3-(меркаптоалкил)-хиназолин-2,4-(1н, 3н)-дионы или их фармацевтически приемлемые соли щелочных металлов или аммонийные соли и фармацевтическая композиция

3-(меркаптоалкил)-хиназолин-2,4-(1н, 3н)-дионы или их фармацевтически приемлемые соли щелочных металлов или аммонийные соли и фармацевтическая композиция

Реферат

 

Использование: в химико-фармацевтической промышленности. Сущность изобретения: 3-(меркаптоалкил)- хиназолин- 2,4-(1H, 3H)- дионы ф-лы I, где R¹-H, 6-CH, 6-F, 6-CL, 6-Br или 6,7-ди- CH₃O, R²-H или CH₃, n=1; 2 или их фармавцевтически приемлемые соли щелочных металлов или аммонийные соли и фармацевтическая композиция, обладающая иммунорегулирующей и/или иммуностимулирующей, и/или антивирусной активностью на основе указанных соединений. Структура соединений ф-лы I: 2 с.п. ф-лы, 4 ил., 9 табл.

Изобретение относится к 3-(меркаптоалкил)-хиназолин-2,4-(1Н,3Н)-дионам общей формулы I, где R¹обозначает водород, 6-метил, 6-фтор, 6-хлор, 6-бром или 6,7-диметокси; R² обозначает водород или метил и n 1 или 2, или их таутомерам, способу их получения и фармацевтическим композициям, в особенности для лечения иммунных заболеваний и/или вирусных инфекций у людей и животных.

Известны способы получения лекарственных средств с иммуностимулирующим и/или иммуновосстанавливающим действием, которые содержат низкомолекулярное биологически активное вещество. В качестве лекарственных средств в настоящее время применяются прежде всего левамизоль-гидрохлорид и инозин-бензоат.

Другие биологически активные вещества, как NPT 15 392 (эритро-9-(2-окси-3-нонил)-гипоксантин), азимексон и дитиокарбум, также обладают иммуностимулирующими и/или иммуновосстанавливающими действиями. Лекарственные средства, которые содержат эти биологически активные вещества, однако, до сих пор не используются.

Стандартизация известных и нового вида биологически активных веществ, которые стимулируют и/или восстанавливают иммунную систему, в настоящее время возможна лишь с трудом. Это является следствием сложности иммунной системы с ее разнообразными механизмами регуляции и генетической регуляции, а также связано с отсутствием международно согласованных условий лабораторных испытаний и, соответственно, условий для клинических испытаний.

Далее, упомянутые выше биологически активные вещества исследуются углубленно в отношении их иммуностимулирующего и/или иммуновосстанавливающего механизма действия.

Широкой сравнимости иммуностимулирующе и/или иммуновосстанавливающе действующих соединений препятствует также различное влияние различных иммунокомпетентных клеток благодаря соответствующим биологически активным веществам, откуда получается неодинаковое влияние на специфические и неспецифические защитные механизмы.

Так, например, левамизоль-гидрохлорид действует преимущественно иммуновосстанавливающе в случае иммуноподавленных организмов. В случае только незначительного влияния на гуморальный ответ стимулируются преимущественно Т-клетки. Активирование неспецифических защитных механизмов получается за счет стимулирования фагоцитоза, а также пролиферации и бактерицидности.

В противоположность этому, инозин-бензоат прежде всего проявляет иммуностимулирующее действие за счет увеличения гуморального иммуноответа. Пролиферация и дифференцирование Т-лимфоцитов также увеличиваются, как и посредничающая через лимфокинную индукцию функция макрофагов.

Несмотря на достигнутые успехи в области разработки иммуностимулирующе и/или иммуновосстанавливающе действующих веществ, известные способы получения такого рода лекарственных веществ обладают недостатками. Так, получаемый путем разделения диастереомеров рацемического тетрамизоль-гидрохлорида оптический изомер левамизоль-гидрохлорида после орального введения человеку вызывает горьковато-металлический привкус и может приводить к рвоте, тошноте, лейкопении и агранулоцитозу. Далее, левомизоль-гидрохлорид в заметной степени зависит в своем действии от генетических факторов, возраста и пола пациентов.

Принимаемый в относительно высоких дозах инозин-бензоат (50 мг/кг/день) может приводить к рвоте, гиперурикемии и повышению гематокрита. В случае азимексона наблюдаются головная боль, рвота, снижение количества эритроцитов в качестве побочного действия. Основы указанных недостатков нужно искать в роде до сих пор применяемых биологически активных веществ.

Поэтому существует необходимость разработки лекарственного средства для лечения иммунных заболеваний и/или вирусных инфекций у человека и животного, а также способов их получения. Особенно необходимы новые лекарственные средства с иммуностимулирующим и/или иммуновосстанавливающим действием для человека и животного, которые приводят к повышенной специфической и неспецифической защите.

Задача изобретения нахождение новых химических веществ, которые обладают иммуностимулирующими или иммуновосстанавливающими и/или антивирусными действиями, когда их вводят в организм человека или животного.

Кроме того, задачей изобретения является разработка способа получения таких соединений, а также и соответствующих лекарственных средств, которые содержат эти соединения.

Согласно изобретению этими новыми химическими веществами с иммуностимулирующими и/или иммуновосстанавливающими и/или антивирусными действиями являются 3-(меркаптоалкил)-хиназолин-2,4-(1Н,3Н)-дионы общей формулы I, где R¹, R² и n имеют вышеуказанные значения.

Среди соединений общей формулы I предпочтительными являются соединения общей формулы II, где R² и n имеют вышеуказанные значения, а из них в особенности 3-(меркаптоэтил)-хиназолин-2,4(1Н,3Н)-дион.

Согласно изобретению, соединения общей формулы I могут существовать как в своей таутомерной форме, так и в виде их фармацевтически безопасных щелочных или аммониевых солей.

Согласно изобретению соединения общей формулы I и их таутомеры можно получать тем, что а) 2Н-3,1-бензоксазин-2,4(1Н)-дионы общей формулы III, где R¹ имеет вышеуказанное значение, вводят во взаимодействие с аминоспиртом общей формулы IV, где R² и n имеют вышеуказанные значения, предпочтительно в водной реакционной среде, с получением соединения общей формулы V, где R¹, R² и n имеют вышеуказанные значения, затем добавляют реакционный раствор из С₁-С₃-алканола, сероуглерода и гидроксида калия или натрия, соответственно, ксантогената натрия или калия; реакционную смесь нагревают, предпочтительно вплоть до кипения с обратным холодильником, затем охлаждают, подкисляют, полученные соединения общей формулы VI, где R¹, R² и n имеют вышеуказанные значения, сначала нагревают с концентрированными неорганическими кислотами, как соляная кислота или серная кислота или смеси этих неорганических кислот с ледяной уксусной кислотой и/или муравьиной кислотой, и, как правило, путем последующей добавки воды к реакционной смеси и нагревания вновь при температуре кипения с обратным холодильником, превращают в соединения общей формулы I или их таутомеры; b) 4Н-3,1-бензотиазин-2,4(1Н)-дитионы общей формулы VII, где R¹имеет вышеуказанное значение, нагревают с аминоспиртом общей формулы IV, где R² и n имеют вышеуказанные значения, в полярном органическом растворителе; полученные соединения общей формулы VIII, где R¹, R² и n имеют вышеуказанные значения, в водно-спиртовой реакционной среде в присутствии акцептора кислоты, как гидроксид щелочного металла или триэтиламин, вводят во взаимодействие с алкилгалогенидом общей формулы IX, где R³ C₁-C₃-алкил и Х-иод или бром, при комнатной температуре; полученные соединения общей формулы Х, где R¹, R², R³ и n имеют вышеуказанные значения, вводят во взаимодействие со спиртовыми растворами неорганических кислот, предпочтительно абсолютной этанольной соляной кислотой, с получением трициклических хиназолиниевых солей общей формулы XI, где остатки R¹, R² и n имеют вышеуказанные значения и V обозначает анион кислоты, предпочтительно хлор, и эти полученные соединения путем обработки водно-спиртовым раствором гидроксида натрия, последующей фильтрации и подкисления фильтрата разбавленной неорганической кислотой переводят в соединения общей формулы I или их таутомеры; с) 2Н-3,1-бензоксазин-2,4(1Н)-дионы общей формулы III, где R¹ имеет вышеуказанное значение, вводят во взаимодействие с бис-(аминоалкил)-дисульфанами общей формулы XII или их солями, предпочтительно их дигидрохлоридами, где R² и n имеют вышеуказанные значения, в растворителе; полученные соединения общей формулы ХIII, где R¹, R² и n имеют вышеуказанные значения, вводят во взаимодействие со сложными алкильными эфирами хлормуравьиной кислоты общей формулы XIV, где R⁴ обозначает алкильный остаток с 1-3 С-атомами, в растворителе или смеси растворителей, и полученные соединения общей формулы XV, где R¹, R² и n имеют вышеуказанные значения, в случае необходимости очищенные или высушенные, в растворителе или смеси растворителей с помощью атомарного водорода переводят в соединения общей формулы I или их таутомеры; d) 3-(галоидалкил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидрохиназолины общей формулы ХVI, где R¹, R² и n имеют вышеуказанные значения, и Наl обозначает хлор или бром, вводят во взаимодействие с тиомочевиной при 80-150^оС с получением S-(W-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидрохиназолин-3-ил)-алкил)- изотиуронийгалогенидов общей формулы XVII, где R¹, R², n и Наl имеют вышеуказанные значения, после их отделения, эти соединения с помощью растворов гидроксидов щелочных металлов в присутствии азота в качестве защитного газа при (-10)-(+15)^оС переводят в соединения общей формулы I или их таутомеры.

Согласно изобретению способы а)-d) могут изменяться в широких пределах.

Так, получающиеся по способу а) из взаимодействий соединений общей формулы VI с концентрированными неорганическими кислотами, как соляная кислота или серная кислота, или смесями этих неорганических кислот с ледяной уксусной кислотой и/или муравьиной кислотой смеси твердых веществ можно разделять и затем путем нагревания в разбавленных неорганических кислотах переводить в соединения общей формулы I или их таутомеры.

В случае осуществления способа d взаимодействие соединений общей формулы XVI с тиомочевиной осуществляют в молярном соотношении 1:1-1:3; для получения соединений общей формулы XVII компоненты реакции вводят во взаимодействие с протонном растворителе, предпочтительно метилгликоле или бутан-1-оле, предпочтительно при кипении с обратным холодильником; при превращении соединений общей формулы XVI, в особенности когда они являются носителями реакции, работают в вакууме; превращение соединений общей формулы XVII в таковые общей формулы I осуществляют в водном или водно-спиртовом растворе гидроксида щелочного металла, в особенности в растворе гидроксида натрия с концентрацией 0,1-1,0 моль/л, предпочтительно 0,25 моль/л, и в случае необходимости при перемешивании; превращение соединений общей формулы XVII в таковые общей формулы I осуществляют в атмосфере защитного газа азота, что также предпочтительно в случае перекристаллизации соединений общей формулы I.

Превращение соединений общей формулы XVI в таковые общей формулы I можно осуществлять так, что отказываются от отделения соединений общей формулы XVII, в остальном, однако, сохраняют вышеуказанные реакционные условия, применяемые по смыслу.

Структура соединений формул I-XVII даны на фиг. 1-4.

Соединения общей формулы I известным образом можно переводить в их щелочные или аммониевые соли.

Следующий аспект изобретения заключается в фармацевтических композициях для лечения иммунных заболеваний и/или вирусных инфекций у человека и животного, которые содержат одно или несколько соединений общей формулы I, где R¹, R² и n имеют вышеуказанные значения, или их таутомеры или их фармацевтически безопасные щелочные или аммониевые соли и в желательном случае инертные, фармацевтически обычные носители и/или вспомогательные вещества.

На основании иммунорегуляционных, иммуностимулирующих и иммуновосстанавливающих свойств соединений общей формулы I фармацевтические композиции, которые содержат эти соединения, пригодны для лечения иммунных заболеваний у человека и животного.

На основании одновременно имеющегося антивирусного действия соединений общей формулы I, такого рода фармацевтические композиции, которые содержат эти соединения, пригодны одновременно для лечения вирусных заболеваний у человека и животного.

Особый вариант осуществления изобретения состоит в том, что вышеуказанные фармацевтические композиции содержат соединения общей формулы II, где R² и n имеют вышеуказанные значения, их таутомеры или их фармацевтически безопасные щелочные или аммониевые соли.

Особенно предпочтительны такие фармацевтические композиции, которые в качестве активной составной части содержат соединение 3-(2-меркаптоэтил)-хиназолин-2,4(1Н, 3Н)-дион, его таутомер или его фармацевтически совместимую щелочную или аммониевую соль Cherbulier и др. (Неlv. Chim. Acta 50 (1967), 1440-1452) подвергали три соединения общей формулы VI, которые подпадают также под определение общей формулы VI изобретения, превращению в две стадии до 2-(о-карбоксифениламино)-4,5-дигидротиазолов, соответственно, -5,6-дигидро-4Н-1,3-тиазина, и исследовали структурно-аналитически (элементный анализ, ¹Н-ЯМР, УФ-спектроскопия, УК-спектрометрия).

Фармакологические испытания.

Соединения общей формулы I обладают ценными фармакологическими свойствами, в особенности для лечения иммунных заболеваний и/или вирусных инфекций у человека и животного.

Ниже приведены результаты об иммунорегуляционных, иммуностимулирующих, иммуновосстанавливающих и антивирусных свойствах предлагаемых соединений.

Обнаружение иммунорегуляционной активности проводились на морских свинках (колониальная порода альбинос) с помощью следующих методов: чрескожный тест для обнаружения контактной повышенной чувствительности замедленного типа (активность эффекторный орган Т-лимфоциты); Takatsy-тест для обнаружения DNP-специфического антитела сыворотки (гуморальный иммуноответ).

Обнаружение иммунностимулирующих эффектов осуществлялось на мышах (инбридинговый штамм СВА) с помощью следующих методов обнаружения: тест по пятну для обнаружения SE-специфического IgM- и IgG-PBZ; Розеточный тест.

Обнаружение иммуновосстанавливающих действий осуществлялось после повреждения иммунной системы также с помощью теста по пятну для обнаружения SE-специфического IgМ- и IgG-PBZ; розеточного теста.

Обнаружение антивирусной активности осуществлялось в ин витро тесте с эмбриональными куриными клетками при использовании представителей различных вирусных групп.

1. Исследования по иммунорегуляционной активности Чрескожный тест для обнаружения контактной повышенной чувствительности.

Введение через кожу DNFB в случае морских свинок и в случае мышей приводит к развитию замедленной повышенной чувствительности, иммунного состояния, которое связано с клональным размножением TNP-специфических Т-лимфоцитов (Т_DTH Ly). Если после латентного периода по меньшей мере 5 дней происходит новое введение DNFB, то приходят к высвобождению лимфокинов благодаря реакции с Т_DTH Ly этой области кожи и благодаря этому к локально ограниченной реакции воспаления.

Спустя 7 дн. после иммунизации с помощью 1%-ного DNFB бока подопытных животных лишаются волос и благодаря нанесению одной капли 0,5%-ного, 0,1%-ного, 0,05% -ного, 0,025%-ного и 0,01%-ного раствора DNFB испытываются. Еще положительная концентрация наоборот пропорциональная степени сенсибилизации. Результаты испытаний получаются из силы и числа положительных кожных реакций, индекс стимулирования (SE) из сравнения подопытных и контрольных животных.

Обработку веществом осуществляют перорально. С помощью желудочного зонда вводят суточную дозу 2 мг/кг массы тела в виде суспензии в воде. Длительность обработки (лечения): 1 день + 1 (день после иммунизации) вплоть до +6. Контрольные животные получают только используемую лактозу.

Таkatsy-тест.

После иммунизации с помощью динитрофторбензола (DNFB) в случае морских свинок также приходят к образованию DNP-специфических гуморальных антител, которые предпочтительно принадлежат к IgG₁-классу. Спустя 14 дн. после первичного введения через кожу DNFB, у подопытных животных отбирают кровь благодаря сердечной пункции. Определение концентрации антител осуществляют по описанному Таkatsy методу (Takatsy G. A new method for preparation of serial dilutions in a quick and accurote way Kiserletes Orvostudomany 2, (1950) 263-396). В качестве клеток-индикаторов используют нагруженные TNP овечьи эритроциты (связывание по Ri Herberg u Pratt; Rittenberg M.B. u Pratt K.L. Antitrinitrophenyl (TNP) plague assay. Primary response of BALB/c mice to soluble and particulate immunogen Pros. Soc. exp. Biol. Med. (1969) 575-579).

Результаты.

Степень сенсибилизации (%) и концентрация антител сыворотки (разница в АК-тетрах) по сравнению с таковыми контрольной группы (скриннинг-значения) приведены в табл. 1.

Из значений ясно, что соединения общей формулы I оказывают хорошо обнаруживаемое влияние на зависящую от Т-лимфоцитов эффекторного органа замедленную повышенную чувствительность. Значения контактного дерматита начиная с 120 [ 20% повышение по сравнению с контролем] соответственно, ниже 80 служат доказательством стимулирующего, соответственно, подавляющего эффекта.

Различия в тетре антител > +1, соответственно, < -1 показывают стимулирующий, соответственно, подавляющий эффект веществ на гуморальный иммуноответ.

2. Исследования иммуностимулирующего действия.

Тест по обнаружению пятна (тест с пятном) для обнаружения SE-специфических IgM- и IgC-PBZ.

Для испытания иммуностимулирующих эффектов также изучали влияние соединений общей формулы I на гуморальный иммуноответ на мышах инцухт-штамма СВА и с помощью теста на пятно гемолиза (НРТ). Этот метод позволяет осуществлять количественное и раздельное распознавание продуцирующих IgM- и IgG-антитела клеток (= образующие пятна клетки, РВZ). Иммунизацию с помощью овечьих эритроцитов (SE) осуществляют в день 0, введение вещества (суточная доза 1.10^-5 моль на кг массы дела, перорально) осуществляют в дни (-1)-(+3) (для распознавания IgM-PBZ), соответственно, в дни (+1)-(+5) (для распознавания IgG-PBZ).

Результаты.

Путем ежедневного и длящегося в течение 5 дн. введения 2,0 мг соединения согласно примеру 1 на кг массы тела можно повысить число IgM-PBZ до среднего значения 352% по сравнению с контролем (100%). Такая форма обработки приводит к повышению IgG-PBZ до 497% (контроль 100%). В обоих случаях обнаруживается разница с контролем в t-тесте с р < 0,001 как значительная. Очевидно, что длящаяся в течение 5 дн. ежедневная обработка соединением согласно примеру 1 в случае СВА мыши вызывает значительное повышение SE-специфических IgM- и IgG-PBZ.

Розеточный тест (SE-специфические розетки).

По теории BURNET лимфоциты на своей поверхности несут рецепторы иммуноглобулина, которые направлены против определенного антигена и обнаруживаются благодаря реакции со специфическим антигеном. Определение числа образующих розетки клеток (RBZ) может служить мерой силы протекающей иммунной реакции и также воспроизводить эффекты в смысле подавления или стимуляции пролиферативных для клеток процессов.

Спустя 3 дн. после внутривенной иммунизации с помощью 210⁵ овечьих эритроцитов (SE) в 0,2 мл физиологического раствора хлорида натрия подопытных животных умерщвляют путем переразгибания, вынимают селезенку и при добавке среды Раrker (рН 7,4) протирают через марлю Muller. Работы для получения клеточной суспензии проводят в бане с ледяной водой (примерно 0-4^оС). В счетной камере по Neubauer осуществляют определение плотности клеток и затем устанавливают постоянное для всех испытуемых смесей число клеток 110⁷, содержащих ядра клеток [KHZ]/мл среды. 0,9 мл суспензии клеток селезенки (110⁷ КНZ/мл) затем смешивают с 0,1 мл 5%-ной промытой суспензии овечьих эритроцитов и инкубируют 24 ч при 4^оС. Розетки оценивают, когда КНZ окружают по меньшей мере 4 эритроцита и можно идентифицировать содержащие ядра клетки.

Результаты.

После орального введения соединений согласно примерам 2,6 и 14d можно установить значительное стимулирование SE-специфических розеткообразующих клеток.

3. Исследования иммуновосстанавливающих эффектов.

Обнаружение иммуновосстанавливающей активности соединений общей формулы I осуществляется тем, что иммунную систему подопытных животных (СВА-инцухт-мыши) повреждают за счет химиотерапии (циклофосфамид, карагеенан, илопрост) путем облучения. Испытание осуществляют с помощью следующих методов: тест по пятну для обнаружения SE-специфических IgM- и IgG-PBZ; розеточный тест.

Результаты.

Обнаружение иммуновосстанавливающих эффектов соединения согласно примеру 1 осуществляется тем, что иммунную систему подопытных животных повреждают циклофосфамидо (ZY) и испытание осуществля- ют, руководствуясь SE-специфическими РВZ.

Повреждение осуществляют путем инъекции 150 мг/кг массы тела в день перед иммунизацией (-1) (испытуемая и контрольная группы). Иммунизацию осуществляют путем интраперитонеальной инъекции 410⁸ SE в 0,2 мл РВS.

Подопытные животные тест-группы получают по 2 мг соединения согласно примеру 1 на кг массы тела в дни -2, -1, 0, +1 и +2 путем введения орально. С помощью теста пятна обнаруживают SE-специфические IgM- и IgG-PBZ.

Результаты (IgM PBZ) приведены в табл. 2.

Под влиянием соединения согласно примеру 1 приходят к измеримому ("выздоровлению") иммунологической реактивности, которая значительна в день +5 с р < 0,05.

Результаты (IgG-PBZ) представлены в табл. 3.

Соединение согласно примеру 1 значительно повышает число IgG-PBZ в случае ZY-подавленных подопытных животных в дни 6+7 (р < 0,05, соответственно, р < 0,01).

4. Исследования антивирусной активности.

Обнаружение антивирусного для человека и антивирусного для животного действия осуществляется после растворения испытуемого вещества в диметилсульфоксида (50 ммоль/л) и последующего разбавления раствора штамма (1:200)-(1: 1600) с помощью обычных физиологических сред. При этом осуществлении способа можно избежать неспецифического действия органического растворителя.

Антивирусное испытание осуществляют в ин витро куриных эмбриональных клетках с представителями групп вирусов Рох, Influenza, Herpes simplex и Rhabdo, а также MDBK-клетках (клетки почек крупного рогатого скота); человеческие фибропласты Rhabdo- и Coxsackie-вирусы; также RH клетки (человеческие почечные клетки) и Рох-, Herpes simplex- и Adeno-вирусы: в опытах по одноступенчатой репликации по Тоnew и Tonew (Arch. ges. Virusforsch. , 319-329, 1971); тесты уменьшения пятна по Тоnew и Tonew (Zbl. Bakter. Hyg. I Orig. , 437-444, 1969); в системе Mikrotiter Dynatech по Тоnew и Glck (J. basic Microbiol. 1986 (3) 173).

Исследование клеточной совместимости веществ осуществляется в тех же самых клетках (см. ряд примеров 1-5). Как показывают ряды примеров 1-5, испытуемые соединения общей формулы в терапевтической концентрации совместимы с клетками и чрезвычайно сильно ингибируют ряд человеческих и животных вирусов.

Ряд примеров 1.

Определения совместимости с клетками 3-(2-меркапто-этил)-хиназолин-2,4-(1Н, 3Н)-диона на первичных куриных эмбриональных клетках (возраст 2 дн. ), RH (человеческие почечные клетки перманентной линии клеток), MDBK (бычьи почечные клетки перманентной линии клеток) и человеческих фибробластах (возраст 2 дн.) представлены в табл. 4.

Pяд примеров 2.

Результаты антивирусного действия 3-(2-меркапто-этил)-хиназолин-2,4-(1Н, 3Н)- диона на куриные эмбриональные клетки (НЕZ) в цикле одноступенчатой репликации представлены в табл. 5.

Результаты представляют собой средние значения из трех опытов. По отношению к Сохsackie А 9-вирусу и Adeno-вирусу типа 4 вещество оказалось антивирусно неактивно.

Терапевтический индекс-соотношение между максимально совместимой и минимально эффективной дозами: для вируса Vaccinia 8 для вируса Influenza 8 Ряд примеров 3.

Результаты антивирусного действия 3-(2-меркапто-этил)-хиназолин-2,4-(1Н, 3Н)- диона на человеческие почечные клетки перманентной линии клеток в цикле одноступенчатой репликации представлены в табл. 6.

Результаты представляют собой средние значение из трех опытов.

Ряд примеров 4.

Результаты антивирусного действия 3-(2-меркапто-этил)-хиназолин-2,4-(1Н, 3Н)- диона в тесте уменьшения пятна представлены в табл. 7.

Результаты представляют собой средние значения из двух опытов.

Ряд примеров 5а.

Результаты антивирусного действия 3-(3-меркапто-проп-1-ил)-6,7-диметокси-хина- золин-2,4-(1Н, 3Н)-диона на человеческие почечные клетки перманентной линии клеток в цикле одноступенчатой репликации представлены в табл. 8.

Ряд примеров 5б.

Результаты антивирусного действия 3-(3-меркапто-проп-1-ил)-6,7-диметокси-хина- золин-2,4-(1Н, 3Н)-диона на куриные эмбриональные фибропласты в цикле одноступенчатой репликации представлены в табл. 9.

П р и м е р 1. 3-(2-Меркаптоэтил)-хиназолин-2,4(1Н,3Н)-дион (формула I, R¹ H; R² H; n 1).

а) 3-(2-Оксиэтил)-2-метилтио-хиназолин-4(3Н)-тион (формула Х, R¹ H, R² H, R³ CH₃, n 1).

2,4 г (10 ммоль) 3-(2-оксиэтил-хиназолин-2,4(1Н,3Н)-дитиона (формула VIII, R¹H, R² H, n 1) растворяют в метанольном растворе гидроксида натрия (20 мл 0,5 н. NaOH и 7 г СН₃ОН), смешивают с 1,6 г метилиодида (формула IX, R₃ CH₃, X 1) и интенсивно механически встряхивают в закрытом сосуде в течение 30 мин при комнатной температуре. Образовавшийся осадок отделяют и промывают небольшим количеством 50%-ного метанола и высушивают. Кристаллы желтого цвета С₁₁Н₁₂N₂OS₂ (252,4). Т.пл. 117-118^оС (метанол). Выход: 92% б) 2,3-Дигидро-5-оксо-6Н-тиазоло(3,2-с)-хиназолиний-4-хлоргидрат (формула XI, R¹ H; R² H, n 1; Y Cl).

505 мг полученного по п. а) хроматографически чистого соединения растворяют в 9 мл метанольного раствора соляной кислоты (30 г газообразного НСl, 200 мл абсолютного метанола) и выдерживают в закрытом сосуде сначала 24 ч при комнатной температуре и следующие 24 ч при -29^оС. Образовавшийся осадок промывают абсолютным диэтиловым эфиром и сушат в вакуумном эксикаторе (КОН/H₂SO₄). Получают 340-380 мг 2,3-дигидро-5-оксо-тиазоло(3,2-с)-хиназолиний-4-хлоргидрата. Кристаллы желтого цвета. С₁₀Н₉СlN₂OSH₂O (258,7). ИК-спектр: СО-полоса при 1740 см^-1. Масс-спектр: m/e 204 (молекулярно-ионный пик лежащего в основе основания).

в) 3-(2-Меркаптоэтил)-хиназолин-2,4(1Н, 3Н)-дион (формула I, R¹ H; R² H; n 1).

700 мг полученного по п. б) соединения при перемешивании растворяют в этанольном растворе гидроксида натрия (5 мл 3 н. NaOH, 35 мл воды и 20 мл этанола). Спустя примерно 15 мин реакционный раствор отфильтровывают и к бесцветному фильтрату при перемешивании добавляют разбавленную соляную кислоты вплоть до прекращения осадкообразования. Образовавшийся осадок тщательно промывают водой и сушат в вакуумном эксикаторе (концентрированная серная кислота). Получают 610 мг хроматографически чистого (элюирующее средство: толуол/ацетон/метанол 7:3:1 по объему) целевого продукта. Бесцветные кристаллы. С₁₀Н₁₀N₂O₂ (222,2). Т.пл. 192-193^оС (хлороформ/петролейный эфир). Дальнейшее количество целевого продукта, загрязненного незначительной долей бис-(2-(2,4-диоксо-1,2,3-тетрагидро-хиназо- лин-3-ил)-этил)-дисульфана (формула XV, R¹ H; R² H; n 1), можно получать благодаря тому, что полученный после отделения кристаллического тиазолхиназолинийхлоргидрата фильтрат концентрируют досуха и остаток обрабатывают аналогичным образом, как описано в п. в).

П р и м е р 2. 3-(3-Меркапто-проп-1-ил)-6,7-диметокси-хиназолин-2,4(1Н, 3Н)-дион (формула I, R¹ 6,7-диметокси; R² H; n 2).

а) 6,7-Диметокси-2-тиоксо-3,1-бензоксазин-4(1Н)-он.

12,5 г (0,15 мл) тиофосгена в виде 10%-ного диоксанового раствора при охлаждении льдом и перемешивании прикапывают к смеси из 19,9 г (0,1 моль) 2-амино-4,5-диметокси-бензойной кислоты, 200 мл диоксана и 32 г (0,3 моль) триэтиламина. Перемешивание продолжают 3 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь смешивают с 1000 мл воды и подкисляют разбавленной соляной кислотой. Образовавшийся осадок перекристаллизуют из смеси диоксана с водой. Кристаллы желтого цвета. С₁₀Н₉NO₄S (239,2). Т.пл. 211-213^оС (диоксан/вода). Выход: 75% б) 6,7-Диметокси-3,1-бензотиазин-2,4(1Н)-дитион (формула VII, R¹ 6,7-диметокси).

2,0 г полученного по п. а) 3,1-бензоксазин-производного растворяют в точно достаточном количестве нагретого псевдокумола, смешивают с 2,0 сульфида фосфора-(V) и кипятят с обратным холодильником 20 мин. После добавления следующего 1,0 г сульфида фосфора-(V) кипятят с обратным холодильником следующие 15 мин. Еще горячий реакционный раствор фильтруют. После стояния в течение 12 ч осадок отсасывают, промывают небольшим количеством метанола и растворяют в 0,5 н. растворе гидроксида натрия. Затем быстро щелочной раствор фильтруют в избыточное количество разбавленной соляной кислоты и образовавшийся осадок после отделения промывают водой. Кристаллы красного цвета. С₁₀Н₉NO₂S₃ (271,4). Т.пл. 247-249^оС (этилацетат). Выход: 60% в) 3-(3-Окси-проп-1-ил)-6,7-диметокси-хиназолин-2,4(1Н, 3Н)-дитион (формула VIII, R¹ 6,7-диметокси; R² H; n 2).

2,7 г (10 ммоль) полученного по п. б) 3,1-бензотиазин-производного вместе с 1,2 г триэтиламина, 0,82 г (11 ммоль) 3-амино-пропан-1-ола (формула IV, R² H; n 2) и 12 мл этанола нагревают с обратным холодильником в течение 2 ч при 60^оС. После охлаждения подкисляют разбавленной соляной кислотой, осадок спустя 12 ч отсасывают и промывают водой. Кристаллы желто- оранжевого цвета. С₁₃Н₁₆N₂O₃S₂ (312,4). Т.пл. 239^оС (пропан-2-ол). Выход 61% Дальнейшее превращение полученного в п. в) дитиона до целевого продукта осуществляют аналогичным образом, как в примере 1 а)-в).

г) 3-(3-Окси-проп-1-ил)-6,7-диметокси-2-метилтио-хиназолин-4(3Н)-тион (формула Х, R¹ 6,7-диметокси; R² H; R³ CH₃; n= 2).

Кристаллы желтого цвета, С₁₄Н₁₈N₂O₃S₂ (326,4). Т.пл. 168-170^оС. Выход: 76% д) 3,4-Дигидро-9,10-диметокси-6-оксо-2Н,7Н-1,3-тиазино-(3,3-с)-хиназолиний -5-хлорид (формула ХI, R¹ 9,10-диметокси, R² H; n 2, Y Cl).

Кристаллы желтоватого цвета. С₁₃Н₁₅СlN₂O₃S (314,8). ИК-спектр: СО-полоса при 1720 см^-1. Т.пл. 197-198^оС (после промывки диэтиловым эфиром). Выход: 74% e) 3-(Меркапто-про-1-ил)-6,7-диметокси-хиназолин-2,4(1Н, 3Н)-дион (формула I, R¹6,7-диметокси. R² H; n 2).

Бесцветные кристаллы. С₁₃Н₁₆N₂O₄S (296,3). Т.пл. 236^оС (метилгликоль). ИК-спектр: SH-полоса при 2540 см^-1. Выход: 81% П р и м е р 3. 3-(2-Меркаптоэтил)-6,7-диметокси-хиназолин-2,4(1Н,3Н)-дион (формула I, R¹ 6,7-диметокси; R² H; n 1).

Бесцветные кристаллы. С₁₂Н₁₄N₂O₄S (282,4). ИК-спектр: SH-полоса при 2540 см^-1; СО-полосы при 1697 и 1645 см^-1. Т.пл. 312-314^оС (хлороформ/петролейный эфир). Выход: 84% (в расчете на последнюю стадию синтеза).

Получение этого соединения осуществляется из 6,7-диметокси-3,1-бензотиазин-2,4(1Н)-дитиона и 2-амино-этан-1-ола аналогично примерам 1 и 2. При этом выделяют следующие промежуточные стадии: а) 3-(2-Оксиэтил)-6,7-диметокси-хиназолин-2,4(1Н, 3Н)-дитион (формула VIII, R¹ 6,7-диметокси; R² H; n 1).

Кристаллы желто-оранжевого цвета. С₁₂Н₁₄N₂O₃S₂ (298,4). Т.пл. 181-183^оС (диоксан/вода). Выход: 92% б) 3-(2-Оксиэтил)-6,7-диметокси-2-метилтио-хиназолин-4(3Н)-тион (формула Х, R¹ 6,7-диметокси; R² H; R² CH₃; n 1).

Кристаллы желтого цвета. С₁₃Н₁₆N₂O₃S₂ (312,4). Т.пл. 187-188^оС (пропан-2-ол). Выход: 72% в) 8,9-Диметокси-5-оксо-2,3-дигидро-6Н-тиазол(3,2-с)-хиназолиний-4-хлорид (формула ХI, R¹ 8,9-диметокси; R² H; n1; Y Cl).

Желтоватые кристаллы. С₁₂Н₁₃СlN₂O₃S (300,8). ИК-спектр: СО-полоса при 1715 см^-1. Т.пл. 201-205^оС (после промывки диэтиловым эфиром). Выход: 67% П р и м е р 4. 3-(2-Меркаптоэтил)-хиназолин-2,4(1Н,3Н)-дион (формула I, R¹ H; R² H; n 1).

a) Бис-2-(2-амино-бензоиламино)-этил)-дисульфан (формула ХIII, R¹ H; R² H; n1).

6,5 г (40 ммоль) 2Н-3,1-бензоксазин-2,4(1Н)-диона (формула III, R¹= H) растворяют в 30 мл диметилформамида и смешивают с приготовленной из 4,5 г (20 ммоль) цистаминийхлорида (цистаминдигидрохлорид, формула ХII, R² H; n 1, 2 HCl), 20 мл диметилформамида и 6 г (60 ммоль) триэтиламина суспензией. Смесь нагревают на водяной бане при 70^оС в течение 45 мин. После охлаждения осадок отделяют и промывают 20 мл диметилформамида. Фильтрат и промывной раствор объединяют и выливают в 150 мл воды. После выдерживания в течение нескольких часов в холодильнике осадок отсасывают, промывают водой и высушивают. Получают 7,0 г (90% от теории) хроматографически чистого бис-(2-(2-амино-бинзоиламино)этил)-дисульфана, который без дальнейшей очистки можно использовать для последующей реакции. Т.пл. 129-131^оС (этанол/вода).

б) Бис-(2-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-хиназолин-3-ил)-этил)-дисульфан (формула ХV, R¹ H; R² H; n 1).

0,98 г (2,5 ммоль) бис-(2-(2-амино-бензоиламино)-этил)-дисульфана растворяют в 10 мл пиридина. При охлаждении льдом прикапывают 1 мл (10 ммоль) этилхлорформиата (формула XIV, R⁴ C₂H₅). Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч и после охлаждения добавляют к смеси, приготовленной из 15 мл НСl (1 моль/л) и 10 мл ледяной воды. После продолжительного выдерживания в холодильнике осадок отсасывают, промывают водой и высушивают. Полученный промежуточный продукт в порошкообразной форме суспендируют в смеси из 8 мл NaOH (3 моль/л) и 1,6 мл этанола, в течение 6 ч встряхивают в закрытом реакционном сосуде и следующие 24 ч хранят при комнатной температуре. Добавляют 30 мл подогретой воды и смесь фильтруют. Фильтрат подкисляют разбавленной НСl, осадок отсасывают и высушивают.

Получают 0,85 г (77% от теории) хроматографически чистого бис-(2-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-хиназолин-3-ил)-этил)-ди- сульфана, который без дальнейшей очистки можно использовать для последующей реакции. Т.пл. 270-272^оС (пропан-1-ол).

в) 3-(2-Меркаптоэтил)-хиназолин-2,4-(1Н,3Н)-дион (формула I, R¹ H; R² H; n1).

200 мг полученного в п. б) продукта, 200 мг цинковой пыли и 12 мл уксусной кислоты кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. Смесь смешивают с приготовленной из 16 см НСl (1 моль/л) и 28 мл воды смесью и снова доводят до кипения. Отфильтровывают и фильтрат выдерживают 1-2 дня в закрытом сосуде в холодильнике. Осадок отсасывают и высушивают. Выход: 150 мг (75% от теории) хроматографически чистого продукта. Т.пл. 193-195^оС.

П р и м е р 5. 6-Бром-3-(2-меркаптоэтил)-хиназолин-2,4(1Н,3Н)-дион (формула I, R¹ 6-Br; R² H; n 1). Т.пл. 298-300^оС. Выход: 52% (в расчете на последнюю стадию синтеза).

Получение этого соединения осуществляют аналогично примеру 4. При этом выделяют и характеризуют следующие промежуточные стадии: а) Бис-(2-(2-амино-5-бром-бензоиламино)-этил)-дисульфан (формула XIII, R¹5-бром; R² H; n 1). Выход: 47% (после перекристаллизации из этанола). Т. пл. 190-195^оС (хлороформ)н-гексан (1:1).

б) Бис-(2-(6-бром-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-хиназолин-3-ил)этил)-дисульфан (формула XV, R¹ 6-бром; R² H; n 1). Выход: 60% (после перекристаллизации из диметилформамида). Т.пл. 334-336^оС (диметилформамид).

П р и м е р 6. 3-(3-Меркаптопропил)-хиназолин-2,4(1Н,3Н)-дион (формула I, R¹ H; R² H; n 2).

24,5 г 2Н-3,1-бензоксазин-2,4(1Н)-диона (формула III, R¹ H) при перемешивании вносят в течение 20 мин в раствор из 12,3 г 3-амино-пропан-1-ола (формула IV, R² H; n 2) и 45 мл воды и затем нагревают 10 мин на кипящей водяной бане (раствор 1).

17,0 г гидроксида калия при нагревании растворяют в 225 мл этанола. К охлажденному раствору добавляют 36 мл сероуглерода. После этого смесь оставляют стоять в течение 15 мин в закрытом сосуде, объединяют с раствором 1 и затем при откачке (вакууме) 3,5 ч кипятят с обратным холодильником. После этого отгоняют примерно 70-80 мл смеси растворителей, реакционную смесь после охлаждения подкисляют ледяной уксусной кислотой и отставляют стоять по меньшей мере 3 ч для кристаллизации. Получают 24,3 г хроматографически чистого 3-(3-оксипропил)-2-тиоксо-2,3-дигидро-хина- золин-4(1Н)-она (формула VI, R¹ H; R² H; n 2). Т.пл. 174-176^оС.

После добавки примерно 200 мл воды к маточному раствору можно получить следующие 4,0 г почти хроматографически чистого сырого продукта. Возможна перекристаллизация из этанола.

30 г вышеполученного сухого неочищенного продукта при откачке вместе с 300 мл концентрированной соляной кислоты кипя