутный. Глазное дно не офтальмоскопируется.

OS - роговица прозрачна. Начальные помутнения хрусталика. ДЗН розовый, границы четкие, в макулярной области дегенеративные очаги. 18.05.1989 г. Операция ЭКК на ОД - без осложнений. Послеоперационный период без особенностей. 09.06.89. Острота зрения правого глаза = 0,1 с коррекцией сфера + 10,0 Дптр. = 0,7 Клинический пример N 3. Больная Молодецкая К.И., 69 лет, И.Б. N 6041, находилась на стационарном лечении в Волгоградском филиале МНТК "Микрохирургия глаза" по поводу: ОД - афакия ОД (криоэкстракция катаракты в 1987 году).

OS - зрелая возрастная катаракта.

Острота зрения ОД - 0,01 с коррекцией + 13,0 Дптр. = 0,8 OS - светоощущение с правильной проекцией.

ВГД: ОД = 22, OS = 22.

Объективно: ОД - роговица прозрачна, в области зрачка и в передней камере и волокна стекловидного тела, ДЗН розовый, границы четкие, сосуды склеротизированы.

OS - роговица прозрачная, субатрофия радужки, хрусталик мутный, глазное дно не офтальмоскопируется.

22.05.1989 г. Операция ЭЭК на OS - без осложнений. После операции обнаружен фиброз задней капсулы хрусталика. Послеоперационный период - без особенностей.

13.06.89 г. Острота зрения левого глаза - 0,05 с коррекцией +11,0 Дптр. = 0,4.

После проведения операции экстракция катаракты фиброз ЗК отмечается у 7,9% больных (Н.Ф.Пашинова, Н.Н.Пивоваров и др. "Амбулаторная хирургия катаракты", ж. - "Офтальмохирургия", 1989 г, N 1-2, с. 7-9).

Предложенный способ прошел аппробацию в Волгоградском филиале МНТК "Микрохирургия глаза" с 20.03.1989 г. по 24.11.89 г. Было обследовано 73 пациента с катарактой. У 11 пациентов согласно изменениям в крови было основание предполагать помутнение ЗК хрусталика. После операции экстракции катаракты у 12 пациентов было обнаружено помутнение ЗК хрусталика (11 из них соответствуют прогнозу; у 12-го помутнение ЗК хрусталика прогнозировано не было). Таким образом, достоверность предлагаемого способа диагностики помутнения ЗК хрусталика составляет 91,7%.

Использование данного способа позволяет прогнозировать один из этапов операции: "отскабливание" передних слоев задней капсулы хрусталика, чтобы в достаточной мере удалить те элементы, которые впоследствии подвергаются перерождению, что сокращает вероятность образования вторичных катаракт.

Формула изобретения

СПОСОБ ПРЕДОПЕРАЦИОННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОМУТНЕНИЯ ЗАДНЕЙ КАПСУЛЫ ХРУСТАЛИКА ПРИ ЭКСТРАКЦИИ КАТАРАКТЫ путем определения содержания антител к коллагену III типа и к гиалуроновой кислоте в сыворотке крови и при одновременном увеличении их содержания на 30% определяют помутнение задней капсулы хрусталика.