Лекарственный препарат и способ профилактики и лечения урогенитальных инфекций

Лекарственный препарат и способ профилактики и лечения урогенитальных инфекций

Реферат

 

Использование: в медицине для лечения урогенитальных инфекций. Сущность изобретения: препарат содержит в качестве активного начала микробную массу живых бифидобактерий в эффективном количестве и фармацевтически приемлемые целевые добавки. Предпочтительное количество бифидобактерий 10 - 10 живых клеток на одну дозу. В качестве бифидобактерий могут быть штаммы Bifidobacterium bifidum N 1, N 791 или ЛБА-3. Дополнительно могут содержаться один или несколько биологически активных ингредиентов, обладающих иммуномодулирующим, регенерирующим или протекторным действием в количестве 0,1-100,0 мг на одну дозу. Дополнительным биологически активным ингредиентами могут быть: гиалуроновая кислота, лизоцим, интерфероны, иммуноглобулины, биологически активные пептиды, антимикробные, антивирусные или антимикотические вещества. Целевыми добавками могут быть: кондитерский, пищевой или фритюрный жир, масло какао, парафин. вазелин. ланолин и эмульгатор в количестве 1,5-2,2 г на одну дозу. Препарат может представлять собой суппозитории, мазь или крем. Способ профилактики и лечения урогенитальных инфекций включает интравагинальное и/или ректальное введение пациенту лекарственного препарата, содержащего 10³-10⁸ живых клеток бифидобактерий на одну дозу, 10-30 дней, для профилактики 1-2 дозы, а для лечения - 2 дозы в день. До, одновременно или после введения препараты возможно введение антибактериального, антимикотического или эубиотического состава. 2 с.п.и 7 з.п.ф-лы, 13 табл.

Изобретение относится к медицине, а точнее касается нового лекарственного препарата для профилактики и лечения урогенитальных инфекций.

Болезни, вызываемые урогенитальными инфекциями, относятся к числу наиболее частых причин заболеваемости в мире (Краснопольский В.И. Вестник Российской ассоциации акушеровгинекологов, т.1. N 2, 1994, с.12). В последние годы как в РФ, так и за рубежом наметилась тенденция роста числа таких заболеваний, как хламидиоз, бактериальный вагиноз, микоплазмоз, кандидоз, уреоплазмоз, гарднереллез,герпес половой и др.

В медицинское практике для лечения урогенитальных инфекций широко применяются антимикробные препараты. Однако указанные препараты токсичны, обладают неспецифичным бактерицидным действием и вызывают возникновение патогенных микроорганизмов, устойчивых к действию данного антибактериального средства, вследствие чего антибиотикотерапия требует как минимум восстановления микробиоценоза организма.

В связи с вышеизложенным особое значение приобретает поиск новых, полностью безопасных, не имеющих противопоказаний и не нарушающих микробиоценоз организма лекарственных препаратов для профилактики и лечения урогенитальных инфекций.

Ближайшим аналогом изобретения является фармацевтическая композиция, включающая в качестве активного начала микробную массу живых ацидофильных лактобактерий и антимикробный агент. а также питательную среду и факторы роста лактобактерий, для предупреждения урогенитальных инфекций (WO 93/ 09793). Известный препарат может содержать фармацевтически приемлемые наполнители и представлять собой вагинальные суппозитории, мазь, крем, пасту или гель.

Отличительной особенностью известной композиции является использование облигатных компонентов нормальной урогенитальной микрофлоры организма. Механизм действия композиции заключается в уничтожении части патогенной урогенитальной микрофлоры с помощью антимикробного агента; блокировании размножения и развития оставшейся патогенной и условно-патогенной урогенитальной микрофлоры за счет адгезии на ней микробного компонента-лактобактерий; интенсивном росте и развитии лактобактерий, обусловленных факторами роста и компонентами питательной среды; создании в итоге нормальной урогенитальной микрофлоры, обеспечивающей естественный гомеостаз мочеполового тракта, являющийся в свою очередь барьером для инфицирования патогенной и условно-патогенной микрофлорой.

Недостатком известной композиции является, прежде всего использование антимикробного агента ряда антибиотиков или сульфаниламидов. Кроме того, применение композиции противопоказано при наличии микозов. И, наконец, известная композиция требует высокой концентрации лактобактерий (1,610⁹ живых клеток на одну дозу), что увеличивает ее себестоимость.

Заявляемый препарат является новым и в литературе не описан.

Целью изобретения является создание нового, высокоэффективного, нетоксичного, не обладающего побочными эффектами и не имеющего противопоказаний лекарственного препарата для профилактики и лечения урогенитальных инфекций бактериальной, вирусной и микотической природы, локализующихся, главным образом, в мочеполовом тракте и прямой кишке.

Это достигается тем, что препарат включает в качестве активного начала микробную массу живых бифидобактерий. Предпочтительно он содержит 10³-10⁶ живых клеток Bifidobacterium bifidum штаммов N 1, N 791 или ЛВА-3 на одну дозу.

В качестве биологически активных ингредиентов иммуномодулирующего, регенерирующего и протекторного действия препарат может содержать лизоцим, интерфероны, иммуноглобулины. гиалуроновую кислоту, биологически активные пептиды, факторы роста бифидобактерий, а также антимикробные антивирусные или антимикотические агенты.

Препарат может содержать фармацевтически применяемые целевые добавки и применяться в виде суппозиториев, мази, крема, пасты или геля.

В отличие от известной композиции в препарате используются несвойственные для мочеполового тракта микроорганизмы бифидобактерии, являющиеся облигатными компонентами кишечной микрофлоры.

Механизм действия препарата заключается в следующем. Бифидобактерии, обладая повышенной антагонистической активностью в отношении патогенной и условно-патогенной урогенитальной микрофлоры, включая грибы, конкурируют с ней за участки связывания на эпителиальных клетках мочеполового тракта и пищевые цепи. В связи с этим патогенная и условно-патогенная урогенитальная микрофлора, включая грибы, вытесняется бифидобактериями, которые затем элиминируются, и их место занимает нормофлора мочеполового тракта.

Препарат не имеет противопоказаний и применяется для лечения микозов, в частности, кандидозов. Кроме того, препарат полностью безопасен, значительно более эффективен и обладает меньшей себестоимостью, поскольку используется без антимикробного агента, факторов роста бифидобактерий и компонентов питательной среды в значительно (в 10 1000000 раз) более низких концентрациях живых бактериальных клеток на одну дозу.

Cледует отметить, что бифидобактерии в составе композиций или самостоятельно применяются для создания и поддержания нормофлоры кишечника, для регуляции кишечной микрофлоры, лечения дисбактериоза кишечника, дизентерии, коликов у новорожденных, реактивного постинфекционного артрита, атопического дерматита, для получения иммуномодулятора, для снижения концентрации мочевины в организме, для регуляции уровня холестерола в плазме крови, для биологической деодоризации и т.д. (DE 2755037 Al, EP 0482530 A3, SU 1286212 Al, SU 1258414 Al, DE 3716938, SU 1553132 Al, SU 1816215 A3, RU 2023445, DE 3406772 Al, EP 0181170 Bl, EP 0208818 Bl, EP 0228861Bl). Однако использование бифидобактерий в качестве средства для профилактики и лечения урогенитальных инфекций неизвестно.

Таким образом, предлагаемый лекарственный препарат обладает высокоэффективным антибактериальным, антимикотическим и противовирусным действием, является полностью безопасным, не имеет противопоказаний и не обнаруживает побочных эффектов и находит применение для профилактики и лечения широкого спектра урогенитальных инфекций.

Предлагаемый препарат представляет собой лиофильно высушенную в среде культивирования микробную массу живых. антагонистически активных штаммов Bifidobacterium bifidum. Он представляет собой аморфный продукт с желтоватым оттенком, без запаха и вкуса, хорошо растворимый в воде с образованием суспензии бактериальных клеток. Препарат применяется в виде суппозиториев, мази, крема, пасты или геля.

Пример 1. Препарат в форме суппозиториев включает ингредиенты на один суппозиторий, приведенные в табл. 1-9.

Пример 2. Препарат в форме мази включает ингредиенты на одну дозу, приведенные в табл. 10 и 11.

Пример 3. Препарат в форме крема включает ингредиенты на одну дозу, приведенные в табл. 12 и 13.

Клинические испытания препарата для профилактики и лечения урогенитальных инфекций в мочеполовом тракте и прямой кишке были проведены в районных женских консультациях, в клиниках Московского областного научно-исследовательского института акушерства и гинекологии, Центре акушерства, гинекологии и перинатологии Минздрава РФ, Центральном кожно-венерологическом научно-исследовательском институте, Центре колопроктологии и ряде городских и областных больниц на 902 больных и 65 здоровых людях.

Пример 4. Клинические испытания препарата и его антибактериальных аналогов для профилактики и лечения бактериального вагиноза проводили в районных женских консультациях и в Центре акушерства, гинекологии и перинатологии Минздрава РФ на 138 женщинах репродуктивного возраста с выявленным бактериальным вагинозом и на 30 беременных.

Для диагностики бактериального вагиноза необходимо наличие следующих признаков: гомогенные, молочной консистенции выделения из влагалища; рН влагалищного отделяемого более 4,5; положительный аминный тест; наличие "ключевых" клеток во влагалищном отделяемом.

Влагалищное отделяемое при бактериальном вагинозе жидкое, беловатого цвета, гомогенные выделения равномерно распределяются по стенкам влагалища. В отличие от вагинального кандидоза или трихомоноза отсутствует воспалительная реакция стенок влагалища, нет гиперемии и отека вульвы или стенок влагалища. Раздражение, отек и болезненность у пациенток с бактериальным вагинозом редко бывают ярко выраженными, чаще эти жалобы умеренные.

Величина рН вагинального содержимого может быть определена с помощью бумажных тестов или рН-метром после разведения влагалищного отделяемого изотопическим раствором хлорида натрия. Этот тест обладает высокой чувствительность (80-98%). но малоспецифичен (50-70%).

Положительный аминный тест состоит в появлении запаха гнилой рыбы при добавлении к капле влагалищного отделяемого капли 10%-ного раствора КОН. Положительный тест связан с появлением летучих аминов (путресцин, кадаверин, триметиламин), которые являются продуктом жизнедеятельности облигатных анаэробов. При отсутствии трихомонад этот тест высокочувствителен и специфичен (более 90% ). Однако в случаях абсолютного преобладания гарднерелл тест отрицателен.

"Ключевые" клетки представляют собой зрелые эпителиальные клетки (поверхностный слой влагалищного эпителия), на которые по всей поверхности плотно и в большом количестве налипают мелкие грамвариабельные палочки. Клетки легко обнаруживаются в неокрашенных нативных мазках и в фиксированных мазках влагалищного отделяемого при любых способах окраски. Однако наибольшей специфичности и чувствительности (приближающейся к 100%) этот метод достигает при окраске по Граму, когда легко можно исключить "ложноключевые" клетки, которые могут быть связаны с адгезией лактобацилл.

Первой группе из 30 больных вводили интравагинально заявляемый препарат в течение 20 дней из расчета 2 дозы в день. По окончании курса лечения у 17 пациенток бактериальный вагиноз не выявлялся, что соответствует 56,7% излечения.

При увеличении курса лечения до 30 дней бактериальный вагиноз не выявлялся еще у четырех пациенток, что соответствует 70% излечения.

Второй группе из 68 больных вводили интравагинально КИП (комплексный иммуноглобулиновый препарат) в форме свечей из расчета 2 свечи в день в течение пяти дней, затем вводили интравагинально заявляемый препарат из расчета 2 дозы в день в течение десяти дней, после чего аналогично вводили ацилакт в форме свечей в течение 10 дней по две свечи в день.

По окончании курса комплексной терапии у 51 пациентки бактериальный вагиноз не выявлялся, что соответствует 75% излечения.

Третьей группе из 20 больных вводили интравагинально антибактериальный препарат далацин в форме крема из расчета 1 доза в день согласно инструкции в течение 7 дней. По окончании курса антибактериальной терапии у 12 пациенток бактериальный вагиноз не выявлялся, что соответствует 60% излечения.

Четвертой группе из 20 больных вводили перорально антибактериальный препарат метронидазол в форме таблеток из расчета 500 мг 2 раза в день в течение 7 дней. По окончании курса антибактериальной терапии у 12 пациенток бактериальный вагиноз не выявлялся, что соответствует 60% излечения.

Таким образом, проведенные сравнительные клинические исследования показали большую эффективность заявляемого препарата для лечения бактериального вагиноза по сравнению с антибактериальными средствами.

Следует отметить, что рецидивы заболевания у третьей и четвертой группы пациенток через 7-10 месяцев после курса лечения отмечались у 50-70% женщин, в то время как у первой и второй группы лишь у 25-35% Кроме того, обследование 30 беременных группы "риска" достоверно показало, что профилактическое применение препарата в течение 20-30 дней на ранних стадиях беременности из расчета 1-2 доза в день снижает риск развития бактериального вагиноза на 60% П р и м е р 5. Клинические испытания заявляемого препарата и его антибактериальных аналогов для профилактики и лечения микозов, в частности, кандидоза проводили в районных женских консультациях и клинике Московского областного научно-исследовательского института акушерства и гинекологии на 246 женщинах репродуктивного возраста с выявленным кандидозом и на 30 женщинах группы "риска".

Диагностику кандидоза осуществляли определением кандид в мазке.

Первой группе из 28 больных вводили интравагинально пимафуцин в форме свечей в течение 3-х дней по 1 свече в день. По окончании курса антимикотической терапии у 8 пациенток кандидоз не выявлялся, что соответствует 29% излечения.

Второй группе из 40 больных вводили интравагинально гино-певарил-150 в форме свечей в течение 3-х дней по 1 свече в день. По окончании курса антимикотической терапии у 26 пациенток кандидоз не выявлялся, что соответствует 65% излечения.

Третьей группе из 82 больных вводили интравагинально заявляемый препарат в течение 15 дней из расчета 2 дозы в день. По окончании курса лечения у 46 пациенток кандидоз не выявлялся, что соответствует 56% излечения.

Четвертой группе из 96 больных вводили интравагинально гино-певарил-150 в форме свечей в течение 3-х дней по одной свече в день, после чего аналогично вводили заявляемый препарат в течение 10 дней из расчета 2 дозы в день. Курс комплексной терапии обеспечивает 100% излечения.

Таким образом, заявляемый препарат по эффективности антимокотического действия превосходит пимафуцин и незначительно уступает гино-певарилу-150, причем наилучшие результаты демонстрирует комплексная терапия.

Обследование 35 женщин группы "риска" (со снижением титром лактобактерий в вагине и пониженной кислотностью вагинальной среды) достоверно показало, что профилактическое применение заявляемого препарата в течение 10-20 дней интравагинально из расчета 1-2 дозы в день снижает риск развития кандидоза на 65% Пример 6. Клинические испытания заявляемого препарата для лечения хламидиоза проводили в клинике Московского областного научно-исследовательского института акушерства и гинекологии, Центральном кожно-венерологическом научно-исследовательском институте и ряде региональных больниц на 300 женщинах репродуктивного возраста с выявленным хламидиозом.

Диагностику хламидиоза осуществляли на основании анамнеза, оценки клинических признаков заболевания и лабораторных методов исследования. В связи с тем, что для урогенитального хламидиоза более характерно малосимптомное и латентное течение, основное значение имела лабораторная диагностика этой инфекции. Лабораторную диагностику хламидиоза проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Клинический материал для ПЦР собирали в пробирки с буферным раствором, хранили в морозильных камерах. Повторное замораживание-оттаивание не допускалось.

Обработка материала: Клинический материал в объеме 100 мкл смешивали со 100 мкл лизирующего буфера (1% твин-20, 1% NP-40, 60 мкг/мл протеиназы К, фосфатный буфер). Смесь инкубировали при 56^oС в течение 2 ч, после чего инактивировали при 95^oС в течение 10 мин (термическая обработка необходима для инактивации протеиназы К и обеззараживания клинического образца). Инактивированные образцы центрифугировали при 10000 g 10 мин. Супернатант собирали и использовали для проведения ПЦР.

Проведение ПЦР.

Реагенты вносили в реакционную пробирку в следующей последовательности: вода бидистиллированная до 30 мкл конечного объема смеси; реакционный буфер 10% 2,5 мкл; 650 мМ раствор МgCl₂ 1,2 мкл; смесь dNTP's 2,5 мкл; Таq полимераза 1-1,5 ед. олигонуклеотидные праймеры 15 пмоль; контрольный образец ДНК или клинический образец 1-2 мкл.

Для предохранения от испарения на реакционную смесь наслаивали 30 мкл минерального масла. Пробирки помещали в амплификатор.

Проводили ПЦР в следующих температурных режимах: 96^oС 4 мин, 55^oС 10 мин 1 цикл; 95^oС 1 мин, 55^oС 1 мин, 72^oС 2 мин 35 циклов.

После завершения ПЦР продукты амплификации фракционировали методом электрофореза в 1,5% -ном агарозном геле. Наличие специфического фрагмента ДНК определяли с помощью контрольной ДНК исследуемого возбудителя, амплифицированной одновременно с клиническими образцами.

Результат анализа считался положительным в следующем случае: размер ДНК-продукта в клиническом образце точно соответствовал ДНК-продукту контрольной положительной пробы; в пробе, содержащей клинический образец и внутренний стандарт идентифицировали специфический ДНК-продукт внутреннего стандарта; в пробе, содержащей вместо клинического образца аликвоту воды (отрицательный контроль), ДНК-продукты не обнаруживали.

Результат анализа считался отрицательным в следующем случае: в пробе, содержащей клинический образец, специфических ДНК-продуктов не обнаруживали; результаты ПЦР в обеих контрольных пробах аналогичны предыдущим.

Следует отметить, что у больных с урогенитальным хламидиозом отмечается значительная контаминация дрожжевыми грибами рода Candida. Так, у 135 из 300 больных с выявленным хламидиозом отмечался также и кандидоз. Исследования показали, что в этом случае целесообразно начинать лечение с ликвидации микозов. Поэтому больным с выявленным кандидозом назначали комплексную терапию согласно примеру 5.

Затем всем больным вводили перорально антибактериальный препарат вилпрафен (йозамицин) в течение 15 дней из расчета 500 мг 2 раза в день, после чего вводили интравагинально заявляемый препарат в течение 10 дней из расчета 2 дозы в день и, наконец, аналогично вводили ацилакт в форме свечей в течение 10 дней по 1 свече в день.

Через 2 недели после окончания курса лечения все пациенты подвергались клинико-лабораторному контролю методом ПЦР. При этом у 285 пациенток хламидиоз не выявлялся, что соответствует 95% излечения. Пятнадцати больным с вновь выявленным хламидиозом назначали аналогичный курс комплексной терапии с пероральным введением другого антибиотика заноцина-200 или заноцина-100 из расчета 200 мг 2 раза в день, что обеспечивало 100% излечения.

Таким образом, излечение хламидиоза обеспечивает применение комбинации заявляемого препарата с антибактериальным и эубиотическим средствами.

Пример 7. В последние годы наметилась тенденция к увеличению числа смешанных урогенитальных инфекций, которые по данным G.Torrigiani составляют 50-90% от числа инфекций, передаваемых половым путем.

Клинические испытания заявляемого препарата для лечения смешанных урогенитальных инфекций проводили в клинике Московского областного научно-исследовательского института акушерства и гинекологии, Центра акушерства, гинекологии и перинатологии Минздрава РФ и Центральном кожно-венерологическом научно-исследовательском институте на 218 женщинах репродуктивного возраста с выявленными смешанными урогенитальными инфекциями. При этом у 55 больных выявлена хламидийноуреоплазменная, у 32 больных - хламидийно-гарднереллезная, у 23 больных хламидийно-кандидозная, у 45 больных хламидийно-вирусная (герпес-вирус II и I тип, цитомегаловирус), у 20 больных хламидийно-микоплазменная инфекция, у 23 больных сочетание 3-х инфекций, а у 20 больных сочетание 4-х и 5-и инфекций.

Кандидоз выявляли определением кандид в мазке. Диагностику хламидиоза и прочих урогенитальных инфекций проводили методом ПЦР согласно примеру 6 с использованием в качестве контрольного образца соответствующей тестируемой ДНК возбудителя.

23 больным с хламидийно-кандидозной инфекцией назначали комплексную антимикотическую терапию согласно примеру 5, затем комплексную антихламидийную терапию согласно примеру 6. Через 2 недели после окончания курса лечения все пациенты подвергались клинико-лабораторному контролю методом ПЦР. Эффективность лечения составляла 95% Остальным 195 больным вводили перорально антибактериальный препарат вилпрафен (йозамицин) в течение 15 дней из расчета 500 мг 2 раза в день, после чего вводили интравагинально заявляемый препарат в течение 10 дней из расчета 2 дозы в день и, наконец, аналогично вводили ацилакт в форме свечей в течение 10 дней по 1 свече в день. При этом больным с хламидийно-вирусной инфекцией одновременно с заявляемым препаратом вводили внутримышечно миелопид или реальдерон в течение 3-5 дней из расчета одну дозу в день. Через 2 недели после окончания курса лечения все пациенты подвергались клинико-лабораторному контролю методом ПЦР. Эффективность лечения хламидийно-вирусной инфекции составляла 80% всех прочих смешанных инфекций 90-95% Таким образом, излечение смешанных урогенитальных инфекций обеспечивает применение комбинации заявляемого препарата с антибактериальными и эубиотическими средствами.

Пример 8. У 10% всех обследованных больных заболевания, вызванные урогенитальными инфекциями, сопровождались проктитами аналогичной этиологии.

Диагностику проктитов проводили методом ректоскопии и клинико-лабораторными методами согласно примерам 4-6.

Больным с выявленными проктитами на фоне вышеуказанного курса лечения конкретного заболевания вводили заявляемый препарат ректально одновременно с его интравагинальным введением из расчета 2 дозы в день. При этом курс лечения заканчивали пероральным введением бактерийных препаратов бифидумбактерина, колибактерина (бификола) и ацилакта (лактобактерина) во флаконах из расчета 5 доз на один прием 2 раза в день в течение месяца.

После окончания лечения все пациенты подвергались клинико-лабораторному контролю вышеуказанными методами (примеры 4-6). Эффективность лечения составляла 90% Профилактику проктитов проводили одновременно с профилактикой конкретного заболевания аналогичной этиологии ректальным введением заявляемого препарата из расчета 1-2 дозы в день. При этом профилактическое применение заявляемого препарата снижает риск развития проктитов на 62,5%

Формула изобретения

1. Лекарственный препарат для профилактики и лечения урогенитальних инфекций, содержащий в качестве активного начала микробную массу живых бактерий и фармацевтически приемлемые целевые добавки, отличающийся тем, что в качестве микробной массы он содержит бифидобактерии в эффективном количестве.

2. Препарат по п.1, отличающийся тем, что он содержит микробную массу бифидобактерий в количестве 10³ 10⁸ живых клеток на 1 дозу.

3. Препарат по п.1 или 2, отличающийся тем что он содержит в качестве бифидобактерий один или смесь штаммов Bifidobacterium bifidum N 1, N 791 или ЛВА-3.

4. Препарат по п.1, 2 или 3, отличающийся тем, что он дополнительно содержит один или несколько биологически активных ингредиентов, обладающих иммуномодулирующим, регенерирующим или протекторным действием, в количестве 0,1 100,0 мг на 1 дозу.

5. Препарат по п.4, отличающийся тем, что биологически активными ингредиентами являются вещества, выбранные из группы, включающей гиалуроновую кислоту, лизоцим, интерфероны, иммуноглобулины, биологически активные пептиды, антимикробные, антивирусные или антимикотические вещества.

6. Препарат по п.1, отличающийся тем, что в качестве целевых добавок он содержит один или несколько ингредиентов из группы, включающей кондитерский, пищевой или фритюрный жир, масло, какао, парафин, вазелин, ланолин и эмульгатор в количестве 1,5 2,2 г на 1 дозу.

7. Препарат по п.1 или 6, отличающийся тем, что он представляет собой суппозитории, мазь или крем.

8. Способ профилактики и лечения урогенитальных инфекций путем интравагинального и/или ректального введения пациенту лекарственного препарата, отличающийся тем, что в качестве лекарственного препарата используют препарат по пп. 1 7, содержащий 10³ 10⁸ живых клеток бифидобактерий на 1 дозу, введение препарата осуществляют в течение 10 30 дней, при этом для профилактики вводят 1 2 дозы препарата в день, а для лечения 2 дозы в день.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что до, одновременно или после введения лекарственного препарата по пп.1 7 пациенту вводят антибактериальное, или антимикотическое, или эубиотическое средство.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5

NF4A Восстановление действия патента Российской Федерации на изобретение

Извещение опубликовано: 20.09.2004        БИ: 26/2004