Штамм бактерий yersinia pestis - продуцент фракции i чумного микроба
Патент 2031938
Авторы
Классы МПК
Штамм бактерий yersinia pestis - продуцент фракции i чумного микроба
Реферат
Использование: микробиология. Сущность изобретения: авирулентный штамм обратного лизиннезависимого мутанта чумного микроба Jersinia pestis А-1435-30 КМ-949 используется как продуцент фракции 1. Штамм обладает повышенной продукцией фракции 1. Мутант выявлен у обратного лизиннезависимого мутанта чумного микроба А-1435-30 lys- который ранее был ауксотрофен по лизину. Авирулентность штамма объясняется состоянием pgm- популяции.
Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к генетике чумного микроба.
Аналогов и прототипов изобретения, относящегося к штаммам обратного лизиннезависимого мутанта чумного микроба и продуцирующего повышенное количество фракции 1, в литературе не имеется. Целью изобретения является селекция из лизинзависимого штамма чумного микроба А-1435-30 lys- обратного лизиннезависимого мутанта, продуцирующего повышенное количество фракции I. Сущностью изобретения является выявление штамма мутанта чумного микроба, обладающего повышенной продукцией фракции 1. Такой мутант выявлен у обратного лизиннезависимого мутанта чумного микроба А-1435-30 lys-, который ранее был ауксотрофен по лизину. Штамм А-1435-30 имеет типичные для возбудителя чумы культурально-морфологические и другие свойства. Он растет в форме на обычных питательных средах (бульон и агар Хоттингера, среда Мартена, обычный питательный агар, среда Эндо, дрожжевая среда, гидролизаты казеина и желатина). Оптимальная температура роста 27-28oC, минимальная (еле заметный рост на 3 сутки) +2oC, максимальная +40oC. Диаметр колоний при изолированном росте на среде Хоттингера на 2-3 cутки - 2-3 мм, на пятые - 4-8 мм (при 28oC выращивания). В мазках грамотрицательные, биполярные палочки. Высокочувствителен к диагностическому чумному и псевдотуберкулезному фагам и фагу Л/413. Штамм ферментирует с образованием кислоты без газа, глицерин, глюкозу, мальтозу, маннит, арабинозу, маннозу, ксилозу; не ферментирует лактозу, сахарозу, рамнозу, дульцит, эритрит, мелибиозу, целлобинозу. Дает отрицательную реакцию нитрификации и положительную денитрификации. Имеет -налактозидазу, реакция Фогес-Проскауэра положительная, не имеет фермента уреазы, оксидазы, редуктазы, амилазы, декарбоксилазы лизина и дегидролазы аргинина. Желатин не разжижает, не расщепляет малоната и тартрата натрия. На среде Джексона-Бэрроуза растет в виде популяций, состоящих из 100% непигментированных (pgm-) колоний. Состоит из 0,5% кальций-независимых клеток. Имеет обычные для возбудителя чумы три плазмиды: р(Саd(pVir), pPst, pFra/Тoх). Каких-либо дополнительных плазмид не имеет. Растет при 28oC на среде следующего химического состава, г: глюкоза 3, двузамещенный фосфорнокислый калий 7, однозамещенный фосфорнокислый калий 2, цитрат натрия 0,5, сернокислая магнезия 0,1, сульфит натрия 0,5, цистеин 0,05, фенилаланин 0,05, метионин 0,05, треонин 0,05, триптофан 0,05 (аминокислоты в ДЛ и Л-форме), дистиллированная вода - 1 л (в случае приготовления плотных питательных сред добавляется 30 г агар-агара). Штамм А-1435-30 авирулентен для лабораторных животных - морские свинки не погибают от 108, а белые мыши - от 105 микробных клеток при подкожном методе заражения. Экспериментальную проверку повышенной продукции фракции I у штамма А-1435-30 проводили в сравнительном аспекте с эталонным вакцинным штаммом ЕV. Штаммы выращивали при 37oC на агаре Хоттингера на протяжении трех дней. Затем готовили взвесь бактерий на физрастворе, содержащих 109 микробных клеток для постановки реакции прямой гемагглютинации (РПГА) с антителами к фракции I. Опыты повторяли трижды с пятью сериями чумного эритроцитарного диагностикума, изготовляемого САНИПЧИ. Во всех опытах штамм А-1435-30 продуцировал фракции в 2-5 раза более, чем штамм EV, т.е. наличие фракции I выявлялось у первого штамма при наличии 2-3 тыс. в 0,1 мл, а у второго - 7-15 тыс. и более м.к. Наличие повышенной продукции фракции I у штамма А-1435-30 приводит к экономии питательных сред и реактивов при получении фракции I для приготовления чумных диагностикумов, а именно питательные среды и реактивы используются в 2-5 раза менее, чем при получении фракции I у штамма ЕV.Формула изобретения
ШТАММ БАКТЕРИЙ YERSINIA PESTIS - ПРОДУЦЕНТ ФРАКЦИИ I ЧУМНОГО МИКРОБА. Штамм бактерий Yersinia pestis КМ 949 (А 1435-30) - продуцент фракции 1 чумного микроба.