Производные оксиндолов или их фармацевтически приемлемые соли

Производные оксиндолов или их фармацевтически приемлемые соли

Реферат

 

Настоящее изобретение относится к новым производным 3-замещенных 2-оксиндолов (I), которые являются ингибиторами простагландин H₂ синтазы, 5-липоксигеназы и биосинтеза интерлейкина-1.

(I) где X, Y = H, Cl, F, Br, C₁ - C₆ алкил, СF₃; R = CONR¹R²; R¹, R² = H, C₁ - C₆ алкил; , F, Cl, Br, I, OR³,S(O)_nR⁴, COOR⁵, CONR³R⁵, COR⁴, CN, NO₂, CH₂OR⁵, OCOR⁴, SO₂NR³R⁵, NR³R⁵, N(R³)COR⁵; R³=H, C₁ - C₆ алкил; R⁴=C₁ - C₆ алкил; R⁵=H,C₁ - C₆ алкил; n =0, 1, 2; B = H, F, Cl, Br, CF₃, C₁ - C₆ алкил. 2 с. и 5 з.п. ф-лы, 4 табл.

Настоящая заявка является частичным продолжением находящейся на рассмотрении заявки серийный N 07/340 113, поданной 18 апреля 1989 года.

Настоящее изобретение относится к новым производным 3-замещенных 2-оксиндолов, которые являются ингибиторами простагландин Н₂ синтазы, 5-липоксигеназы и биосинтеза интерлейкина-1.

Соединения изобретения являются полезными в качестве ингибиторов простагландин Н₂ синтазы и биосинтеза интерлейкина-1, самих по себе, а также в качестве анальгетических, противовоспалительных и противоаритмических агентов при лечении хронических воспалительных заболеваний. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные производные 3-замещенных 2-оксиндолов; к способам ингибирования простагландин Н₂ синтазы и биосинтеза интерлейкина-1 и к лечению хронических воспалительных заболеваний у млекопитающих с помощью указанных соединений. Кроме того, настоящее изобретение относится к некоторым новым карбоновым кислотам, полезным в качестве промежуточных продуктов, при получении 3-замещенных 2-оксиндолов настоящего изобретения и к способу получения производных 3-замещенных 2-оксиндолов.

В патенте США N 5 469 942 описаны некоторые 2-оксиндол-1-карбоксамиды формулы: где Х является Н, фтором, хлором, бромом, (C₁-C₄)-алкилом, (C₃-C₇)-циклоалкилом, (С₁-C₄)-алкокси, (С₁-C₄)-алкилтио, трифторметилом, (С₁-C₄)-алкилсульфинилом, (C₁-C₄)-алкилсульфонилом, нитро, фенилом, (С₂-C₄)-алканоилом, бензоилом, тоноилом, (С₁-C₄)-алканамидо, бензамидо или N, N диалкилсульфамоилом, имеющим 1 3 атома углерода в каждом из указанных алкилов; Y является Н, фтором, хлором, бромом, (C₁ C₄)-алкилом, (C₃ - C₇)-циклоалкилом, (C₁ C₄)-алкокси, (С₁-C₄)-алкилтио и трифторметилом; R¹ является (C₁ C₈)-алкилом, (C₃ C₇)-циклоалкилом, (C₄ - C₇)-циклоалкенилом, фенилом, замещенным фенилом, фенилалкилом, имеющим 1 3 атома углерода в указанном алкиле, замещенным /фенокси/алкилом, содержащим 1 3 атома углерода в указанном алкиле, /тиофенокси/ алкилом, содержащим 1 3 атома углерода в указанном алкиле, нафтилом, бицикло (2.2.1) гептан-2-илом, бицикло (2.2.1)гепт-5-ен-2-илом или -(СН₂)_n-Q-R^o' n равно нулю, 1 или 2; Q является двухвалентным радикалом, происходящим из фурана, тиофена, пиррола, пиразола, имидазола, тиазола, изотиазола, оксазола, изоксазола, 1,2,3-тиадиазола, 1,3,4-тиадиазола, 1,2,5-тиадиазола, тетрагидрофурана, тетрагидротиофена, тетрагидропирана, тетрадротиопирана, пиридина, пиримидина, пиразина, бензо(в) фурана и бензо(г) тиофена; R^o является Н или (C₁ - C₃)-алкилом; и является (C₁ C₆)-алкилом, (C₃ - C₇)-циклоалкилом, бензилом, фурилом, тиенилом, пиридилом или где R³ и R₄ каждый является Н, фтором, хлором, (С₁-C₄)-алкилом, (C₁ C₄)-алкокси или трифторметилом.

В этом патенте также описано, что указанные 2-аксиндол-1-карбоксамиды являются ингибиторами циклооксигеназы и липоксигеназы, обладают анальгетической активностью у млекопитающих и являются полезными при лечении боли и облегчения симптомов хронических заболеваний, таких как воспаление и боль, связанные с ревматоидным артритом и остеоартритом.

В патенте США N 4556672 описаны некоторые 3-алилзамещенные 2-оксиндол-1-карбоксамиды формулы: где Х, Y и R₁ имеют значения, указанные ранее для соединений патента США N 4569942. Соединения патента США N 4556672 описаны как имеющие такую же активность, как и соединения патента США N 4569942, указанную выше.

В патенте США N 4861794 описано использование соединений формулы: и из фармацевтически приемлемых основных солей, где Х является Н, Сl или F, Y является Н или Сl, а R является бензилом или тионилом, для ингибирования биосинтеза интерлейкина-1 (ИЛ-1) и для лечения вызванных ИЛ-1 расстройств и дисфункций.

В заявке на патент РСТ серийный N РСТ US 88/03658, поданной 18 октября 1988 года, описаны нестероидные противовоспалительные агенты формулы: где каждый из X и Y является водородом, фтором или хлором; R¹ является 2-тиенилом или бензилом; R¹ является алканоилом, циклоалкилкарбонилом, фенилалканоилом, бензоилом и некоторыми замещенными бензоильными группами, теноилом, омега-алкокси-карбонилалканоилом, алкоксикарбонилом, феноксикарбонилом, 1-алкоксикарбонилокси, алкилсульфонилом, метилфенилсульфонилом и диалкилфосфонатом.

Уже сообщалось, что интерлейкин-1 (ИЛ-1) стимулирует ресорбцию кости как in vitro тaк и in vivo, Hayward M.U.Fiedler-Hagy Cn. Агенты и действия, 22, 251 254 (1987). Также сообщалось здесь, что ИЛ-1, между прочим, индуцирует продуцирование простагландина Е₂ (ПГЕ₂), ПГЕ₂ является стимулятором резорбции кости и участвует в потере кости. Смотри Hayward M. и Caggiano T.J.annual Reports in Medicinae Chemistry, 22, Sect. IV, Chapter 17, 169 178 (1987). Остеопороз определяется как ослабление потери минеральных составляющих кости, что в результате приводит к более высокой скорости перелома. Смотри Hayward M. и Caggiano T.J. выше, и приведенные здесь ссылки.

Уже сообщалось, что интерлейкин-1 включается в патогенез многих заболеваний. Смотри Sinarello C.A. J. Clin Jmmunjc 5, 287 237 (1985), содержание которых приводится здесь в качестве уровня техники. Кроме того, было обнаружено, что повышение уровня ИЛ-1 подобного материала ассоциируются с псориазом. Caмp, R.S. al. J.Jmmunal 137, 3469 3474 т (1986).

Настоящее изобретение обеспечивает новые 3-замещенные 2-оксиндольные соединения формулы: и их фармацевтически приемлемые соли, где Х является Н, F, Cl, Br, (1C₁-C₆)-алкилом, (C₃-C₈)-циклоалкилом, NO₂, CF₃, CN, CH, S(O)_mR³, OR⁴, COR⁴ или CONR⁴R⁵.

Y является H, F, CL, Br, (C₁-C₂(2АЛКИЛОМ6 (C₃-C₈)-циклоалкилом, ТO₂, CF₃, CN, S(O)gR¹⁷, OR¹⁸, COR₁₈ или CONR¹⁸R₁₉, R¹ является Н, алканоилом с 2 10 атомами углерода, циклоалкилкарбонилом с 5 7 атомами углерода, фенилалканоилом с 7 10 атомами углерода, хлорбензоилом, метоксибензоилом, теноилом, омега-алкоксикарбонилалканоилом, указанная алкоксигруппа содержит 1 3 атома углерода, а указанная алканоильная группа содержит 3 5 атомов углерода, алкоксикарбонилом с 2 10 атомами углерода, феноксикарбонилом, 1-(ациклокси)-алкилом, где ацил имеет 1 4 атома углерода, 1-(алкоксикабонилокси) алкилом, где указанная алкоксигруппа имеет 2 5 атомов углерода, а указанный алкил имеет 1 4 атома углерода, алкилом с 1 3 атомами углерода, алкилсульфонилом с 1 3 атомами углерода, метилфенилсульфонилом или деалкилфосфонатом, где каждый из указанных алкилов содержит 1 3 атома углерода; R² является СOR⁶, CONR⁷R⁸ (С₁-C₆)-алкилом, (С₃-C₈)-циклоалкилом, фенилом или моно-, или дизамещенным фенилом, где заместитель или заместители каждый является Сl, Br, F (C₁-C₆)-алкилом, (С₁-C₆)-алкокси или СF₃; Q является или Q²-A¹ А является Н, F, Cl, Br. I, CF₃, OR⁹, S(O)_pR¹⁰, COOR¹¹, CONR⁹R¹¹, CN, NO₂, COR¹⁰, CH₂OR¹¹, OCOR¹⁰, NR⁹R¹¹, N(R⁹)COR¹¹, SO₂NR⁹R¹¹ , , , , , , или B является Н, F, Cl, Br, I, CF₃, OR¹⁹, S(O)_tR¹⁴, COOR¹⁵, CONR¹³R¹⁵, CN, NO₂, COR¹⁴, CH₂OR¹⁵, OCOR¹⁴, NR¹³R¹⁵, N(R¹³)COOR¹⁵ или SO₂NR¹³R₁₅ при условии, что А и В не могут быть оба Н или А и В, взятые вместе, соединенные с одним и тем же углеродом кольца Q, и равны оксо, или когда А не является Н и имеет указанные ранее значения или является (C₁-C₄)-алкилом; A¹ является F, Cl, Br, J, CF₃, OR⁹, S(O)_pR¹⁰, COOR¹¹, CONR⁹R¹¹, CN, NO₂, COR¹⁰, CH₂OR¹¹, OCOR¹⁰, NR⁹R¹¹, N(R⁹)COOR¹¹, или SO₂NR⁹R₁₁ Q¹ является , , , , , , , , , , , , или Q² является , , , или м; n, p, q и t каждый равен нулю, 1 или 2; W¹ и Z каждый является О, S или NR¹¹; W¹ и W² каждый является О, S или NR¹⁰ при условии, что когда один из W¹ или W² является О, S или NR¹⁰, другой является О или S, R³, R¹⁰, R⁶, R¹⁴ и R¹⁷ каждый является (С С)-алкилом или фенилом; R⁵, R⁸, R¹¹, R¹⁵ и R¹⁹ каждый является Н, (С₁-C₆)-алкилом или фенилом; R⁴, R⁷, R⁹, R¹³ и R¹⁸ каждый является Н или (C₁-C₆)-алкилом; и является Н, F, Cl, Br, CF₃ или (C₁-C₆)-алкилом.

Хотя приведенные выше соединения формулы I показаны как энолы, простые и сложные эфиры энолов, должно быть понятно, что когда R¹ является Н, соединения формулы I могут быть в их таутомерной кетонной форме. То есть, Все такие таутомерные формы входят в область настоящего изобретения и приложенной формулы изобретения и изображаются формулой I. Далее заместители у экзоциклической двойной связи в положении 3 соединений формулы I могут быть син, анти или смесью обоих. Cледовательно соединения формулы I, имеющие структуры и и их смеси входят в область настоящего изобретения и все такие изомеры описываются формулой I и входят в область приложенной формулы изобретения.

Соединения формулы I, у которых R¹ является другим, чем Н, являются пролекарствами соединений формулы I, у которых R¹ является Н, и их солей.

Термин "пролекарство" относится к соединениям, которые являются предшественниками лекарств, которые после введения и абсорбции млекопитающими, выделяют лекарство in vivo с помощью некоторых метаболических процессов.

После желудочно-кишечной абсорбции пролекарства гидролизуются in vivo в соответствующие соединения формулы I, где R является Н, или их соли. Поскольку пролекарства изобретения не являются энольными кислотами, сводится к минимуму экспозиция желудочно-кишечного тракта родственным кислотным соединением.

Предпочтительная группа соединений настоящего изобретения составлена соединениями формулы I выше, где R¹ является Н. Другой предпочтительной группой соединений является группа соединений формулы I, у которых Х и Y каждый является Н, F, Cl, NO₂ (С₁-C₃)-алкилом или CF₃. Еще одной предпочтительной группой соединений является группа соединений формулы I, у которых R² является COR⁶, CONR⁷R⁸ или (С₁-C₆)-алкилом, где R⁶, R⁷ и R⁸ имеют указанные ранее значения. Другой предпочтительной группой соединений настоящего изобретения является группа соединений формулы I, где Q является Q¹, a Q¹ является или Другой предпочтительной группой соединений являются соединения формулы I, в которых Q является Q¹, где Q¹ является , W является О или S; a W¹ является О или S. Другая предпочтительная группа соединений состоит из соединений, у которых Q является Q², где Q² является или и W является S Более предпочтительной группой соединений являются соединения, у которых Q является Q¹, где Q¹ является а W является Q или S. Особенно предпочтительные соединения являются теми, у которых R¹ является Н; Х и Y каждый является Н, F, Cl, NO₂ (С₁-C₃)-алкилом или СF₃; R² является COR⁶, CONR⁷T⁸ или (C₁-C₆)-алкилом, где R⁶, R⁷ и R⁸ имеют указанные ранее значения; а Q является Q¹, где Q¹ является или где W имеет указанные ранее значения, или Q является Q¹, где Q¹ является где W является Q или S, или Q является Q, где Q¹ является или где W является Q или S и W¹ является Q или S или Q является Q², где Q² является или где W является S. Еще более предпочтительными соединениями являются те из непосредственно приведенных выше, у которых является S, R² является CONR⁷R⁸ и R⁷ и R⁸ являются Н. Еще более предпочтительными являются указанные соединения, у которых Х является Н, Cl или CF₃; Y является Н, Cl или F; A является Cl, Br, F, CF, SCH₃, OCH₃ или CH₂OCH₃; и В является Н, Cl, Br или СН₃. Другими особенно предпочтительными соединениями являются указанные соединения, у которых n равно нулю или 1, когда n равно нулю, эти соединения являются более предпочтительными.

Еще одной предпочтительной группой соединений являются соединения формулы I и соединения, указанные выше, как предпочтительные, более предпочтительные и особенно предпочтительные, у которых А является Н, F, Cl, Br, CF₃, OR⁹, CN, NO₂, COR¹⁰, CH₂OR¹¹, N(R⁹)COR¹¹, а В является Н, F, Cl, Br, CF₃, OR¹³, CN, NO₂, COR¹⁴, CH₂OR¹⁵ или N(R¹³)COR¹⁵, где R⁹, R¹⁰, R¹¹, R¹³, R¹⁴ и R¹⁵ имеют указанные ранее значения, или А и В, взятые вместе, связанные с одним и тем же углеродом кольца Q¹ и равны оксо, или когда А не является Н, В имеет указанные ранее значения или является (С₁-C₃)-алкилом; и А¹ является F у еще более предпочтительных соединений, являющихся такими соединениями, у которых R⁶ является CH₃; R⁷ является Н и R⁸ является Н или (C₁-C₄)-алкилом.

Соединения формулы I выше, у которых R¹ является Н, являются активными как ингибиторы простагландин Н₂ синтазы (циклооксогеназы), как ингибиторы 5-липоксигеназы и как ингибиторы биосинтеза интерлейкина-1 (ИЛ-1) у млекопитающих. Соединения формулы I в дополнение к их полезности как такие ингибиторы являются полезными как анальгетики, противовоспалительные и антиаритритные агенты при лечении хронических воспалительных заболеваний у млекопитающих.

Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие соединения формулы I. Далее настоящим изобретением обеспечиваются способы ингибирования простагландин Н₂ синтазы и биосинтеза интерлейкина-1 у млекопитающих при введении эффективного количества соединений формулы I указанному млекопитающему. Настоящим изобретением также обеспечивается способы лечения вызванных интерлейкином-1 расстройств и иммунных дисфункций и/или хронических воспалительных заболеваний у млекопитающих при введении указанным млекопитающим эффективного количества соединения формулы I. В рамках настоящего изобретения такие хронические заболевания включают, но не ограничиваются ими, псориаз, ревматоидный артрит и остеоартрит.

Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает новые карбоновые кислоты формулы и их соли, у которых А² является Н; В¹ находится в положении 4 и является S(O)_p, R¹⁶ или СOOCH₃, или В¹ находится в положении 5 и является SO₂NHCH₃ или В¹ находится в положении 4 или 5 и является СON(CH₃)₂ , , , или n' равно нулю; p' равно 1; W³ является S; Z¹ является О или S, R¹² является Н, Cl, Br, CF₃ или (C₁-C₆)-алкилом; и R¹⁶ является (С₁-C₆)-алкилом.

Соединения формулы II являются полезными в качестве промежуточных продуктов при получении некоторых соединений формулы I.

Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает новый способ получения некоторых соединений формулы I, выше у которых R¹ является Н, а R² является R²⁰ как определено ниже, который заключается во взаимодействии соединения формулы Q-(CH₂)_n COOH (II), где Q и n имеют указанные ранее значения для соединения формулы I с молярным избытком 1,1'-карбонилдиимидазола в инертном реакционном растворителе в инертной атмосфере и взаимодействии продукта в присутствии основного агента с производным 2-оксиндола формулы (IV) где Х и Y определены выше для соединений формулы I, а R²⁰ является COR⁶ CONR⁷R⁸ фенилом или моно- или дизамещенным фенилом, в котором заместителем или заместителями являются Cl, F, Br, (C₁-C₆)-алкилом, (C₁-C₆)-алкокси или CF₃, где R⁶, R⁷ и R⁸ определены выше для соединений формулы I, при температуре около 0 50^oС в инертном реакционном растворителе в инертной атмосфере.

Способ получения соединений формулы I, у которых R¹ является Н, показан на реакционной схеме А выше и описан ниже. Замещенные 2-оксиндольные соединения формулы IV получают по методикам, описанным в патентах США 3634453, 4556672, 4569 942, 4695571 в ЕП 175551 и приведенных здесь ссылках. Их содержание приведено здесь в качестве уровня техники. Карбоновые кислоты формулы получают, как описано ниже, и активируют при взаимодействии соединения формулы II с молярным избытком тионилхлорида, необязательно в присутствии инертного реакционного растворителя. Подходящими инертными реакционными растворителями являются те, которые будут, по крайней мере, частично растворять один или все реагенты или продукт. Полученное в результате карбонилхлоридное соединение формулы III растворяется в инертном реакционном растворителе и его медленно прибавляют к раствору, охлажденному до примерно 0^oС, состоящему из примерно эквимолекулярного количества замещенного 2-оксиндола формулы IV и молярного избытка основного агента в инертном реакционном растворителе. Реакционный инертный растворитель описан выше, но на практике обычно используют полярный апротонный растворитель, такой как N,N-диметилформамид, N,N-диметилацетамид, N-метилпирролидон или диметилсульфоксид. Предпочтительным растворителем является диметилформамид. Может быть использовано широкое разнообразие основных агентов в реакции между карбонилхлоридом формулы III и замещенным 2-оксиндолом формулы IV. Однако предпочтительными основными агентами являются третичные амины, такие как триметиламин, триэтиламин, трибутиламин, N-метилморфолин, N-метилпиперидин, пиридин и 4-/N,N-диметиламино/пиридин, особенно предпочтительным основным агентом является 4-/N, N-диметиламино/пиридин. После прибавления карбонилхлоридного соединения формулы III к замещенному 2-оксиндолу формулы IV реакционной смеси дают нагреться до примерно 25^oС и продолжают реакцию при этой температуре. Время реакции составляет от примерно 30 мин до 2 ч. По окончании реакции реакционную смесь подкисляют, а затем извлекают продукт, например, фильтрацией. Затем продукт можно промыть, высушить и снова очистить стандартными методами, такими как перекристаллизация.

Альтернативно соединения формулы I, в которых R является Н, могут быть получены по новому способу изобретения, показанному на реакционной схеме В и описанному ниже. Карбоновые кислоты формулы Н, полученные как описано ниже, вводят в реакцию с небольшим молярным избытком 1,1-карбонилдиимидазола в инертном реакционном растворителе. Реакцию проводят при температуре около 25^oС и перемешивают в инертной атмосфере. Реакцию проводят в течение примерно 2 ч, после чего всю реакционную смесь прибавляют к смеси, состоящей из примерно эквимолекулярного количества замещенного 2-оксиндольного соединения формулы IV, полученного, как описано выше, в присутствии молярного избытка основного агента в инертом реакционном растворителе, в инертной атмосфере. Подходящими инертными реакционными растворителями являются те, что описаны выше для реакционной схемы А, а предпочтительным для использования здесь растворителем является N,N-диметилформамид. Инертную атмосферу получают при проведении реакции в инертном газе, таком как азот или аргон. Подходящими основными агентами являются тем, что описаны выше для реакционной схемы А, а предпочтительными основными агентами являются 4-/N,N-диметиламино/пиридин и триэтиламин.

Другой способ, полезный для получения соединений формулы I, в который R¹ является Н, заключается в присоединении заместителя в положение 3 требуемого 2-оксиндольного соединения формулы: при взаимодействии соединения формулы VI с производным соответствующих кислоты формулы Н выше по методике, описанной в патенте США 4556672. Полученные в результате соединения формулы затем превращают в соответствующие соединения формулы I' выше по методикам, описанным в патентах США 3634453, 4556672, 4569942, 4695571 в ЕП 175551 и приведенных здесь ссылках.

Имеется два способа, которые могут быть применены для синтеза соединений формулы I, в которой R¹ является другим, чем водород (формула I'' в реакционной схеме С). Первый способ заключается в обработке раствора соответствующего замещенного 2-оксиндола формулы I' выше и эквимолекулярного количества триэтиламина в инертном реакционном растворителе, таком как хлороформ, при 0^oС с эквимолекулярным количеством, плюс небольшой избыток необходимого хлорангидрида кислоты, хлорформата, оксаниевой соли или алкилирующего агента. Через 2 ч реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и оставляют на 2 3 ч. Если исходный оксиндол не прореагировал полностью, смесь охлаждают до 0^oС, прибавляют дополнительный ацилирующий или алкилирующий агент и повторяют процесс до тех пор, пока не израсходуется весь исходный оксиндол.

Продукт отделяют от реакционного растворителя фильтрованием и промывают 1н. соляной кислотой, затем распределяют в органическом растворителе и насыщенном растворе бикарбоната натрия. Органический слой сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный в результате продукт очищают перекристаллизацией или хроматографией.

Вторая процедура, полезная и при получении соединений настоящего изобретения, у которых R¹ не является водородом, заключается в контактировании в безводном инертном реакционном растворителе, таком как ацетон, соответственно замещенного 2-оксиндола формулы I' с трехкратным молярным избытком необходимого алфа-хлоралкилкарбоната, пятикратным молярным избытком йодида натрия и двукратным молярным избытком безводного карбоната калия (высушенного в глубоком вакууме при 165^oС в течение 1 ч) и нагревании указанной реакционной смеси при кипячении с обратным холодильником в течение 16 ч.

Реакционную смесь охлаждают, разбавляют водой и экстрагируют продукт не смешивающимся с водой растворителем, таким как диэтиловый эфир или хлороформ. Объединенные экстракты сушат, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Полученный в результате сырой продукт очищают перекристаллизацией и/или хроматографией.

Некоторые карбоновые кислоты формулы II являются известными и карбоновые кислотные соединения формулы II включают новые карбоновые кислоты формулы II', полученные известными способами или по способам, аналогичным известным методикам. Такие способы могут включать получение соответствующих сложных эфиров или нитридов соответствующих карбоновых кислот, которые в случае гидролиза по известным методикам дают интересующие карбоновые кислоты. Такие способы описаны: Taylor, E.C. at al. J O.C.50:1002 (1985); Noto, R. et al. J. Chem. Soc. P.T. 11, 689 (1987); Schick, J.W. et al. J. Am. Chem. Soc. 70: 286 (1948); Carpenter, A. J. et al. Tetrahedron 41:3808 (1985); Gronowitz, S. et al. Arkiv. for Kemi. 21:265 (1963); Benkeser, R. A. et al. J.O.C. 38: 3660 (1973); Corral, C. et al. Heterocycles 23:1431 (1985); Iriarte, J. et al. J. Het. Chem. 13: 393 (1976); Reinecke, M.G. et al. Synthesis, 327 (1980); Lawesson, S.O. Arkiv. for Kemi. 11:317 (1957); Gronowitz, S. Arkiv. for Kemi. 8:87 (1955); Knight, D.W. et al. J. Chem. Soc. P.T.I. 791 (1983); Gronowitz, S. Arkiv. for Kemi. 12:239 (1958); Sice, J. Am. Chem. Soc. 75: 3697 (1953); Bohlmann, F. et al. Chem. Ber. 106:497 (1973); Thames, S. F. et al. J. Het. Chem. 3:104 (1966); Arndt, F. et al. Chem. Ber. 94:1757 (1961); Cymerman-Craig, J. et al. J. Chem.Soc. 237 (1954); Lora-Tamayo, M. et al. Anales Real Soc. Espan. Fis. Quim. Ser. B 62:187 (1966); Nemec, N. et al. Coll. Czech. Chem. Comm. 39:3527 (1974); Janda, M. et al. Coll. Czech. Chem. Comm. 27: 1191 (1962); Carpenter, A. J. et al. Tetrahedron Letters 26:1777 (1985); Satonaka, H. Bull. Chem. Soc. Japan 56:2463 (1983); Kinoshita, T. et al. Bull. Chem. SOc. Japan 48:1865 (1975); Schwertner, E. et al. CA 88: 105790c (1978); Takaya, T. et al. bull. Chem. Soc. Japan 41:2086 Takaya, T. et al. Bill. Chem. Soc. Japan 41:2086 (1968); Kim, H. et al. J. Med. Chem. 29: 1374 (1986); Dostert, P. et al. Eur. J. Med. Chem. Chim. Ther. 17:437 (198); Sato, N. et al. J. Heterocyclis Chem. 19:407 (1982); Ladruee, D. et al. Heterocycles 22: 299 (1984); Leanxa, W.J. et al. JACS 75:4086 (1953); Barlin, G.B. et al. Aust. J. Chem. 30:2319 (1977); Gregory, G.I. et al. JCS P. T. 1: 47 (1973); Moriarty, R.M. et al. JACS 89:5958 (1967); Ross, J.M. et al. JACS 86: 2861 (1964); Goerdeler, J. et al. Chem. Ber. 99:1618 (1966); Demaree, P. et al. Can. J. Chem. 55:243 (1977); U.S. Patent 4,001,238; Kawazu, M. et al. J. Med. Chem. 15:914 (1972); Buckle, D.R. et al. JCS P.T. 1: 627 (1982); Naikm S.R. et al. JOC 38:4353 (1973); Okada, M. et al. Marcomolecules 19: 503 (1986); Jndetti, M.A. et al. CA 92:76268p (1980); Neth. Appl. 6,503,440, Sept. 20, 1965; Kenley, R.A. et al. CA 101:90841f (1984); Schmidt, U. et al. CA 96:104572m (1982); Lukes, R. et al.Cjem. listy 51: 1510 (1957); Krowicki, K. et al. JOC 52:3493-3501 (1987); Goya, P. et al. Heterocycles 24:3451 (1986); Montero, J.L. et al. J. Heterocyclic Chem. 15: 929 (1978); Yasuda, N. et al. J. Heterocyclic Chem. 24:303 (1987); Hosmane, R.S. et al. Heterocycles 24:2743 (1986); Rapoport, H. et al. Environ. Health Persp. 67: 41 (1986); Kravchenko, T.B. et al. CA 107:18953t (1987); Stanovnik, B. et al. Heterocycles 12:761 (1979); Smithm R. C. et al. Biochem. Oharmacol. 36:1457 (1987); Bosso, C. et al. Org. Mass Spectrom. 20:263 (1985); Takagi, T. et al. CA 83:164172x (1975); Bende, Z. et al. CA98:89254e (1983); Sarodnick, G. et al. CA101:38426k (1984); Fletton, R.A. et al. CA107:39474k (1987); Solomon, D.M. et al. Heterocycles 26:651 (1987); Erlenmeyer, H. et al. Helv. Chim. Acta 27:1432 (1944); CA98:95673 (1983); U.S. Patent 4, 437, 876; Hundle, B. S. et al. Biochemistry 26:4505 (1987); Marutani, Y. et al. CA104: 19320q (1986); Golubev, A.A. et al. CA107:236584x (1987); Higuchi, M. et al. CA104: 215392t (1986); Nakagawa, M. et al. Tetrahedron Letters 27: 6087-6090 (1986); Pereira, M.A. et al. CA101:165001t (1984); Fujii, S. et al. CA102: 45788d (1985); Bredereck, H. et al. Chem. Ber. 97:1414 (1964); Howe, R. K. et al. CA95:80933f (1981); Ibarra, C.A. et al. Tetrahedron Letters 26:243 (1985); Hoppe, D. Justus Liebigs Ann. Chem:1843 (1976); Evans, D.L. et al. JOC 44: 497 (1979); Ozaki, Y. et al. Synthesis (1979) 216; Ehler, K.W. et al. CA87: 136361x (1977); Scolastico, C. et al. Synthesis:850 (1985); Corsico Coda, A. et al. Heterocycles 26:745 (1987); Fields, R. et al. CA90:152072w (1979); Farina, F. et al. Heterocyclec 24:2587 (1986); Manaev, Y.A. et al. CA98: 71993k (1983); Beck, J.R. CA107:23332b (1987); Ajki, I. et al. CA107: 176057r (1987); Beck, J.R. et al. J. Heteroceclic Chem. 24:267 (1987); Sato, T. et al. CA107:39807w (1987), Ege, G. et al. Chem. Ber. 120:1375 (1987); Klein, H. J. et al. CA102:203932c (1985); Perevalov, V.R. et al. CA101: 171198d (1984); Hamilton, H.W. C.A. 107; 59059a (1987); Sabate-Alduy, C. et al. CA 87, 23137k (1977); Bastide, J. et al. Tetrahedron 30:3355 (1974); Chrzaszawska, A. Lodz. Tow. Navk, Wydz. 111, 112:119 (1967) (CA 71:124091r (1969)); British Patent 705,950 (CA4S:2233 (1955)); and Se Nardo, M. CA 87: 118063x (1977); Cоединения формулы I, в который R¹ является Н, являются кислотными и они образуют основные соли. Все такие основные соли входят в область изобретения и они могут быть получены традиционными методами. Например, они могут быть получены при простом контактировании кислотных и основных веществ, обычно в стехиометрическом соотношении, или в водной, или в неводной или в частично водной среде, как соответствует. Соли извлекают или фильтрованием, или осаждением нерастворителем с последующей фильтрацией, или выпариванием растворителя, как подходит, или в случае водных растворов, лиофилизацией. Типичные соли соединений формулы I, которые могут быть получены, являются солями первичных, вторичных и третичных аминов, солями щелочных металлов и солями щелочно-земельных металлов. Особенно ценными являются соли этаноламина, диэтаноламина, триэтаноламина.

Основные агенты, особенно пригодные для образования солей, принадлежат как к органическому, так и к неорганическому типу и они включают органические амины, гидроксиды щелочных металлов, карбонаты щелочных металлов, бикарбонаты щелочных металлов, гидриды щелочных металлов, алкоксиды щелочных металлов, гидроксиды щелочно-земельных металлов, карбонаты щелочно-земельных металлов, гидриды щелочно-земельных металлов и алкоксиды щелочно-земельных металлов. Типичными примерами таких оснований являются первичные амины, такие как н-пропиламин, н-бутиламин, анилин, циклогексиламин, бензиламин, п-толуидин, этаноламин и глюкамин; вторичные амины, такие как диэтиламин, диэтаноламин, N-метилглюкамин, N-метиланилин, морфолин, пирролидин и пиперидин; третичные амины, такие как триэтиламин, пирролидин, и пиперидин; третичные амины, такие как триэтиламин, триэтаноламин, N,N-диметиламилин, N-этилпиперидин и N-метилфорфолин: гидроксиды, такие как гидроксид натрия, алкоксиды, такие как этоксид натрия и метоксид калия; гидриды, такие как гидрид кальция и гидрид натрия; карбонаты, такие как карбонат калия и карбонат натрия.

Способность соединений формулы I ингибировать биосинтез интерлейкина-1 показана в процедуре, описанной ниже.

CЗН/HeN мышей (Чарльз Райвер, Уилмингтон, Массачусеттс) умерщвляют шейной дислокацией и их брюшную полость опрыскивают 70%-ным этанолом, чтобы предотвратить бактериальное загрязнение полученных в последствии клеточных препаратов. В брюшину каждой мыши вводят 8 мл/RPMI (RPMI-1640 среда (Хазелтон Рисерч Продактс. Инк. Ленекса, Канзас), Канзас) содержащей 5% FCS (Фетальная сыворотка теленка, которая была скринирована на хорошую отзывчивость к ИЛ-1 в тимоцитном анализе (Хиклон Лабораториз, Логан, Ута) и на низкую спонтанную пролиферацию в отсутствии ИЛ-1) пенициллин-стрептомицин (100 единиц/мл 100 мкг/мл) и глютамин (2 мм). Брюшину смешивают в общую массу, чтобы помочь высвободить клетки. Затем делают надрез через кожу брюшины, чтобы раскрыть лежащий под ней мышечный слой. Удаляют перитонеальную жидкость иглой 20 калибра путем вставки иглы острием вниз через обнаженный мышечный слой точно ниже грудины. Перитонеальную жидкость от шести мышей объединяют в пластиковую коническую пробирку и проводят микроскопическое исследование на бактериальное загрязнение. Незагрязненную жидкость центрифугируют при примерно 600хg в течение 6 мин и декантируют надосадочный слой. Объединяют клеточные шарики из 5 6 пробирок и повторно суспендируют все в 20 мл RP MI-FCS³. Затем выясняют число клеток, используя гемацитометр, и определяют жизнеспособность клеток окрашиванием Трипан блю, также используя гемацитомер. Клетки потом разбавляют до концентрации 310⁶ клеток/мл, используя RPMI-FC. В ячейки пластины с 35 мм ячейками вносят 1 мл указанной выше суспензии клеток. Клетки инкубируют 2 ч при 37^oС в атмосфере 5% CO₂, чтобы вызвать прикрепление макрофагов к стенкам ячеек. Удаляют надосадочный слой, создавая интенсивное кружение суспензии в ячейках и декантируя. Прикрепившиеся клетки (т. к. макрофаги) дважды промывают RPMI-SF⁴. В ячейки, содержащие прикрепившиеся клетки, прибавляют 1 мл изучаемых соединений в концентрациях от 0,1 до 100 мгм/мл в RРМI-SF или 1 мл RPMI-SF в качестве контроля. Затем в каждую ячейку прибавляют 100 мкл Р вRPMI-SF (1 мг/5 мл).

¹ RPMI-1640 cреда, содержащая 5% фетальной сыворотки теленка ⁴ RPMI, содержащая пенициллин-стрептомицин (100 единиц/мл 100 мкг/мл/ и глютамин (2 мМ).

⁵ Тонко очищенный липополисахарид из Salmonella minnesota который был проконтролирован, чтобы определить, что СЗН/HeJ мыши не дают ответа на него. в RPMI-SF (1 мг/5 мл). Пластины инкубируют при 37^oС в атмосфере 5% CO₂ в течение 24 ч. Надосадочные жидкости удаляют и анализируют на ИЛ-1 сразу или же после охлаждения или замораживания для последующего анализа.

Надосадочные жидкости анализировали количественно на ИЛ-1 в соответствии с аналитическими рецепторами связывания, описанными ниже. Стандартную кривую строят следующим образом, EZ 4 6,1 клетки тимуса мыши (10 - 1510⁶ клеток) в 0,4 мл связующего буфера (RPMI 1640, 5% FCS, 25 мМ НЕРЕS, 0,01% NaNO₃, pH 7,3)прибавляют, варьируя количества немеченного мышиного rIZ-I рекомбинант IZ-I продуцированный в Eseherichia coli от опубликованной последовательности аминокислот 115 270 для IZ-I, Lomeclico, P.M. et al. Nature 312, 458 462, 1984) (40 пг до 49 нг в 0,5 мл буфера) и инкубируют 1 ч при 4^oС при непрерывном встряхивании, после чего прибавляют 0,8 нг (0,1 мл) человеческого ¹²⁵I-rIZ-I (Нью Инглэнд Нуклеар, Бостон, Массачусеттс) и продолжают встряхивать еще 3 ч. Образцы фильтруют на устройстве Йеда (Линса Ко. Тель-Авив, Израиль) через стекловолокнистые фильтры Ватман (С2. 4 см) блокированный с 0,5% порошковым молоком в течение 2 ч при 37^oС и один раз промывают 3 мл охлажденного льдом буфера. Фильтры подсчитывают в гамма-счетчике Сирла и неспецифическое связывание рассматривают как связывание в присутствии 200 нг немеченного r-IZ-I. Калибровочная кривая Хилла строится как график log(Y) (100-Y) по отношению к logC, где Y представляет собой процент контроля ¹²⁵I-rIZ-I связывания.

Линия, спрямленная по методу наименьших квадратов, соответствует величинам Y между 20 и 80% Затем для количественного определения уровней ИЛ-1 в надосадочных жидкостях, полученных как описано выше, разбавленные надосадочные жидкости заменяют rIZ-I в приведенном выше протоколе, и используют измеренный процент величин связывания для определения концентраций ИЛ-1 из стандартного графика Хилла. Каждое разбавление анализируют дважды и обычно используют только те разбавления, у которых величины Y находятся между 20 и 80% чтобы рассчитать средние уровни ИЛ-1.

Способность соединений формулы I ингибировать протагландин H₂ синтазу и 5-липоксигеназу показана в следующей процедуре анализа. Применяя описанную ниже процедуру, измеряют уровни известных продуктов простагландин H₂ синтазы и 5-липоксигеназы для клеток, обработанных изучаемым соединением для ингибирования протагландин Н₂ синтазы и/или 5-липоксигеназы, которое доказывается снижением количества или отсутствие известных продуктов этих ферментов.

Клетки RBZ-I, поддерживаемые в монослое, выращивают в течение 1 2 дней в культуре Спиннера в минимальной основной среде (Игла) с солями Ирла плюс 15% фетальной коровьей сыворотки, дополненной раствором антибиотик/антимикотик (Гибко) согласно методу Jackschik B.A. et al. Nature 287:51 52 (1980). Клетки дважды промывают и повторно суспендируют в холодной РМI 1640 до плотности клеток 410⁶ клеток/мл. Затем 0,25 мл аликвота изучаемого соединения при желаемой концентрации в RPMI 1640 уравновешивают при 37^oС в течение 5 мин. К уравновешенному аликвоту прибавляют 0,25 мл аликвота предварительно подогретой клеточной суспензии и смесь инкубируют при 37^oС в течение 5 мин. Прибавляют 10 мл раствора, содержащего 14-С-арахидоновой кислоты и А-23187 (ионофора кальция, Сигма Кемикал) и смесь инкубируют при 37^oС в течение еще 5 мин. Затем прибавляют 267 мкл ацетонитрила 0,3% уксусной кислоты и смесь оставляют стоять на льду в течение 30 мин. Перемешивают содержимое пробирки, осветляют центрифугированием (3000 об/мин, 10 мин), декантируют надосадочную жидкость и повторно центрифугируют 2 м