1-аклил, 1-алкенил или 1-алкиниларил-2-амино-1,3- пропандиолы или их оптические изомеры, или фармацевтически приемлемые соли и способ их получения

1-аклил, 1-алкенил или 1-алкиниларил-2-амино-1,3- пропандиолы или их оптические изомеры, или фармацевтически приемлемые соли и способ их получения

Реферат

 

Использование: в качестве лекарственных средств для лечения расстройства памяти. Сущность: 1-алкил, 1-алкенил или 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолы получают, например, взаимодействием галогенпиридина с фенилалкином в акцепторе кислоты и в присутствии дихлорида бис(трифенилфосфин) палладия/иодида меди при 0 - 75^oC. 2 с.п. ф-лы, 4 ил., 7 табл.

Изобретение относится к 1-алкил, 1-алкенил, и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолам формулы 1: где R является R⁵ представляет группу формулы: CH₃(CH₂)_mCC-, CH₃(CH₂)mCH CH-, CH₃(CH₂)_mCH₂-CH₂-, , m от 3 до 15 и n от 0 до 12.

R¹ является водородом или где R⁶ водород, низший алкил, низший алкокси, или R² является водородом или низшим алкилом, R³ является водородом, низшим алкилом или , где R⁶ определен выше, R⁴ является , где R⁷ водород, низший алкил, или CH₂OR⁶, где R⁶ водород или , где R⁶ определен выше, R¹ и R⁸, взятые вместе с атомом кислорода, с которым они связаны, образуют группу формулы: где R⁹ и R¹⁰ независимо являются водородом или алкилом или их оптически изомеры или фармацевтически приемлемые соли.

Настоящее изобретение относится также к оптическим изомерам указанных соединений или их фармацевтически приемлемым солям, а также использованию этих соединений для лечения воспалительных состояний /поскольку они обладают способностью к ингибированию протеинкиназы C/; для лечения псориаза и других кожных заболеваний; для лечения раковых заболеваний /поскольку указанные соединения обладают способностью к ингибированию роста опухолевых клеток/; для лечения расстройств памяти, например, таких, как болезнь Альцгеймера, а также в качестве противогрибковых и антибактериальных средств, которые могут быть использованы как отдельно, так и в сочетании с адьювантами.

Предпочтительными 2-амино-1,3-пропандиолами настоящего изобретения являются соединения, в которых R является , R¹, R², и R³ являются водородом и R⁵ является CH₃/CH₂/_mCH₂CH₂ или CH₂/CH₂/_nCH₂CH₂. Предпочтительным также являются соединения, где R представляет собой ; R¹ и R² водород; ; и R⁵ CH₃/CH₂/_m .

Соединения настоящего изобретения, в которых отсутствует элемент симметрии, существуют в качестве оптических антиподов и их рацемических форм. Оптические антиподы могут быть получены из соответствующих рацемических форм с помощью стандартной техники оптического разделения, включая, например, разделение диастереометрических солей соединений, которые характеризуются присутствием основной аминогруппы и оптически активной кислоты; или соединений, которые характеризуются присутствием группы карбоновой кислоты и оптически активного основания, или путем синтеза из их оптически активных предшественников.

Настоящее изобретение включает в себя все оптические изомеры, их рацемические формы, и геометрические изомеры, которые будут раскрыты в описании к формуле изобретения. Формулы соединений, представленные в настоящем описании, показывают, что они включают в себя все возможные геометрические и оптические изомеры.

Соединения настоящего изобретения, имеющие смежные хиральные центры, присутствуют в качестве диастереомеров и различаются как эритро- и треоизомеры. Эритро-диастереомерами являются такие соединения, которые могут стать мезоформой, то есть оптически неактивной формой благодаря тому, что они имеют элемент симметрии в одной из возможных конформаций, если один из неодинаковых заместителей замещается один другим. Треодиастереомерами являются такие соединения, которые остаются энантиомером, т.е. оптически активным изомером, благодаря отсутствию элемента симметрии в одном из возможных конформаций, если один из неодинаковых заместителей замещается другим. Например, замещение аминогруппы эритро-2-амино-1,3-пропандиола 9а настоящего изобретения гидроксильной группой образует мезо-1,2,3- пропантриол 9b, имеющий плоскость симметрии, проходящую через углеродный скелет молекулы, как показано ниже: и замещение аминогруппы трео-2-амино-1,3-пропандиола 9с настоящего изобретения гидроксильной группой образует энантиомер 9d, в котором элемент симметрии во всех конформациях, один из которых представлен формулой 9d.

Новые 1-алкил-, 1-алкенил- или 1-алкинил-арил-2-амино-1,3- пропандиолы общей формулы I могут быть получены реакцией соединения формулы 4а где R" является R¹¹ и R¹² низший алкил, Y галоген, с алкином формулы или CH₃(CH₂)_mCCH где m и n определены выше, в целях получения соединения формулы I, где R определен выше, где R⁵ группа или CH₃(CH₂)_mCC R¹ и R² водород, R³ группа COR⁶, где R⁶ низший алкил, и R⁴ группа CO₂R⁷, где R⁷ низший алкил, с последующим или выделением целевого продукта или b) необязательно его восстановлением боргидридом щелочного металла с целью получения соединения формулы I, где R определены выше и R⁵ или -CH₃(CH₂)_mCC- R¹ и R² водород, R³ группа COR⁶, где R⁶ низший алкил, и R⁴ является группой CH₂OH или с) необязательно гидрогенизацией соединения формулы I, полученного на стадии а) или b), в целях получения соединения формулы I, где R определен выше, где R⁵ является CH₃(CH)_2m CH₂-CH₂ или , CH₂-CH₂, R¹ и R² являются водородом, R³ является COR⁶, где R⁶ низший алкил и R⁴ является CO₂R⁷, где R⁷ низший алкил, или R⁴ является CH₂OH, или d) необязательно восстановлением соединения формулы I, где R определен выше, где R⁵ является CH₃(CH₂)_m CH₂-CH₂ или CH-CH₂, R¹ и R² являются водородом, R³ является COR⁶, где R⁶ низший алкил, и R⁴ является CO₂R⁷, где R⁷ низший алкил, с использованием щелочного борогидрида в целях получения соединения формулы I, где R, R⁵, R¹ и R² определены выше, а R⁴ является CH₂OH, или е) необязательно гидрогенизацией соединения формулы I, в которой R определен выше, где R⁵ является или -CH₃(CH₂)_mCC R¹ и R² являются водородом, R³ является COR⁶, где R⁶ низший алкил, и R⁴ является CH₂OH, в целях получения соединения формулы I, где R, R¹, R², R³ и R⁴ определены выше и R⁵ является CH₃(CH₂)_m CH CH или CH CH, или f) необязательно гидролизом соединения формулы I, где R определен выше, R¹ и R² является водородом, R³является COR⁶, где R⁶ низший алкил и R⁴ является CH₂OH в целях получения соединения формулы I, где R, R⁵, R¹ и R⁴ определены выше, а R³ является водородом, или g) необязательно взаимодействием соединения формулы I, где R определен выше, R¹, R² и R³ являются водородом, и R⁴является CH₂OH, с низшим альдегидом в присутствии восстанавливающего агента в целях получения соединения, формулы I, где R и R⁵ определены выше, R² является водородом, R⁴ является CH₂OH и R² и R³ являются низшим алкилом, или h) необязательно взаимодействием соединения формулы I, где R определен выше, R¹, R² и R³ являются водородом и R⁴ является -CH₂OH с N-бензилоксикарбонилокси-сукцинимидом формулы 20: в целях получения соединения формулы I, где R и R⁵ определены выше, R¹ и R² являются бензилоксикарбонилом, R² - водородом и R⁴ является CH₂OR⁸ и, где R⁸ бензилоксикарбонил, или k) необязательно ацилированием соединения формулы I, где R определен выше, R¹ и R² являются водородом, R³ является COR⁶, где R⁶ низший алкил, и R⁴ является CH₂OH в целях получения соединения формулы I, где R, R⁵, R¹, R² и R³ определен выше, а R⁴ является CH₂OCOR⁶, где R⁶ низший алкил, или l) необязательно взаимодействием соединения формулы I, где R определен выше, R¹ и R² являются водородом, R³ является COR⁶, где R⁶ низший алкил, и R⁴ является CH₂OH с 2,2-диметоксипропаном, в целях получения соединения формулы I, где R, R² и R³ определены выше, R⁴CH₂OR⁸ и R¹ и R⁸, взятые вместе, образуют группу формулы: Общий способ получения новых 1-алкил-, 1-алкенил, и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолов настоящего изобретения могут быть получены проиллюстрированными Реакционными схемами А, В и С (фиг.1-3) для ряда пиридинов, имеющих аралкильную боковую цепь. Указанные трансформации могут быть использованы при получении соединений настоящего изобретения, в которых арильной группой, среди прочих, является замещенный и незамещенный фенил, фурил, тиенил, изоксазолил, изотиазолил, и пирролил, тиазолил, и оксазолил, имеющий 1-алкильную, 1-алкенильную или 1-алкинильную боковую цепь.

Для получения 1-алкинилпиридинил-2-амино-1,3-пропандиола 7, где W и Х являются водородом, алкилом, алкокси, галогеном или трифторметилом, пиридинилкарбоксальдегид 2, в котором W и Х определены выше, а Y является галогеном, конденсируют со сложным эфиром амидомалоновой кислоты 3, где R¹¹ и R¹² являются алкилом, в целях получения пиридинилпропионата 4, где R¹¹ и R¹², Х и Y определены выше, который алкинилируют до получения алкинилпиридина 5, где R¹¹, R¹², W и Х определены выше, n 3 15, который в свою очередь восстанавливают до пиридинил-1,3-пропандиола 6, где R¹² и Х определен выше, а затем гидролизуют до соединения 7.

Конденсацию карбоксальдегида 2 и малоната 3 проводят в эфирном растворителе в присутствии третичного амина. Примерами таких растворителей могут быть диэтиловый эфир; 1,2-диметилоксиэтан, 2-метоксиэтиловый эфир, диоксан, и тетрагидрофуран. Примерами третичных аминов могут служить пиридины /пиридин, пиколин, лутидин и коллидин/ и триалкиламины /триметиламин, триэтиламин, трипропиламин/. Предпочтительным растворителем является тетрагидрофуран, а предпочтительным третичным амином является триэтиламин. Поскольку температура конденсации не является критической, то эту реакцию предпочтительно осуществлять приблизительно при комнатной температуре /25^oC/, хотя указанная реакция может протекать как при пониженных температурах /около 0 25^oC/, так и при повышенных температурах /от около 25^oC до точки кипения реакционной смеси/.

Реакцию алкинилирования осуществляют путем обработки галогенпиридина 4 алкином 13: где W и n определены выше, в акцепторе кислоты, например, ди- или триалкиламине, таком, как диэтилаин, дипропиламин, триметиламин, или трипропиламин, и в присутствии дихлорида бис/трифенилфосфин/палладия/иодида меди при температуре около 0 75^oC. Предпочтительным акцептором кислоты является триэтиламин. Предпочтительной температурой алкилирования является температура около 50 60^oC. При этом может быть использован эфирный растворитель. Такими эфирными растворителями являются диэтиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, 2-метоксиэтиловый эфир, диоксан, и тетрагидрофуран. Предпочтительным растворителем является тетрагидрофуран.

Реакцию восстановления алкилпиридинилпропионата 5 в пропандиол 6 осуществляют с помощью щелочного борогидрида в эфирном растворителе при температуре восстановления в пределах около 0 50^oC. Такими борогидридами щелочных металлов являются борогидрид кальция, борогидрид лития, борогидрид калия и борогидрид натрия. А примерами эфирных растворителей являются диэтиловый эфир, 1,2-диметоксиэтан, 2-метоксиэтиловый эфир, диоксан, и тетрагидрофуран. Предпочтительной является восстановительная система борогидрида лития или борогидрида кальция в тетрагидрофуране при температуре около 0 25^oC.

Гидролиз карбооксамида 6 в аминодиол 7 может быть осуществлен с помощью стандартной гидролизной техники. Например, карбоксамид 6 может быть гидролизирован с помощью гидроокиси щелочного металла, например, гидроокиси лития, натрия или калия, в водном алканоле, таком, как метанол, этанол или 1- или 2-пропанол, при температуре гидролиза около 0 100^oC.

В целях получения 1-алкилпиридинил-2-амино-1,3-пропандиола 9, где W, X и m определены выше, 1-алкинилпиридинил-2-амино-1,3- пропандиол 6, гидрогенизируют с получением 1-алкинилпиридинил-2- амидо-1,3-пропандиола 8, который превращают в 1-алкилпиридинил-2- амино-1,3-пропандиол 9.

Гидрогенизацию осуществляют путем обработки алкина 6 водородом при атмосферном давлении приблизительно до 60 фунт/кв. дюйм /413,6 кПа/, а предпочтительно около 40 фунт/кв. дюйм /275,7 кПа/, в присутствии металлического катализатора, например, платинового, палладиевого, родиевого или рутениевого катализатора без подложки или нанесенного на подложку из угля или карбоната кальция, при этом предпочтительным является палладированный уголь, и в присутствии алканола, например, метанола, этанола, или 1- или 2-пропанола, а предпочтительно этанола, при температуре гидрирования около 25^o 50^oC, а предпочтительно при 25^oC.

Превращение пиридиниламидодиола 8 в пиридиниламидодиол 9, то есть, гидразинолиз 8, проводят с использованием гидразина в свободной или гидратированной форме, в алканоле, например, таком, как метанол, этанол или 1- или 2-пропанол, при температуре от около 25^oC до температуры перегонки реакционной смеси. Предпочтительным растворителем является этанол. Температура гидразинолиза предпочтительно является температурой перегонки реакционной смеси.

Альтернативно, получение систем 1-алкинил- и 1-алкилпиридинил-2-амино-1,3-пропандиола, то есть, систем формул 7 и 9, соответственно, где W, X и n определены выше, может быть достигнуто путем алкинилирования пиридинилкарбоксальдегида 2, где W, X и Y определены выше, в алкинилпиридинилкарбоксальдегид 10, где W, X и m определены выше, с последующей конверсией пиридинилкарбоксальдегида 10 в пиридинилпропионат 5, где R¹¹, R¹², W, X и m определены выше, и гидрогенизацией алкинилпиридина 5, где R¹¹, R¹², W, X и m определены выше, в соединение 11, где R¹¹, R¹², W, X и m определены выше. Реакции алкинилирования, конверсии и гидрогенизации, то есть, трансформацией 2 в 5 и 11 посредством 10, осуществляют способами, в основном, аналогичными соответствующим трансформациям 4 в 5, 2 в 4, и 6 в 8.

Алкил 1-алкиопиридинилпропионат 11, где R¹¹, R¹², W, X и m определены выше, может быть восстановлен до 1-алкил пиридинилпропандиол 8 способом, в основном, аналогичным способу, используемому для восстановления алкилпиридинилпропионата 5 в пропандиол 6.

Получение ряда 1-алкинилпиридинил-2-амино-1,3-пропандиола, то есть, ряда соединений, представленных формулами 5, 6 и 7, может быть также достигнуто путем восстановления алкилпиридинилпропионата 4, где R¹¹, R¹², W, X и Y определены выше, в пиридинилпропандиол 12, и алкинилирования полученного таким образом пиридинилдиола 12 в алкинилпиридиндиол 6. Как было указано выше, амидопропандиол 6 превращают в аминопропандиол 7 путем гидролиза. Аналогично, восстановление 4 в 12 и алкинилирование 12 в 6 осуществляют, в основном таким же способом, как и тот, что был использован для конверсии 5 и 6 и 4 в 5.

Производные алкинилпиридинил-2-амино-1,3-диола 7 получают из амидопропандиола 6 путем ацилирования 6, где R¹², W, X и m определены выше, в амидодиацилоксипропан 15, где R¹², R¹³, R¹⁴, W и m определены выше, с использованием, например, ангидрида алкановой кислоты, такого, как ангидрид уксусной кислоты, в присутствии триэтиламина и 4-диметиламинопиридине и диоксинилирования 6 в амидодиоксан 14, где R¹², R¹⁵, R¹⁶, W, X и m определены выше, с использованием, например, 2,2-диметоксипропана и в присутствии пара-толуолсерной кислоты. В результате гидролиза 15 /см. описание превращения 6 в 7/ получают аминопропандиол 7. Амидодиацилоксипропан 15 подвергают избирательному гидролизу с получением амидодигидроксипропана 20, например, с помощью карбоната щелочного металла, такого, как карбонат лития, натрия или калия, в алканоле, таком, как метанол, этанол или 2-пропанол. Предпочтительной средой для гидролиза является карбонат калия в метаноле. Процесс гидролиза обычно протекает при комнатной температуре. Можно также использовать и повышенные температуры вплоть до температуры перегонки гидролизной смеси.

Ациловые производные амидопропандиола 12, где R¹², X и Y определены выше, получают путем обработки 12 ангидридом алкановой кислоты при тех же условиях, которые описаны для конверсии 6 в 15.

В целях получения 1-алкенил-2-амино-1,3-пропандиола 17, где W, X и m определены выше, 1-алкинил-2-амино-1,3-пропандиол 6, где R¹², W, X и m определены выше, гидрогенизируют до получения 1-алкенил-2-амино-1,3-пропандиола 16, где R¹², W, X и m определены выше, а конфигурация атомов водорода в двойной связи углерод-углерод является цис-конфигурацией, который, в свою очередь, гидролизуют в 17, где W, X и m также определены выше.

Для получения N,0,0-трибензилоксикарбонил-2-амино-1,3- пропана 18, где R¹⁵ является 2-амино-1,3-пропандиол обрабатывают N-бензилоксикарбонилоксисукцинимидом 20: в присутствии третичного амина, например, триэтиламина в эфирном растворителе, таком, как тетрагидрофуран, приблизительно при комнатной температуре.

Для синтеза 2-амино-1,3-пропандиола 19, 1,3-диацилокси-2- пропаннилацетамид 13 гидролизуют с использованием гидразингидрата в присутствии этанола в соответствии с процедурой, описанной для конверсии 8 в 9.

Как правило, конечные 1-алкиларил-2-амино-1,3-пропандиолы настоящего изобретения получают из 1-алкиниларилкарбоксальдегидов. См. Реакционную схему А для конверсии 10 в 9 пиридинового ряда. В изоксазоловом ряде, конечные 1-алкилизоксазолил-2-амино-1,3-пропандиолы могут быть получены, например, из 5-/1-алкил/-3-изоксазолкарбоксальдегида 21, где R⁵ додецил.

3-изоксазолкарбоксальдегид 21, где R⁵ является додецилом, в свою очередь, синтезируют, например путем конденсации 1-нитротридекена с 0-триметилсилилпропинолом в присутствии фенилизоцианата и триэтиламина, а затем фторида тетрабутиламмония, в результате чего получают изоксазолметанол 22 где R⁵ является додецилом, который может быть окислен до 21 с помощью оксалилхлорида: диметилсульфоксида.

Для получения 2-алкоксикарбониламино-1,3-пропандиола, например, 1-алкинил-2-т-бутилоксикарбониламино-1,3-пропандиол 6, где R¹² представляет собой OC/CH₃/₃, 1-алкинил-2-амино-1,3-пропандиол 7 ацилируют с ди-т-бутилдикарбонатом в присутствии основания, такого, как бикарбонат натрия в галогенуглеводородном растворителе, таком, как хлороформ, при повышенной температуре, около 60^oC.

Для получения 2-диалкиламино-1,3-пропандиола, например, 1-алкенил-2-диметиламино-1,3-пропандиола 23, 1-алкенил-2-амино- 1,3-пропандиол 17 подвергают восстановительному алкилированию с формальдегидом, таким, как формалин, в присутствии восстанавливающего агента, такого, как цианоборогидрид натрия в растворителе, таком, как ацетонитрил, при комнатной температуре.

1-алкенил-2-амино-1,3-пропандиол, например, 1-алкенилпиридинил-2-амино-1,3-пропандиол 17, получают путем реакции восстановления 1-алкинилпиридинил-2-ациламино-1,3- пропандиола 6 посредством 1-алкенил-2-ациламино-1,3-пропандиола 16 /см. Реакционную схему С/. Альтернативно, 1-алкенил-2-амино-1,3-пропандиол, например, 1-алкенилтиенил-2-амино-1,3-пропандиол 27 может быть получен путем конденсации галогентиофенекарбоксиальдегида 25, где Х является бромом, с три-н-бутил-1-алкенилстаннаном 24 в присутствии 2,6-ди-т-бутил-4-метил-фенола и тетракис /трифенилфосфин/ палладия /O/ в ароматическом растворителе, таком, как толуол, при комнатной температуре с получением 1-алкенилтиофенокарбоксальдегида 26 /см. фиг.4/, который, в свою очередь, превращают в 2-амино-1,3-диол 27 и его производные способами, указанными в Реакционных схемах А, В и С.

Целевой три-н-бутил-1-алкенилстаннат 24 получают путем восстановительной конденсации алкина 28 с три-н-бутилоловогидридом в присутствии азобисизобутиронитрила.

1-Алкил, 1-алкенил, и 1-алкиниларил-3-амино-1,3-пропандиолы настоящего изобретения могут быть использованы в качестве лекарственных средств для лечения расстройств памяти, в частности, нарушений, связанных с пониженной холинергической активностью, которая например, имеет место при болезни Альцгеймера. Активность к ослаблению расстройств памяти соединений настоящего изобретения исследовалась с помощью теста на избегание темноты, проводимого на мышах в целях определения восстанавливающего действия рассматриваемых соединений при скополамин-индуцированных расстройств памяти, ассоциированных с пониженными уровнями ацетохолина в головном мозге. В этом тесте были использованы три группы из 15 мышей CFW /самцов/, а именно: контрольная группа "наполнитель/наполнитель", группа "скополамин/наполнитель", и группа "скополамин/лекарственное средство". За 30 минут до обучения, контрольной группе "наполнитель/наполнитель" подкожно вводили обычный солевой раствор, а группам "скополамин/наполнитель" и "скополамин/лекарственное средство" подкожно вводили скополамин /3,0 мг/кг, вводимые в виде гидрогидрид скополамина/. За пять минут до начала обучения, контрольной группе "наполнитель/наполнитель" и группе "скополамин/наполнитель" вводили дистиллированную воду, а группе "скополамин/лекарственное средство" вводили испытуемое соединение в дистиллированной воде.

Устройство для обучения/испытания содержало камеру из плексигласа, приблизительно 48 см длиной, 30 см высотой, которая имеет конусообразную форму, заостренную книзу /шириной от 26 см в верхней части и до 3 см в нижней части/. Внутри эта камера разделена с помощью вертикальной перегородки на два разных отделения, светлое отделение /освещенное зеркальной лампой в 25 Вт, подвешенной на высоте 30 см от пола/ в темное отделение /покрытое/. В нижней части перегородки имеется отверстие шириной 2,5 см и высотой 6 см и дверь-ловушка, которая может опускаться, чтобы помешать животному проходить в соседнее отделение. Приспособление для вызывания шока у мелких животных /Coulbourn Intrument/ было соединено с двумя металлическими пластинками, которые могли двигаться по всей длине устройства, а в темном отделении на расстоянии 7,5 см от вертикальной перегородки и 2 см от пола помещался фотоэлемент. Поведение животных контролировалось с помощью миникомпьютера 11/34 с программно-управляемым процессором для обработки данных /PDP/.

По окончании периода предварительной подготовки животных помещали в светлое отделение непосредственно под фиксированным источником света, причем так, чтобы животные были обращены мордочкой от двери, ведущей в темное отделение. Затем устройство закрывали и систему приводили в действие. Если мыши проходили через перегородку в темное отделение и прерыва луча фотоэлемента в течение 180 с, то дверь опускалась, блокируя выход в светлое отделение, и мыши подвергались воздействию электрического тока интенсивностью 0,4 мА в течение трех секунд. После чего животных тотчас удаляли из темного отделения и помещали в свои клетки. Если животным не удавалось прервать луч фотоэлемента в течение 180 с, то эти животные устранялись из испытаний. Для каждой мыши регистрировалось латентное время в секундах.

Через 24 часа, животных снова испытывали в том же самом устройстве для испытаний, за исключением того, что мышам не вводили инъекции и их не подвергали шоковому воздействию. Для каждой мыши регистрировали скрытое время в секундах за время дневного теста, после чего животных удаляли.

Специалистам хорошо известно, что в одном типе поведения пассивного избегания при испытаниях имеет место высокая степень вариабельности (в зависимости от времени года, условий содержания и ухода). В целях учета указанного фактора, для каждого теста были определены отдельные пренебрегаемые величины (СО), компенсирующие указанную вариабельность. Кроме того, было установлено, что 5 7% мышей в контрольныхгруппах "скополамин/наполнитель" оказались нечувствительными к дозе скополамина 3 мг/кг, sc. Таким образом, СО-величины определяли как второй наиболее высокой скрытый период в контрольной группе для более точного отражения 1/15 ожидаемых контрольных ответов в каждой тестируемой группе. Эксперименты с рядом стандартов, которые повторяли при различных окружающих условиях, позволили разработать следующие критерии: для рассматриваемого теста СО-величины должны быть менее 120 сек, контрольная группа "наполнитель/наполнитель" должна иметь, по крайней мере, 5/15 животных со скрытыми периодами, превышающими СО. Для соединения рассматриваемой активности группа "скополамин/соединение" должна иметь, по меньшей мере, 3/15 со скрытыми периодами, превышающими СО.

Результаты теста на избегание темноты выражали как число животных на группу в которой скополамин-индуцированное расстройство памяти является блокированным, измеренное путем увеличения скрытого периода. Активность к восстановлению расстройств памяти характерных соединений настоящего соединения представлена в таблице 1.

Восстановление скополамин-индуцированного расстройства памяти достигалось при введении 1-алкил, 1-алкенил, и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиола и родственных соединений в организм с указанным расстройством перорально, перентерально или внутривенно в дозе от 0,01 до 100 мг/кг тела в день. Особенно эффективным является количество 25 мг/кг тела в день. Однако, очевидно, что для каждого конкретного случая может быть установлен определенный режим в соответствии с индивидуальными особенностями организма и способа введения указанного соединения. Само собой разумеется, что указанные выше дозы являются иллюстративными, и ни в коем случае не ограничивают объема настоящего изобретения.

1-алкил, 1-алкенил, и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолы настоящего изобретения могут быть также использованы в качестве противовоспалительных средств, благодаря их способностик снижению воспалительных процессов у млекопитающих. Испытания противовоспалительной активности соединений проводились с помощью теста на ТРА-индуцированный отек уха и теста на отек уха, вызванный арахидоновой кислотой см. J. V. Joung и др. Journal Investigitive Dermatology 80, 48 (1983).

В указанном анализе на ТРА-индуцированный отек уха, ТРА (12-о-тетрадеканоилфорбол-13-ацетат) растворяли в смеси пропиленгликоля и этанола (30:70) и раствор наносили на правое ухо мышей группы, состоящей из 6 мышей (самок) Swiss Webster которые за 1 неделю до их использования были помещены вместе в клетку при стандартных условиях и с пищей и водой по желанию, при этом обработку проводили объемом 20 мк так, чтобы на внутреннюю и внешнюю поверхности уха приходилось в целом 10 мкг ТРА. Испытуемое соединение растворяли в наполнителе и наносили на правое ухо (внутреннюю и внешнюю поверхность) в объеме 20 мкл, так, чтобы на ухо в целом проходилось 10 мкг соединения. Приблизительно через 5 часов животных умертвляли и из каждого уха вынимали вкладыш диам. 4 мм и взвешивали. После чего определяли разницу между весом правого и левого уха для каждого животного. Противовоспалительную активность испытуемого соединения выражали как среднее изменение в процентах веса ушного вкладыша обработанных животных по сравнению со средним изменением веса вкладыша контрольных животных. Результаты определения противовоспалительной активности характерных соединений настоящего изобретения представлены в таблице 2.

В анализе на отек уха, индуцированный арахидоновой кислотой, испытуемое соединение растворяли в смеси пропиленгликоля и этанола (30:70) и наносили на оба уха мышей группы, состоящей из 6 мышей-самок Swiss Webster, которые за 1 неделю до их использования содержались вместе в клетке при стандартных условиях с пищей и водой по желанию, при этом обработку проводили объемом 20 мкл так, чтобы накаждое ухо (внутреннюю и внешнюю поверхность) приходилось в целом 1,0 мг испытуемого соединения. Мышам контрольной группы каждое ухо обрабатывали таким же объемом наполнителя (20 мкл). Через 30 минут на правое ухо каждой группы наносили арахидоновую кислоту в количестве 4 мг/ухо. А на левое ухо каждой мыши каждой группы наносили наполнитель в количестве 20 мкл/ухо. Еще раз через час животных умерщвляли и из каждого уха вынимали вкладыш диаметром 4 мм и взвешивали. И для каждого животного определяли разницу между весами вкладышей правого и левого уха. Противовоспалительную активность определяли как среднее процентное изменение веса ушного вкладыша обработанных животных по отношению к среднему процентному изменению веса ушного вкладыша контрольной группы. Противовоспалительная активность характеристик соединений настоящего изобретения в соответствии с проведенным анализом представлена в таблице 3.

Ослабление воспалительного процесса достигается при введении 1-алкилн, 1-алкенил, и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолов наружно, например, путем офтальмического введения в качестве эффективной дозы для наружного применения от 0,001 до 100 мг/кг тела в день. Особенно эффективным количеством является доза около 25 мг/кг веса в день. Однако, очевидно, что для каждого конкретного индивидуума специалистом может быть установлена конкретная схема применения в зависимости от состояния организма и способа введения. Поэтому указанные выше дозы являются иллюстративными и ни в коем случае не ограничивают объема настоящего изобретения.

1-алкил, 1-алкенил, или 1-алкинил-2-аминопропандиолы настоящего изобретения могут быть использованы в качестве ингибиторов роста опухолевых или злокачественных клеток благодаря их способности к снижению пролиферации клеток, как может быть показано с помощью анализа на протеинкиназу С (см. U. Kikkawa и др. Biochemical and Biophysical Research Comminications 135, 636 (1986) и R.M.Bell и др. "Methods in Enxylalagy, Hormone Achon", Part J, R.M. Conn. Ed. Academic Press, Inc. Нью-Йорк, NY 1986, стр. 353).

Экстракт протеинкиназы С получали из головного мозга крыс Wistar (самцов) весом 180 200 г, и очищали по методу U.Kikkawa и др. ibid 636. Очищенный экстракт хранили при -80^oC и его аликвоты использовали в анализе на протеинкиназу С, который проводили в соответствии с модификациейспособа R.M.Bell и др. ibid al 354.

Для осуществления анализа использовали дублированные аликвоты дублированных образцов. В каждом анализе участвуют базальная или неактивированная протеинкиназа С, фосфатидилсерин/диацилглицерин-активированная протеинкиназа С, и тестируемые образцы. В каждую пробирку, содержащую образец неактивированной протеинкиназы, охлажденной льдом, добавляли экстракт протеинкиназы (1 5 мкг белка; 10 мкл), 8 мкл раствор N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этилсульфоновой кислоты (500 мМ), хлорид магния (40 мМ), этилендиаминотетрауксусной кислоты (10 мМ), дитиотреитол (20 мМ, 8 мкл), гистон типа 111 (12 мкг, 8 мкл), и хлорид кальция (11 мМ, 8 мкл). К каждой пробирке с образцом активированной протеинкиназы, охлажденной льдом, добавляли фосфатидилсерин/диацилглицерин (4 мкг, 8 мкл). После чего к пробиркам с образцами, охлажденным льдом, добавляли испытуемое соединение (10^-4 10^-12 М в 4 мкл диметилсульфоксида). После этого объем всех испытуемых пробирок доводили до 72 мкл дистиллированной водой (18 мкл для активированных образцов; 26 мкл для неактивированных образцов без 8 мкл фосфатидилсерин/диацилглицерина). Испытуемые пробирки нагревали до 25^oC и к каждой пробирке добавляли 8 мкл смеси аденозин 5-трифосфата (100 мкМ) и ³²P-аденозинтрифосфата (1-2х10⁵ отсчетов в мин) до получения конечного объема 80 мкл на каждую пробирку. Через 2 минуты реакцию завершали включение фосфора в гистон типа 111 путем нанесения реакционной смеси на фосфоцеллюлозную бумагу. Пятна, нанесенные на бумагу, вырезали и радиоактивность каждого пятна (число отсчетов в минуту) определяли в сцинтилляционном счетчике. Активность к ингибированию протеинкиназы С, т.е. процент ингибирования внедрения ³²фосфора из ³²P-аденозинтрифосфата в гистон типа 111, рассчитывали следующим образом: Активность к ингибированию протеинкиназы С характерных соединений настоящего изобретения, рассчитанная как концентрация испытуемого соединения, вызывающая 50% -ное ингибирование поглощения фосфора (IC₅₀), представлена в таблице 4.

Ингибирование протеинкиназы достигается при введении организму, требующему такого лечения, 1-алкил, 1-алкенил, и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолов настоящего изобретения или родственных соединений перорально, парентерально, внутривенно или местно в эффективном количестве от 0,001 или 0,01 до 100 мг/кг тела в день. Особенно эффективным количеством является доза 25 мг/кг тела в день. Однако, при этом следует учесть, что для каждого организма может быть установлен конкретный режим приема в зависимости от состояния индивидуума и способа введения лекарственного средства. Поэтому, очевидно, что указанные выше дозы являются иллюстративными, и ни в коем случае не должны ограничивать объема настоящего изобретения.

1-алкил, 1-алкенил, и 1-алкиниларил-2-амино-1,3-пропандиолы настоящего изобретения могут быть также использованы в качестве противогрибковых и антибактериальных средств благодаряих способности к ингибированию бактериального и грибкового роста у млекопитающих. Антибактериальная и противогрибковая активность была проиллюстрирована с помощью стандартного анализа на антибактериальную активность (см. D.J.Bibel и др. The Journal of Investigative Dermatology 92, 632 (1989).

Анализ на чувствительность к аэробным бактериям осуществляли с помощью теста использованием разведений в агаре Mueller-Hinton. Чашки инокулировали с использованием многоточечного инокулятора, в который вводили 5 х 10⁴ КОЕ/пятно стационарных, свежеразведенных культур рассматриваемых штаммов. За минимальную ингибиторную концентрацию MIC принимали наинизшую концентрацию, при которой не наблюдается видимого роста через 24 часа при 37^oC.

Анаэробный анализ, то есть анализ на чувствительность к облигатным грамположительным и грамотрицательным анаэробам, проводили с использованием разведений в агаре Wilkins Chalgren. В качестве инокулята использовали ночные культуры соответствующих испытуемых штаммов, разведенные 1:10 в свежей тиогликоллатной среде. После того, как чашки инокулировали в течение 48 часов при 37^oC в анаэростате, определяли MIC антибиотиков.

Антибактериальная активность характерных соединений настоящего изобретения, определенная в вышеуказанном анализе, представлена в таблицах 5 и 6.

Анализ на противогрибковую активность проводили с использованием техники микротитрования (u образный планшетна 96 лунок), при которой испытуемое соединение (10 мг) растворяли в соответствующем растворителе (10 мл дистиллированной воды, или 1 мл орг. растворитель + 9 мл дистил. вода).

Планшет для микротитрования подготавливали следующим образом: каждую лунку наполняли (2 ряда/штамм) 50 мкл неопептон-декстрозного бульона (12-канальная пипетка). Кроме того, 1 ряд/штамм покрывали 50 мкл смеси дрожжей и азотного основания на лунку для дрожжей и п