Способ определения активности фермента карбоангидразы
Патент 207856
Классы МПК
Способ определения активности фермента карбоангидразы
Иллюстрации
Реферат
ОПИСАНИЕ
ИЗ ОБ РЕ ТЕ Н ИЯК азтОИСКОМ СВИДНЕЛЬСтВЮ
Сова Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 30.III.1966 (№ 1064816/31-16) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 29.Х11.1967. Бюллетень № 3
Дата опубликования описания 23.II.1968
Кл. 6а, 22/07 ба, 22/01
ЫПК С 12k
С 121<
УДК 535.247.4:612.015.1 (088.8) Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
Авторы изобретения
А. В. Сруогините и А. П. Юконите
Заявитель
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТА
КАРБОАНГИДРАЗЫ
4 о
Предмет изобретения
Известны способы определения активности фермента карбоангидразы на основе измерения скорости реакции нейтрализации СО2 до определенного значения рН раствора. Однако эти способы недостаточно точны вследствие визуального наблюдения за изменением окраски индикатора, занимают много времени и предусматривают использование металлической ртути.
Предлагаемый способ отличается тем, что учет скорости хода контрольной и катализируемой карбоангидразой реакции производят фотоэлектроколориметрированием, Такая методика анализа позволяет обеспечить более высокую точность, сократить время его проведения и исключает использование металлической ртути.
Для определения активности фермента карбоангидразы по предлагаемому способу в две кюветы фотоколориметра наливают по
1,2 мл раствора, содержащего по
0,005 г-экв/л бикарбоната натрия и соляной кислоты, по 1,2 мл раствора, содержащего
0,02 м NaHCo3, 0,0005 м Na CO3 и индикатор, и по 0,1 мл инактивированного кипячением растительного экстракта или по 0,05 мл инактивированного гемолизата крови. Кюветы закрывают крышками, взбалтывают и уста. навливают в фотоколориметр. После установки нулевого положения при зеленом светофильтре правую кювету вынимают, заполняют теми же растворами и в момент прибавления раствора бикарбоната натрия и соляной кислоты включают секундомер. Кювету помещают в фотоколориметр и отмечают время, пока стрелка гальванометра не возвратится в нулевое положение. Измеренное таким образом время контрольной реакции обычно составляет около 60 сек. Затем в правую кювету наливают 1,2 лл раствора
10 бикарбоната натрия и соляной кислоты, необходимое количество источника карбоангидразы и 1,2 мл раствора бикарбоната и карбоната натрия. При добавлении последнего раствора включают секундомер. Когда стрел15 ка гальванометра возвращается на нуль, секундомер отключают, определяя таким образом время катализируемой карбоангидразой реакции, Активность фермента определяют по формуле:
20 где А — - активность фермента в условных единицах; t, — время контрольной реакции
25 и t — время катализируемой карбоангидразой реакции.
30 Способ определения активности фермента карбоангидразы на основе измерения скоро.
207856
Составитель В, А. Тарабута
Редактор В. С. Сорокин Техред Т. П. Курилко Корректоры: Г. И. ПлешакоЬЙ и Е. Ф. Полионова
Заказ 15/14 Тираж 530 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типография, пр. Сапунова, 2 сти реакции нейтрализации СО2 до опреде ленного рН, отличающийся тем, что, с целью получения более высокой точности, сокра1цения лабораторных манипуляций и исключе ния использования металлической ртути, учет скорости хода контрольной и катализируемой карбоангидразой реакции производят фотоэлектроколориметрированием.