Производные карбапенема и их фармацевтически приемлемые соли

Производные карбапенема и их фармацевтически приемлемые соли

Реферат

 

Сущность изобретения. Производные карбапенема общей формулы (I), в которой R¹ - низший алкил, который может быть замещен гидроксилом или защищенным гидроксилом; R² - низший алкил, R³ - карбоксил, который может быть этерифицирован; R⁴ - H или аминозащищающая группа; R⁵ и R⁶ одинаковые или различные, означают H, гидроксил, галоген R⁷ - H, низший алкил или карбоксил; R⁸ - H, низший алкил или гидроксинизший алкил; или R⁷ и R⁸, взятые вместе, образуют (C₂-C₆) алкилен; R⁹ и R¹⁰, одинаковые или различные, означают аминозащищающую группу, H или низший алкил; Z - простая связь, O, S или группа CR¹¹R¹² или группа NR¹³ - CO - где R¹¹ и R¹², одинаковые или различные, означают H, гидроксил или низший алкил, а R¹³ - H, m и n - целые числа от 0 до 6; а также их фармацевтические приемлемые соли. Преложенные соединения проявляют антибактериальную активность. 5 з.п. ф-лы.

в

Изобретение относится к новым антибиотикам, имеющим карбапенемовый скелет.

Тиенамицин, имеющий карбапенемовый скелет, считался многообещающим новым антибиотиком в момент его открытия в 1976 году, потому, что он является эффективным против бактериальных штаммов, которые являются устойчивыми против ранее известных антибиотиков, и может проявлять отличную антибактериальную активность.

Однако тиенамицин и другие различные производные карбапенема, описанные после этого, могли бы использованы в качестве смешанного препарата с ингибитором дигидропептидазы /ДГП/, потому что они не только являются физико-химически нестабильными, но также могут разлагаться ДГП и подобным ферментом в почках, вызывая в результате такие побочные эффекты, как почечная токсичность.

Кроме того, в опубликованной без экспертизы японской заявке на патент N JP-A-60-233076 описаны 1- -метилкарбапенемовые соединения, которые являются стабильными против b -лактамаза продуцирующих штаммов, имеют стабильную физико-химическую природу и проявляют сильную антибактериальную активность. Однако эти соединения являются еще неудовлетворительными в отношении их стабильности против ДГП и антибактериальной активности.

Изобретатели настоящего изобретения провели интенсивные исследования с целью обнаружения производного карбапенема, обладающего лучшими свойствами, и в результате осуществили настоящее изобретение, обнаружив соединение, которое является эффективным против различных бактериальных штаммов, включая Pseudomonas aeruginosa, отличным в отношении безопасности и стабильности против гидролаз, таких как ДГП и подобные.

Настоящее изобретение относится к производству карбапенема, имеющему следующую формулу (I), и к его соли: где R¹ является низшим алкилом или окси-низшим алкилом, который может иметь защищающую группу; R² является атомом водорода или низшим алкилом; R³ является карбоксилом, который может быть этерифицирован; R⁴ является защищающей аминогруппу группой, атомом водорода или низшим алкилом; R⁵ и R⁶, которые могут быть одинаковыми или различными, каждый является атомом водорода, гидроксилом, низшим алкилом, оксинизшим алкилом или атомом галогена, и R⁵ и R⁶ вместе могут образовывать алкиленовую группу, имеющую 2 6 атомов углерода; R⁷ является атомом водорода, низшим алкилом, карбоксилом, карбамоилом, карбоксилом, который может иметь защищающую группу, или частичной структурой, представленной -CONR⁷¹R⁷², где R⁷¹ и R⁷², которые могут быть одинаковыми или различными, каждый является атомом водорода или низшим алкилом; R⁸ является атомом водорода, низшим алкилом или окси-низшим алкилом, и R⁷ и R⁸ вместе могут образовывать алкиленовую группу, имеющую 2 6 атомов углерода; R⁹ и R¹⁰, которые могут быть одинаковыми или различными, каждый является защищающей аминогруппой, атомом водорода или низшим алкилом; Z является простой связью, атомом кислорода, атомом серы, или частичной структурой, представленной -CR¹¹R¹²-, -NR¹³-CO-, -CONR¹⁴ или -NR¹⁵-, где R¹¹ и R¹², которые могут быть одинаковыми или различными, каждый является атомом водорода, гидроксилом, низшим алкилом, окси-низшим алкилом или атомом галоида, и R¹¹ и R¹² вместе могут образовывать алкиленовую группу, имеющую 2 6 атомов углерода, R¹³ и R¹⁴, которые могут быть одинаковыми или различными, каждый является атомом водорода или низшим алкилом, а R¹⁵ является защищающей аминогруппу группой, атомом водорода или низшим алкилом; и каждый m и n является целым числом от 0 до 6.

Термин карбапенем, как он использован здесь, означает соединение, имеющее следующее структурное ядро, и настоящее изобретение относится к производным карбопенема, в которых различные типы замещающих групп присоединены к этому ядру.

Ниже описаны замещающие группы в этой общей формуле (I). В этом случае термин низший алкил, как здесь использовано, означает алкил, имеющий 1 6 атомов углерода (ниже они будут обозначены соответственно как C1-C6, тогда как в других случаях другие количества углерода), такие как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил и тому подобные.

R¹ является низшим алкилом или продуктом его замещения гидроксилом, а именно оксилалкилом, который также может иметь защищающую группу. Среди них предпочтительными является 1-оксиэтил, особенно, когда 1-оксиэтил связан с атомом углерода в 6 положении карбапенемового скелета в виде S-конфигурации, а его гидроксильная группа присоединена к 1-положению этильной группы (обычно называемого 8-полождением карбапенема) в виде R-конфигурации.

R² является атомом водорода или низшим алкилом, предпочтительно C1-C4-алкилом с прямой или разветвленной цепью, таким как метил, этил или пропил, более предпочтительно, метилом. В этом случае такие группы предпочтительно могут иметь R-конфигурацию по отношению к углероду в 1-положении карбапенемового скелета.

R³ является карбоксилом, который может быть этерифицирован. Примеры сложноэфирного остатка включают C1-C6-алкилы с прямой или разветвленной цепью, такие как метил, этил, изобутил или трет.-бутил; C1-C6-алкокси-C1-C6-алкильные группы, такие как метоксиметил или метоксиэтил; C2-C7-алифатические ацилоксиметильные группы, такие как пивалоилоксиметил; фталидильной группой и тому подобные. Так же полезными являются сложноэфирные остатки, которые могут быть легко удалены в мягких условиях и имеют функцию защищающей карбоксил группы, они включают, например, аралкильные группы, такие как п-нитробензил, о-нитробензил, бензгидрил или 2-нафтилметил, 2,2,2-трихлорэтильную группу, аллильную группу /CH₂= CH-CH₂-/ C1-C6-алкилзамещенную силильную группу, такую как триметилсилил и тому подобные. Примерами сложноэфирных групп, полезных в качестве защищающих карбоксил групп во время реакции синтеза, являются н-нитробензил, аллил и тому подобные. Также могут быть использованы метаболируемые сложноэфирные остатки, предпочтительными примерами их являются пивалоилоксиметильная группа, фталидильная группа, ацетоксикарбонилоксиметильная группа и тому подобные. Карбоксильная группа может быть в виде карбоксилатного аниона по отношению к другим замещающим группам, солью и тому подобным.

R⁴ является атомом водорода, C1-C6-алкилом с прямой или разветвленной цепью, таким как метил, этил или пропил, защищающей аминогруппы, группой, которая обычно используется в ³ -лактамных антибиотиках, такой как п-нитробензилоксикарбонил, трет.-бутоксикарбонил или аллилоксикарбонил и тому подобное R⁵ и R⁶, которые могут быть одинаковыми или различными, каждый является атомом водорода, гидроксилом, низшим алкилом, оксинизшим алкилом или атомом галогена. Кроме того, R⁵ и R⁶ вместе могут образовывать полиалкиленовую цепь с 2 6 атомами углерода, и образовать циклическую структуру вместе с атомом углерода, к которому присоединены R⁵ и R⁶.

R⁷ являются атомом водорода, низшим алкилом, карбоксилом, карбамоилом, который может иметь защищающую группу, или замещенными карбамоильными группами, представленными следующими частичными структурными формулами.

В приведенной выше формуле каждый из R⁷¹ и R⁷² является атомом водорода или низшим алкилом. Они вместе могут образовать полиалкиленовую цепь с 2 6 атомами углерода, и образовать циклическую структуру с атомом азота, к которому присоединены R⁷¹ и R⁷².

R⁸ является атомом водорода, низшим алкилом или окси-низшим алкилом. Кроме того, R⁷ и R⁸ вместе могут образовывать полиалкиленовую цепь с 2 6 атомами углерода, и образовывать циклическую структуру вместе с атомом углерода, к которому присоединены R⁷ и R⁸.

Каждый из R⁹ и R¹⁰ являются защищающей аминогруппу группой, атомом водорода или низшим алкилом. Предпочтительные примеры защищающих аминогруппу групп включают те, которые обычно используются в -лактамных антибиотиках, например, п-нитробензилоксикарбонил, трет. -бутоксикарбонил, аллилоксикарбонил и тому подобное.

Z является простой связью или атомом кислорода /-O-/ или атомом серы /-S-/, или частичной структурой, представленной -CR¹¹R¹², -NR¹³CO-, -CONR¹⁴- или -NR¹⁵-. В этих формулах R¹¹R¹², которые могут быть одинаковыми или различными, каждый представляет собой атом водорода, гидроксил, низший алкил, окси-низший алкил, такой как оксиметил или оксиэтил, или атом галогена. Кроме того, R¹¹ и R¹² вместе могут образовывать полиалкиленовую цепь с 2 6 атомами углерода и образуют циклическую структуру и вместе с атомами углерода, к которому присоединены R¹¹ и R¹².

Каждый из R¹³ и R¹⁴ является атомом водорода или низшим алкилом.

Кроме того, R¹⁵ является защищающей аминогруппу группой, атомом водорода или низшим алкилом. Предпочтительными примерами защищающей аминогруппу группы являются те, что обычно используются в b -лактамных антибиотиках, например п-нитробензилоксикарбонил, трет.-бутоксикарбонил, аллилоксикарбонил и тому подобные.

Каждый из m и n является целым числом от 0 до 6.

По отношению к конфигурации замещенной пирролидинтиогруппы в заместителе, расположенном в положении 2 карбапенемового скелета предпочтительно, чтобы площадь его связывания с карбонильной группой, в положении 2 находилась в форме S-конфигурации, а площадь с тиогруппой в положении 4 была в S-конфигурации.

Соединение настоящего изобретения и некоторые их промежуточные продукты могут иметь таутомерные структуры. Хотя эти структуры показаны единой структурной формулой в этом описании, должно быть понятно, что она не ограничивает его.

Соединение настоящего изобретения может быть использовано в виде фармацевтически приемлемой соли. Примеры таких солей включают нетоксичные соли карбоксильных кислот, такие как натриевая, калиевая, алюминиевая, магниевая и тому подобные соли металлов; аммонийную соль; триэтиламинную соль, прокаиновую соль и бензиламинную соль, а также соли с другими аминами, которые обычно используют для солеобразования пенициллина и цефалоспорина. Среди них особенно предпочтительными являются натриевая и калиевая соли. Поскольку производное карбапенема настоящего изобретения содержит основной заместитель, он также может быть превращен в фармакологически приемлемую соль присоединения кислоты, например, с неорганической кислотой, такой как соляная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота или серная кислота, или с органической кислотой, такой как уксусная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота, аскорбиновая кислота или метансульфоновая кислота. Среди них предпочтительными являются гидрохлорид и сульфат. Заявленное соединение также может быть использовано в виде различных сольватов, таких как гидрат.

Поскольку соединение настоящего изобретения может проявлять отличные антибактериальные свойства против не только Escherichia coli, Proteus, Klebsiella, Enterobacter, Salmonella, Serratia, Streptococcus, Staphylococcus и тому подобных, но также и против Pseudomonas aeruginosa, оно может быть эффективно использовано для лечения различных инфекционных заболеваний, вторичной инфекции, вызванной повреждениями, ожогами или оперативными ранами, и гнойных болезней.

Соединение настоящего изобретения может быть сформулировано в виде фармацевтических препаратов обычным путем с обычно используемыми фармацевтическими вспомогательными веществами, такими как носитель, стабилизатор, солюбилизирующий агент и наполнитель. Оно может быть введено различными путями, такими как оральное введение дозированной формы в виде таблеток, пилюль, капсул, гранул или тому подобного или парентеральным введением дозированной формы в виде внутривенней инъекции, внутримышечной инъекции, суппозиториев и тому подобного, из которых предпочтительной является внутривенная инъекция.

Обычно оно может быть введено в соответствующей дозе от 100 мг до 3 г на взрослого человека один раз в день или при разделении дневной дозы на несколько приемов. Однако доза может быть изменена не обязательно в зависимости от возраста и пола каждого пациента и симптомов болезни, подлежащей лечению.

Соединение настоящего изобретения может быть получено в соответствии со способом, представленным следующей реакционной схемой: Реактивный промежуточный продукт (III) может быть получен при реакции соединения (II) (R¹, R² и R³ в формуле имеют указанные ранее значения) с дифенилфосфорилхлоридом по известному способу (D.H. Shin et al. Heterocycles, 21, 29 (1984)), или по его модифицированному варианту.

Эта реакция может быть проведена предпочтительно в присутствии алкиламина, такого как триэтиламин, диизопропилэтиламин или тому подобного, алициклического амина, такого как 1,8-диазабицикло/5.4.O/-7-ундецена (ДВИ), N-метилморфолина или тому подобного, органического основания, такого как хинуклидин, 3-хинуклидинол или тому подобного, неорганического соединения, такого как гидроксид натрия, гидроксид калия, карбонат калия, карбонат натрия и тому подобное, алкоголятов металлов, таких как трет.бутокси калия, метоксид натрия или тому подобного, или амида натрия; среди них особенно предпочтительными являются диизопропилэтиламин или ДВИ. Также предпочтительно эту реакцию можно проводить в растворителе, который не оказывает вредного влияния на исходные материалы и продукт, иллюстративные примеры растворителей включают кетоны, такие как ацетон, метилэтилкетон и тому подобное, ацетонитрил, диметилформамид (ДМФ), диметилацетамид, диметилсульфоксид (ДМСО), тетрагидрофуран (ТГФ), дихлорметан и хлороформ, а также необязательно их смеси.

Температура реакции может быть в интервале от -50^oC до комнатной температуры, предпочтительно от -40 до 0^oC. Реакция может быть проведена в течение времени от 15 мин до 1 дн, предпочтительно от 30 мин до 8 ч.

Реактивный промежуточный продукт (III) после его выделения или как таковой затем подвергают реакции замещения с тиольным соединением (IV), чтобы получить соединение (I).

Тиольное соединение (IV) может быть получено по способу, описанному в ссылочных примерах ниже. Реакция с тиольным соединением (IV), имеющим высокую реакционную способность, хорошо проходит в присутствии основания, хотя такая реакция проходит также и без основания. Основания приведены выше в отношении предыдущей стадии реакции, они также могут быть использованы в этой реакции, из них особенно предпочтительными являются диизопропилэтиламин и ДВИ. Такое основание предпочтительно может быть использовано в количестве, эквивалентном тиольному соединению, но когда тиольное соединение находится в виде соли присоединения кислоты, хорошие результаты могут быть получены при внесении дополнительного количества основания, необходимого для нейтрализации соли присоединения кислоты.

Эта реакция может быть проведена в растворителе, который не оказывает вредного влияния на исходные продукты и продукт реакции, растворители, описанные для предшествующей стадии реакции, могут быть использованы в качестве растворителя. Когда промежуточный продукт (III) не выделяют, предпочтительно продолжать реакцию в том же самом растворителе.

Соединение формулы (IV) может быть использовано в количестве от 1 до 3 эквивалентов, предпочтительно 1 2 эквивалентов, к соединению формулы (III). Температура реакции может быть в интервале от -50^oC до комнатной температуры, предпочтительно от -10 до 0^oC. Реакция может быть проведена в течении времени от 30 мин до 1 дн, предпочтительно в течение 1 6 ч. Продукт замещения может быть изолирован обычными способами и, при необходимости, очищен хроматографией на колонке с силикагелем, используя хлороформ, этилацетат, дихлорметан, метанол или их смеси.

Когда продукт реакции замещения имеет защищающую группу, она при желании может быть удалена. Ее удаление может быть осуществлено восстановительным гидрогенолизом, химическим восстановлением или гидролизом при использовании кислоты, основания или фермента.

Когда заместитель группы R³ в общей формуле (I) этерифицирован и имеет, например, п-нитробензильную группу, бензильную группу, бензгидрильную группу или 2-нифтилметильную группу, такое соединение может быть превращено в производное карбапенема, в котором R³ в общей формуле (I) является карбоксильной группой или карбоксилатным анионом, с помощью реакции снятия защиты путем каталитического восстановления в присутствии известного металлического катализатора, такого как палладий на угле, оксид платины и тому подобное. Более конкретно, такая реакция может быть проведена в реакционном растворителе, таком как диоксан, ТГФ, вода, буферный раствор или их смеси, предпочтительно в водном или в смешанном растворителе, состоящем из фосфатного буфера и ТГФ, при давлении водорода от 1 до 5 атм, при температуре от 0 до 50^oC, предпочтительно от 10 до 30^oC, в течение периода времени от 30 мин до 16 ч, обычно от 10 мин до 1 ч.

Когда R³ в соединении (I) является п-нитробензилоксикарбонильной группой, оно может вступать в реакцию с водным раствором хлористого алюминия и порошка железа в водорастворимом органическом растворителе, таком как ТГФ или диоксан, чтобы получить интересующее соединение, у которого R³ является карбоксилом или карбоксилатным анионом, или когда R³ является аллилоксикарбонильной группой, целевое соединение может быть получено при обработке его тетракистрифенилфосфинпалладием (O), трифенилфосфином и 2-этилгексановой кислотой в апротонном растворителе, таком как ТГФ или дихлорметан.

При использовании защищающей группы, обычно применяемой в синтезе -лактамных антибиотиков, такой как п-нитробензилоксикарбонильная группа, для замещающих групп R⁴, R⁹, R¹⁰ или R¹⁵ в общей формуле (I), такое соединение может быть превращено в производное карбапенема, в котором R⁴, R⁹, R¹⁰ или R¹⁵ в общей формуле (I) является атомом водорода, при проведении реакции снятия защиты путем каталитического восстановления на известном металлическом катализаторе, таком как палладий на угле или оксид платины. Реакция каталитического восстановления может быть проведена в растворителе, таком как диоксан, ТГФ, вода, буферный раствор или их смесь, предпочтительно в водном диоксане или в смешанном растворителе, состоящем из фосфатного буфера и ТГФ, при давлении водорода 1 - 5 атм, при температуре от 0 до 50^oC, предпочтительно от 10 до 30^oC, в течение периода времени от 30 мин до 16 ч, обычно от 10 мин до 1 ч, в результате получают производное карбапенема (I).

При использовании других защищающих групп, обычно используемых в синтезе b -лактамных антибиотиков, таких как аллилоксикарбонил, в замещающей группе R⁴, R⁹, R¹⁰ или R¹⁵, такое соединение может быть превращено в производное карбапенема, в котором R⁴, R⁹, R¹⁰ или R¹⁵ в общей формуле (I) является атомом водорода, при проведении реакции снятия защиты с тетракистрифенилфосфинпалладием (O), трифенилфосфином и 2-этилгексановой кислотой в апротонном растворителе, таком как ТГФ или дихлорметан.

Когда множество вышеупомянутых защищающих групп одновременно существует в R³, R⁴, R⁹, R¹⁰ и R¹⁵ в соединении формулы (I), такое соединение может быть превращено в производное карбопенема, в котором такие защищающие группы одновременно удалены при обработке в соответствии с вышеупомянутыми реакционными условиями.

Целевое соединение может быть очищено обычно применяемыми методами, например, экстракцией и последующим концентрированием, потом, при необходимости, перекристаллизацией, переосаждением, хроматографией на колонке и тому подобным. Кроме того, соединение (I) может быть получено в высоко очищенной форме при его кристаллизации, и такая цель может быть достигнута с высокой эффективностью, когда соединение находится в виде соли. В этом случае соль не обязательно должна быть нетоксичной солью присоединения кислоты, но целевое соединение может быть получено с высокой чистотой при кристаллизации его в виде токсичной соли, соль очищают, а затем удаляют кислоту или превращают соль в фармакологически приемлемую соль.

Сложные эфиры, которые метаболизируются in vivo, могут быть получены путем перевода R³ в соединении общей формулы (I) в этерифицированную форму в соответствии с методикой, обычно используемой в синтезе пенициллинов в цефалоспоринов (например, J.Med. Chem. 13, 607 (1970)), или подвергая карбоксильную группу или карбоксилатный анион соединения этерификации.

Наилучший вариант осуществления изобретения Следующие изобретательские и ссылочные примеры предназначены для дополнительной иллюстрации способа получения соединения настоящего изобретения. Использованные здесь сокращения обозначают следующее: ПНЗ: п-нитробензилоксикарбонильная группа ПНБ: п-нитробензильная группа ПМЗ: п-метоксибензилоксикарбонильная группа ПМБ: п-метоксибензильная группа Бок: трет.-бутоксикарбонильная группа Тз: п-толуолсульфонильная группа Фн: фенильная группа Если нет других указаний, конфигурация замещенных частей в следующей формуле (IVa) является смесью R и S форм.

Ссылочный пример 1.

/2S, 4S/4-меркапто-1-/-п-нитробензилоксикарбонил/-2-//1-/2- /п-нитробензилоксикарбонил/аминоацетил/пиперизин-4-ил/карбонил/пирролидин 1. Порцию 3,75 г глицина растворяют в 25 ил 2H водного раствора гидроксида натрия и к полученному раствору, охлажденному на ледяной бане, одновременно прибавляют по каплям 10,77 г п-нитробензилоксикарбонилхлорида, растворенного в эфире, и 12,5 мл 4H водного раствора гидроксида натрия. После 2 ч перемешивания при этой же температуре реакционный раствор промывают эфиром, подкисляют полученный в результате водный слой концентрированной соляной кислотой и отфильтровывают выпавший в осадок твердый продукт, промывают его водой, затем сушат, получают 11,98 г N-/п-нитробензилоксикарбонил/глицина в виде твердого продукта.

ЯМР/ДМСО-d₆/ 3,69 /2H, д/, 5,20 /2H, с/, 7,60 /2H, д/, 8,23 /2H, д/.

2. Порцию 2,67 г N-п-/нитробензилоксикарбонил/глицина суспендируют в 30 мл дихлорметана и прибавляют одну каплю диметилформамида к суспензии, потом в течение 1 ч проводят реакцию при комнатной температуре.

После выпаривания растворителя при пониженном давлении остаток растворяют в 25 мл дихлорметана и при охлаждении до -30^oC прибавляют к раствору 2,63 г 1-/п-метоксибензилоксикарбонил/- пиперизина и 2,13 г триэтиламина, потом 2 ч проводят реакцию при комнатной температуре. Реакционный раствор смешивают с хлороформом, промывают водой и затем сушат над сульфатом натрия, потом удаляют растворитель выпариванием при пониженном давлении и прибавляют н-гексан к полученному остатку, отфильтровывают твердый материал, таким образом получают 4,13 г 1-/п-метоксибензилоксикарбонил/-4-/2-/п- нитробензилоксикарбонил/аминоацетил/пиперазина.

ЯМР/CDCl₃/ d 3,2 3,7 /8H, м/, 3,80 /3H, с/, 4,00 /2H, д/, 5,06 /2H, с/, 5,18 /2H, с/, 6,90 /2H, д/, 7,30 /2H, д/, 7,48 /2H, д/, 8,20 /2H, д/.

3. К 3,74 г 1-/п-метоксибензилоксикарбонил/-4- /2-/п-нитробензилоксикарбонил/аминоацетил/пиперазина прибавляют 4,17 мл анизола и при охлаждении на ледяной бане 20 мл трифторуксусной кислоты, потом проводят реакцию в течение 1 ч при комнатной температуре. После удаления трифторуксусной кислоты выпариванием при пониженном давлении подщелачивают остаток водным раствором гидроксида натрия и экстрагируют хлороформом, органический слой промывают водой и сушат над сульфатом натрия, потом удаляют растворитель при пониженном давлении и потом прибавляют н-гексан к остатку, отфильтровывают твердый материал, таким образом получают 2,45 г 1-/2-/п-нитробензилоксикарбонил/аминоацетил/пиперазина.

ЯМР/CDCl₃/ d 2,7 3,0 /4H, м/, 3,3 3,5 /2H, м/, 3,5 3,7 /2H, м/, 4,02 /2H, д/, 5,20 /2H, с/, 7,50 /2H, д/, 8,22 /2H, д/.

4. Порцию 1,25 г /2S, 4S/-4-бензоилтио-1-/п-нитробензилоксикарбонил/пролина суспендируют в 10 мл дихлортемана и прибавляют 0,76 г оксалилхлорида и одну каплю диметилформамида к полученной суспензии, потом перемешивают 1 ч. Выпаривают растворитель при пониженном давлении и полученный в результате остаток растворяют в 10 мл дихлорметане, к которому при охлаждении на ледяной бане прибавляют последовательно 1,02 г 1-/2-п-нитробензилоксикарбонил/аминоацетил/пиперазина и 0,61 г триэтиламина, потом проводят реакцию в течение двух ночей при комнатной температуре. Полученную в результате реакционную смесь смешивают с хлороформом, промывают водным раствором лимонной кислоты, водным раствором бикарбоната натрия и водным раствором хлористого натрия, в таком порядке потом выпаривают растворитель при пониженном давлении и очищают полученный в результате остаток хроматографией на колонке с силикагелем, получают количественный выход /2S,4S/-4- бензилтио-1-/п-нитробензилоксикарбонил/аминоацетил/пиперазин-4- ил/карбонил/пирролидина в виде белого сиропа.

ЯМР /CDCl₃/ d 1,8 2,2 /1H, м/, 2,5 3,0 /1H, м/, 3,1 4,4 /13H, м/, 4,6 4,9 /1H, м/, 5,20 /4H, с/, 7,3 7,7 /7H, м/, 7,90 /2H, д/, 8,22 /4H, д/.

5. Порцию 1,47 г /2S,4S/-4-бензилтио-1-/п-нитробензилоксикарбонил/-2//1-(2-/п-нитробензилоксикарбонил/аминоацетил/-пиперазин-4-ил/карбонил/пирролидина растворяют в 9 мл метанола 6 мл тетрагидрофурана, к полученному в результате раствору прибавляют 0,22 г метоксида натрия при охлаждении на ледяной бане и в токе аргона, потом проводят реакцию в течение часа. После нейтрализации водным раствором лимонной кислоты и концентрирования растворителя, полученный в результате реакционный раствор экстрагируют хлороформом, хлороформенный слой промывают водой и сушат над сульфатом натрия, отгоняют растворитель при пониженном давлении, а полученный в результате остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем, получают 1,10 г целевого соединения в виде белой пены.

ЯМР /CDCl₃/ d 1,8 2,1 /1H, м/, 2,5 3,0 /1H, м/, 3,0 4,3 /13H, м/, 4,5 4,8 /1H, м/, 5,20 /4H, с/, 7,50 /4H, д/, 8,22 /4H, д/.

Ссылочный пример 2.

/2S, 4S/-4-меркапто-1-/п-нитробензилоксикарбонил/-2-//1-/ 2-N,N-диметиламиноацетил/пиперазин-4-ил/карбонил/пирролидин 1. Порцию 14,9 г /2S,4R/-1-/п-нитробензилоксикарбонил/4-оксипролина, 12,4 г дициклогексилкарбодиимида и 6,75 г N-оксибензотриазола прибавляют к 100 мл тетрагидрофурана, потом проводят реакцию в течение 1 ч при комнатной температуре, получают активный сложный эфир пролина. Продукт реакции смешивают с 16,5 г 1-/п-метоксибензилоксикарбонил/пиперазина и проводят реакцию в течение 2 ч при комнатной температуре при перемешивании. После завершения реакции отфильтровывают дициклогексилмочевину, оставшийся фильтрат выпаривают при пониженном давлении, остаток растворяют в хлороформе и промывают 10% -ным водным раствором лимонной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия, потом выпаривают растворитель при пониженном давлении, получают маслянистый остаток. Его наносят на хроматографическую колонку с силикагелем и проявляют хлороформом и смесью хлороформа и метанола, получают 16,5 г /2S,4R/-1-/п-нитробензилоксикарбонил/-2-//1-/ п-метоксибензилоксикарбонил/пиперазин-4-ил/карбонил/-4-оксипирролидина в виде целевого соединения.

ЯМР /CDCl₃/ d 0,90 1,40 /2H, м/, 3,00 3,90 /11H, м/, 3,80 /3H, с/, 4,40 4,70 /1H, м/, 4,90 5,44 /4H, м/, 6,75 7,02 /2H, м/, 7,20 - 7,60 /4H, м/ 8,08 8,30 /2H, м/.

2. Растворяют порцию 11,8 г трифенилфосфина в 200 мл тетрагидрофурана, к которому последовательно прибавляют по каплям 7,06 мл диэтилазодикарбоксилата при охлаждении до -20^oC. Через 40 мин к раствору прибавляют по каплям 15,9 г /2S,4R/-1-/п-нитробензилоксикарбонил/пиперазин-4-ил/карбонил/- 4-оксипирролидина и 5,2 мл тиобензойной кислоты, растворенных в тетрагидрофуране последовательно. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи отгоняют тетрагидрофуран при пониженном давлении, полученный таким образом остаток растворяют в этилацетате и промывают водным раствором бикарбоната натрия, органический слой промывают водой и сушат над сульфатом натрия, потом выпаривают растворитель при пониженном давлении. Полученный таким образом /2S,4S/-4-бензилтио-1-/п-нитробензилоксикарбонил/-2-//1-/п- метоксибензилоксикарбонил/пиперазин-4-ил/карбонил/пирролидин используют в последующей реакции без дополнительной очистки.

3. Полученный выше сырой продукт прибавляют к охлажденной льдом смеси, состоящей из 200 мл трифторуксусной кислоты и 50 мл анизола, потом проводят реакцию в течение 1 ч при комнатной температуре. После удаления трифторуксусной кислоты при пониженном давлении, остаток растворяют в этилацетате, нейтрализуют и промывают водным раствором бикарбоната натрия, промывают водой и затем сушат над сульфатом натрия, потом выпаривают растворитель при пониженном давлении. Остаток наносят на хроматографическую колонку с силикагелем и элюируют смесью хлороформа и метанола получают 12 г /2S,4S/-4-бензоилтио-1-/п-нитробензилоксикарбонил/-2-//пиперазин-1- ил/карбонил/пирролидина.

ЯМР/CDCl₃/ d 1,8 2,3 /1H, м/, 2,6 3,3 /5H, м/, 3,3 4,0 /5H, м/, 4,0 4,4 /2H, м/, 4,6 5,0 /1H, м/, 5,23 /2H, с/ 7,3 7,7 /5H, м/, 7,8 8,0 /2H, м/, 8,23 /2H, д/.

4. Суспендируют порцию 0,29 г N,N-диметилглицина в 10 мл хлороформа и прибавляют к смеси 0,53 г оксалилхлорида и 1 каплю диметилформамида, потом проводят реакцию в течение 1 ч при комнатной температуре. К смеси прибавляют при охлаждении на ледяной бане 1,0 г /2S,4S/-4-бензоилтио-1-/п-нитробензилоксикарбонил/-2-//пиеперазин-1-ил/карбонил/пирролидина и 0,63 г триэтиламина, потом проводят реакцию в течение 2 ч. Реакционный раствор смешивают с хлороформом, промывают водой и сушат над сульфатом натрия, потом выпаривают растворитель при пониженном давлении и очищают хроматографией на колонке с силикагелем, получают 0,49 г /2S,4S/-4-бензоилтио-1-/п-нитробензилоксикарбонил/- 2-//1-/2-N,N-диметиламиноацетил/пиперазин-4-ил/карбонил/пирролидина в виде пены.

ЯМР /CDCl₃ d 1,9 2,2 /1H, м/, 2,2 /6H, с/, 2,5 3,0 /1H, м/, 3,10 /2H, с/, 3,3 3,9 /8H, м/, 3,9 4,4 /3H, м/, 4,6 5,0 /1H, м/, 5,22 /2H, м/, 7,3 7,7 /5H, м/, 7,9 /2H, д/, 8,20 /2H, д/.

5. Растворяют порцию 0,49 г /2S,4S/-4-бензоилтио-1-/п-нитробензилоксикарбонил/-2-//1-/2-N,N-диметиламиноацетил /пиперазин-4-ил/карбонилпирролидина в смеси 10 мл метанола и 5 мл тетрагидрофурана и прибавляют к раствору при охлаждении на ледяной бане и в токе аргона 0,069 г метоксида натрия, потом проводят реакцию в течение 60 мин. Реакционный раствор нейтрализуют при охлаждении на ледяной бане 0,076 г уксусной кислоты и концентрируют растворитель, остаток смешивают с хлороформом, промывают водой и сушат над сульфатом натрия, потом выпаривают растворитель при пониженном давлении и очищают хроматографией на колонке с силикагелем, получают 0,31 г целевого соединения в виде белой пены.

ЯМР /CDCl₃/ d 1,8 2,1 /1H, м/, 2,20 /6H, м/, 2,5 3,0 /1H, м/, 3,12 /2H, с/, 3,2 3,9 /10H, м/, 3,9 4,2 /1H, м/, 4,5 4,9 /1H, м/, 5,20 /2H, с/, 7,50 /2H, д/, 8,20 /2H, д/.

Ссылочный пример 3.

/2S, 4S/-4-меркапто-1-/п-нитробензилоксикарбонил/-2-//1-/4-/п-нитробензилоксикарбонил/аминобутирил/пиперазин-4- ил/карбонил/пирролидин 1. Растворяют порцию 3,10 г 4-аминомасляной кислоты в 15 мл 2H гидроксида натрия, к раствору одновременно прибавляют по каплям 6,48 г -п-нитробензилоксикарбонилхлорида, растворенного в эфире, и 7,5 мл 4H гидроксида натрия при охлаждении на ледяной бане. После 2 ч перемешивания при этой же температуре раствор промывают эфиром, подкисляют полученный в результате водный слой концентрированной соляной кислотой и отфильтровывают выпавший в осадок твердый продукт, промывают водой и затем сушат, получают 7,64 г 4-/п-нитробензилоксикарбонил/аминомасляной кислоты.

ЯМР /DMCO-d₆/ d 1,5 1,9 /2H, м/, 2,28 /2H, т/, 3,04 /2H, к/, 5,18 /2H, с/, 7,62 /2H, д/, 8,25 /2H, д/.

2. К 1,13 г 4-п-/нитробензилоксикарбонил/аминомасляной кислоты, растворенным в тетрагидрофуране, прибавляют при охлаждении на ледяной бане 0,48 г N-оксисукцинимида и 0,87 г дициклогексилкарбодиимида, потом проводят реакцию при перемешивании в течение ночи. К раствору прибавляют 1,0 г 1-/п-метоксибензилоксикарбонил/-пиперазина и 0,41 г триэтиламина, проводят реакцию в течение 2 ч. После удаления нерастворимого материала из реакционной смеси фильтрованием и последующего концентрирования фильтрата полученный таким образом остаток смешивают с этилацетатом, промывают водным раствором бикарбоната натрия, водным раствором лимонной кислоты и водным раствором хлористого натрия в таком порядке, затем сушат над сульфатом натрия и выпаривают растворитель при пониженном давлении. После этого полученный в результате остаток подвергают хроматографии на колонке с силикагелем, получают 1,49 г 1-/п-метоксибензилоксикарбонил/-4-/4-/п-нитробензилоксикарбонил/аминобутирил/пиперазина.

ЯМР /CDCl₃/ d 1,5 2,1 /2H, м/, 2,40 /2H, т/, 3,1 3,7 /10H, м/, 3,80 /3H, с/, 5,08 /2H, с/, 5,20/2H, с/, 6,90 /2H, д/, 7,30 /2H, д/, 7,50 /2H, д/, 8,20 /2H, д/.

3. Суспендируют порцию 0,86 г /2S,4S/-4-бензоилтио- 1-/п-нитробензилоксикарбонил/пролина в 10 мл дихлорметана и прибавляют к суспензии 0,51 г оксалилхлорида и 1 каплю диметилформамида, потом проводят реакцию в течение часа при комнатной температуре. К раствору прибавляют при охлаждении на ледяной бане 0,74 г 1-/4-/п- нитробензилоксикарбонил/аминобутирил/пиперазина и 0,42 г триэтиламина, потом проводят реакцию 3 ч при комнатной температуре. Полученную в результате реакционную смесь смешивают с хлороформом, промывают водным раствором бикарбоната натрия, водным раствором лимонной кислоты и водным раствором хлористого натрия в таком порядке и затем сушат над сульфатом натрия, потом выпаривают растворитель при пониженном давлении. После этого остаток подвергают хроматографии на колонке с силикагелем, получают 1,64 г пены /2S,4S/-4-бензоилтио-1-/п-нитробензилоксикарбонил/-2-//1-/4-/п-нитробензилоксикарбонил/ аминобутирил/пиперазин-4-ил/-карбонил/пирролидина.

ЯМР /CDCl₃/ d 1,5 2,1 /3H, м/, 2,2 2,5 /2Н, м/, 2,5 4,4 /14Н, м/, 4,5 4,9 /1Н, м/, 5,20 /2Н, с/, 5,25 /2Н, с/, 7,3 7,7 /7Н, м/, 7,90 /2Н, д/, 8,20 /4Н, д/.

4. Растворяют порцию 1,53 г /2S,4S/-4-бензоилтио-1-/п-нитробензилоксикарбонил/-2-//1-/4-/п-нитробензилоксикарбонил/аминобутирил/пиперазин-4-/карбонил/пирролидина в смеси 20 мл метанола и 10 мл тетрагидрофурана, прибавляют 0,16 г метоксида натрия к раствору при охлаждении на ледяной бане, потом проводят реакцию в течение 1 ч. Смесь нейтрализуют при охлаждении на ледяной бане водным раствором лимонной кислоты и концентрируют, остаток растворяют в хлороформе, промывают водой и сушат над сульфатом натрия, потом выпаривают растворитель при пониженном давлении и подвергают остаток хроматографии на колонке с силикагелем, получают количественный выход целевого соединения.

ЯМР /CDCl₃/ d 1,5 2,1 /3H, м/, 2,2 2,5 /2Н, м/, 2,5 3,0 /1Н, м/, 3,0 4,2 /13Н, м/, 4,5 4,8 /1Н, м/, 5,20 /2Н, с/, 5,22 /2Н, с/, 7,50 /4Н, д/, 8,20 /4Н, д/.

Ссылочный пример 4.

/2S, 4S/-4-меркапто-1-/п-нитробензилоксикарбонил/-2-//1-//2S/-/4-/п-нитробензилоксикарбонил/амино-2-оксибутирил/пиперазин-4-ил/пирролидин 1. Растворяют порцию 2,82 г /2S/-4-амино-2-оксимасляной кислоты в 15 мл 2H гидроксида натрия к охлажденному на льду раствору прибавляют одновременно по каплям 0,15 г п-нитробензилоксикарбонилхлорида, растворенного в эфире, и 7,5 мл 4H гидроксида натрия. После 2 ч перемешивания при этой же температуре подкисляют водный слой концентрированной соляной кислотой и отфильтровывают выпавший в осадок твердый материал, промывают водой и затем сушат, получают 4,48 г /2S/-4-/п-нитробензилоксикарбонил/- амино-2-оксимасляной кислоты.

ЯМР /ДМСО-d₆/ d 1,5-2,1 /2H, м/, 2,9-3,4 /2H, м/, 3,99 /1H, дд/, 5,16 /2H, с/, 7,59 /2H, с/, 7,59 /2H, д/, 8,23 /2H, д/.

2. K 0,9