Способ подавления микрофлоры

Способ подавления микрофлоры

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в практической медицине при лечении гнойной инфекции в виде аппликаций или орошений раневых поверхностей, внутривенного или внутриполостного введения. Целью изобретения является повышение чувствительности антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов к антибиотикам. Предложено антибиотикорезистентные микроорганизмы последовательно или одновременно с антибиотиками обрабатывать 2,5 - 5 мг/л раствором серебра, полученным электролитическим методом и доведенным до изотоничности добавлением хлористого натрия. Из антибиотиков используют ампициллин, канамицин, налидиксовая кислота /невиграмон/, рифампицин, тетрациклин, хлорамфеникол. Изобретение позволяет достигнуть снижения жизнеспособности культур в 100 и 66 раз для концентрации серебра 5 и 2,5 мг/л соответственно. 2 табл.

Изобретение относится к медицине и микробиологии и может быть использовано, например, при лечении гнойных хирургических инфекций и их осложнений, вызванных антибиотикоустойчивыми штаммами микроорганизмов.

В современной антибактериальной терапии ведущее место принадлежит антибиотикам. Опыт же использования последних свидетельствует о том, что в ходе их широкого применения развивается антибиотикорезистентность микрофлоры и даже антибиотикозависимость ее, что естественно приводит к потере данного антибиотика как противомикробного препарата. При этом приспосабливаемость микрофлоры к антибиотикам настолько высока, что внедрение новых антибиотиков едва поспевает за нуждами медицины. В большинстве случаев устойчивость обусловлена наличием у микроорганизмов особых генетических детерминант-R-плазмид, способных передаваться между таксономически далекими бактериями, придавая им резистентность к отдельным антибиотика и их комбинациям.

Изобретение преодолевает антибиотиковую устойчивость микрофлоры и повышает эффективность использования имеющегося арсенала антибиотиков. При совместном применении антибиотиков и препарата серебра, полученного путем электролиза в дистиллированной воде серебра 99,9 чистоты в концентрации 5-10 мг/л с добавлением к последнему перед употреблением хлористого натрия до концентрации 0,89% (до изотоничности). Электролизное серебро применяют в виде аппликаций, орошений, внутривенно, введением в полости.

Для апробации способа подавления микрофлоры использованы штаммы кишечной палочки, обладающие хромосомной или плазмидной устойчивостью к антибиотикам, перечисленным в таблице 1.

Для доказательства достоверности способ осуществлен в двух вариантах.

П р и м е р 1. Использовали штаммы Е.Соli К12J 53 с плазмидой R 124, контролирующей устойчивость к тетрациклину, культуру выращивали в МБП в течение 18 ч при 37^оС, разводили свежим МПБ и культивировали 3 ч при 37^оС. В пробирки, содержащие раствор электролизного серебра в концентрациях 5 и 2,5 мг/л (разведения готовили в дистиллированной воде или в физиологическом растворе непосредственно перед употреблением), добавляли тетрациклин до конечной концентрации 50 мгк/мл и исследуемую культуру до конечной концентрации порядка 10 7 клеток в 1 мл. При этом объем культуры составлял не более 1/20 суммарного объема, чтобы обеспечить необходимое разведение бульона, компоненты которого способны связывать серебро. После инкубации в течение 2 ч при 37^оС высеяли по 0,1 мл смеси из каждой пробирки на МПА для подсчета выживших колоний. При необходимости готовят ряд 10-кратных разведений смеси.

Контрольными служат пробирки, в которых находится каждый из действующих на клетки компонентов в отдельности (т.е. либо электролизный раствор серебра, либо раствор антибиотика заменяют физиологическим раствором). Общим контролем служит культура без добавок серебра и антибиотиков.

В результате проведенной работы установлено следующее: в пробирке, где находилась культура с физиологическим раствором, концентрация клеток составила 1 10 7 в 1 мл. При инкубации штамма с электролизным серебром в концентрации 2,5 мг/л выжило 6 10 5 клеток, при концентрации 5 мг/л 1 10 5 клеток. Антибиотик в отдельности не повлиял на жизнеспособность клеток. При инкубировании клеток в присутствии серебра в концентрации 5 мг/л и антибиотика выжило 1 10 3 клеток в 1 мл; концентрации серебра 2,5 мг/л и антибиотика 9 10 3 клеток в 1 мл.

Таким образом, сочетаное действие антибактериальных препаратов обеспечило снижение выживаемости в 100 раз (на 2 порядка) и 66 раз для концентраций серебра 5 и 2,5 мг/л соответственно.

П р и м е р 2. Использовали штамм Е.сoli К12 с плазмидой R387, контролирующей устойчивость к стрептомицину и хлорамфениколу. Культуру выращивали в МПБ при 37^оС в течение 18 ч, разводили свежим МПБ и культивировали 3 ч при 37^оС. В пробирки, содержащие раствор электролизного серебра в концентрациях 5 и 2,5 мг/л (разведения готовили в дистиллированной воде или физиологическом растворе перед употреблением) вносили культуру до конечной концентрации 10 7 клеток в 1 мл. После инкубации в течение 2 ч при 37^оС из каждой пробирки высевали по 0,1 мл смеси на МПА и МПА со стрептомицином или хлорамфениколом в концентрациях 50 и 100 мкг/мл. В контроле культуру инкубировали с физиологическим раствором. По разнице числа колоний, выросших на чашках с антибиотиками и на МПА, судили об эффективности действия антибиотика на обработанную серебром культуру, о чем можно судить по результатам, представленным в табл. 2: cнижение числа выживших клеток в 10-1000 раз, т.е. на 1-3 порядка в зависимости от концентрации антибиотика и серебра.

В связи с тем, что Е.соli является более устойчивым микроорганизмом к действию электролизного серебра, то эффект препарата в тех же концентрациях на других представителях семейств Энтеробактерий (Salmonella, Shigilla, Proteus) и на Гр+Флору (Staph. aureus) будет не только идентичным, но и более выраженным.

Этот же вывод позволяет сделать и общность механизма воздействия серебра на бактериальную клетку и схожесть строения внешней оболочки бактерий (особенно семейства Энтеробактерий).

Принципиальных различий в эффекте при применении электролизного серебра в описанных вариантах не было.

Для определения эффективности препаратов серебра в концентрациях 2,5-5 мг/л in vivo проводились опыты на собаках.

П р и м е р 3. Брали три группы собак по пять особей каждая. Всем особям по методике Буянова В. М. с соавторами (Вестник хирургии, 1989 г. N 6, с. 28-31) интерперитониально в пять точек живота вводили по 0,8 мл смеси/1 мл кишечного содержимого, 5 мл желчи и 1 мл крови/и таким образом воспроизводили острый гнойный панкреатит.

Через 1 сутки группе животных вводили внутрибрюшинно антибиотик пенициллин 50 тыс. бд/кг веса 4 раза в сутки на физиологическом растворе. Второй группе животных электролизный раствор серебра на физиологическом растворе 5 мг/л из расчета 15 мл/кг веса и антибиотик в той же дозе, как и в первой группе, третья служила контролем им вводился физиологический раствор.

В контрольной группе погибло четыре из пяти животных, в группе, где применялся один антибиотик, из пяти погибло три особи, а в группе, где совместно вводили электролизный раствор серебра 5 мг/л, погибло одно животное.

Таким образом можно сделать вывод, что концентрация 5 мг/л электролизного серебра эффективна в применении in vivo и его раствор усиливает действие антибиотика.

П р и м е р 4. Больному 62 лет по поводу опухолевого процесса произведена субтотальная проксимальная резекция желудка и резекция хвоста поджелудочной железы. Послеоперационный период осложнился формированием абсцесса брюшной полости и развитием септического состояния. Антибиотикотерапия, включая ампициллин, кефзол, пенициллин, цепорин не принесла эффекта. По жизненным показаниям назначено внутривенно введение 500 мл в сутки электролизного раствора серебра на физиологическом растворе 5 мг/л на фоне применения пенициллина 12 млн в сутки. В течение 2-х суток нормализовалась температура. Введение препарата продолжалось 9 дней. На 12-й день состояние больного стало удовлетворительным.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ МИКРОФЛОРЫ с помощью антибиотиков и препаратов серебра, отличающийся тем, что антибиотики применяют одновременно или последовательно с электролизным серебром в концентрации 2,5 - 5 мг/л, причем в электролизный раствор серебра добавляют NaCl до достижения физиологической концентрации 0,89% NaCl.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2