Циклические пептиды или их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтическая композиция

Циклические пептиды или их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтическая композиция

Реферат

 

Назначение: в медицине в качестве соединений, обладающих противотромбозной активностью. Сущность изобретения - циклические пептиды общей формулы I, приведенной в тексте описания, или их фармацевтически приемлемые соли, где R₁ - водород, (C₁-C₄) алкил, фенил, бензил; R₂ - водород, низший алкил; R₁₀ - водород, галоген; n=1, n'=0; j=D-Ala, D-Val, D-Ile, D-Leu, D-Nle, D-фенилGly, D-Phe, D-Lys, D-Orn, D-Met, D-Pro, -Ala, D-Tyr, D-Ser, NMeGly, D-циклогексил Gly, D-циклогексилметилGly, D-норвалин, D - 2 - аминомасляная кислота, D-2-аминопентановая кислота Gly, N -р-азидобензоил-D-Lys, N -р-бензоилбензоил-D-Lys, N р-ацетобензоил-D-Lys, N -дансил-D-Lys, N t-бутоксикарбонил глицил-D-Lys, N -глицил-D-Lys, N -p-бензоилбензоилглицил-D-Lys, N -р-фенилбензоил-D-Lys, N -m-бензоилбензоил-D-Lys или N -o-бензоилбензоил-D-Lys; K = NMeArg , N, N -диме-N-гуанидинил Orn, N MeLys или N,N -диMeLys, L=Gly; M=Asp, MeAsp или NMeAsp и фармацевтическая композиция, обладающая способностью ингибировать действие тромбоцитов, содержащая в качестве активного начала эффективное количество циклического пептида формулы I. 2 с. и 6 з.п. ф-лы, 8 табл.

Настоящее изобретение относится к новым циклическим пептидам, содержащим аминометилбензойную кислоту и используемым в качестве антагонистов тромбоцитарного гликопротеинового комплекса IIb/IIIa и к лекарственным композициям, содержащим эти циклические пептиды.

Активация тромбоцитов и, как результат, их агрегация и секреция ими факторов связаны с различными патофизиологическими состояниями, включая сердечно-сосудистые и церебрососудистые тромбоэмболические осложнения, например тромбоэмболические осложнения, связанные с неустойчивой стенокардией, инфарктом миокарда, преходящим нарушением мозгового кровообращения, параличом, атеросклерозом и диабетом. Роль тромбоцитов в этих процессах определяется их способностью образовывать агрегаты или тромбы, особенно на стенках артерий после повреждений.

Известно, что тромбоциты играют важную роль в обеспечении гемостаза и в патогенезе артериального тромбоза. Было показано, что активация тромбоцитов усиливается при коронарном тромболизе, что может привести к задержанной реперфузии и реокклюзии. Клинические исследования с использованием аспирина, тиклопидина и моноклонального антитела на тромбоцитарный гликопротеин IIb/IIIa позволили получить биохимические доказательства того, что тромбоциты играют активную роль при неустойчивой стенокардии, на ранней стадии инфаркта миокарда, при преходящем нарушении мозгового кровообращения, церебральной ишемии и параличе.

Тромбоциты активируются большим количеством разнообразных веществ, обладающих сродством к рецепторам, что приводит к изменению формы тромбоцитов, секреции гранулярных компонентов и агрегации. Агрегация тромбоцитов способствует образованию сгустка благодаря сосредоточению активированных факторов свертывающей системы крови в одном месте. Было идентифицировано несколько эндогенных веществ, обладающих сродством к рецепторам, включая аденозиндифосфат (АДФ), серотонин, арахидоновую кислоту, тромбин и коллаген. Поскольку в процессы активации и агрегации тромбоцитов вовлечены несколько эндогенных веществ, обладающих сродством к рецепторам, ингибитор, который эффективен в отношении всех этих веществ, должен представлять собой более действенный противотромбоцитный агент, чем известные в настоящее время противотромбоцитные лекарства, каждое из которых является специфическим только для определенного вещества, обладающего сродством к рецепторам.

Современные противотромбоцитные лекарства эффективны только в отношении какого-то одного типа таких веществ; примеры включают аспирин, противодействующий арахидоновый кислоте; тиклопидин, противодействующий АДФ; ингибиторы тромбоксана A₂-синтетазы или рецепторные антагонисты, противодействующие тромбоксану A₂; и гирудин, противодействующий тромбину.

Недавно был обнаружен общий для всех известных веществ, обладающих сродством к рецепторам, механизм действия, в котором ключевую роль играет тромбоцитарный гликопротеиновый комплекс IIb/IIIa (GPIIb/IIIa), который является мембранным белком, опосредующим агрегацию тромбоцитов. Один из последних обзоров исследований GPIIb/IIIa был сделан Phillips et al. (1991) Cell 65: 359-362. Создание антагониста для GPIIb/IIIa представляет собой новый, многообещающий подход к проблеме противотромбоцитной терапии. Последние исследования, проведенные на людях с применением моноклонального антитела на GPIIb/IIIa показывают, что антагонист GPIIb/IIIa должен являться эффективным противотромботическим агентом.

В настоящее время существует потребность в специфическом для GPIIb/IIIa противотромбоцитном агенте, способном ингибировать активацию и агрегацию тромбоцитов в ответ на воздействие любого вещества, обладающего сродством к рецепторам. Такой агент должен являться более эффективным противотромбоцитным терапевтическим средством, чем известные в настоящее время ингибиторы тромбоцитов, которые специфичны только в отношении какого -либо одного вещества, обладающего сродством к рецепторам.

GPIIb/IIIa не связывает растворимые белки на неактивированных тромбоцитах, но известно, что в случае активированных тромбоцитов GPIIb/IIIa связывает четыре растворимых адгезивных белка, а именно: фибриноген, фактор фон Виллебранда, фибронектин и витронектин. Связывание фибриногена и фактора фон Виллебранда с GPIIb/IIIa вызывает агрегацию тромбоцитов. Связывание фибриногена частично опосредуется опознавательной последовательностью Arg-Gly-Asp (RGD), которая является общей для адгезивных белков, связываемых GPIIb/IIIa.

Было описано несколько RGD -содержащих пептидов и родственных им соединений, которые блокируют связывание фибриногена и предотвращают образование тромбов. См. например, Cadroy et al. (1989). J. Clin. Invest. 84: 939- 944; Klein et al. патент США 4952562, опубл. 8/28/90; Европейскую патентную заявку ЕР 0319506 А; Европейскую патентную заявку ЕР 0422938 А1; Европейскую патентную заявку ЕР 0422937 А1; Европейскую патентную заявку ЕР 0341915 А2; РСТ патентную заявку WO 89/07609; РСТ патентную заявку WO 90/02751; РСТ патентную заявку WO 91/04247; и Европейскую патентную заявку ЕР 0343085 А1.

В настоящем изобретении нами использованы сдерживающие жесткую конформацию аминокислоты (изомеры аминометилбензойной кислоты) в качестве шаблонов для циклизации пептидов таким образом, чтобы они обладали высоким сродством и селективностью в отношении GPIIb/IIIa.

Подробное описание изобретения Настоящее изобретение относится к циклическим пептидам формулы (I): или их фармацевтически приемлемым солям, где R¹ представляет H, (C₁-C₄)алкил, фенил, бензил; R² представляет H или низш.алкил; R¹⁰ представляет H, галоген; n 1; n'-0; J представляет D-Ala, D-Val, D-Ile, D-Leu, D-Nle, D-фенилGly, D-Phe, D-Lys, D-Orn, D-Met, D-Pro, -Ala, D-Tyr, D-Ser, NMeGly, D-циклогексилGly, D-циклогексилметилGly, D-норвалин, D-2-аминомасляную кислоту, D-2-аминопентановую кислоту Gly, N^e-р-азидобензоил-D-Lys, N-p-бензоилбензоил-D-Lys, N-p-ацетобензоил-D-Lys, N-дансил-D-Lys, N-t-бутоксикарбонилглицил-D-Lys, N-глицил-D-Lys, N-p- бензоилбензоилглицил-D-Lys, N-p-фенилбензоил-D-Lys, N-m-бензоилбензоил-D-Lys или N-o-бензоилбензоил-D-Lys; K представляет NMeArg, N, N -ди-Me N гуанидинилOrn, N MeLys или N, N -диMeLys; L представляет Gly; M выбирается из Asp, -MeAsp или NMeAsp.

Предпочтительными соединениями настоящего изобретения являются: Соединение формулы (I), где: R¹ представляет H, (C₁-C₄)алкил, фенил, бензил; R² представляет H или метил; R¹⁰ представляет H, галоген; J представляет D-Ala, D-Val, D-Ile, D-Leu, D-Nle, D-фенилGly, D-Phe, D-Lys, D-Orn, D-Met, D-Pro, b -Ala, D-Tyr, D-Ser, NMeGly, D-циклогексилGly, D-циклогексилметилGly, D-норвалин, D-2-аминомасляную кислоту, D-2-аминопентановую кислотуGly, N^e-р-азидобензоил-D-Lys, N-p-бензоилбензоил-D-Lys, N-p-ацетобензоил-D-Lys, N-дансил-D-Lys, N-t-бутоксикарбонилглицил-D-Lys, N-глицил-D-Lys, N-p- бензоилбензоилглицил-D-Lys, N-p-фенилбензоил-D-Lys, N-m- бензоилбензоил-D-Lys или N-o-бензоилбензоил-D-Lys; K представляет NMeArg, N, N - ди Me-N -гуанидинилOrn, MeLys или N^e, N -диMeLys; L представляет Gly; M выбирается из Asp, -MeAsp или NMeAsp.

Соединение формулы (I), где: R¹ представляет H, (C₁-C₄)алкил, фенил, бензил; R² представляет H или метил; R¹⁰ представляет H, галоген; J представляет D-Ala, D-Val, D-Ile, D-Leu, D-Nle, D-фенилGly, D-Phe, D-Lys, D-Orn, D-Met, D-Pro, b -Ala, D-Tyr, D-Ser, NMeGly, D-циклогексилGly, D-циклогексилметилGly, D-норвалин, D-2-аминомасляную кислоту, N^e-p-азидобензоил-D-Lys, N-p-бензоилбензоил-D-Lys, N- p-ацетобензоил-D-Lys, N-дансил-D-Lys, N-t-бутоксикарбонилглицил- D-Lys, N-глицил-D-Lys, N-p-бензоилбензоилглицил-D-Lys, N-p-фенилбензоил-D-Lys, N-m-бензоилбензиол-D-Lys или N-о-бензоилбензоил-D-Lys; K представляет NMeArg; L представляет Gly; а M выбирается из Asp, b -MeAsp или NMeAsp.

Соединение формулы (I), где: R¹ и R² независимо выбираются из H или метила; R¹⁰ представляет H; J выбирается из D-Val, D-2-аминомасляной кислоты, D-Leu, D-Ala, D-Pro, D-Ser, D-Lys, b -Ala, NMeGly, D-Nle, D-фенилGly, D-Ile, D-Phe, D-Tyr; К представляет a NMeArg; L представляет Gly; M выбирается из Asp, b -MeAsp или NMeAsp.

А также циклические пептиды, которые выбираются из группы соединений у которых R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-2-аминомасляную кислоту; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Leu; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Ala; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Pro; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Lys; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ представляет метил (изомер 1), R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ представляет метил (изомер 2), R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ представляет фенил (изомер 1), R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J D-Met; K NMeArg; L Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J D-2- аминомасляную кислоту; K N^d, N^a -ди Me-N^d гуанидинилOrn; L - Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J D-2- аминомасляную кислоту; K N N ди Me Lys; L - Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-p-азидобензоил-D-Lys; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-п-бензоилбензоил-D-Lys; K NMeArg; L Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-триптофанил-D-Lys; K NMeArg; L Gly; M - Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-o-бензилбензоил-D-Lys; K NMeArg; L Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-р-ацетилбензоил-D-Lys; K NMeArg; L Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-дансил-D-Lys; K NMeArg; L Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-глицил-D-Lys; K NMeArg; L Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-р-бензоилбензоилглицил-D-Lys; K NMeArg; L Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-p-фенилбензоил-D-Lys; K NMeArg; L Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-m-бензоилбензоил-D-Lys; K NMeArg; L - Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-o-бензоилбензоил-D-Lys; K NMeArg; L - Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Nle; K NMeArg; L Gly; M Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-фенилGly; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Phe; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Ile; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ и R² представляют H; R¹⁰ представляет 4-Cl; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ и R² представляют H; R¹⁰ представляет 4-I; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Cly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ и R² представляют H; R¹⁰ представляет 4-I; J представляет D-2-аминомасляную кислоту; K представляет NMeArg; L I представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ и R² представляют H; R¹⁰ представляет 4-Me; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ и R² представляют H; R¹⁰ представляет 6-Cl; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ и R² представляют H; R¹⁰ представляет 6-метокси; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ и R² представляют H; R¹⁰ представляет 6-Me; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ и R² представляют H; R¹⁰ представляет 4-Cl; J представляет D-2-аминомасляную кислоту; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ и R² представляют H; R¹⁰ представляет 4-I; J представляет D-2-аминомасляную кислоту; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ и R² представляют H; R¹⁰ представляет 4-Me; J представляет D-2-аминомасляную кислоту; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Tyr; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹ и R¹⁰ представляют H; R² представляет CH₃; J представляет D-Val; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-циклогексилGly; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет N-t-бутоксикарбонилглицил-D-Lys; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp; соединения формулы (I), где R¹, R² и R¹⁰ представляют H; J представляет D-Ser; K представляет NMeArg; L представляет Gly; M представляет Asp.

Циклические пептиды формулы (I), где R¹ представляет H, (С₁-С₄)алкил, фенил; R² представляет H или метил; R¹⁰ представляет H, галоген; J представляет D-Ala, D-Val, D-Ile, D-Leu, D-Nle, D-фенилGly, D-Phe, D-Lys, D-Orn, D-Met, D-Pro, -Ala, D-Tyr, D-Ser, NMeGly, D-циклогексилGly, D-циклогексилметилGly, D-норвалин, D-2-аминомасляную кислоту, D-2-аминопентановую кислотуGly, N^e, N -p-азидобензоил-D-Lys; K представляет N - ди Me-N -гуанидинилOrn, N-диMeLys; L представляет Gly; а M выбирается из Asp, -MeAsp или NMeAsp; И соединение, где J означает D-Ala, D-Val, D-Ile, D-Leu, D-Pro, D-Ser или D-Lys.

В настоящем изобретении было обнаружено, что вышеприведенные соединения могут быть использованы как ингибиторы гликопротеина IIb/IIIa (GPIIb/IIIa). Как уже говорилось выше, GPIIb/IIIa является медиатором процесса активации и агрегации тромбоцитов.

Соединения согласно настоящему изобретению ингибируют активацию и агрегацию тромбоцитов, вызываемую любыми известными эндогенными веществами, обладающими сродством к рецепторам тромбоцитов.

Настоящее изобретение обеспечивает также способы терапевтического лечения болезней, связанных с активацией и агрегацией тромбоцитов, включая сердечно -сосудистые и церебрососудистые тромбоэмболические осложнения, например тромбоэмболические осложнения, связанные с неустойчивой стенокардией, инфарктом миокарда, преходящим нарушением мозгового кровообращения, параличом, атеросклерозом и диабетом, путем введения реципиенту, нуждающемуся в таком лечении, фармацевтически эффективного количества соединений вышеприведенной формулы (I).

Известно, что в метастатических опухолевых клетках уровень экспрессии GPIIb/IIIa является повышенным. Соединения согласно настоящему изобретению могут также использоваться для лечения метастатического рака.

Описанные здесь соединения могут иметь асимметрические центры. Если не оговорено обратное, то настоящее изобретение охватывает все хиральные, диастереомерные и рацемические формы. Известно, что существуют два разных изомера (цис и транс) относительно пептидной связи; оба этих изомера могут иметь место в случае описанных соединений, и все такие стабильные изомеры также включаются в объем настоящего изобретения. Если особо не оговорено обратное, то используется L-изомер аминокислоты. D- и L-изомеры конкретной аминокислоты обозначаются в данном описании с использованием стандартного трехбуквенного сокращения, принятого для этой аминокислоты, например, d-Leu, D-Leu, l-Leu или L-Leu.

Если какой-либо переменный, то есть могущий принимать разные значения, символ (например, R¹-R⁸, m, n, p, Q, W, X, Y, Z и т.д.) встречается в каком-либо фрагменте или в какой-либо формуле больше одного раза, то его значение в каждой из занимаемых им позиций не зависит от его значений в любой другой из занимаемых им позиций. Сочетания заместителей и/или переменных символов считаются допустимыми только в тех случаях, когда такие сочетания приводят к устойчивому соединению.

В контексте настоящего описания термин "алкильный" ("алкильная") охватывает насыщенные алифатические углеводородные группы как с прямой, так и с разветвленной цепью, имеющие указанное количество атомов углерода; термин "алкокси" охватывает алкильные группы с указанным числом атомов углерода, соединенные через мастиковый атом кислорода; термин "циклоалкильный" ("циклоалкильная") охватывает насыщенные циклические группы, такие как циклопропильная, циклобутильная, циклопентильная, циклогептильная и циклооктильная. Термин "алкенильный" ("алкенильная") охватывает углеводородные цепи как разветвленного, так и неразветвленного строения, содержащие одну или несколько двойных углерод-углеродных связей, которые могут занимать любое устойчивое положение вдоль цепи, такие как этенильная, пропенильная и аналогичные группы; термин "алкинильный" ("алкинильная") охватывает углеводородные цепи как разветвленного, так и неразветвленного строения, содержащие одну или несколько тройных углерод- углеродных связей, которые могут занимать любое устойчивое положение вдоль цепи, такие как этинильная, пропинильная и аналогичные группы. Термин "галоген" в контексте настоящего описания относится к атомам фтора, хлора, брома и йода; термин "контерион" используется для обозначения небольшой отрицательно заряженной частицы, например, хлорид, бромид, гидроксил, ацетат, сульфат и аналогичных.

Под "устойчивым соединением" или "устойчивой структурой" в настоящем описании подразумевается соединение, достаточно прочное для того, чтобы оно могло быть выделено с требуемой степенью чистоты из реакционной смеси, и превращено в эффективный терапевтический агент.

Термин "фармацевтически приемлемые соли и пролекарства" относится к производным раскрываемых соединений, которые получены переводом этих соединений в кислые или основные соли, или модификацией функциональных групп, имеющихся в этих соединениях таким образом, чтобы эти модификации при обычных процедурах или in vivo превращались в родительские соединения. Примеры включают, но не ограничиваются, следующими вариантами: соли основных остатков органических или неорганических кислот, таких как амины, соли кислых остатков щелочных или органических кислот, таких как карбоновые кислоты; сложные эфиры карбоксилатов; ацетатные, формиатные и бензоатные производные спиртов и аминов; и аналогичные.

Фармацевтически приемлемые соли соединений настоящего изобретения могут быть получены реакцией этих соединений в виде свободных кислот или оснований со стехиометрическими количествами соответствующих оснований или кислот в воде или в органическом растворителе, или в их смеси; как правило, предпочтительными являются среды, не содержащие воды, такие как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Перечни подходящих солей можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed. Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p.1418.

Термин "аминокислота" в контексте настоящего описания означает органическое соединение, содержащее основную аминогруппу, и кислую карбоксильную группу. Этот термин охватывает также модифицированные и необычные аминокислоты.

Термин "аминокислотный остаток" в рамках настоящего описания означает ту часть аминокислоты (термин определен выше), которая присутствует в пептиде или в псевдопептиде. Термин "пептид" в контексте настоящего описания означает линейное соединение, состоящее из двух или нескольких аминокислот (определение термина см. Выше), связанных друг с другом пептидными или псевдопептидными связями.

Соединения настоящего изобретения могут быть получены рядом способов, хорошо известных специалистам в области органического синтеза. Предпочтительные способы включают описанные ниже, но не ограничиваются ими.

В описании использованы следующие сокращения: D-Abu D-2-аминомасляная кислота b -Ala или bAla 3-аминопропионовая кислота Boc t-бутоксикарбонил Boc-Mamb t-бутоксикарбонил-З-аминометилбензойная кислота Boc-ON 2-(трет-бутоксикарбонилоксилимино)-2-фенилацетонитрил DCC дициклогексилкарбодиимид DIEA диизопропилэтиламин ОМАР 4-диметиламинопиридин HBTU 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуронийгексафторфосфат NMeArg или MeArg a -N-метиларгинин NMeGly или MeGly N-метилглицин NMM N-метилморфолин OcHex O-циклогексил OBzl О-бензил Tos тозил В описании использованы следующие стандартные трехбуквенные сокращения названий аминокислот: Ala аланин Arg аргинин Asn аспарагин Asp аспарагиновая кислота Cys цистеин Gln глютамин Glu глютаминовая кислота Gly глицин His гистидин Ile изолейцин Leu лейцин Lys лизин Met метионин Phe фенилаланин Pro пролин Ser серин Thr треонин Trp триптофан Tyr тирозин Val валин.

Синтез пептидов Соединения настоящего изобретения могут быть синтезированы стандартными синтетическими способами, известными специалистам в данной области техники. Как правило, наращивание пептидной цепи осуществляют, снимая защиту с a -аминогруппы С-концевого остатка и присоединяя следующую, соответствующим образом защищенную, аминокислоту пептидной связью, используя описанные в литературе методы. Эти операции снятия защиты (депротектирования) и присоединения повторяют до тех пор, пока не получат требуемую последовательность. Присоединение может быть осуществлено или постадийным добавлением составляющих последовательность аминокислот, или конденсацией фрагментов (двух или нескольких аминокислот), или сочетанием обоих методов, или твердофазным пептидным синтезом согласно способу, впервые описанному Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2154 (1963).

Соединения настоящего изобретения можно также синтезировать, используя автоматическое оборудование для синтеза пептидов, описанное Stewart and Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", 2nd ed. Pierce Chemical Co. Rockford, IL (1984); Gross, Meienhofer, Udenfriend, Eds. "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", vol. l, 2, 3, 5 and 9, Academic Press, New York, (1980-1987); Bodanszky, "Peptide Chemistry: A Practical Textbook", Springer- Verlag, New York (1988); и Bodanszky et al. "The Practice of Peptide Synthesis" Springer-Verlag, New York (1984).

Соединение двух аминокислотных производных, аминокислоты и пептида, двух пептидных фрагментов или циклизация пептида могут быть осуществлены с использованием стандартных методик сдваивания, таких как азидный метод, метод со смешанным ангидридом карболовой кислоты (изобутилхлороформиатный), карбодиимидный (дициклогексилкарбодиимидный, диизопропилкарбодиимидный или водорастворимый карбодиимидный) метод, метод с использованием активного сложного эфира (п-нитрофенильного эфира, эфира N-гидроксисукцинимида), метод с использованием реагента K Вудворда, карбонилдиимидазольный метод, метод с использованием фосфорных реагентов, например, BOP-Cl, или окислительно-восстановительный метод. Некоторые из этих методов (особенно карбодиимидный) могут быть улучшены добавлением 1- гидроксибензотриазола. Эти реакции сдваивания можно проводить или в растворе (в жидкой фазе), или в твердой фазе.

Во избежание образования нежелательных связей, во время реакций сдваивания функциональные группы составляющих аминокислот должны быть защищены. Защитные группы, которые могут быть использованы, перечислены в следующих источниках: Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley Sons, New York (1981) и "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", vol.3, Academic Press, New York (1981).

a -карбоксильную группу С концевого остатка обычно защищают, получая сложноэфирную группу, которая может быть гидролизована до карболовой кислоты. Эти защитные группы включают: 1) алкиловые эфиры, такие как метиловый и трет-бутиловый, 2) ариловые эфиры, такие как бензиловый и замещенный бензиловый, или 3) эфиры, которые могут быть расщеплены щелочным гидролизом в мягких условиях или восстановлением в мягких условиях, такие как трихлорэтиловый или фенилациловый эфиры. В случае синтеза в твердой фазе С-концевую аминокислоту присоединяют к нерастворимому носителю (обычно к полистиролу). Эти нерастворимые носители содержат группу, реагирующую с карбоксильной группой с образованием связи, которая устойчива в условиях реакции наращивания пептидной цепи, но относительно легко расщепляется в дальнейшем. Примерами являются: оксимная смола (DeGrado and Kaiser (1980) J. Org. Chem. 45, 1295-1300), хлор- или бромметильная смола, гидроксиметильная смола и аминометильная смола. Многие из этих смол производятся в промышленном масштабе, причем в такой форме, что уже содержат требуемую С-концевую аминокислоту.

В каждой аминокислоте a -аминогруппа должна быть защищена. Для этого может быть использована любая из известных в данной области техники защитных групп. Примерами являются: 1) группы ацильного типа, такие как формильная, трифторацетильная, фталильная и п-толуолсульфонильная; 2) ароматические карбаматные группы, такие как бензилоксикарбонильная (Cbz) и замещенные бензилоксикарбонильные, 1-(п-бифенил)-1-метилэтоксикарбонильная и 9-фторметилоксикарбонильная (Fmoc); 3) алифатические карбаматные группы, такие как трет. -бутилоксикарбонильная (Boc), этоксикарбонильная, диизопропилметоксикарбонильная и аллилокси- карбонильная; 4) циклоалкилкарбаматные группы, такие как циклопентилоксикарбонильная и адамантилоксикарбонильная; 5) алкильные группы, такие как трифенилметильная и бензильная; 6) триалкилсилильные группы, такие как триметилсилильная; и 7) тиолосодержащие группы, такие как фенилтиокарбонильная и дитиасукциноильная. Предпочтительными защитными группами для a -аминогрупп являются Boc или Fmoc. Промышленностью производится множество производных аминокислот, надлежащим образом защищенных для проведения пептидного синтеза.

Защитную группу удаляют из a -аминогруппы перед присоединением следующей аминокислоты. При использовании группы Boc удаление осуществляют или с помощью трифторуксусной кислоты, взятой в чистом виде или в виде раствора в дихлорметане, или с помощью раствора HCl в диоксане. Полученную аммонийную соль затем нейтрализуют щелочными растворами, такими как водные буферные растворы или третичными аминами в дихлорметане, или диметилформамиде, перед сдваиванием или in situ. При использовании группы Fmoc применяют пиперидин или замещенные пиперидины в диметилформамиде, но могут быть использованы также любые вторичные амины или водные растворы оснований. Депротектирование проводят при температуре от 0^oC до комнатной.

Любые аминокислоты, содержащие функциональные группы в боковой цепи, при получении пептидов должны быть защищены с помощью любой из вышеуказанных групп. Специалисту в данной области техники понятно, что выбор и использование соответствующих защитных групп для этих функциональностей в боковых цепях зависит от аминокислоты и от наличия в пептиде других защитных групп. Важным требованием при выборе таких защитных групп является то, что они не должны отщепляться при депротектировании и сдваивании a -аминогруппы.

Например, в случае выбора Boc для защиты a -аминогруппы, подходящими являются следующие защитные группы: п-толуолсульфонильные (тозильные) остатки и нитрогруппа для аргинина; бензилоксикарбонильная, замещенные бензилоксикарбонильные и тозильная группы для лизина; сложные бензиловый или алкиловые эфиры, такие как циклопентиловый, для глютаминовой и аспарагиновой кислот; простые бензиловые эфиры для серина и треонина; простые бензиловые эфиры, замещенные простые бензиловые эфиры или 2-бромбензилоксикарбонильная группа для тирозина; п-метилбензильная, п-метоксибензильная, ацетамидометильная, бензильная или трет. бутилсульфонильная группы для цистеина; и, наконец, индол в триптофане может быть оставлен незащищенным, или защищен формильной группой.

При выборе Fmoc для защиты a -аминогруппы обычно подходящими являются защитные группы на основе трет.-бутила. Например, Boc может быть использован для лизина, простой трет.-бутиловый эфир для серина, треонина и тирозина, и сложный трет.-бутиловый эфир для глютаминовой и аспарагиновой кислот.

По окончании наращивания и циклизации пептида все защитные группы удаляют. При жидкофазном синтезе способ удаления определяется тем, какие именно группы были выбраны в качестве защитных. Эти способы хорошо известны специалистам в данной области техники.

При твердофазном синтезе пептид должен быть удален со смолы без одновременного удаления защитных групп с тех функциональных групп, которые в дальнейшем могли бы мешать процессу циклизации. Так, если пептид намереваются циклизовать в растворе, то условия удаления защиты должны быть выбраны таким образом, чтобы получить свободную a -карбоксильную группу и свободную a -аминогруппу без одновременного удаления остальных защитных групп. С другой стороны, пептид может быть удален с поверхности смолы гидразинолизисом, и затем циклизован азидным способом. Другой очень удобный способ включает в себя синтез пентодов на оксимной смоле с последующим внутримолекулярным нуклеофильным вытеснением со смолы, что приводит к получению циклического пептида (Osapay, Profit and Taylor (1990), Tetrahedron Letters 43, 6121-6124). При использовании оксимной смолы, как правило, используется схема защиты на основе Boc. Далее, предпочтительный способ удаления защитных групп с боковых цепей обычно включает в себя обработку безводным HF, содержащим такие добавки, как диметилсульфид, анизол, тиоанизол или п-крезол, при 0^oC. Удаление защитных групп из пептида можно также осуществить с помощью кислотных реагентов, например, смесей трифторметансульфоновой и трифторуксусной кислот.

Использованные в настоящем изобретении необычные аминокислоты можно синтезировать стандартными методами, которые хорошо известны специалистам в данной области техники ("The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", vol.5, pp.342-349, Academic Press, New York (1981)). N-алкиламинокислоты можно получить ранее описанными методами (Cheung е1 а1. (1977) Can. J. Chem. 55, 906; Preidinger et al. (1982) J. Org. Chem. 48, 77).

Соединения настоящего изобретения можно получить способами, которые подробно описаны ниже.

Типичные