Способ получения 3-замещенных 2-оксоиндолов

Способ получения 3-замещенных 2-оксоиндолов

Реферат

 

Использование: в медицине и биологии, в частности в качестве ингибиторов простагландин-Н2-синтазы, 5-липоксигеназы и биосинтеза интерлейнина-1. Сущность изобретения: способ предусматривает реакцию соответствующей гетерилкислоты с молярным избытком 1,1-карбонилдиимидазола в инертном растворителе и инертной атмосфере с последующим взаимодействием полученного продукта с 3-замещенным 2-оксииндола в присутствии основного агента при 0 50°С в инертной атмосфере и инертном растворителе. 2 ил. 4 табл.

Изобретение относится к новым производным 3-замещенных 2-оксоиндолов, которые являются ингибиторами простагландин Н₂-синтезы, 5-липоксигеназы и биосинтеза интерлейкина-1.

Соединения изобретения являются полезными в качестве ингибиторов простагландин Н₂-синтазы и биосинтеза интерлейкина-1, а также в качестве анальгетических противовоспалительных и противоаритмических агентов при лечении хронических воспалительных заболеваний. Изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим указанные производные 3-замещенных 2-оксоиндолов, к способам ингибирования простагландин Н₂-синтазы и биосинтеза интерлейкина-1 и к лечению хронических воспалительных заболеваний у млекопитающих с помощью указанных соединений. Кроме того, настоящее изобретение относится к некоторым новым карбоновым кислотам, полезным в качестве промежуточных продуктов при получении 3-замещенных 2-оксоиндолов настоящего изобретения, и к способу получения производных 3-замещенных 2-оксоиндолов.

В патенте США N 4569942 описаны некоторые 2-оксоиндол-1-карбоксамиды формулы где Х-Н, фтор, хлор, бром, (С₁-С₄)-алкил, (С₃-С₇)-циклоалкил, (С₁-С₄)-алкокси, (С₁-С₄)-алкилтио, трифторметил, (С₁-С₄)- алкилсульфинил, (С₁-С₄)-алкилсульфонил, нитро, фенил, (С₂-С₄)- алканоил, бензоил, теноил, (С₁-С₄)-алканамидо, бензамидо или N,N-диалкилсульфамоил, имеющий 1-3 атома углерода в каждом из указанных алкилов; Y-H, фтор, хлор, бром, (С₁-С₄)-алкил, (С₃-С₇)-циклоалкил, (С₁-С₄)-алкокси, (С₁-С₄)-алкилтио и трифторметил; R₁ является (С₁-С₆)-алкил, (С₃-С₇)-циклоалкил, (С₄-С₇)-циклоалкенилом, фенилом, замещенный фенилом, фенилалкилом, имеющим 1-3 атома углерода в указанном алкиле, замещенным (фенокси) алкилом, содержащим 1-3 атома углерода в указанном алкиле, (тиофенокси) алкилом, содержащим 1-3 атома углерода в указанном алкиле, нафтилом, бицикло (2.2.1) гептан-2- илом, бицикло (2.2.1) гепт-5-ен-2-илом или -(СН₂)_n-О-R_о; n равно нулю, 1 или 2; О двухвалентный радикал, происходящий из фурана, тиофена, пиррола, пиразола, имидазола, тиазола, изотиазола, оксазола, изоксазола, 1,2,3-тиадиазола, 1,3,4-тиадиазола, 1,2,5-тиадиазола, тетрагидрофурана, тетрагидротиофена, тетрагидропирана, тетрагидротиопирана, пиридина, пиримидина, пиразина, бензо (в) фурана, бензо(в) тиофена; R_о-Н или (С₁-С₃)-алкил; R₂ (С₁-С₆)-алкил, (С₃-С₇)-циклоалкил, бензил, фурил, тиенил, пиридил или где R₃ и R₄ каждый является Н, фтором, хлором, (С₁-С₄)-алкилом, (С₁-С₄)-алкокси или трифторметилом.

Указанные 2-оксоиндол-1-карбоксамиды являются ингибиторами циклооксигеназы и липоксигеназы, обладают анальгетической активностью у млекопитающих и являются полезными при лечении боли и облегчают симптомы хронических заболеваний, таких как воспаление и боль, связанные с ревматоидным артритом и остеоартритом.

В патенте США N 4556672 описаны некоторые 3-ацилзамещенные 2- оксиндол-1-карбоксамиды формулы где Х, Y и R₁ имеют указанные значения. Соединения этого патента имеют такую же активность, как и соединения патента США N 4569942.

В патенте США N 4861794 описано использование соединений формулы и их фармацевтически приемлемых основных солей, где Х-Н, Сl или F, Y-Н или Cl; R бензил или тиенил, для ингибирования биосинтеза интерлейкина-1-(ИЛ-1) и для лечения вызванных ИЛ-1 расстройств и дисфункций.

В заявке на патент РСТ N 03658, описаны нестероидные противовоспалительные агенты формулы где каждый из Х и Y является водородом, фтором или хлором; R₁ 2-тиенил или бензил; R алканоил, циклоалкилкарбонил, фенилалканоил, бензоил и некоторые замещенные бензоильные группы, теноил, омега-алкоксикарбонилалканоил, алкоксикарбонил, феноксикарбонил, 1-алкоксикарбонилокси, алкилсульфонил, метилфенилсульфонил и диалкилфосфанат.

Интерлейкин-1-(ИЛ-1) стимулирует ресорбцию кости как in vitro, так и in vivo. (Hayward M. и Fiedler-Hagy Cn. Агенты и Действия, 22, 251-254, 1987). ИЛ-1 индуцирует продуцирование простагландина (ПГЕ2), является стимулятором резорбции кости и участвует в потере кости. (Hayward M. Caggiano J.J. Annual Reports in Medicinal Chemistry, 22, Sect. IV, Chapter 17, 169-1780 1987). Остеопороз определяется как ослабление потери минеральных составляющих кости, что в результате приводит к более высокой скорости перелома. ИЛ-1 включается в патогенез многих заболеваний. (Dinarello C.A. I. Clin. Jmmunol, 5, 287-297, 1985). Кроме того, повышенные уровни ИЛ-1 подобного материала ассоциируются с псориазом. (Сamp R. D. et. al. I.Jmmunol, 137, 3469-3474, 1986).

Настоящее изобретение обеспечивает новые 3-замещенные 2-оксоиндольные соединения формулы (1) и их фармацевтически приемлемые соли, где Х Н, F, Cl, Br, (C₁-C₆)-алкил, (С₃-С₈)-циклоалкил, NO₂, CF₃, CN, SH, S(O)_m, R₃, OR₄, COR₄ или CONR₄R₅, Y H, F, Cl, Br, (C₁-C₆)-алкил, (С₃-С₈)-циклоалкил, NO₂, CF₃, CN, SN, S(O)q, R₁₇, OR₁₈ или CONR₁₈R₁₉; R₁ H, алканоил с 2-10 атомами углерода, циклоалкилкарбонил с 5-7 атомами углерода, фенилалканоил с 7-10 атомами углерода, хлорбензоил, метоксибензоил, теноил, омега-алкоксикарбонилалканоил, указанная алкоксигруппа содержит 1-3 атома углерода, а указанная алканоильная группа содержит 3-5 атомов углерода, алкоксикарбонил с 2-10 атомами углерода, феноксикарбонил, 1-(ацилокси)-алкил, где ацил имеет 1-4 атома углерода, 1-(алкоксикарбонилокси) алкил, где указанная алкоксигруппа имеет 2-5 атомов углерода, а указанный алкил имеет 1-4 атома углерода, алкил с 1-3 атомами углерода, алкилсульфонил с 1-3 атомами углеpода, метилфенилсульфонил или диалкилфосфонат, где каждый из указанных алкилов содержит 1-3 атома углерода; R₂ COR₆, CONR₇R₈, (C₁-C₆)-алкил, (С₃-С₈)-циклоалкил, фенил, моно- или дизамещенный фенил, где заместитель или заместители каждый является Cl, Br, F, (C₁-C₆)-алкил, (С₁-С₆)-алкокси или CF₃; Q R или Q₂-A₁ А Н, F, Cl, Br, J, CF₃, OR₉, S(O)_pR₁₀, COOR₁₁, CONR₉R₁₁, CN, NO₂, COR₁₀, CH₂OR₁₁, OCOR₁₀, NR₉R₁₁, N(R₉)COR₁₁, SO₂NR₉R₁₁ R₁₂ + + + R₁₂ + + R₁₂ или R₁₂ В H, F, Cl, Br, J, CF₃, OR₁₃, S(O)_tR₁₄, COOR₁₅, CONR₁₃R₁₅, CN, NO₂, COR₁₄, CH₂OR₁₅, OCOR₁₄, NR₁₃R₁₅, N(R₁₃) COR₁₅ или SO₂NR₁₃R₁₅, при условии, что А и В не могут быть оба Н, или А и В, взятые вместе, соединены с одним и тем же углеродом кольца Q и равны оксо, или когда А не является Н, В, имеет указанные ранее значения или является (С₁-С₄)-алкилом; А₁ F, Cl, Br, J, CF₃, OR₉, S(O)_pR₁₀, COOR₁₁, CONR₉R₁₁, CN, NO₂, COR₁₀, CH₂OR₁₁, OCOR₁₀, NR₉R₁₁, N(R₉) COR₁₁ или SO₂NR₉R₁₁; Q является _или Q₂ является O _или m, n, p, q и t каждый равень нулю, 1 или 2; W и Z каждый является 0, S или NR₁₁; w₁ и w₂ каждый является 0, S или NR₁₀ при условии, что когда один из w₁ или w₂ является 0, S или NR₁₀, другой является 0 или S; R₃, R₆, R₁₀, R₁₄ и R₁₇ каждый является (С₁-С₆)-алкилом или фенилом; R₅, R₈, R₁₁, R₁₅ и R₁₉ каждый является Н (С₁-С₆)-алкилом или фенилом; R₄, R₇, R₉, R₁₃и R₁₈ каждый является Н или (С₁-С₆)-алкилом; R₁₂ является Н, F, Cl, Br, CF₃ или (С₁-С₆)-алкилом.

Хотя приведенные выше соединения формулы I показаны как энолы, простые и сложные эфиры энолов, понятно, что когда R₁ является Н, соединения формулы I могут быть в их таутомерной кетонной форме.

Все такие таутомерные формы изображаются формулой I.

Заместители у экзоциклической двойной связи в положении 3 соединений формулы I могут быть син, анти или смесью обоих. Следовательно, соединения формулы I, имеющие структуры и их смеси входят в настоящее изобретение и все такие изомеры описываются формулой I.

Соединения формулы I, где R₁ не Н, являются пролекарствами соединений формулы I, у которых R₁ является Н, и их солей. Термин "пролекарство" относится к соединениям, которые являются предшественниками лекарств, которые после введения и абсорбции млекопитающими выделяют лекарство in vivo с помощью некоторых метаболических процессов.

После желудочно-кишечной абсорбции пролекарства гидролизуются in vivo в соответствующие соединения формулы I, где R является Н, или их соли. Поскольку пролекарства изобретения не являются энольными кислотами, сводится к минимуму экспозиция желудочно-кишечного тракта родственным кислотным соединением.

Предпочтительная группа соединений настоящего изобретения составлена соединениями формулы I, где R₁ Н. Другой предпочтительной группой соединений является групп соединений формулы I, у которых Х и Y каждый является Н, F, Cl, NO₂, (С₁-С₃)-алкилом или CF₃. Еще одной предпочтительной группой соединений является группа соединений формулы I, у которых R₂ является COR₆, CONR₇R₈ или (С₁-С₆)-алкил, где R₆, R₇ и R₈ имеют укзанные значения. Другой предпочтительной группой соединений настоящего изобретения является группа соединений формулы I, где Q Q₁, а Q₁ является или Другой предпочтительной группой соединений являются соединения формулы I, где Q Q₁, где Q₁ является где W 0 или S, а W₁ 0 или S. Другая предпочтительная группа соединений состоит из соединений, у которых Q Q₂, где Q₂ является _или W S.

Более предпочтительной группой соединений являются соединения, у которых Q Q₁, где Q₁ является a W 0 или S. Особенно предпочтительные соединения являются теми, у которых R₁ H, X и Y, а каждый является Н, F, Cl, NO₂ (C₁-C₃)-алкилом или CF₃; R₂ COR₆, CONR₇R₈ или (С₁-С₆)-алкилом, где R₆, R₇ и R₈ имеют укзанные значения; Q Q₁, где Q₁ является или где W имеет указанные значения, или Q является Q₁, где Q₁ является где W 0 или S, или Q Q₁, где Q₁ является или где W 0 или S, W₁ 0 или S, или Q является Q₂, где Q₂ является или где W S.

Еще более предпочтительными соединениями являются те, у которых W S; R₂ CONR₇R₈; R₇ и R₈ H.

Еще более предпочтительными являются указанные соединения, у которых Х-Н, Cl или CF₃; Y H, Cl или F; А Cl, Br, F, CF₃, SCH₃, OCH₃или CH₂OCH₃; B H, Cl, Br или CH₃. Другими особенно предпочтительными соединениями являются указанные соединения, у которых n равно 0 или 1, когда n равно нулю, эти соединения являются более предпочтительными.

Еще одной предпочтительной группой соединений являются соединения формулы I и указанные соединения, у которых А Н, F, Cl, Br, CF₃, OR₉, CN, NO_2, COR₁₀, CН₂OR₁₁ или N(R₉)COR₁₁; B H, F, Cl, Br, CF₃, OR₁₃, CN, NO₂, COR₁₄, CH₂OR₁₅ или N(R₁₃)COR₁₅, где R₉, R₁₀, R₁₁, R₁₃, R₁₄ и R₁₅имеют указанные значения, или А и В, взятые вместе, связаны с одним и тем же углеродом кольца Q₁ и равны оксо, или когда А не является Н, В имеет указанные значения или является (С₁-С₃)-алкилом; А₁ является F у еще более предпочтительных соединений, являющихся такими соединениями, у которых R₆ CH₃, R₇ H, R₈ H или (С₁-С₄)-алкил.

Соединения формулы I, у которых R₁ H, являются активными как ингибиторы простагландин Н₂-синтазы (циклооксогеназы), как ингибиторы 5-липоксигеназы и как ингибиторы биосинтеза интерлейкина-1(ИЛ-1) у млекопитающих. Соединения формулы I в дополнение к их полезности являются полезными как анальгетики, противовосплительные и антиартритные агенты при лечении хронических воспалительных заболеваний у млекопитающих.

Предлагаемое изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие соединения формулы I. Настоящим изобретением обеспечиваются способы ингибирования простагландин Н₂-синтазы и биосинтеза интерлейкина-1 у млекопитающих при введении эффективного количества соединений формулы I указанному млекопитающему. Настоящим изобретением также обеспечиваются способы лечения вызванных интерлейкином-1 расстройств и имунных дисфункций и/или хронических воспалительных заболевний у млекопитающих при введении указанным млекопитающим эффективного количества соединения формулы I. В рамках настоящего изобретения хронические заболевания включают, но не ограничиваются ими, псориаз, ревматоидный артрит и остеоартрит.

Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает новые карбоновые кислоты формулы (II') и их соли, где А₂ Н; В₁ находится в положении 4 и является S(O)_p, R₁₆ или COOCH₃ или В₁ находится в положении 5 и является SO₂NHCH₃, или В₁ находится в положении 4 или 5 и является CON(CH₃)₂, R₁₂ ^или R₁₂ и равно нулю, р равно 1; W₃ S, Z₁ 0 или S; R₁₂ H, F, Cl, Br, CF₃ или (C₁-С₆)-алкил; R₁₆ (C₁-C₄)-алкил.

Соединения формулы II являются полезными в качестве промежуточных продуктов при получении некоторых соединений формулы I.

Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает новый способ получения некоторых соединений формулы I, где R₁ H; R₂ R₂₀, который заключается во взаимодействии соединения формулы Q (CH₂)_nCOOH (II) где Q и n имеют укзанные значения, для соединения формулы I с молярным избытком 1,1¹-карбонилдиимидазола в инертном реакционном растворителе в инертной атмосфере и взаимодействии продукта в присутствии основного агента с прозводным 2-оксондола формулы (IV') где Х и Y указаны выше для соединений формулы I; R₂₀ COR₆, CONR₇R₈, фенил или моно- или дизамещенный фенил, в котором заместителем или заместителями являются Cl, F, Br, (C₁-C₆)-алкил, (С₁-С₆)-алкокси или CF₃, где R₆, R₇ и R₈ определены выше для соединений формулы I, при температуре около 0-50^оС в инертном реакционном растворителе в инертной атмосфере.

Схема реакций приведена на фиг. 1 и 2.

Соединения формулы I, в которых R₁ является Н, могут быть получены по новому способу изобретения, показанному в рекционной схеме на фиг. 2. Карбоновые кислоты формулы II вводят в реакцию с небольшим молярным избытком 1,1¹-карбонилдиимидазола в инертном реакционном растворителе. Рекцию проводят при температуре около 25^оС и перемешивают в инертной атмосфере. В течение примерно 2 ч, после чего всю реакционную смесь прибавляют к смеси, состоящей из эквимолекулярного количеств замещенного 2-оксоиндольного соединения формулы IY, полученного в присутствии молярного избытка основного агента в инертном реакционном растворителе в инертной атмосфере. Подходящими инертными реакционными растворителями являются те, которые по крайней мере частично растворяют один или все реагенты или продукт, а предпочтительным для использования растворителем является N, N-диметилформамид. Инертную атмосферу получают при проведении реакции в инертном газе, таком как азот или аргон. Предпочтительными основными агентами являются 4-(N, N-диметиламино)пиридин и триэтиламин.

Некоторые карбоновые кислоты формулы II являются известными. Карбоновые кислотные соединения формулы II включают новые карбоновые кислоты формулы II¹, полученные известными способами или по способам, аналогичным известным методикам. Такие способы могут включать получение соответствующих сложных эфиров или нитрилов соответствующих карбоновых кислот, которые в случае гидролиза по известным методикам дают интересующие карбоновые кислоты.

Соединения формулы I, в которых R₁ H, являются кислотными и они образуют основные соли. Все такие основные соли входят в изобретение и могут быть получены традиционными методами. Например, они могут быть получены при простом контактировании кислотных и основных веществ обычно в стехиометрическом соотношении в водной, неводной или частично водной среде. Соли извлекают фильтрованием, осаждением нерастворителем с последующей фильтрацией или выпариванием растворителя, или в случае водных растворов лиофилизацией. Типичные соли соединений формулы I, которые могут быть получены, являются солями первичных, вторичных и третичных аминов, солями щелочных металлов и солями щелочно-земельных металлов. Особенно ценными являются соли этаноламина, диэтаноламина, триэтаноламина.

Основные агенты, особенно пригодные для образования солей, принадлежат как к органическому, так и к неорганическому типу. Они включают органические амины, гидроксиды щелочных металлов, бикарбонаты щелочных металлов, гидриды щелочных металлов, алкоксиды щелочных металлов, гидроксиды щелочно-земельных металлов, карбонаты щелочно-земельных металлов, гидриды щелочно-земельных металлов и алкоксиды щелочно-земельных металлов. Типичными примерами таких оснований являются первичные амины, такие как н-пропиламин, н-бутиламин, анилин, циклогексиламин, бензиламин, п-толуидин, этаноламин и глюкамин, вторичные амины, такие как диэтиламин, диэтаноламин, N-метилглюкамин, N-метиланилин, морфолин, пирролидин и пиперидин, третичные амины, такие как триэтиламин, триэтаноламин, N,N- диметиланилин, N-этилпиперидин и N-метилморфолин, гидроксиды, такие как гидроксид натрия, алкоксиды, такие как этоксид натрия и метоксид клия, гидриды, такие как гидрид кальция и гидрид натрия, и карбонаты, такие как карбонат калия и карбонат натрия.

Способность соединений формулы I ингибировать биосинтез интерлейкина-1 показана в нижеописанной процедуре.

СЗН/НеN мышей умерщвляют шейной дислокцией и их брюшную полость опрыскивают 70% -ным этанолом, чтобы предотвратить бактериальное загрязнение полученных впоследствии клеточных препаратов. В брюшину каждой мыши вводят 8 мл КРМ1 (1640 среда), содержащей 5% FCS (фетальная сыворотка теленка, которая была скринирована на хорошую отзывчивость к ИЛ-1 в тимоцитном анализе и на низкую спонтанную пролиферацию в отсутствии ИЛ-1), пенициллин стрептомицин (100 ед./мл 100 мкг/мл) и глютамин (2 мМ). Брюшину смешивают в общую массу, чтобы помочь высвободить клетки. Затем делают надрез через кожу брюшины, чтобы раскрыть лежащий под ней мышечный слой. Удаляют перитонеальную жидкость иглой 20 калибра путем вставки иглы острием вниз через обнаженный мышечный слой точно ниже грудины. Перитонеальную жидкость от шести мышей объединяют в пластиковую коническую пробирку и проводят микроскопическое исследовние на бактериальное загрязнение. Незагрязненную жидкость центрифугируют при примерно 600 х g в течение 6 мин и декантируют надсадочный слой. Объединяют клеточные шарики из 5-6 пробирок и повторно суспендируют все в 20 мл КРМ1 FCS (РРМ1-1640 среда, содержащая 5% фетальной сыворотки теленка). Затем выясняют число клеток, используя гемацитометр, и определяют жизнеспособность клеток окрашиванием Трипан-блю, также используя гемацитометр. Клетки потом разбвляют до концентрации 3 10⁶ кл./мл, используя КРМ1 PCS. В ячейки пластины с ячейками (35 мм) вносят 1 мл указанной суспензии клеток. Клетки инкубируют 2 ч при 37^оС в атмосфере 5% СО₂, чтобы вызвть прикрепление макрофагов к стенкам ячеек. Удаляют надосадочный слой, создавая интенсивное кружение суспензии в ячейкх и декантируя. Прикрепившиеся клетки, т. е. макрофаги, дважды промывают КРМ1-СF. [КРМ1, содержащая пенициллин-стрептомицин [100 ед. /мл 100 мкг/мл) и глютамин (2 мМ)] В ячейки, содержащие прикрепившиеся клетки, прибавляют 1 мл изучаемых соединений в концентрациях от 0,1 до 100 мкг/мл в РРМ1-SF или 1 мл РРМ1 SF в качестве контроля. Затем в каждую ячейку прибавляют 100 мкл ZPS (тонко очищенный липополисахарид из salmonella minnesota, который был проконтролирован, чтобы определить, что СЗН/НеI мыши не дают ответа на него) в КРМ1-SF (1 мг/5 мл). Пластины инкубируют при 37^оС в атмосфере 5%-ной СО₂ в течение 24 ч. Надосадочные жидкости удаляют и анализируют на ИЛ-1 сразу или же после охлаждения или замораживания или последующего анализа.

Надосадочные жидкости анализировали количественно на ИЛ-1 в соответствии с аналитическими рецепторами связывания.

Стандартную кривую строят следующим образом. ЕZ 4-6.1 клетки тимуса мыши (10-15) 10⁶ клеток в 0,4 мл связующего буфера (КРМ1-1640, 5% FCS, 25 мМ НЕРЕS, 0,01% NaN₃, рН 7,3) прибавляют, врьируя количества немеченого мышиного r IZ-() рекомбинанта IZ-I продуцированного b Escherichia coli от опубликованной последовательности аминокислот 115-270 для IZ-l (от 40 пг до 40 нг в 0,5 мл буфера) и инкубируют 1 час при 4^оС при непрерывном встряхивании, после чего прибавляют 0,8 нг (0,1 мл) человеческого ¹²⁵I-rIZ-I и продолжают встряхивать еще 3 ч. Образцы фильтруют на устройстве Йеда через стекловолокнистые фильтры Ватман GF (С2.4 см), блокированные с 0,5%-ным порошковым молоком, в течение 2 ч при 37^оС и один раз промывают 3 мл охлажденного льдом буфера. Фильтры подсчитывают в гамма-счетчике Сирла и неспецифическое связывание рассматривают как спм-связывание в присутствии 200 нг немеченого r-IZ-I . Калибровочная кривая Хилла строится как график log Y(100-Y) по отношению к log C, где Y представляет собой процент контроля ¹²⁵1-rIZ-I связывания, а С концентрация немеченого r1Z-I . Линия, спрямленная по методу наименьших квадратов, соответствует величинам Y между 20 и 80% Затем для количественного определения уровней ИЛ-1 в надосадочных жидкостях, полученных, как описано выше, разбавленные надосадочные жидкости заменяют rIZ-I и используют измеренный процент величин связывания для определения концентраций ИЛ-1 из стандартного графика Хилла. Каждое разбавление анализируют дважды и обычно используют только те разбавления, у которых величины Y находятся между 20 и 80% чтобы рассчитать средние уровни ИЛ-1.

Способность соединений формулы I ингибировать простагландин Н₂-синтазу и 5-липоксигеназу показана в следующей процедуре анализа. Применяя описанную ниже процедуру, измеряют уровни известных продуктов простагландин Н₂-синтазы и 5-липоксигеназы для клеток, обработанных изучаемым соединением для ингибирования простагландин Н₂-синтазы и/или 5-липоксигеназы, которое доказывается снижением количества или отсутствием известных продуктов этих ферментов.

Клетки RBZ-1, поддерживаемые в монослое, выращивают в течение 1-2 дней в культуре Спиннера в минимальной основной среде (Игла) с солями Ирла плюс 15% фетальной коровьей сыворотки, дополненной раствором антибиотик/антимикотик (Гибко). Клетки дважды промывают и повторно суспендируют в холодный RPM1 1640 до плотности клеток 410⁶ кл./мл. Затем 0,25 мл аликвота изучаемого соединения при желаемой концентрации в RPM1 1640 уравновешивают при 37^оС в течение 5 мин. К уравновешанному аликвоту прибавляют 0,25 мл аликвота предварительно подогретой клеточной суспензии и смесь инкубируют при 37^оС в течение 5 мин. Прибавляют 10 мкл раствора, содержащего 14-С-арахидоновой кислоты и А-23187 (ионофора кальция, Сигма Кемикал) и смесь инкубируют при 37^оС в течение еще 5 мин. Затем прибавляют 267 мкл ацетонитрила, (0,3%-ной уксусной кислоты) и смесь оставляют стоять на льду в течение 30 мин. Перемешивают содержимое пробирки, осветляют центрифугированием (3000 об./мин, 10 мин), декантируют надосадочную жидкость и повторно центрифугируют 2 мин в микропробирке с высокой скоростью. После этого анализируют 100 мкл аликвота надосадочного слоя с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке Перкин- Эльмер-Н5 (3 мкм), используя градиент системы ацетонитрил (Н₂О с 0,1 трифторуксусной кислоты и скорость потока 2 мл/мин. Определение радиоактивности выполнено на приборе по определению радиоактивности Бертольд ЛБ504, снабженном проточной ячейкой 800 мкл, смешивающей 2,4 мл/мин Омнифлауэр на выходе из колонки. Количественную оценку радиоактивности осуществляют с использованием компьютерного интегратора спектра Физикс SP4200. Полученные таким образом данные используют в программе данные- снижение, где интегрированные единицы каждого продукта рассчитывют как процент от суммы интегрированных единиц и сравнивают со средними контрольными уровнями.

Соединения формулы 1 обладают анальгетической активностью. Эта активность продемонстрирована на мышах путем показа блокирования брюшного вытягивания, вызванного введением 2- фенил-1,4- бензохинона (ФБХ). Использованный способ основан на известной методике и приспособлен для большого расхода материла в единицу времени. Всех мышей не кормили всю ночь перед введением лекарства и испытаниями.

Соединения формулы 1 растворяют или суспендируют в носителе, состоящем из этанола (5% ), эмульфора 620 (смесь полиэтоксилированных сложных эфиров жирных кислот, 5%) и солевого раствора (90%). Этот носитель также служит в качестве контроля. Дозы взяты по логарифмической шкале, а именно0,32, 1,0, 3,2, 10, 32 мг/кг. Путь введения является оральным, концентрации меняются, остается постоянным объем дозировки 10 мл/кг веса тела. Указанный метод используют для определения эффективности и мощности. Мыши, обработанные орально испытуемым соединением, через час получают интраперитонеально 2 мг/кг ФБХ. Индивидуально мышь затем немедленно помещают в теплую прозрачную клетку и начинют через 5 мин после введения ФБХ регистрировать число брюшных сокращений в течение следующих 5 мин. Рассчитывается степень анальгетической защиты (% МРЕ) на основе подавления брюшинного сокращения по отношению к данным для конкурентных контрольных животных в опыте в тот же день. Четыре таких определения (N 5) обеспечивают данные дозы ответ для получения МРЕ, лучшая оценка у дозы, которая снижает брюшные сокращения на 50% от уровня контроля.

Соединения формулы I также обладают противовоспалительной активностью. Эта активность показана на крысах с помощью метода, основанного на стандартном тесте с карагенином, вызывающим одеому лапы крысы.

Подсчитывают и взвешивают неанастезированных взрослых самцов белых крыс с массой тела 150-190 г и помечают чернилами правую боковую лодыжку. Каждую лапу погружают в ртуть точно до чернильной метки. Ртуть находится в стеклянном цилиндре, соединенном с преобразователем давления Статама. Выход из преобразователя поддерживается через контрольный элемент погруженной лапой. Лекарства дают с питьем. Через час после введения лекарства индуцируют одеому инъекцией 0,05 мл 1%-ного раствора карагинина в подошвенную ткань помеченной лапы. Сразу после этого измеряют объем конечности, в которую была сделана инъекция. Увеличение объема конечности через 3 ч после инъекции карагинина составляет индивидуальный противовоспалительный ответ.

Анальгетическая активность соединений формулы I делает их полезными для срочного введения млекопитающим дляконтроля за болью при травме. Кроме того, соединения формулы I являются полезными для хронического введения млекопитающим для облегчения симптомов хронических заболеваний, таких как воспаление ревматоидного артрита, и болей ассоциированных с остеоартритами и другими мышечно-скелетными расстройствами.

Способность соединений формулы I ингибировать биосинтез ИЛ-1 делает их полезными в качестве ингибитора биосинтеза ИЛ-1 вообще. Они также полезные при лечении медиированных ИЛ-1 расстройств и иммунных дисфункций у млекопитающих. Указанные медиированные ИЛ-1 расстройства включают расстройства метаболизма в костях и соединительных тканях, такие как остеопороз, периодонтитная болезнь и рубцы тканей. Медиированные ИЛ-1 иммунные дисфункции включают аллергию и псориаз.

Способность соединений формулы 1 ингибировать простагландин Н₂-синтазу делает их полезными в качестве ингибиторов простагландин Н₂-синтазы вообще, поскольку функционирование этого фермента, как известно, включает патогенез артритных сочленений у млекопитающих.

В табл. 1-3 показана биологическая активность предлагаемых соединений, в табл. 4 известных.

Когда соединения формулы I или их фармцевтические приемлемые соли используют в качестве ингибитора ИЛ-1, ингибитора простагландин Н₂-синтазы, анальгетического агента или противовоспалительного агента, они могут быть введены млекопитающему по одному или предпочтительно в сочетании с фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями в фармацевтической композиции в соответствии со стандартной фармацевтической практикой. Соединения могут быть введены орально или парентерально. Парентеральное введение включает внутривенное, внутримышечное, интраперитонеальное, подкожное или местное введение.

В фармацевтической композиции, состоящей из соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, массовое отношение носителя к активному ингредиенту обычно находится в интервале (1:4)-(4:1), предпочтительно (1:2)-(2:1). При этом выбранное отношение зависит от таких факторов, как растворимость активного ингредиента, ожидаемая дозировка и точный путь введения.

При оральном использовании соединений формулы I они могут быть введены, например, в виде таблеток или капсул, водных растворов или суспензий. В случае таблеток для орального введения носители, которые обычно используют, включают лактозу, кукурузный крахмал, обычно добавляют смазки, такие как стеарат магния. Для орального введения в виде капсул полезными разбавителями являются лактоза и высушенный кукурузный крахмал. Когда для орального введения требуются водные суспензии, активный ингредиент объединяют с эмульгирующими и суспендирующими агентами. При желании могут быть добавлены подслащиватели и/или отдушки. Для внутримышечного, интраперитонеального, подкожного и внутривенного использования обычно готовят стерильные растворы активного ингредиента, при этом рН растворов должен быть соответственно установлен или забуферирован. Для внутривенного использования должна контролироваться общая концентрация солюта, чтобы препарат был изотоническим.

При использовании соединения формулы I или его соли ежедневная дозировка для человека обычно определяется лечащим врачом. Кроме того, дозировка варьируется в зависимости от возраста, веса и индивидуальной реакции пациента, а также от тяжести симптомов и мощности конкретного вводимого соединения. При введении для снятия боли доза, дающая эффективный анальгетический ответ, в большинстве случаев составляет примерно 5-500 мг в зависимости от необходимости, например, каждые 4-24 ч. При хроническом введении для облегчения (лечения) воспаления и боли ингибирования биосинтеза ИЛ-1 и/или ингибирования простагландин Н₂-синтезы в большинстве случаев эффективная доза составляет примерно от 5 мг до 1 г в день, предпочтительно 50-500 мг в день, в виде единичной или раздельных доз. С другой стороны, в некоторых случаях может быть необходимым использование дозировок вне этих пределов.

Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение.

П р и м е р 1. 4-Метилсульфинил-2-тиофенкарбоновая кислота.

Охлаждают до температуры ледяной бани при перемешивании раствор 2,46 г (14,1 ммоль) 4-метилтио-2-тиофенкарбоновой кислоты, полученной, как описано в примере 28, в 150 мл дихлорметана и 10 мл метанола. К охлажденному реакционному раствору медленно прибавляют 120 мл дихлорметанового раствора 2,82 г (13,9 ммоль) м-хлорпербензойной кислоты (технической, 80-85%). После 1 ч реакция по существу заканчивается с образованием бесцветного осадка. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 1,18 г (6,20 ммоль) целевого соединения в виде бесцветного твердого продукта, т. пл. 188-190^оС. Концентрированный маточник хроматографируют на силикагеле, чтобы получить дополнительные 0,83 г (4,36 ммоль) целевой 4-метилсульфинил-2-тиофенкарбоновой кислоты, общий выход 75% (10,56 ммоль).

Вычислено для С₆Н₆О₃S₂ C 37,88% Н 3,18 Найдено: С 37,89% Н 3,18 EJMS(m)z 190 (M⁺, 45) и 175 (М⁺-CH₃).

^IH-ЯМР (ДМСО-d₆) дельта; 13,4 (IH, обмениваемый), 8,27 (IH, д, J= 1,5 Гц), 7,96 (IH, д f 1,5 Гц) и 2,86 (3Н,с).

¹³СЯМР (ДМСО d₆) дельта; 162,1 146,4 137,2 131,7 128,9 и 42,2.

ИК-спектр (бромистый калий): 3420, 2550, 1705, 1245, 1015 см^-1.

П р и м е р 2. 5-(N-метиламиносульфонил)-2-тиофенкарбоновая кислота.

Готовят диизопропиламид лития путем медленного прибавления 17,5 мл (43,8 ммоль) 2,5 М н-бутиллития в гексане к 200 мл охлажденного (2-пропанол/сухой лед) тетрагидрофуранового раствора 7 мл (50 ммоль) диизопропиламина, поддерживая температуру реакции ниже -60^оС. Через 5 мин рекционный раствор нагревают до комнатной температуры в течение 30 мин, а затем снова охлаждают до температуры ниже -70^оС. Медленно прибавляют 100 мл тетрагидрофуранового раствора 3,54 г (20 ммоль)-2-(N-метиламиносульфонил)-тиофе- на при температуре реакции ниже -70^оС. После этого рекционную смесь перемешивают 30 мин, а затем барботируют через раствор избыток двуокиси углерода. Затем раствор нагревают до 5^оС и закаливают 50 мл 1н. гидроксида натрия. К водному тетрагидрофурановому раствору прибавляют порцию 300 мл диэтилового эфира и разделяют фазы в делительной воронке. Органический слой экстрагируют 50 мл 1 н.гидроксида натрия. Объединяют оба основных водных раствора, промывают 50 мл диэтилового эфира и подкисляют концентрированной соляной кислотой. Подкисленную водную смесь экстрагируют 2 х 100 мл диэтилового эфира. Эфирный раствор промывают рассолом, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме, получая 3,38 г (15, 3 ммоль) целевой тиофенкарбоновой кислоты в виде бесцветного твердого продукта, т. пл. 145-