Циклические пептиды или их фармацевтически приемлемые соли, способ их получения

Циклические пептиды или их фармацевтически приемлемые соли, способ их получения

Реферат

 

Использование: в медицине как соединения, обладающие бронхолитической активностью. Сущность изобретения: циклические пептиды формулы I: где R₁=His, NCH₃Ala; R₂=Ala, Ser; R₆= группа; -NH-C(Q)-C(O)- где Q = (низший) аклиларил, причем арил может быть незамещенным или замещенным по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из: OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃; R₈= Asp, Ala, Glu; R₁₀=Tyr, незамещенный или замещенный низшей алкоксигруппой; или R₆, где Q= (низш.) алкилфенил; R₁₂=Arg, Lys или Orn; R₁₆=Ala или Gln; R₁₇=Nle или Ala; R₁₉=Ala или Val; R₂₂=Tyr или R₆, где Q=(низший) алкилфенил; R₂₄= Ala или Asn; R₂₆=Ile, Val, Leu; R₂₇=Lys или Leu; R₂₈=Asn, Thr, Lys; X = водород или ацил; Y = NH₂, OH; или R₂₉-R₃₀-R₃₁-Z, где Z = NH₂; R₂₉=Gly или Ala; R₃₀= Gly или Ala; R₃₁=Met, Cys(Asm), Ala , Thr или их фармацевтически приемлемые соли; способ получения пептидов I путем построения пептидной цепи твердофазным методом на полимерном носителе, отщепления защитных групп для получения аминогруппы со свободной боковой цепью в соответствующих положениях, необходимых для последующей циклизации, образования циклической ковалентной связи между этими защитными группами, отщепления защитных групп и полимера-носителя путем обработки соответствующим реганентом и, при необходимости, в присутствии таких добавок, как ацепторы катионов. 4 с.п. и 53 з. п. ф-лы, 6 табл.

Изобретение относится к новым циклическим пептидам или их фармацевтически приемлемым солям, которые являются аналогами вазоактивных пептидов (VIP), используемых при лечении бронхотрахеальных спазматических состояний.

Вазоактивный кишечный пептид (VIP) был впервые обнаружен, выделен и очищен с применением свиной кишки (патент США 3,879,371). Пептид содержит двадцать восемь аминокислот (28) и расширяет гомологический ряд соединений на основе секретина и глюкагона (Carlquist et al. Horm.Metab.Pes. 14, 28-29 (1982)). Последовательность аминокислот в VIP является следующей: His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu- Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn- NH₂[(SEQ ID NO:1)-NH₂] VIP известен как вещество с широким диапазоном биологического действия на всем протяжении желудочно-кишечного тракта и сердечно-сосудистой системы. Ввиду его сходства с желудочно-кишечными гормонами, было обнаружено, что VIP способен стимулировать панкреатическую и билиарную секрецию, печеночный гликогенолиз, секрецию глюкагона и инсулина и активизировать выделение панкреотического бикарбоната [Kerrins C. and Said S.I. Proc.Soc. Exp.Biol. Med. 142, 1014-1017 (1972); Domschke S. et al. Gastroenterology, 73, 478-480 (1977)] Нейроны, содержащие VIP, были определены путем иммуноанализа в клетках эндокринной и экзокринной систем, кишечной и гладкой мышц [Polak J.M. et al. Gut, 15, 720-724 (1974)] Было обнаружено, что VIP является нейроэффектором, вызывая выделение нескольких гормонов, включая пролактин [Frawley L.S. et al. Neuroendocrinology, 33, 79-83 (1981)] тироксин [Ahren B. et al. Nature, 287, 343-345 (1980)] инсулин и глюкагон [Schebalin M. et al. Am.J.Physiology E. 232, 197-200 (1977)] Была обнаружена также способность VIP стимулировать выделение ренина из почки в естественных и в искусственных условиях [Porter J.P. et al. Neuroendocrinology, 36, 404-408 (1983)] Было обнаружено, что VIP присутствует в нервах и нервных окончаниях дыхательных путей различных видов животных и человека [Dey R.D. and Said S.I. Fed.Proc. 39, 1062 (1980); Said S. I. et al. Ann.N.Y. Acad.Sci. 221, 103-114 (1974)] Действие VIP на сердечно-сосудистую и бронолегочную системы заключается в том, что, как было обнаружено, VIP является мощным вазодилататором и потенциальным релаксантом гладких мышц, оказывающим воздействие на периферические, легочные и коронарно-сосудистую системы [Said S.I. et al. Clin.Res. 20, 29 (1972)] Было обнаружено, что VIP обладает расширяющим действием на церебральные кровеносные сосуды [Lee T.J. and Berzin I. Science, 224, 898-900 (1984)] Проведенные в лабораторных условиях исследования показали, что экзогенное воздействие вазоактивного кишечного пептида на церебральные артерии вызывает расширение кровеносных сосудов, что позволяет сделать предположение о возможности использования VIP в качестве сосудорасширяющего средства для церебральной системы [Lee T. and Satio A. Science, 224, 898-901 (1984)] Было также обнаружено, что VIP обладает потенциальным сосудорасширяющим действие на глаза [Nilsson S.P.E. and Bill A. Acta Physiol.Scand. 121, 385-392 (1984)] VIP может оказывать соответствующее действие на иммунную систему. O'Doriso et al. показали, что VIP может вызывать пролиферацию и миграцию лимфоцитов [J.Immunol. 135, 792s-796s (1985)] Поскольку было обнаружено, что VIP обладает способностью к расслаблению гладких мышц и обычно присутствует в тканях дыхательных путей, как отмечено выше, то было высказано предположение о том, что VIP может оказывать эндогенное воздействие на расслабление гладких мышц бронхиальной системы [Dey R. D. and Said S.I. Fed.Proc. 39, 1962 (1980)] Было обнаружено, что ткани больных астмой не содержат иммуноактивного VIP по сравнению с тканями здоровых людей. Это может указывать на потерю VIP или VIP-содержащих нервных волокон, связанную с возникновением астмы [Ollerenshaw S. et al. New England J.Med. 320, 1244-1248 (1989)] При проведении испытаний в искусственных и естественных условиях было обнаружено, что VIP обладает способностью к расслаблению гладких мышц трахеи и к защите от воздействия таких бронхосжимающих агентов, как гистамин и простагландин F_2a [Wasserman M.A. et al. in Vazoactive Intestinal Peptide, S.I.Said ed. Raven Press, N.Y. 1982, pp.177-184; Said S. I. et al. Ann. N.Y. Acad. Sci. 221, 103-114 (1974)] Было обнаружено, что при внутривенном введении VIP обладает способностью к защите от воздействия таких бронхосжимающих агентов, как гистамин, простагландин F_2a, лейкотриены, факторов, вызывающих тромбоцит, а также антигеноиндуцированного бронхостеноза [Said S. I. et ak. supra, (1982)] Проведенные в лабораторных условиях испытания показали, что VIP также обладает способностью к ингибированию выделения слизи в тканях дыхательных путей человека [Coles S.J. et al. Am.Rev.Respir.Dis. 124, 531-536 (1981)] При внутривенном введении VIP в организм человека, больного астмой, было выявлено, что VIP обладает способностью к увеличению максимальной скорости выдоха и к защите от гистамининдуцированного расширения бронхов [Morice A.H. and Sever P.S. Peptides, 7, 279-280 (1986); Morice A. et al. The Lancet, 11, 1225-1227 (1983)] Эффективное действие на легкие, наблюдаемое при таком внутривенном введении VIP, сопровождалось, однако, побочным действием на сердечно-сосудистую систему вызывал в особенности гипотензию и тахикардию, а также прилив крови к лицу. При дозированном внутривенном введении, не вызывающем сердечно-сосудистого действия, VIP не способен изменить удельную проводимость дыхательных путей [Palmer J.B.D. et al. Thorax, 41, 663-666 (1986)] Недостаточную степень воздействия VIP объясняют небольшим количеством допустимой дозы и, возможно, быстрым разрушением соединения.

При назначении больным в виде аэрозоля нативный VIP обладал минимальной активностью для защиты от гистамининдуцированного бронхостеноза [Altieri et al. Pharmacologist, 25, 123 (1983)] Было обнаружено, что VIP не оказывает значительного воздействия на основные параметры дыхательных путей, но обладает защитным действием от гистамининдуцированного бронхостеноза при ингаляционном введении в организм больного [Barnes P.J. and Dixon C.M.S. Am.Rev. Respir.Dis. 130, 162-166 (1984)] При введении в организм больного в виде аэрозоля VIP не вызывал тахикардии или понижения артериального давления, но оказывал бронхорасширяющее действие [Said S. I. et al. in Vasoactive Intenstinal Peptide, S.I.Said, ed. Raven Press, N.Y. 1928, pp.1-85-191] Ввиду интересной биологической активности, которая может быть полезной, VIP явилось предметом изучения официально представленных программ синтеза, имеющих целью развить одно или более свойств данной молекулы. Takeyama et al. сообщили об аналоге VIP, имеющем в своем составе глютаминовую кислоту, замещенную аспарагиновой кислотой в положении 8. Было обнаружено, что это вещество не такое сильнодействующее, как нативный VIP [Chem.Pharm.Bull. 28, 2265-2269 (1980)] Wendlberger et al. обнаружили аналог VIP, имеющий в своем составе норлейцин, заменяющий метионин в положении 17 [Peptide, Proc. 16th Eur. Pep. Symp. 290-295 (1980)] Было обнаружено, что данный пептид обладает таким же сильным действием, как и нативный VIP, по его способности к замещению радиоиодированного VIP в препаратах на основе печеночной мембраны. Watts и Wooton сообщили о серии линейных и циклических фрагментов VIP, включающих в себя от 6 до 12 остатков, соответствующих последовательности нативного VIP (Eur. Pat. Nos. 184309 and 325044; U.S. Pat.Nos. 4,737,487 and 4,866,039). Turner et al. сообщили о том, что фрагмент VIP(10-28) является веществом-антагонистом по отношению к VIP [Peptides, 7,849-854 (1986)] Было также указано на то, что замещенный аналог [4-Cl-D-Phe⁶Leu¹⁷]-VIP присоединяется к рецептору VIP и подавляет активность VIP. [Pandol S. et al. Gastrointest. Liver Physiol. 13, G553-G557 (1986)] Gozes et al. сообщили о том, что аналог [Lys¹, Pro², Arg³, Arg⁴, Pro⁵, Tyr⁶]-VIP представляет собой конкурентноспособный ингибитор образования связи между VIP и его рецептором на уровне глиальных клеток. [Endocrinology, 125, 2945-2949 (1989)] Robberecht et al. сообщили о нескольких аналогах VIP с D-остатками, замещенными в N-концевой группе нативного VIP. [Peptides, 9, 339-345 (1988)] Каждый из этих аналогов имел менее прочную связь и обладал меньшей активностью, чем нативный VIP в отношении с-AMP активации. Tachibana и Ito сообщили о нескольких аналогах VIP, включающих в себя молекулу исходного вещества. [in Peptide Chem. T.Shiba and S.Sakakibara, eds. Prot. Res.Foundation, 1988, pp.481-486, Jap.Pat.No.1083012, U.S.Pat.4,822,774] Было указано на то, что бронхолитическое действие этих веществ на 1-3 порядка более, чем действие VIP, а гипотензивное действие на 1-2 порядка более, чем действие VIP. Musso et al. сообщили также о нескольких аналогах VIP, замещенных в положениях 6-7, 9-13, 15-17 и 19-28. [Biochemistry, 27, 8174-8181 (1988); Eur.Pat. No.8271141; U. S. Pat. 4,835,252] Было обнаружено, что действие этих веществ эквивалентно или менее активно, чем действие нативного VIP в отношении присоединения к рецептору VIP и биологической чувствительности. Bartfai et al. сообщили о серии многократно замещенных [Leu¹⁷]-VIP аналогах. (Международная заявка на патент N WO 89/05857).

Настоящее изобретение относится к аналогам циклических вазоактивных пептидов. Циклический пептид представляет собой пептид, в котором карбоксигруппа одной аминоксилоты соединена ковалентной связью с амино-группой другой аминокислоты с образованием амидной связи. В результате такой связи образуется циклическая структура. Биологическая активность циклических пептидов может существенно отличаться от биологической активности их исходных аналогов с линейной структурой. Структура циклических пептидов является более устойчивой и четко выраженной. Эти различия оказывают влияние на биологическую активность циклических пептидов. Циклическая структура аналога пептида может способствовать продолжительности его действия ввиду устойчивости структуры, которая уменьшает вероятность химической и ферментативной деструкции. Может быть увеличена и биологическая активность циклических пептидов в результате изменения физических свойств пептидов при повышении устойчивости структуры. Таким образом, четко выраженная форма циклического пептида может способствовать его большей избирательности действия в отношении избранного рецептора по сравнению с линейными пептидами, способствуя уменьшению нежелательного побочного действия.

В настоящем изобретении предложены новые циклические пептиды с формулой: где R₁ His, NCH₃Ala; R₂ Ala, Ser; R₆ группа Q (низший) алкарил, в котором арил может быть незамещенным или замещенным одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃; R₈=Asp, Ala, Glu; R₁₀= Tyr, незамещенный или замещенный низшей алкоксигруппой; или R₆, где Q= (низший) алкилфенил, незамещенный или замещенный в фенильном ядре одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: N(CH₃)₂, OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃; R₁₂=Arg,Orn или Lys; R₁₆= Ala или Gln; R₁₇=Nle, Ala; R₁₉=Als, Val; R₂₂=Tyr или R₆, где Q=(низший) алкилфенил незамещенный или замещенный в фенильном ядре одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, N(CH₃)₂, C(CH₃)₃; R₂₄=Ala, Asn; R₂₆=Ile, Val, Leu; R₂₇= Lys, Leu; R₂₈=Asn, Thr, Lys; X водород или ацил; Y NH₂ или OH-группа; R₂₉-R₃₀-R₃₁-Z, где Z NH₂; R₂₉=Gly, Ala; R₃₀=Gly, Ala; R₃₁=Met, Cys(Asm), Ala, Thr; или их фармацевтически приемлемые соли.

Предпочтительны циклические пептиды, в которых Q представляет собой (C₁-C₂) алкарил; либо циклические пептиды, в которых Q (C₁-C₂)алкилфенил, где фенильное кольцо является незамещенным или замещенным одним или несколькими заместителями, выбранными из: F, Cl, I, NH₂, OH, OCH₃, CH₃, CF₃, NO₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃, либо циклические пептиды, в которых Q-(C₁-C₂)алкилнафталин.

Преимущественно это циклические пептиды, выбранные из соединений формулы I, где R₂₆= Val, R₂₈= Thr [X (SEQ ID No. 11)Y] или R₁₇= Nle, R₂₆= Val, R₂₈= Thr [X (SEQ ID No.12)Y] в частности, пептид, представляющий собой Ae-[Glu⁸, Orn¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP цикло/Lys²¹, ___ Asp²⁵/[Ac-/SEQ ID No.14/-Y/, или R₁₂ Lys, R₁₇ Nle, R₂₆ Val, R₂₈ Thr [X (SEQ ID No.31)-NH₂] в частности, пептид, представляющий собой: Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID No.28)- NH₂] или Ac-[p-F-Phe⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:66)-NH₂] или циклический пептид, где R₁₂ представляет собой Lys, R₁₇ представляет собой Nle, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Val и R₂₈ представляет собой Thr [X-SEQ ID NO:15)-Y] В частности, к ним относится циклический пептид, представляющий собой: а) Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:29)- NH₂] б) Ac-[p-F-Phe⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Cys(Acm)³¹]-VIP (1-31)-NH₂ цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:32)-NH₂] в) Ac-[Ala², Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:33)-NH₂] г) Ac-[N-Me-Ala¹, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:34)-NH₂] д) Ac-[O-Me-Tyr¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:41)-NH₂] е) Ac-[p-F-Phe⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:49)-NH₂] ж) Ac-[I-Nal⁶, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:50)-NH₂] з) Ac-[p-NH₂-Phe¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:54)-NH₂] и) Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-OCH₃-Tyr²², Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:55)-NH₂] к) Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-F-L-Tyr²², Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:56)-NH₂] л) Ac-[Glu⁸ Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Val²⁶, Thr²⁸, Gly^29,30, Thr³¹] -VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:65)-NH₂] или к пептиду в), в котором R₂₆ представляет собой Leu, и R₂₇ и R₂₈ и представляют собой Lys[X-(SEQ ID NO:16)-Y] в частности, к пептиду, в котором R₁₂ представляет собой Lys, R₁₇ представляет собой Ala, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆представляет собой Leu и R₂₇ и R₂₈ представляют собой Lys [X-(SEQ ID NO: 17)-Y] Среди последних можно назвать циклический пептид, представляющий собой Ac-[Glu, Lys¹², Ala^16,17,19, Asp²⁵, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 60)-NH₂] или Ac-[Ala⁸, Lys¹², Ala^16,17,19, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:62)-NH₂] Ac-[Glu⁸, Lys¹², Ala^16,17,19,Ala²⁴, Asp²⁵,Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:64)-NH₂] либо циклический пептид, в котором R₁₂ представляет собой Lys, R₁₇ представляет собой Nle, R₂₆ представляет собой Leu и R₂₇ и R₂₈ представляют собой Lys[X-(SEQ ID No:18)-Y] в частности, циклический пептид, представляющий собой Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло [Lys²¹-->Asp²⁵] [Ac-(SEQ ID NO: 67)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:68)-NH₂] либо циклический пептид, в котором R₁₂ представляет собой Lys, R₁₇ представляет собой Nle, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Leu и R₂₇ и R₂₈ представляют собой Lys[X-(SEQ ID NO: 19)-Y] циклический пептид, в котором R₁₂ представляет собой Lys, R₁₆ представляет собой Gln, R₁₇ представляет собой Nle, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Leu и R₂₇ и R₂₈ представляют собой Lys[X-(SEQ ID NO:70)-Y] циклический пептид, в котором R₂ представляет собой Ser, R₁₂ представляет собой Lys, R₁₆ представляет собой Gln, R₁₇ представляет собой Nle, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Leu, R₂₇ и R₂₈ представляет собой Lys[X-(SEQ ID NO:71)-Y] в частности циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Lys¹², -Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 38)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[N-Me-Ala¹, Lys¹², -Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:39)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 40)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31, -VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:42)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[N-Me-Ala¹, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 44)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[p-F-Phe⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:45)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[I-Nal⁶, Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 46)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, p-NH₂-Phe¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:47)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, O-Me-Tyr¹⁰, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 48)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:52)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, m-OCH₃-Tyr²², Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 57)- NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹,m-F-L-Tyr²², Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 58)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Ala⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 59)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31] -VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:69 )-NH₂] циклический пептид, в котором R₂ представляет собой Ala, R₁₂ представляет собой Lys, R₁₆ представляет собой GLu, R₁₇ представляет собой NLe, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Leu и R₂₈ представляет собой Lys[X-(SEQ ID NO: 72)-Y] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29-31] -VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:43)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Ala^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:51)- NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Ala², Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO: 53)-NH₂] циклический пептид, в котором R₁₂ представляет собой Lys, R₁₆ представляет собой Ala, R₁₇ представляет собой Nle, R₁₉ представляет собой Ala, R₂₆ представляет собой Leu и R₂₇ и R₂₈ представляют собой Lys[X-(SEQ ID NO: 73)-Y] в частности, циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Ala⁸, Lys¹², Ala¹⁶, Nle¹⁷, Ala¹⁹, Ala²⁴, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28] -VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:61)-NH₂] циклический пептид, в котором указанный пептид представляет собой Ac-[Glu⁸, Lys¹², Ala¹⁶, Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:63)-NH₂] Все указанные пептиды обладают терапевтической активностью, в частности, бронхолитической активностью. Особенно это относится к пептиду формулы: Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:52)- NH₂] обладающему терапевтической активностью, а именно бронхолитической активностью.

Данное изобретение относится к способу получения циклических пептидов общей формулы I в которой R₁ представляет собой His, N-CH₃-Ala; R₂ представляет собой Ser или Ala; R₆ представляет собой где Q (низший)алкарил, причем арильное кольцо может быть незамещенным или замещенным по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃; R₈ представляет собой Asp, Glu или Ala; R₁₀ представляет собой Tyr, незамещенный или замещенный алкоксигруппой; или R₆, где Q-низший(алкфенил), незамещенный или замещенный по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃; R₁₂ представляет собой Arg, Lys или Orn; R₁₆ представляет собой Ala или Gln; R₁₇ представляет собой Nle или Ala; R₁₉ представляет собой Val или Ala; R₂₂ представляет собой Tyr или R₆, где Q=низший (алкфенил), незамещенный или замещенный по кольцу одним или несколькими заместителями, выбранными из группы: OH, OCH₃, CF₃, CH₃, F, Cl, J, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅, C(CH₃)₃; R₂₄ представляет собой Asn или Ala; R₂₆ представляет собой Ile, Val или Leu; R₂₇ представляет собой Lys или Leu; R₂₈ представляет собой Asn, Thr или Lys; X представляет собой водород или ацил; Y представляет собой NH₂ или группу OH; R₂₉-R₃₀-R₃₁-Z; R₂₉=Gly, Ala; R₃₀ представляет собой Gly или Ala; R₃₁ представляет собой Ala, Met, Cys(Acm) или Thr; Z представляет собой NH₂; или их фармацевтически приемлемых солей.

Способ заключается в том, что к полимерному носителю присоединяют C-концевую N-защищенную аминокислоту, деблокируют и присоединяют по аминогруппе N-защищенные аминокислоты в порядке, указанном в формуле I, деблокируя каждый раз аминогруппу очередной, присоединенной к пептидной цепи аминокислоты, от полученного пептидилполимера отщепляют защитные группы для получения аминогруппы со свободной боковой цепью в соответствующих положениях, необходимых для последующей циклизации, циклизуют с образованием циклической ковалентной связи между этими группами, отщепляют оставшиеся защитные группы и полимер-носитель путем обработки соответствующим реагентом и, при необходимости, в присутствии таких добавок, как акцепторы катионов.

Q предпочтительно представляет собой: где n 1, 2; X₁ и X₂ независимо означают атомы водорода, OH, OCH₃, F, Cl, I, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃, NHCOC₆H₅ или C(CH₃)₃.

Предпочтительно, если Q означает бензил, п-фторбензил, п-аминобензил, п-гидроксибензил, о-метил, 1-метилнафтил или 2-метилнафтил. Наиболее предпочтительным значением Q является бензил.

Целесообразно использовать пептиды, имеющие группу формул А, приведенных в конце описания, где X, Y, R₁, R₂, R₆, R₈, R₁₀, R₁₂, R₁₆, R₁₇, R₁₉, R₂₂, R₂₄ и R₂₇ имеют значения, указанные выше.

Наиболее целесообразно использовать циклический пептид в виде Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Ala¹⁹, Asp²⁵, Leu²⁶, Lys^27,28, Gly^29,30, Thr³¹]-VIP цикло _[Lys21_{___ Asp}25_] [Ac-(SEQ ID NO:52)- NH₂] В соответствии с настоящим изобретением пептиды способствуют релаксации трахеобронхиальных гладких мышц без побочного действия на сердечно-сосудистую систему и, поэтому, являются пригодными для лечения нарушений, связанных с сужением просвета бронха, например, для лечения астмы.

Изобретение относится к неизвестным аналогам вазоактивных кишечных пептидов (VIP), которые оказывают соответствующее бронхорасширяющее действие без поддающихся наблюдению побочных эффектов.

Термин "низший алкил", используемый в описании, относится к остаткам насыщенных алифатических углеводородов с прямой и разветвленной цепью, содержащей 1-6 атомов углерода. Предпочтительной группой низшего алкила является метильная группа.

Термин "арил", используемый в описании, относится к таким группам одноядерных ароматических углеводородов, как фенил, который может быть незамещенным или замещенным в одном или нескольких положениях OH, OCH₃, F, Cl, J, CH₃-группами, аминогруппой, нитрогруппой, диметиламиногруппами, ацетиламино или бензоиламиногруппой. Термин "арил" также относится к многоядерным арильным группам, таким как нафтил, который может быть замещен одной или несколькими из вышеуказанных групп. Предпочтительными арильными группами являются фенил, незамещенный или однозамещенный фтором, или незамещенный нафтил.

X представляет собой водород или ацил, а Y представляет OH или NH₂ группу.

Используемые далее термины: "гидролизуемая аминозащитная группа" и "гидролизуемая карбоксизащитная группа" согласно описанию данного изобретения означает любую ацильную группу.

Предпочтительными аминозащитными группами являются: где X₃ представляет собой низший алкил или низший галоидалкил. Наиболее предпочтительными из этих защитных групп являются те группы, в которых X₃ представляет собой C_1-3алкил или C_1-3галоалкил.

Предпочтительными карбозащитными группами являются низшие сложные алкиловые эфиры, NH₂ и низшие алкиламиды, наиболее предпочтительными из которых являются C_1-3алкиловые сложные эфиры, NH₂ и C_1-3алкиламиды.

В настоящем изобретении также рассматриваются новые циклические пептиды с формулой: где R₁ представляет собой N-CH₃-Ala; R₂ представляет собой Ser или Ala; R₆ представляет собой где R₈ представляет собой Asp, Glu или Ala; R₁₀ представляет собой Tyr или R₆; R₁₂ представляет собой Arg или Lys; R₁₆ представляет собой Gln или Ala; R₁₇ представляет собой Nle или Ala; R₁₉ представляет собой Val или Ala; R₂₂ представляет собой Tyr или R₆; R₂₄ представляет собой Asn или Ala; R₂₆ представляет собой Ile, Val или Ley; R₂₇ представляет собой Leu или Lys; R₂₈ представляет собой Asn, Thr или Lys; X представляет собой водород или гидролизуемую аминозащитную группу-ацил; Y представляет собой гидроксил, гидролизуемую карбоксизащитную группу - NH₂, или R₂₉-R₃₀-R₃₁-Z; R₂₉ представляет собой Gly или Ala; R₃₀ представляет собой Gly или Ala; R₃₁ представляет собой Ala, Met, Cys(Acm) или Thr; Z представляет собой гидроксильную или гидролизуемую карбоксизащитную группу NH₂.

Q представляет собой: где n 1, 2; X₁ и X₂ представляют собой независимые эквивалентные группы водорода, OH, OCH₃, F, Cl, I, CH₃, CF₃, NO₂, NH₂, N(CH₃)₂, NHCOCH₃,NHCOC₆H₅ или C(CH₃)₃.

Наиболее предпочтительными из соединений в виде Q являются бензил, п-фторбензил, п-аминобензил, п-гидроксибензил, о-метил, 1-метилнафтил или 2-метилнафтил. Самым предпочтительным из соединений Q является бензил или фармацевтически-приемлемые соли этих соединений.

Предпочтительными пептидами являются пептиды с группой формул Б, приведенных в конце описания, где значения радикалов указаны выше.

Как указано выше, способ получения циклических полипептидов заключается в том, что (а) проводят избирательное удаление защитной группы пептида, если она имеется, и присоединяют к полимеру с получением свободной аминогруппы и карбоксильной группы; (б) наращивают цепь путем взаимодействия реагента со свободной аминогруппой с реагентом со свободной кислотной группой, с образованием амидной ковалентной связи; (в) проводят удаление полимера.

Номенклатура, используемая для определения пептидов, является обычной для соединений, в которых N-концевая аминогруппа находится слева, а C-концевая карбоксильная группа, находится справа. Природными аминокислотами являются существующие в природе аминокислоты, обнаруженные в протеинах, то есть Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gln, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp и His. Если не оговорено иное, они находятся в виде L-изомера.

Следующие сокращения или условные обозначения используются далее в дополнение к представленным выше защитным группам, растворителям, реагентам и прочим веществам, приведенным в табл.1.

Изменения аминокислотной последовательности в пептидной цепочке нативного VIP указаны в квадратных скобках перед обозначением "VIP". Производные по аминогруппе в N-положении, представленные выше в виде X, слева от аминокислот, заключенных в скобки. Последовательность чисел, появляющихся в круглых скобках справа от "VIP", указывает на удаление аминоксилот и добавление к нумерации последовательности нативного VIP. Такое обозначение, например, Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Gly²⁹] -VIP(1-29)-NH₂, указывает на полипептид, имеющий последовательность аминокислот, соответствующую нативному VIP, в котором ацетильная группа замещает водород в N-положении аминокислоты, лизин замещает аргинин в положении 12 и норлейцин замещает на метионин в положении 17. Дополнительно на месте карбоксильной группы в положении 28 вместо аспарагина и в положении 29 введены 2 остатка глицина. Суффиксы "-OH" и "-NH₂", следующие за "VIP", или круглые скобки указывают на свободную кислоту или амид соответствующего полипептида. В случае, когда ни один из двух суффиксов не используется, последовательность содержит обе формы.

Как указано выше, циклический пептид, о котором идет речь, представляет собой пептид, в котором карбоксильная группа, вводимая в боковую цепь аминокислоты в пептиде, соединена посредством ковалентной связи с аминогруппой другой аминокислоты в пептидной цепи, с образованием амидной связи. Для обозначения циклического пептида используют несколько номенклатур и условных обозначений. Ниже приведены примеры: Leu-Arg-Lys-Gln-Nle-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr- a.

Leu-Asp-Ser-Val-Leu-Thr-NH₂ [Ac-(SEQ ID NO:20)-NH₂] Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo (8 _____ 12) b.

[Ac-(SEQ ID N0:20)-NH₂] Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo (Asp⁸_____ Lys¹²) c.

[Ac-(SEQ ID N0:20)-NH₂] Вышеуказанные три структуры (a-c) и сопровождающее их обозначение SEQ ID NO: а также нижеуказанная последовательность показывает один и тот же пептид с последовательностью аминокислот, соответствующей нативному человеческому VIP, в котором ацетильная группа замещает водород в N- положении вводимой аминокислоты; лизин замещает аргинин в положении 12, норлейцин замещает метионин в положении 17, валин замещает изолейцин в положении 26 и треонин замещает аспарагин в положении 28. Кроме того, между амидной связью карбоксильной группы в положении 8 боковой цепи аспарагиновой кислоты и аминогруппой в положении 12 боковой цепи лизина образуется цикл. Вышеуказанные обозначения пептидной структуры считают эквивалентными и взаимозаменяемыми.

Как указано выше, обозначение "R_n" для аминокислоты в положении одной из вышепредставленных структур и обозначение "Xaa" для аминокислоты в положении соответствующей последовательности, представленной ниже, являются эквивалентными и взаимозаменяемыми в тех случаях, когда Xaa представляет собой вещество, выбираемое из двух или нескольких аминокислот.

В соответствии с настоящим изобретением циклические пептиды имеют следующие конфигурации, если не оговорено иное, (см.табл.2).

В соответствии с изобретением рассматриваемые вещества включают в себя пептиды, имеющие следующую последовательность аминокислот: Ac-[Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸]-VIP cyclo _(Asp8_{_____ Lys}12₎ [Ac-(SEQ ID N0:20)-NH₂] Ac-[Glu⁸, Lys¹², Nle¹⁷, Val²⁶, Thr²⁸] -VIP cyclo _(Glu8_{_____ Lys}12₎ [Ac-(SEQ ID N0:21)-NH₂] Ac-[Asn⁸, Asp⁹, Lys¹²