Гексациклическое соединение

Гексациклическое соединение

Реферат

 

Изобретение относится к новому соединению с шестичленным циклом, производное камптотецина общей формулы 1. Соединение получают из аминокетона и пираноиндолизинового соединения путем реакции конденсаций - замыкания кольца. Оно хорошо растворимо в воде и обладает превосходной антиопухолевой активностью и высокой степенью безопасности, его можно использовать как антиопухолевый препарат для лечения опухолей различного типа. 8 з. п. ф-лы, 1 табл. Соединение формулы 1

Изобретение относится к новому соединению, обладающему противоопухолевой активностью, и способу его получения.

Камптотецин является пентациклическим алкалоидом, выделенным из коры, корней, плодов или листьев Camptotheca acuminata. Известно, что это соединение проявляет противоопухолевую активность вследствие его способности ингибировать синтез нуклеиновой кислоты. Однако в соответствии с результатами клинических испытаний, проводимых в США, было обнаружено, что данное соединение вызывает проблемы с точки зрения безопасности, и его исследование и разработка в качестве медицинского средства было прекращено.

После этого во всем мире проводили исследования с целью поиска производных камптотецина, обладающих лучшей активностью и меньшей токсичностью. Однако пока не появилось сообщений о производных с удовлетворительными клиническими результатами.

Другой проблемой этого соединения при использовании в качестве медицинского средства является недостаточная растворимость камптотецина в воде. В качестве одного из средств повышения растворимости камптотецина в воде известен способ раскрытия лактонового кольца и перевода его в карбонат натрия. Однако продукт, полученный данным способом, проявляет весьма пониженную противоопухолевую активность. Поэтому все еще остается потребность в разработке водорастворимых производных камптотецина с сохраненным лактоновым кольцом.

Были проведены обширные исследования с целью получения производных камптотецина с лучшей активностью и более высокой безопасностью, а также с отличными характеристиками, которые необходимы для используемых лекарств, и обнаружено, что гексациклические соединения, полученные с помощью присоединения к камптотецину водорастворимого кольца, имеют характеристики, лучшие, чем у камптотецина. Данная находка привела к созданию данного изобретения.

Таким образом, целью изобретения является предоставление гексациклического соединения следующей общей формулы: где R₁ и R₂ независимо представляют атом водорода, гидроксильную группу, C_1-6-алкильную группу (термин "C_1-6-алкильная группа", который будет использоваться здесь далее, обозначает алкильную группу с 1 6 атомами углерода), которая может содержать атом галогена, нитро- или цианогруппу, С_1-6-алкокси-группу, атом галогена, цианогруппу, аминогруппу, которая может содержать защитную группу; R₃ представляет C_1-6-алкильную группу; R₄ представляет аминогруппу, которая может содержать защитную группу, C_1-6-алкиламиногруппу, которая может содержать защитную группу, которая может содержать защитную группу, сульфокислотную группу; Z представляет атом кислорода, атом серы, метиленовую группу или иминогруппу; m 0 или 1; n 1 или 2; его физиологически приемлемых солей.

Предпочтительными примерами групп, представленных R₁ или R₂ в формуле (1), являются C_1-3-алкил, гидроксиметил, гидроксил, C_1-3-алкоксигруппа, галоген, аминогруппа, цианогруппа и аналогичные.

Этильная группа и подобные приведены в качестве предпочтительных групп для R₃.

Аминогруппа, C_1-6-алкиламиногруппа, амино-C_1-6-алкильная группа даны в качестве предпочтительных групп для R₄. Среди них особо предпочтительными являются метиламиногруппа, диметиламиногруппа, аминометил, этиламиногруппа, диэтиламиногруппа, аминоэтил, и аналогичные.

Когда заместитель R₄ и заместитель R₁ или R₂ соединения (1) выбраны подходящим образом, соединение обладает значительной растворимостью в воде и подходящей липофильностью и, таким образом, проявляет превосходные свойства. Липофильность является параметром проницаемости вещества через клеточную мембрану, а улучшение проницаемости через клеточную мембрану обеспечивает цитотоксичность по отношению к раковым клеткам.

Примеры предпочтительных сочетаний R₄, R₁ и R₂ включают следующие: R₄ NH₂, NHCH₃ или N(CH₃)₂; R₁ или R₂ CH₃ или C₂H₅.

Среди них наиболее предпочтительным является сочетание, когда R₄ - NH₂, R₁ 4-метил, и R₂ 5-фтор.

Когда R₄ является NH₂ и R₁ или R₂ является ОН, получают только незначительную проницаемость клеточной мембраны и, следовательно, предпочтительно, чтобы соединение переводилось в пролекарство, другими словами, ОН группу превращают в -O-Y или -O-CO-Y. Y представляет амино, диалкиламино, диалкиламиноалкиламино, аминоалкил, алкиламиноалкил, диалкиламиноалкил, гетероциклическую группу, которая может содержать один или более C_1-6-алкилов, C_1-6-алкоксигруппу, аминогрупп, галогенов, нитро- или цианогрупп, или алкильную группу с гетероциклическим кольцом, которое может содержать одну или более алкильных групп, C_1-6-алкокси, амино, галоид, нитро или цианогрупп.

Предпочтительными защитными группами для аминогруппы являются формил, ацетил, тритил, трет-бутоксикарбонил, бензил, n-метоксибензилоксикарбонил и подобные.

Среди соединений формулы (1) особенно предпочтительными являются соединения с 6-членным кольцом А, представленные следующей формулой: Кроме того, среди соединений формулы (1) с точки зрения медицинской активности предпочтительными являются соединения, в которых асимметрический углерод в положении 9 F-кольца принимает конфигурацию S-типа.

Предлагаемые соединения можно получить в соответствии со способом, приведенным в качестве примера, по следующей реакционной схеме: В соответствии с приведенной выше схемой реакции аминокетон (2) и пираноиндолизин (3) конденсируют по реакции Friedlaender, получая соединение (1).

Аминокетоны (2) являются известными соединениями, их можно легко получить методами, известными в технике. Удобные условия проведения этой реакции конденсации соединений (2) и (3) с замыканием кольца могут быть выбраны из условий, при которых реакцию проводят при комнатной температуре или повышенной в присутствии кислоты или основания.

К выбору используемого растворителя ограничений нет, если растворитель инертен по отношению к реакции. Примеры таких растворителей включают ароматические углеводороды такие, как бензол, толуол, ксилол и подобные, галоидированные углеводороды такие, как дихлорметан, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и подобные, эфиры такие, как диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран, диметилцеллозольв, диэтилцеллозольв, диглим и подобные, низшие спирты такие, как метанол, этанол, пропанол, трет-бутанол и подобные, амиды такие, как ацетамид, диметилацетамид, N,N-диметилформамид и подобные и уксусная кислота. Более предпочтительными растворителями являются бензол, толуол и уксусная кислота.

Для реакции можно использовать и органическую, и неорганическую кислоту, Соляная кислота и серная кислота типичные примеры данных неорганических кислот. Органические кислоты, которые можно использовать, включают сульфоновые кислоты такие, как метансульфокислота, трифторметансульфокислота, бензолсульфокислота, n-толуолсульфокислота, пиридин-n-толуолсульфонат; карбоновые кислоты такие, как уксусная кислота и подобные. Особо предпочтительными являются n-толуолсульфокислота, пиридин-n-толуолсульфонат, уксусная кислота и подобные. Здесь уксусная кислота может быть также и растворителем.

Используемые в реакции основания могут быть и неорганическими, и органическими. В качестве примеров неорганических оснований приведены гидроокиси, карбонаты, бикарбонаты и гидриды щелочных металлов такие, как карбонат лития, карбонат натрия, карбонат калия, бикарбонат натрия, бикарбонат калия, гидрид натрия и подобные. Органические основания включают алкоголяты щелочных металлов такие, как метилат натрия, этилат натрия, трет-бутилат калия и подобные; третичные алкиламины такие, как триэтиламин, N,N-диизопропилэтиламин и подобные; ароматические третичные амины такие, как N,N-диметиланилин, N, N-диэтиланилин, N,N-диметиламинопиридин и подобные; пиридин, 1,8-диазабициклоундецен и подобные. Предпочтительными основаниями являются карбонат калия и триэтиламин.

Некоторые соединения формулы (1) нестабильны к действию основных соединений. Следовательно, необходимо уделять специальное внимание условиям реакции при использовании оснований. Например, необходимо проводить реакцию при относительно низкой температуре, в течение небольшого периода времени или в кислой среде.

Обычно реакцию проводят при температуре 20 150^oC, предпочтительно при 80 120^oC. Однако в зависимости от характеристик соединения (3), желательно проводить реакцию при охлаждении на льду. Время реакции может быть 1 48 ч. Обычно реакция завершается за 1 24 ч.

Типичным примером проведения реакции является кипячение с обратным холодильником реакционной смеси в бензоле, толуоле или уксусной кислоте в присутствии пиридин-n-толуолсульфоната.

Когда группа R₁, R₂ или R₄ или заместитель в них является аминогруппой с защитной группой, то защитную группу можно удалить восстановлением или гидролизом кислотой или щелочью.

Соединение с алкоксигруппой можно превратить в соответствующее гидроксильное производное путем его обработки хлоридом алюминия или бромидом алюминия в инертном растворителе таком, как толуол, бензол или подобные, или путем нагревания в растворе бромистоводородной кислоты.

Соединение с нитрогруппой можно перевести в соответствующее аминопроизводное путем каталитического восстановления на платине, палладии или подобном.

Соединение с аминогруппой можно перевести в соответствующее гидроксильное производное через диазониевое соединение путем взаимодействия с нитритом натрия или подобным в кислотном растворителе при низкой температуре с последующим гидролизом диазониевой соли.

Соединение с аминогруппой можно также перевести в соответствующее галоген-производное по реакции Сандмейера через соль диазония, которая упоминалась выше. Обычные условия реакции Сандмейера можно применить к данной реакции, используя хлорид меди, бромид меди или подобные.

Обычно предлагаемое соединение можно перевести в форму физиологически приемлемой соли, например соли щелочного металла или щелочноземельного металла, используя гидроокись соответствующего металла; или когда такое соединение является основным, как соединения с аминогруппой и подобные, его можно перевести в неорганическую или органическую соль, используя неорганические кислоты такие, как соляная кислота, серная кислота, фосфорная кислота или подобные, или органические кислоты такие, как муравьиная кислота, уксусная кислота, метансульфоновая кислота или подобные.

Антиопухолевые эффекты предлагаемых соединений.

Антиопухолевые эффекты предлагаемых соединений, полученных таким образом, описаны далее при помощи экспериментальных примеров.

Экспериментальный пример 1.

Клетки лейкемии мышей Р388 помещают на микроплату с 96 ячейками, 2,5 х 10³ клеток на ячейку. Испытываемый образец добавляют через 24 ч. Клетки культивируют в условиях 5 СО₂ при 37^oC в течение 3 дней. Через 4 ч после добавления образца добавляют 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолилбромид (МТТ). После добавления 200 л/мл изопропилового спирта, содержащего 0,04 н. HCl измеряют абсорбцию при 540 нм для определения IC₅₀. Результаты представлены в таблице.

В данной таблице приводятся также данные, характеризующие способность предлагаемых соединений ингибировать активность ацетилхолинэстеразы (AChE), вызывающей неблагоприятное действие производных камптотецина.

Предлагаемые соединения демонстрируют циктотоксическое действие (МТТ тест) на лейкемию мышей, которое примерно в 1,5 5 раз выше, чем действие соединений известного уровня. Другими словами, предлагаемые соединения превосходят известные по противоопухолевому действию.

Более того, ингибирующая активность предлагаемых соединений в отношении AChE составляет величину примерно 4/10 1/00 активности соединений известного уровня. Это свидетельствует о том, что предлагаемые соединения в большей степени свободны от неблагоприятных побочных действий на желудочно-кишечный тракт, таких, как понос и рвота, которые проявляются сразу после приема и свойственны для соединений известного уровня.

Помимо того, что предлагаемые соединения обладают превосходной антиопухолевой активностью и высокой степенью безопасности, они являются водорастворимыми, превосходя водорастворимость известных соединений в 16 и более раз. Они полезны в качестве антиопухолевых препаратов.

Другие отличительные признаки изобретения станут очевидны в ходе последующего описания типичных примеров, которые приведены для иллюстрации изобретения, но не ограничивают его области.

Пример 1.

Получение (9S)-1-ацетиламино-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-1Н,12-бензо-[de]- пирано-[3',4':6,7]-индолизино-[1,2-b]-хинолин-10,13-(9Н, 15Н)-диона 1) 8-Ацетиламино-1-тетралон.

10 г 1-ацетиламино-тетралина растворяют в смеси растворителей: 400 мл ацетона и 40 мл 15 водного раствора сульфата магния. Раствор выдерживают при 0^oC и добавляют 42 г перманганата калия, затем перемешивают в течение 20 мин при той же температуре, 800 мл воды добавляют к остатку, полученному при концентрировании раствора. Полученный таким образом осадок экстрагируют хлороформом и экстракт промывают соляным раствором и сушат над сульфатом магния. Остаток, полученный при концентрировании раствора, хроматографируют на колонке с силикагелем, используя хлороформ в качестве элюента для получения фракций, содержащих требуемое соединение. Фракции концентрируют, получая 5,46 г указанного соединения.

ЯМР (CDCl₃) м. д. 2,08 2,14 (2Н, м), 2,23 (3Н, с), 2,70 (2Н, т, J 6,8 Гц), 2,97 (2Н, т, J 6,8 Гц), 6,93 (1Н, д, J 6,8 Гц), 7,44 (1Н, т, J 8,3 Гц), 8,59 (1Н, д, J 8,3 Гц).

2) 8-Ацетиламино-2-оксиимино-1-тетралон.

К реакционному раствору, полученному суспендированием 316 мг трет-бутилата калия в 18 мл тетрагидрофурана (далее здесь обозначен ТГФ) и охлажденному до 0^oC, в потоке азота понемногу добавляют раствор 500 мг соединения, полученного в (1), в 2 мл ТГФ. После перемешивания в течение 10 мин при той же температуре и добавления 0,35 мл бутилнитрита смесь нагревают при 50^oC в течение 1 ч при перемешивании. Осадок, полученный при добавлении к реакционной смеси диэтилового эфира, собирают фильтрованием. Полученный таким образом порошок суспендируют в 10 водном растворе соляной кислоты и экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают соляным раствором и сушат над сульфатом магния. Остаток, полученный при концентрировании раствора, хроматографируют на колонке с силикагелем, используя смесь этилацетат-гексан (1 1) в качестве элюента, получая фракции, содержащие требуемое соединение. Фракции концентрируют, получая 320 мг указанного соединения.

ИК^КBr_max см^-1: 3440, 1698, 1678, 1608, 1580, 1518.

ЯМР (CDCl₃) м. д. 2,26 (3Н, с), 3,08 (4Н, с), 6,98 (1Н, д, J 7,4 Гц), 7,53 (1Н, т, J 7,7 Гц), 8,64 (1Н, д, J 8,5 Гц).

МАСС m/z: 232 (M⁺).

3) 2,8-Диацетиламино-1-тетралон.

1 г порошка цинка добавляют к раствору 300 мг соединения, полученного в (2), растворенного в смеси растворителей: 10 мл уксусной кислоты и 10 мл уксусного ангидрида; перемешивают смесь в течение 40 мин при комнатной температуре. Нерастворимые вещества удаляют фильтрованием, а фильтрат концентрируют. Остаток перекристаллизовывают из этилацетата и гексана, получая 263 мг указанного соединения.

ИК^КBr_max/см^-1: 3280, 1660, 1596, 1516.

ЯМР (CDCl₃) м. д. 1,6 2,0 (1Н, м), 2,11 (3Н, с), 2,23 (3Н, с), 2,6 3,0 (1Н, м), 3,1 3,4 (2Н, м), 4,6 4,8 (1Н, м), 6,93 (1Н, д, J 6,8 Гц), 7,49 (1Н, т, J 8,3 Гц), 8,59 (1Н, д, J 8,3 Гц).

МАСС m/z: 260 (M⁺).

4) 2-Ацетиламино-8-амино-1-тетралон.

245 мг соединения, полученного в (3), растворяют в 40 мл 3 н. соляной кислоты и нагревают при 60^oC в течение 1 ч при перемешивании. После охлаждения до 0^oC реакционный раствор нейтрализуют карбонатом натрия и экстрагируют хлороформом. Экстракт сушат над сульфатом магния. Остаток, полученный после удаления растворителя, перекристаллизовывают из этилацетата и гексана, получая 150 мг указанного соединения.

ИК^КBr_max см^-1: 3424, 3304, 1668, 1632, 1558, 1508.

ЯМР (CDCl₃) м. д. 1,6 2,0 (1Н, м), 2,09 (3Н, с), 2,6 3,2 (3Н, м), 4,41 4,67 (1Н, м), 6,47 6,71 (2Н, м) 7,12 7,26 (1Н, м).

МАСС m/z: 218 (M⁺).

5) (9S)-1-ацетиламино-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-1Н, 12Н-бензо-[de]- пирано-[3',4':6,7]-индолизино-[1,2-b]-хинолин-10,13-(9Н, 15Н)-дион.

361 мг (S)-4-этил-4-окси-7,8-дигидро-1Н-пирано-[3,4-f] -индолизин-3,6,10(4Н)- триона (далее здесь обозначается, как "трион") добавляют к раствору 300 мг соединения, полученного в (4), в 200 мл толуола. Смесь нагревают с обратным холодильником, используя аппарат Deanstark, в течение 10 мин. К смеси добавляют 1 мг пиридин-n-толуолсульфоната (далее здесь обозначен "ППТС"), смесь нагревают с обратным холодильником при перемешивании в течение следующих 24 ч. После охлаждения остаток, полученный после удаления толуола при концентрировании, суспендируют в 300 мл растворителей хлороформ-метанол (10 1). Нерастворимые вещества удаляют и остаток растирают с метанолом, получая 336 мг указанного соединения.

Т. пл. выше 240^oC (разлагается).

ИК^КBr_max см^-1: 3452, 1750, 1660.

ЯМР (ДМСО-D₆) м.д. (0,89 (3Н, т, J 7,2 Гц), 1,83 1,92 (2Н, м), 1,94 (3Н, д, J 4 Гц), 2,09 2,17 (2Н, м), 3,14 3,31 (2Н, м), 5,21 (2Н, д, J 5,6 Гц), 5,42 (2Н, д, J 5,6 Гц), 5,58 5,61 (1Н, д), 6,50 (1Н, ш.с), 7,35 (1Н, д, J 2,4 Гц), 7,52 (1Н, д, J 7,2 Гц), 7,79 (1Н, т, J 7,2 Гц), 8,02 (1Н, д, J 8,7 Гц), 8,52 (1Н, т, J 9,5 Гц).

МАСС m/z: 445 (M⁺).

Пример 2.

Получение (9S)-1-амино-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-1Н,12Г-бензо-[de]- пирано-[3',4':6,7]-индолизино-[1,2-b]-хинолин-10,13 (9Н,15Н)- дионгидрохлорида Смесь, полученная при добавлении 300 мг соединения, полученного в примере 1, к 100 мл 6 н. водного раствора соляной кислоты, реагирует при нагревании с обратным холодильником в течение 4 ч. После того, как смеси дают остыть, ее концентрируют, 100 мл воды добавляют к остатку, удаляя нерастворимые вещества фильтрованием, используя FALCON 7105 (0.22 м). Остаток, полученный концентрированием фильтрата, чистят методом жидкостной хроматографии при повышенном давлении на колонке с обратным током HPLC (CAPCE LL PAK C18: производство Shiseido Co.), используя смесь ацетонитрил вода 1 н. соляная кислота (20 80 2) и разделяя два типа диастереомеров. Остаток, полученный при концентрировании первой фракции, осаждают в метаноле и ацетонитриле, получая 74 мг указанного соединения (изомер А). Аналогичным образом из следующей фракции получают 90 мг указанного соединения (изомер В). В следующих примерах изомеры, которые элюируют первыми из обратной колонки HPLC, обозначены, как изомеры А, а вторые изомеры, как изомеры В.

Изомер А.

Т. пл. выше 240^oC (разлагается).

[]²_D⁰= +178 (с 0,25 в H₂O).

ИК^КBr_max см^-1: 3440, 1738, 1658.

ЯМР (ДМСО-D₆) м.д. 0,90 (3Н, т, J 7,2 Гц), 1,85 1,94 (2Н, м), 2,17 2,23 (1Н, м), 3,20 3,23 (1Н, м), 3,36 3,43 (1Н, м), 5,12 (1Н, ш.с), 5,42 5,46 (3Н, м), 5,94 (1Н, д, J 19 Гц), 6,53 (1Н, с), 7,38 (1Н, с), 7,61 (1Н, д, J 7,2 Гц), 7,85 (1Н, т, J 7,2 Гц), 8,09 (1Н, д, J 8,8 Гц), 8,77 (3Н, ш).

МАСС m/z: 403 (M⁺).

Изомер В.

Т. пл. выше 240^oC (разлагается).

[]²_D⁰= -38 (c 0,25 в H₂O).

ИК^КBr_max см^-1: 3444, 1740, 1658.

ЯМР (ДМСО-D₆) м.д. 0,89 (3Н, т, J 7,2 Гц), 1,84 1,93 (2Н, м), 2,16 2,23 (1Н, м), 3,21 3,24 (1Н, м), 3,38 3,45 (1Н, м), 5,13 (1Н, ш.с), 5,42 5,49 (3Н, м), 5,98 (1Н, д, J 19 Гц), 7,38 (1Н, с), 7,61 (1Н, д, J 7,2 Гц), 7,86 (1Н, т, J 7,2 Гц), 8,09 (1Н, д, J 8,8 Гц).

МАСС m/z: 403 (M⁺).

Пример 3.

Получение (9S)-1-ацетиламино-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-4- метокси-1Н, 12Н-бензо-[de] -пирано-[3', 4': 6,7] -индолизино-[1,2-b] хинолин-10,13 (9Н, 15Н)-диона 1) 2-Оксиимино-5-метокси-8-нитро-1-тетралон.

Выполняют процедуру, аналогичную процедуре примера 1 (2) за исключением того, что используют 1,5 г 5-метокси-8-нитро-1-тетралон вместо 8-ацетиламино-1-тетралона. После обработки таким же образом, как в примере 1 - (2) получают 740 мг указанного соединения.

ИК^КBr_max см^-1: 3428, 3256, 1696, 1604, 1580, 1534.

ЯМР (ДМСО-D₆) м.д. 2,95 (4Н, с), 3,94 (3Н, с), 7,32 (1Н, д, J 8,7 Гц), 7,78 (1Н, д, J 8,7 Гц).

МАСС m/z: 251 (M⁺).

2) 2,8-диацетиламино-5-метокси-1-тетралон.

Выполняют процедуру, аналогичную процедуре в примере 1 (3), за исключением того, что используют 500 мг соединения, полученного в (1), вместо 8-ацетиламино-2-оксиимино-1-тетралона. После обработки аналогичным образом, как в примере 1 (3), получают 225 мг указанного соединения.

ИК^КBr_max см^-1: 3432, 1696, 1642, 1532.

ЯМР (CDCl₃) м. д. 1,6 2,0 (1Н, м), 2,11 (3Н, с), 2,21 (3Н, с), 2,6 3,2 (3Н, м), 3,85 (3Н, с), 4,5 4,8 (1Н, м), 7,09 (1Н, д, J 9,2 Гц), 8,55 (1Н, д, J 9,2 Гц).

МАСС m/z: 290 (M⁺).

3) 2-Ацетиламино-8-амино-5-метокси-1-тетралон.

Выполняют процедуру, аналогичную процедуре примера 1 (4), за исключением того, что используют 200 мг соединения, полученного в (2), вместо 2,8-диацетиламино-1-тетралона. После обработки аналогичным образом, как в примере 1 (4), получают 130 мг указанного соединения.

ИК^КBr_max см^-1: 3444, 2940, 1632, 1564, 1534.

ЯМР (CDCl₃) м. д. 1,6 2,0 (1Н, м), 2,08 (3Н, с), 2,6 3,4 (3Н, м), 3,77 (3Н, с), 4,52 4,61 (1Н, м), 6,52 (1Н, д, J 9 Гц), 6,98 (1Н, д, J 9,2 Гц).

МАСС m/z: 248 (M⁺).

4) (9S)-1-ацетиламино-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-4-метокси-1Н, 12Н- бензо-[d-e]-пирано[3',4':6,7]-индолизино-[1,2-b]-хинолин-10,13 (9Н, 15Н)-дион.

125 мг соединения, полученного в (3), реагируют с 133 мг триона в течение 24 ч аналогичным образом, как в примере 1 (5). После обработки аналогичным образом (по примеру 1 (5)), получают 207 мг указанного соединения.

Т. пл. выше 240^oC (разлагается).

ИК^КBr_max/см^-1: 3448, 1748, 1660, 1600.

ЯМР (ДМСО-D₆) м.д. 0,88 (3Н, дт, J 3,2, 7,2 Гц), 1,84 1,89 (2Н, м), 1,92 (3Н, д, J 4,8 Гц), 2,06 2,07 (2Н, м), 3,07 3,08 (2Н, м), 4,00 (3Н, с), 5,20 (2Н, д, J 4,8 Гц), 5,41 (2Н, д, J 4,8 Гц), 5,52 5,54 (1Н, м), 6,48 (1Н, д, J 1,6 Гц), 7,28 (1Н, д, J 2,4 Гц), 7,77 (1Н, д, J 9,5 Гц), 8,08 (1Н, д, J 9,5 Гц), 8,44 (1Н, т, J 9,5 Гц).

МАСС m/z: 475 (M⁺).

Пример 4.

Получение (9S)-1-амино-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-4-метокси-1Н,12Н-бензо-[de] пирано-[3',4':6,7]-индолизино-[1,2-b]-хинолин-10,13 (9Н,15Н)- дионгидрохлорида Вводят в реакцию 102 мг соединения, полученного в примере 3 (4), и обрабатывают аналогичным образом, как в примере 2, получая 50 мг изомера А и 44 мг изомера В указанного соединения.

Изомер А.

Т. пл. выше 240^oC (разлагается).

[]²_D⁰= +78 (c 0,25 в H₂O).

ИК^КBr_max см^-1: 3448, 2936, 1740, 1658, 1598.

ЯМР (ДМСО-D₆) м.д. 0,90 (3Н, т, J 7,2 Гц), 1,84 1,93 (2Н, м), 2,07 2,12 (1Н, м), 2,94 3,00 (1Н, м), 3,25 3,33 (1Н, м), 4,03 (3Н, с), 5,07 (1Н, ш), 5,40 5,44 (3Н, м), 5,91 (1Н, д, J 19 Гц), 7,32 (1Н, с), 7,83 (1Н, д, J 9,5 Гц), 8,15 (1Н, д, J 8,8 Гц), 8,75 (3Н, ш).

МАСС m/z: 433 (M⁺).

Изомер В.

Т. пл. выше 240^oC (разлагается).

[]²_D⁰= -34 (c 0,25 в H₂O).

ИК^КBr_max см^-1: 3448, 1744, 1654.

ЯМР (ДМСО-D₆) м.д. 0,89 (3Н, т, J 7,2 Гц), 1,84 1,91 (2Н, м), 2,06 2,12 (1Н, м), 2,95 3,01 (1Н, м), 4,03 (3Н, с), 5,07 (1Н, ш), 5,41 - 5,44 (3Н, ш. с), 5,93 (1Н, д, J 19 Гц), 7,32 (1Н, с), 7,84 (1Н, д, J 9,5 Гц), 8,16 (1Н, д, J 8,8 Гц), 8,78 (3Н, ш).

МАСС m/z: 433 (M⁺).

Пример 5.

Получение (9S)-1-амино-9-этил-2,3-дигидро-4,9-диокси-1Н,12Н-бензо-[de]- пирано-[3', 4': 6,7]-индолизино-[1,2-b]-хинолин-10,13-(9Н, 15Н)- дионгидрохлорида 90 мг соединения, полученного в примере 3 (4), добавляют к 30 мл 47 водного раствора бромистоводородной кислоты, смесь нагревают с обратным холодильником в течение 3 ч. К остатку, полученному при удалении растворителя при пониженном давлении, добавляют 30 мл воды. Нерастворимые вещества удаляют фильтрованием, используя FALCON 7105 (0.22 м). Остаток, полученный при концентрации фильтрата, чистят на HPLC с обратным током (CAPCELLPAK C18: товарный знак, производства Shiseido Co.), используя смесь ацетонитрил вода 1 н. соляная кислота (20 80 2) и получая 34 мг изомера А и 35 мг изомера В указанного соединения.

Изомер А.

Т. пл. выше 240^oC (разлагается).

[]²_D⁰= +135 (с = 0.25 в H₂O) (c 0,25 в H₂O).

ЯМР (ДМСО-D₆) м.д. 0,89 (3Н, т, J 7,2 Гц), 1,83 1,92 (2Н, м), 2,04 2,09 (1Н, м), 2,88 2,95 (1Н, м), 3,20 3,24 (1Н, м), 5,04 (1Н, ш), 5,43 (3Н, м), 5,89 (1Н, д, J 19 Гц), 7,29 (1Н, с), 7,61 (1Н, д, J 8,7 Гц), 7,99 (1Н, д, J 9,5 Гц), 8,71 (3Н, ш), 10,5 (1Н, ш).

МАСС m/z: 419 (M⁺).

Изомер В.

Т. пл. выше 240^oC (разлагается).

(с 0,2 в H₂O).

ЯМР (ДМСО-D₆) м.д. 0,89 (3Н, т. J 7,2 Гц), 1,84 1,91 (2Н, м), 2,07 2,09 (1Н, м), 2,88 2,95 (1Н, м), 3,21 3,24 (1Н, м), 5,05 (1Н, ш), 5,39 5,47 (3Н, м), 5,88 (1Н, д, J 19 Гц), 7,29 (1Н, с), 7,61 (1Н, д, J 8,7 Гц), 7,98 (1Н, д, J 8,7 Гц), 8,68 (3Н, ш), 10,5 (1Н, ш) МАСС m/z: 419 (M⁺).

Пример 6.

Получение (9S)-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-4-метокси-3- (1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)- 1Н, 12Н-бензо-[de]-пирано-[3',4':6,7]- индолизино-[1,2-b]-хинолин-10,13-(9Н, 15Н)-диона.

1) 4-Окси-5-метокси-8-нитро-1-тетралон.

2,0 г 5-метокси-8-нитро-тетралона (описан в открытой выкладке Японского Патента (KO-Kai) 279891/1989) и 2,05 г N-бромсукцинимида растворяют в 50 мл четыреххлористого углерода. После добавления каталитического количества перекиси бензоила смесь нагревают с обратным холодильником в течение 4 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и добавляют 50 мл хлороформа. Смесь промывают 10 водным раствором гидроокиси натрия, водой и насыщенным соляным раствором в указанном порядке, сушат над безводным сульфатом натрия. К остатку, полученному при удалении растворителя, добавляют 5 мл тетрагидрофурана, 5 мл этанола, 8 мл воды и 250 мг карбоната кальция, смесь кипятят с обратным холодильником. Остаток, полученный при удалении растворителя из реакционной смеси, после добавления 50 мл воды экстрагируют хлороформом. Экстракт промывают насыщенным соляным раствором, сушат над безводным сульфатом натрия и хроматографируют на колонке с силикагелем, используя смесь хлороформ-этилацетат (4 1) в качестве элюента, получая фракции, содержащие требуемое соединение. Фракции концентрируют, получая 1,49 г светло-желтого порошка указанного соединения.

ЯМР (CDCl₃) м.д. 2,2 2,4 (2Н, м), 2,5 2,7 (2Н, м), 3,0 3,2 (1Н, м), 4,00 (3Н, с), 5,29 (1Н, с), 7,09 (1Н, д, J 8,8 Гц), 7,52 (1Н, д, J 8,8 Гц).

2) 8-Амино-5-метокси-4-(1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-1-тетралон.

424 мг соединения, полученного в (1), как указано выше, 288 мг фталимида и 517 мг трифенилфосфина добавляют к 20 мл высушенного ТГФ. К указанной смеси медленно добавляют диэтилазодикарбоксилат (далее здесь обозначен "ДЭАД") при охлаждении на бане из воды со льдом. После перемешивания в течение 30 мин при той же температуре смесь экстрагируют хлороформом. Хлороформный слой промывают насыщенным соляным раствором и сушат над сульфатом магния. К остатку, полученному при концентрировании раствора, добавляют 50 мл диоксана, 50 мл этанола и 280 мг 10 палладия на углероде в качестве катализатора гидрирования. После удаления катализатора фильтрованием и концентрирования фильтрата остаток хроматографируют на колонке с силикагелем, используя смесь хлороформ-этилацетат (9 1) в качестве элюента, получая фракции, содержащие требуемое соединение. Фракции концентрируют, получая 306 мг указанного соединения.

ЯМР (CDCl₃) м.д. 2,1 3,2 (4Н, м), 3,36 (3Н, с), 5,70 (1Н, м), 6,56 (1Н, д, J 9 Гц), 6,86 (1Н, д, J 9 Гц), 7,6 7,8 (4Н, м).

3) (9S)-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-4-метокси-3- (1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-1Н, 12Н-бензо-[de] -пирано-[3', 4': 6,7]- индолизино-[1,2-b]-хинолин-10,13(9Н, 15Н)-дион.

К 30 мл толуола добавляют 306 мг соединения, полученного выше в (2), и 220 мг триона. К этому добавляют каталитическое количество ППТС для проведения реакции в аппарате Deanstark при нагревании с обратным холодильником в течение 6 ч. Реакционную смесь охлаждают, собирают осадок фильтрацией, получая таким образом 390 мг указанного соединения.

ЯМР (CDCl₃) м.д. 1,04 (3Н, т, J 7,6 Гц), 1,8 2,0 (2Н, м), 2,3 2,4 (1Н, м), 2,5 2,56 (1Н, м), 3,1 3,2 (1Н, м), 3,3 3,41 (1Н, м), 3,87 (3Н, с), 5,25 (2Н, с), 5,31, 5,75 (2Н, АВ кв. J 15,9 Гц), 6,05 (1Н, м), 7,52 (1Н, д, J 9,5 Гц), 7,6 7,8 (5Н, м), 8,28 (1Н, д, J 9,5 Гц).

Пример 7.

Получение (9S)-3-амино-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-4-метокси-1Н, 12Н-бензо-[de] пирано-[3',4':6,7]-индолизино-[1,2-b]-хинолин-10,13-(9Н, 15Н)- дионгидрохлорида 224 мг соединения, полученного в примере 6 (3), растворяют в 14 мл хлороформа. После добавления 10 мл метанола и затем 1,2 мл гидразинмоногидрата смесь перемешивают в течение 2 ч. После удаления растворителя добавляют 7 мл 5 н. соляной кислоты. Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч с последующим охлаждением. Добавляют 10 мл воды и удаляют нерастворимые вещества фильтрацией. Остаток, полученный при концентрировании фильтрата, чистят на колонке с обратным током HPLC (CAPCELL PAK C18), используя смесь ацетонитрил - вода 1 н. соляная кислота (20 80 2), получая 94 мг изомера А и 80 мг изомера В указанного соединения.

Изомер А.

Т. пл. выше 215^oC (разлагается).

ЯМР (CD₃OD) м.д. 1,00 (3Н, т, J 7,2 Гц), 1,95 (2Н, м), 2,4 2,5 (1Н, м), 2,5 2,6 (1Н, м), 3,2 3,4 (2Н, м), 4,12 (3Н, с), 5,17 (1Н, м), 5,23 5,32 (2Н, АВ кв, J 19,1 Гц), 5,37, 5,55 (2Н, АВ кв, J 16,7 Гц), 7,62 (1Н, с), 7,85 (1Н, д, J 9,5 Гц), 8,28 (1Н, д, J 9,6 Гц).

Изомер В.

Т. пл. выше 180^oC (разлагается).

ЯМР (CD₃OD) м.д. 1,01 (3Н, т, J 7,1 Гц), 1,97 (2Н, м), 2,3 - 2,45 (1Н, м), 2,5 2,6 (1Н, м), 3,2 3,4 (2Н, м), 4,16 (3Н, с), 5,18 (1Н, м), 5,25 5,38 (2Н, АВ кв, J 19,1 Гц), 5,39, 5,57 (2Н, АВ кв, J 16,7 Гц), 7,67 (1Н, с), 7,89 (1Н, д, J 9,5 Гц), 8,31 (1Н, д, J 9,5 Гц).

Пример 8.

Получение (9S)-3-амино-9-этил-2,3-дигидро-4,9-диокси-1Н,12Н-бензо-[de]- пирано-[3',4':6,7]-индолизино-[1,2-b]-хинолин-10,13-(9Н, 15Н)- дионгидрохлорида 94 мг изомера А, полученного в примере 7, растворяют в 25 мл уксусной кислоты и нагревают с обратным холодильником в течение 30 ч. После удаления растворителя, добавляют к остатку 10 мл воды и удаляют нерастворимые вещества фильтрацией. Фильтрат чистят на колонке с обратным током HPLC (CAPCELL PAK C18), используя смесь ацетонитрил вода 1 н. соляная кислота (20 80 2). Фракции, содержащие требуемое вещество, концентрируют. 17 мг изомера А указанного соединения получают при осаждении остатка в смеси метанол-этанол-этилацетат. Следуя этой процедуре, из 68 мг изомера В указанного соединения.

Изомер А.

Т. пл. выше 170^oC (разлагается).

ЯМР (ДМСО-D₆) м.д. 0,89 (3Н, т, J 7,2 Гц), 1,82 (2Н, м), 2,1 - 2,2 (1Н, м), 2,4 2,6 (1Н, м), 3,15 3,35 (2Н, м), 4,93 (1Н, м), 5,21, 5,33 (2Н, АВ кв, J 19,1 Гц), 5,41, 5,45 (2Н, А кв, J 15,9 Гц), 7,28 (1Н, с), 7,64 (1Н, д, J 9,5 Гц), 8,20 (1Н, д, J 9,5 Гц), 8,25 8,35 (3Н, м).

Изомер В.

Т. пл. выше 195^oC (разлагается).

ЯМР (ДМСО-D₆) м.д. 0,89 (3Н, т, J 7,6 Гц), 1,8 2,0 (2Н, м), 2,1 2,2 (1Н, м), 2,4 2,6 (1Н, м), 3,15 3,35 (2Н, м), 4,94 (1Н, м), 5,21 5,34 (2Н, АВ кв, J 19,1 Гц), 5,43 (2Н, с), 7,28 (1Н, с), 7,65 (1Н, д, J 9,5 Гц), 8,10 (1Н, д, J 9,5 Гц), 8,25 8,35 (3Н, м).

Пример 9.

Получение (9S)-2-ацетиламино-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-4- метокси-1Н, 12Н-бензо-[de] -пирано-[3', 4': 6,7] -индолизино-[1,2-b]- хинолин-10,13-(9Н, 15Н)-диона 1) 2-Ацетиламино-8-метокситетралин.

К раствору 5,18 г 8-метокси-2-тетралона (описан в J. Chem. Soc. 2636. 1965), растворенного в 100 мл метанола, добавляют 560 мг цианоборгидрида натрия и 4,86 г ацетата аммония, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 89 ч. Реакционную смесь охлаждают на льду и доводят рН ниже 1, затем добавляют 500 мл воды. После промывания эфиром доводят рН водного слоя до значения больше 10 гидроокисью калия и экстрагируют эфиром. Экстракт сушат над безводным сульфатом магния и остаток, полученный при удалении растворителя, растворяют в 50 мл хлористого метилена. К раствору добавляют 2 мл пиридина и 2,4 мл уксусного ангидрида и затем перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь промывают 10 водным раствором соляной кислоты, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным соляным раствором в указанном порядке и сушат над безводным сульфатом магния. После удаления растворителя остаток кристаллизуют в этилацетате и гексане, получая 2,47 г указанного соединения.

ЯМР (CDCl₃) м. д. 1,75 2,11 (2Н, м), 1,98 (3Н, с), 2,49 2,58 (1Н, м), 2,79 3,32 (3Н, м), 3,80 (3Н, с), 4,21 4,37 (1Н, м), 6,62 6,76 (2Н, м), 7,12 (1Н, т, J 7,9 Гц).

2) 2-Ацетиламино-8-метокси-5-нитротетралин.

К 20 мл уксусного ангидрида, охлажденного до 0^oC, медленно добавляют 1,75 мл дымящей азотной кислоты и затем каплю концентрированной серной кислоты. К этому раствору добавляют 2,2 г соединения, полученного в (1), как описано выше, и смесь перемешивают в течение 20 мин. К реакционной смеси добавляют 40 мл 25 водного раствора гидроокиси натрия и перемешивают в течение 30 мин. Осадок собирают фильтрацией и промывают водой. Органический слой сушат над сульфатом магния. Остаток, полученный при концентрировании раствора, хроматографируют на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь растворителей хлороформ-метанол (80 1), получая фракции, содержащие требуемое соединение. Фракции концентрируют, получая 770 мг указанного соединения.

Т. пл. 207 210^oC.

ЯМР (CDCl₃) м. д. 1,6 2,2 (2Н, м), 2,01 (3Н, с), 2,3 2,6 (1Н, м), 3,10 3,24 (3Н, м), 3,89 (3Н, с), 4,26 (1Н, м), 6,76 (1Н, д, J 9,1 Гц), 7,96 (1Н, д, J 8,9 Гц).

3) 2,5-Диацетиламино-8-метокситетралин.

320 мг соединения, полученного в (2), как описано выше, растворяют в смеси растворителя 5 мл уксусного ангидрида и палладия на углероде, в смеси проводят каталитическое гидрирование в течение 5 ч. После удаления катализатора фильтрацией и концентрирования фильтрата остаток кристаллизуют из хлороформа, получая 190 мг указанного соединения.

ЯМР (CDCl₃) м. д. 1,6 2,2 (2Н, м), 1,96 (3Н, с), 2,16 (3Н, с), 2,4 2,9 (4Н, м), 3,80 (3Н, с), 4,0 4,4 (1Н, м), 6,68 (1Н, д, J 8,5 Гц), 7,18 (1Н, д, J 8,5 Гц).

4) 3,8-Диацетиламино-5-метокси-1-тетралон.

190 мг соединения, полученного в (3), как описано выше, суспендируют в смеси 16 мл ацетона и 4 мл 15 водного раствора сульфата магния, к раствору добавляют 543 мг перманганата калия, затем перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре. После добавления 150 мл воды реакционную смесь экстрагируют хлороформом. Экстракт промывают насыщенным соляным раствором и сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя остаток кристаллизуют в этилацетате и гексане, получая 124 мг указанного соединения.

ЯМР (CDCl₃) м.д. 1,96 (3Н, с), 2,21 (3Н, с), 2,6 3,4 (4Н, м), 3,84 (3Н, с), 4,4 4,7 (1Н, м), 7,11 (1Н, д, J 9,2 Гц), 8,61 (1Н, д, J 9,2 Гц).

5) 3-Ацетиламино-8-амино-5-метокси-1-тетралон.

102 мг соединения, полученного в (4), как описано выше, загружают в 20 мл 3 н. водного раствора соляной кислоты, смесь термостатируют при 60^oC в течение 2 ч при перемешивании. После охлаждения до 0^oC реакционную смесь нейтрализуют карбонатом натрия и экстрагируют хлороформом. Экстракт сушат над сульфатом магния и хроматографируют на колонке с силикагелем, используя смесь хлороформ-метанол (40 1) в качестве элюента, получая фракции, содержащие требуемое соединение. Фракции концентрируют, получая 66 мг указанного соединения.

ЯМР (CDCl₃) м. д. 1,94 (3Н, с), 2,51 3,34 (4Н, м ), 3,76 (3Н, с), 4,06 4,75 (1Н, м), 6,55 (1Н, д, J 9 Гц), 7,00 (1Н, д, J 9 Гц).

6) (9S)-2-ацетиламино-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-4- метокси-1Н,12Н-бензо-[de]-пирано-[3',4':6,7]-индолизино-[1,2-b]- хинолин-10,13-(9Н,15Н)-дион.

126 мг соединения, полученного в (5), и 134 мг триона реагируют в течение 24 ч, затем реакционную смесь обрабатывают таким же образом, как в примере 1 (5), получая 103 мг указанного соединения.

ИК^КBr_max см^-1: 3392, 1748, 1660.

ЯМР (ДМСО-D₆) м. д. 0,98 (3Н, т, J 7,3 Гц), 1,85 (3Н, с), 1,87 - 1,93 (2Н, м), 2,67 2,81 (1Н, м), 3,02 3,09 (1Н, м), 3,97 (3Н, с), 4,22 (1Н, ш), 5,09 5,25 (2Н, м), 5,37 5,46 (2Н, м), 6,47 (1Н, шс), 7,29 (1Н, с), 7,71 (1Н, д, J 9,3 Гц), 8,03 (1Н, д, J 9,3 Гц), 8,13 (1Н, ш).

МАСС m/z: 475 (M⁺).

Пример 10.

Получение (9S)-2-амино-9-этил-2,3-дигидро-9-окси-4-метокси-1Н,12Н-бензо-[de] пирано-[3',4':6,7'индолизино-[1,2-b]-хинолин-10,13-(9Н,15Н)- дионгидрохлорида 48 мг соединения, полученного в примере 9, реагируют и затем смесь обрабатывают таким же образом, как в примере 2, получая 42 мг указанного соединения.

Т. пл. выше 240^oC (разлагается).

ИК