Способ получения иммуноглобулинового препарата, содержащего иммуноглобулины классов g, m и a

Способ получения иммуноглобулинового препарата, содержащего иммуноглобулины классов g, m и a

Реферат

 

Использование: в области ветеринарии для производства препаратов для профилактики и лечения инфекционных заболеваний млекопитающих и птиц. Сущность изобретения: проводят экстракцию липидов из сыворотки крови млекопитающих и птиц хлороформом, образуют липиды 1-2%-ным полиэтиленгликолем, удаляют их, а целевой продукт выделяют полиэтиленгликолем.

Изобретение относится к ветеринарии и касается способа получения комплексного иммуноглобулинового препарата для профилактики и лечения инфекционных заболеваний млекопитающих и птиц бактериальной и вирусной природы.

Одним из общепринятых приемов снижения заболеваемости и гибели животных и птиц в условиях из промышленного разведения является введение с первых дней жизни с кормами и питьем антибиотиков или других антимикробных препаратов. Помимо значительных экономических затрат этот прием приводит к накоплению в организме животных и птиц антимикробных соединений, что существенно снижает потребительские качества мяса, молока, яиц.

В связи с вышеизложенным разработка физиологических высокоэффективных препаратов для профилактики инфекционных заболеваний и снижения гибели домашних животных и птиц является актуальной задачей.

Одним из способов решения этой задачи является использование иммуноглобулиновых препаратов. Известны способы получения иммуноглобулиновых препаратов для профилактики и лечения инфекционных заболеваний у млекопитающих и птиц (Sigma Immuno Chemicals, 1989 Сatalogue, No 14881).

Наиболее широко используют спиртовый метод фракционирования сыворотки крови на холоду по Кону. Известны также достаточно трудоемкие, требующие специального оборудования методы получения иммуноглобулиновых препаратов путем ионообменной хроматографии и гельфильтрации. Общим недостатком всех перечисленных методов является то, что конечный продукт содержит иммуноглобулины только одного класса Ig G. в нем отсутствуют Ig классов М и А, например, антибактериальные IgМ антитела к грамотрицательным бактериям, антивирусные IgA антитела.

Наиболее близким к заявляемому является способ получения комплексного иммуноглобулинового препарата, содержащего три класса иммуноглобулинов Ig G. А. M. для орального применения из сыворотки крови человека для орального применения (прототип). Способ предусматривает экстракцию балластного осадка В (III фракция Кона) обработку экстракта хлороформом и декстрансульфатом с целью удаления липопротеидов, осаждение фракции иммуноглобулинов полиэтиленгликолем в концентрации 12% (патент СССР N 836831 А 61 К 35/14 БИ 15, 1982).

Однако препарат, полученный этим способом, малопригоден для массовой профилактики и лечения инфекционных заболеваний млекопитающих и птиц в условиях промышленного животноводства и птицеводства из-за высокой стоимости препарата (использование в качестве одного из основных реагентов дорогостоящего декстрансульфата и дефицитной сыворотки крови человека) и недостаточно высокой эффективности в связи с использованием гетерологичной для животных и птиц сыворотки крови человека.

Целью настоящего изобретения является повышение эффективности комплексного иммуноглобулинового препарата для профилактики и лечения инфекционных заболеваний млекопитающих и птиц и снижение его себестоимости.

Поставленная цель достигается тем, что в известном способе получения комплексного иммуноглобулинового препарата в качестве исходного сырья используют сыворотку крови млекопитающих или птиц, а осаждение липидов проводят 1-2% полиэтиленгликолем (ПЭГ, м.м.6т.). Замена декстрансульфата на полиэтиленгликоль наряду с заменой исходного сырья значительно снижает стоимость препарата и не влияет на его качество.

Способ поясняют следующим образом: Обработка сыворотки крови млекопитающих и птиц с целью удаления липротеидов.

К 10 л сыворотки добавляют 1 л хлороформа (10% по объему). Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре, затем при постоянном перемешивании добавляют 50%-ный раствор полиэтиленгликоля (м.м.6 т.) до концентрации 2% Добавление ПЭГ к сыворотке в концентрации 1-2% позволяет сформировать комплекс (липопротеины + ПЭГ), легко удаляемый их сыворотки. При этом в надосадочной жидкости полностью сохраняются иммуноглобулины IgM и IgA. После центрифугирования в течение 30 мин при 3000 об/мин осадок удаляют. Объем очищенной от липопротеидов фракции равен 8 л.

Осаждение фракции иммуноглобулинов.

К 8 л экстракта для осаждения иммуноглобулинов добавляют 50%-ный раствор полиэтиленгликоля до конечной концентрации 12% (1,6 л) при постоянном перемешивании. Осадок, содержащий иммуноглобулиновую фракцию, отделяют центрифугированием в течение 30 мин при 3000 об/мин.

Растворение осадка иммуноглобулинов.

Осадок иммуноглобулинов растворяют в 0,9%-ном растворе хлорида натрия до содержания белка (6,5 + 0,5)% рН 7,2. Определение проводят по ФС 42-344 ВС-90. Для стабилизации препарата добавляют лактозу в концентрации 2% После стерилизующей фильтрации препарат разливают по флаконам и лиофилизируют. Хранят препарат в темном месте при температуре (6+4)C. Срок хранения 3 года.

В готовом препарате определяют титры антител к одному из видов энтеробактерий (сальмонеллы, эшерихии), а также к вирусам (ротавирусу). Титры антител должны быть не ниже 1:160. Определение проводят методами РТПГА и РПГА. Состав препарата: InG 40% IgM 25% IgА 25% Определение проводят методом РИД с кроличьими моноспецифическими к белкам крови млекопитающих и птиц.

Количество иммунологически неактивных примесей составляет не более 10% Определение проводят по ФС 42-344 ВС-90. Вещества, входящие в состав препарата: хлорид натрия в концентрации (0,85+0,5)% для создания изотонического раствора; лактоза в концентрации 2% стабилизатор; остаточный ПЭГ на более 1% Предлагаемый способ, не усложняя технологию получения комплексного иммуноглобулинового препарата, позволяет получить высокоэффективный препарат для профилактики и лечения распространенных инфекционных заболеваний млекопитающих и птиц бактериальной и вирусной этиологии. Препарат недорог и может быть использован для массового применения животным и птицам.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВОГО ПРЕПАРАТА, СОДЕРЖАЩЕГО ИММУНОГЛОБУЛИНЫ КЛАССОВ G, M И A, включающий экстракцию липидов из препарата крови хлороформом, осаждение липидов из экстракта, их удаление и выделение целевого продукта полиэтиленгликолем, отличающийся тем, что в качестве препарата крови используют сыворотку крови млекопитающих и птиц, а осаждение липидов проводят 1-2%-ным полиэтиленгликолем.