Фармацевтический препарат антиалкогольного и ноотропного действия

Фармацевтический препарат антиалкогольного и ноотропного действия

Реферат

 

Изобретение относится к области медицины, касается нового фармацевтического препарата, обладающего одновременно антиалкогольным и ноотропным действием. Препарат не токсичен и не вызывает побочных действий. Он представляет собой фармацевтическую композицию для сублингвального применения, содержащую в качестве активного начала аминокислоту L-треонин или ее фармацевтически приемлемую соль в количестве 0,1-0,2 г на дозу и витамин В₆ в количестве 0,005-0,010 г на дозу. Препарат может применяться для уменьшения и ликвидации патологического влечения к алкоголю и лечения алкогольного абстинентного синдрома, а также для повышения умственной работоспособности, в частности, внимания. Препарат используют сублингвально в дозе 1,5-4 мг/кг массы 2-3 раза в день для курсовых лечений. 5 з.п. ф-лы, 4 ил., 16 табл.

Изобретение относится к области медицины, а точнее касается нового фармацевтического препарата антиалкогольного и ноотропного действия.

Проблема поиска и создания лекарственных препаратов для лечения алкоголизма остается актуальной, несмотря на активные усилия исследователей многих стран мира.

В настоящее время снижение потребления алкоголя, относительно легко достигается препаратами, в той или иной степени обладающими алкоголеподобным эффектом (транквилизаторами, барбитуратами, ГОМК, антигистаминными средствами с транквилизирующим действием). Известно, однако, что такого рода терапия может приводить к формированию токсикоманий, в значительной мере осложняющих течение алкоголизма, а также снижающих умственную работоспособность. Использование при лечение алкогольной болезни различных психотропных средств, сенсибилизирующих препаратов также не позволяет достигнуть желаемого эффекта и, более того, формирует резко негативное отношением к лечебным мероприятиям.

В связи с этим имеют особое значение поиск и создание новых антиалкогольных препаратов, лишенных указанных недостатков, снижающих патологическое влечение и обладающих одновременно ноотропными свойствами (повышающими внимание, улучшающими память, умственную деятельность).

Известны препараты СААВ (SAAVE^TM) и тропамин (Tropamine^TM) фирмы Matrix Technologies, Ync, (Y. of Psychoactive Drugs, vol 20(3), Yul-Sep. 1988, p. 333). СААВ представляет собой комбинацию аминокислот DL-фенилаланина, L-триптофана, L-глутамина и пиридоксаль-5-фосфата и рекомендуется как пищевое дополнение к терапии для лиц, страдающих алкоголизмом и наркоманией (героин, опиаты и др.). Тропамин имеет расширенный по сравнению с СААВ состав по дополнительным веществам, а по аминокислотам в его состав входят: DL-фенилаланин, L-тирозин, L-триптофан, L-глутамин, а также пиридоксаль-5-фосфат. Он также является пищевым дополнением к терапии для потребителей наркотиков.

Таким образом оба препарата являются пищевыми дополнениями, т.е. применяются наряду с иными терапевтическими средствами и содержат триптофан, на использование которого в лекарствах и пищевых добавках FDA в 1989 г. наложила запрет. Кроме того, препараты не обладают ноотропным действием.

Предлагаемый препарат является новым и в литературе не описан. В основе изобретения лежит задача создания нового лекарственного препарата, обладающего одновременно антиалкогольным и ноотропным действием, высокой активностью, не токсичного и не вызывающего побочных действий.

В соответствии с поставленной задачей была создана композиция, содержащая в качестве действующего вещества аминокислоту L-треонин и витамин В₆, представляющий собой группу соединений производных 2-метил-3-гидроксипиридина.

Предлагаемый препарат обладает высокоэффективным противоалкогольным и ноотропным действием и может применяться для профилактики и лечения алкоголизма (снятия патологического влечения), выявления скрытого влечения к алкоголю и для повышения умственной работоспособности (повышения внимания).

Препарат может использоваться в виде таблеток, порошка и раствора. Предпочтительно применять его в виде таблеток подъязычно, при этом одна таблетка препарата содержит 0,1-0,5 г L-треонина и 0,005-0,08 г витамина В₆. В качестве вспомогательных веществ одна таблетка содержит: 0,001-0,005 метилцеллюлозы и 0,001-0,005 магния стеариновокислого.

Действующие вещества препарата получают: L-треонин путем микробиологического или химического синтеза, витамин В₆ путем химического синтеза.

Действующими веществами предлагаемого препарата являются аминокислота L-треонин и витамин В₆.

Треонин (Tpe, Thr, T) представляет собой моноаминомонокарбоновую кислоту (-амино-b-оксимасляную кислоту), которая является незаменимой аминокислотой, входящей в состав всех белков, за исключением протаминов. Это кристаллическое вещество, растворимое в воде.

(1) CH₃CH(OH)CH(NH₂)COOH-a-амино-b-оксимасляная кислота, треонин. Витамин В₆ представляет собой группу соединений - производных 2-метил-3-гидроксипиридина.

В природе встречается 3 формы (витамера) витамина В₆: пиридоксин (пиридоксол), пиридоксаль, пиридоксамин.

Все они растворимы в воде и этаноле, плохо растворимы в других органических растворителях.

Кроме того, в группу соединений, обладающих свойствами витамина В₆, входят фосфорные эфиры витамеров, образующие каталитически активные (коферментные) формы витамина В₆: пиридоксинфосфат, пиридоксальфосфат и пиридоксаминфосфат. Эти три соединения в организме легко превращаются друг в друга. Основной коферментной формой является пиридоксальфосфат, который входит в состав активного центра ферментов азотистого обмена.

На фиг. 1 показано влияние введения in vivo животным этанола и предлагаемого препарата на янтаратзависимое дыхание в гомогенате. По оси абсцисс изображено время нахождения митохондрий в ячейке (с), по оси ординат - скорость дыхания (НГ.атом О/мг.с). АДФ аденозиндифосфорная кислота; ДНФ - динитрофенол.

На фиг. 2 влияние введения in vivo животным этанола и предлагаемого препарата на окисление b-оксибутирата в гомогенате. Условные обозначения - как на фиг. 1.

На фиг. 3 сроки исчезновения симптомов при ААС в опытной и контрольной группах. ААС алкогольный абстинентный синдром; О опыт; К контроль.

На фиг. 4 динамика усредненных показателей абсолютной мощности по частотным диапазонам ЭЭГ в основной и контрольной группах на этапах испытания. По оси абсцисс время, по оси ординат абсолютная мощность ЭЭГ; D,,,₁,₂ - частотные диапазоны со следующими значениями, Гц: 0,5-4,0 (); 4,0-8,0 (q); 8,0-13,0 (a); 13,0-20,0 (b₁); 20,0-32,0 (₂).

Предлагаемый препарат изучался в эксперименте на животных и в клинике на людях.

В доклинических исследованиях на животных изучалось антиалкогольное действие препарата, его действие на центральную нервную систему (ЦНС) и влияние на окислительно-восстановительные и биоэнергетические процессы в тканях.

Исследование специфических свойств предлагаемого препарата как антиалкогольного средства проводилось на крысах, при этом изучалось влияние препарата на: продолжительность бокового положения, вызываемого у животных наркотической дозой этанола; выживаемость крыс при введении этанола в дозе 6 г/кг массы тела; способность замедлять у крыс формирование влечения к алкоголю; потребление алкоголя у крыс "хронических алкоголиков"; алкогольную мотивацию в период лишения алкоголя.

Исследование влияния препарата на продолжительность бокового положения, вызываемого наркотической дозой этанола, проводилось на беспородных крысах-самцах (20 животных) массой 200-250 г. Опытной и контрольной группам (по 10 животных) внутрибрюшинно (в/б) вводился 25%-ный раствор этанола в дозе 4,5 г/кг массы тела. Опытной группе через 15 мин после введения этанола в/б вводился водный раствор предлагаемого препарата из расчета 20 мг/кг массы тела, контрольной группе соответствующий объем воды.

Исследования показали, что препарат не влияет на время бокового положения животных при введении этанола в наркотической дозе (табл. 1).

Полученные результаты дают основание считать, что препарат, не обладая антитоксическими свойствами, одновременно и не потенциирует действие этанола. Последнее положение подтвердилось и при изучении влияния предлагаемого препарата на выживаемость животных при введении токсической дозы этанола.

Обычно при таких исследованиях предусмотрено введение этанола в дозе LD₅₀ (что соответствует 9,3 г/кг массы тела). Однако это требует ввести животному внутрибрюшинно объем жидкости 8-10 мл, что приводит к нарушению гемодинамики, дыхательных экскурсий. В соответствии с этим была выбрана доза этанола 6 г/кг, которая также вызывает тяжелую алкогольную интоксикацию, но несколько меньшую смертность животных. Исследования проводились на крысах-самцах массой 190-220 г, введение в/б. Схема опытов и результаты представлены в табл. 2.

Результаты опытов показывают, что в условиях резко выраженного токсического влияния этанола (время бокового положения в группах колебалось от 2,5 до 7 ч) предлагаемый препарат не обнаруживал антитоксического действия, но одновременно, в отличие от амитала(барбамила) препарат, оказывающий снотворное, а также успокаивающее и противосудорожное действие, и не потенциировал эффект алкоголя. В первых двух группах погибло близкое число животных, введение же амитала резко повысило смертность, до 80% (табл. 2).

Таким образом эта и предыдущая (табл. 1) серии исследований однозначно показали, что предлагаемый препарат не обладает антитоксическими свойствами, но, главное, позволили установить, что препарат не потенциирует действие алкоголя, т.е. он не имеет алкоголеподобного и амиталоподобного эффектов.

Исследовано влияние предлагаемого препарата на способность замедлять у крыс формирование влечения к алкоголю. Опыты проводились на крысах-самцах весом 200-220 г. Опытные (15 крыс) и контрольные (15 крыс) животные рассаживались в индивидуальные клетки в условиях свободного выбора между этанолом и водой. В течение первой недели учитывалось ежедневное потребление этанола. Через 7 дн в опытной и контрольной группах были отобраны по 10 животных (удалено по 5 крыс) с относительно близкими объемами потребления этанола в неделю. В последующие 2 нед опытным животным с помощью зонда внутрижелудочно (в/ж) вводился раствор предлагаемого препарата 2 мг/кг 2 раза в день, контрольные животные в те же сроки получали в/ж соответствующий объем воды. После двух недель введения изучаемого препарата он отменялся и в дальнейшем еще неделю, как и две предыдущие, учитывалось ежедневное потребление этанола в обеих группах Для удобства оценки данные (табл. 3) представлены в виде средних значений по группам среднесуточного потребления этанола каждым животным за соответствующий период наблюдений.

Исследования показали (табл. 3), что в контрольной группе уже в первую неделю от начала внутрижелудочного введения воды увеличилось потребление этанола всеми животными в 1,5-2 раза. Подобный характер потребления этанола сохранялся и на второй неделе. При этом 4 животных увеличили потребление алкоголя до 6-7,5 г/кг массы тела в сутки (с 1,5-2 г/кг исходно). После прекращение введения воды в контрольной группе количество выпитого этанола в сутки несколько уменьшилось, однако 4 "запивших" животных сохраняли его потребление до 5-6 г/кг массы в сутки.

В опытной группе на 1-ой неделе от начала введения исследуемого препарата в 1,5-2 раза увеличили потребление этанола 3 животных (до 5-6 г/кг в сутки). На второй неделе у этих же животных сохранялось повышенное (в сравнении с исходными показателями) потребление этанола, но составляло 3,5-4 г/кг. После отмены предлагаемого препарата указанные животные в течение недели не уменьшили количество потребляемого этанола. У 7 животных опытной группы, хотя и наблюдалось некоторое колебание потребления алкоголя по дням, но в среднем их значения мало отличались от исходных (табл. 3).

Таким образом исследованиями установлено, что предлагаемый препарат способен уменьшать потребление этанола в период формирования влечения к алкоголю. Кроме того, можно считать, что вышеприведенные данные свидетельствуют о способности предлагаемого препарата уменьшать алкогольную мотивацию в условиях стресса, поскольку описанные манипуляции с животными представляют собой достаточно резкое воздействие, моделирующие стрессорную ситуацию.

Изучалось также влияние предлагаемого препарата на потребление алкоголя у крыс "хронических алкоголиков", причем исследование проводилось в условиях приближения патологической модели к достаточно часто встречающимся в практике наркологии ситуациям.

В этих целях по 10 животных (крыс-самцов весом 150-200 г) в каждой из 2-х групп, находившихся в условиях "свободного выбора" между 15%-ным этанолом и водой, в течение 20 дн ежедневно получали в/б амитал (60 мг/кг). В дальнейшем был сделан перерыв во введении амитала на 40 дн. Животные в этот период продолжали находиться в условиях "свободного выбора". После этого самцам возобновлялось введение амитала, но в/ж и в дозе 40 мг/кг в течение 30 дн с сохранением условия "свободного выбора". После прекращения введения амитала в течение 10 дн животные резко повысили потребление алкоголя с 1,5-2 г/кг до 6-9 г/кг массы в сут. При достижении подобного эффекта крысы рассаживались в индивидуальные клетки, и в течение недели учитывалось потребление 15%-ного алкоголя. После этого опытная группа ежедневно в течение 2 нед получала предлагаемый препарат в/ж в дозе 2 мг/кг, а контрольная соответствующий объем воды. По окончании 2 нед введение препарата прекращалось и при "свободном выборе" между 15%-ным этанолом и водой учитывалось суточное потребление алкоголя (в г/кг массы) еще в течение недели. Результаты данного исследования представлены в табл. 4.

Исследования позволили установить, что в первую неделю после начала введения предлагаемого препарата опытная и контрольная группы не различались по уровню суточного потребления спирта. Однако в опытной группе в сравнении с исходными показателями значимо сократилось (различие составляло до 3 г/кг) питье спиртового раствора (табл. 4). На второй неделе воздействия предлагаемого препарата потребление этанола было почти в 2 раза ниже в опытной группе по сравнению с контрольной. Эти же различия сохранились и в течение последующих 7 дн после отмены препарата. Примечательно также, что в группе, получавшей препарат, статистически значимо происходило постепенное снижение потребления этанола, а в контрольной, напротив, оно возрастало (табл. 5). Таким образом исследование влияния предлагаемого препарата на потребление алкоголя у крыс "хронических алкоголиков" обнаружило у препарата противоалкогольное действие.

Изучалась эффективность предлагаемого препарата в период депривации на последующее "отношение" крыс-"алкоголиков" к потреблению этанола, иными словами исследовалась способность препарата ослаблять патологическую алкогольную мотивацию в период лишения алкоголя.

Исследования проводились на 2 группах (по 10 животных) крыс-самцов весом 200-250 г, потребляющих в условиях "свободного выбора" по 7-9 г/кг массы этанола в сутки. В период эксперимента животные контрольной и опытной групп находились в индивидуальных клетках. В течение первой недели учитывалось среднесуточное потребление алкоголя, в дальнейшем крысы лишались доступа к алкоголю в течение 9 дн и в этот период опытная группа получала в/ж изучаемый препарат (20 мг/кг), а контрольная соответствующий объем воды. После периода депривации крысам прекращалось введение предлагаемого препарата (опыт) и воды (контроль) и в течение 7 дн учитывалось ежесуточное потребление 15% -ного алкоголя в условиях "свободного выбора". Данные исследования представлены в табл. 5.

Данные исследования показывают (табл. 5), что в опытной группе после периода депривации (во время которого вводился предлагаемый препарат) существенно уменьшилось потребление этанола, и, следовательно, предлагаемый препарат обладает свойством ослаблять патологическое влечение к алкоголю.

Таким образом, обобщая данные по изучению противоалкогольного действия предлагаемого препарата на животных, можно сделать следующие выводы: препарат не обладает антитоксическими свойствами, не потенциирует действие алкоголя, способен замедлять формирование влечения к алкоголю и ослаблять патологическую алкогольную мотивацию.

Изучено действие предлагаемого препарата на центральную нервную систему (ЦНС). Опыты проводились на мышах весом 18-22 г и крысах-самцах весом 200-220 г. Исследовалось влияние предлагаемого препарата на: поведение животных в тесте "открытого поля"; реакции животных на раздражители; вегетативную нервную систему; температуру тела; реакции страха и агрессии в тесте "электропол".

В тестах взаимодействия изучено влияние предлагаемого препарата на эффекты гексенала, апоморфина, ареколина. Потенциальные противосудорожные свойства препарата исследованы на моделях судорожного синдрома, вызванного максимальным электрошоком и коразолом.

В опытах по изучению влияния предлагаемого препарата на спонтанную двигательную активность его однократно вводили мышам в дозах 2 и 20 мг/кг и наблюдали его слабое стимулирующее воздействие на поведение животных. При этом отмечалось усиление спонтанной двигательной активности и повышение реакций на раздражители, но эти признаки возбуждения животных не сопровождались усилением агрессивности, стереотипиями и тремором или судорогами проявлениями, характерными при воздействии сильных стимуляторов ЦНС.

В дальнейшем выяснялось влияние препарата на поведенческие реакции при его более длительном приеме. Так, при изучении влияния предлагаемого препарата на эмоционально-двигательную активность (опыты на крысах-самцах массой 200-220 г) опытная группа (10 животных) получала в/ж изучаемый препарат 2 раза в сут в дозе 20 мг/кг в течение 4 дн.

Контрольной группе (10 животных) в те же сроки в/ж вводился соответствующий объем воды.

Исследования не выявили изменений в поведении животных под действием предлагаемого препарата (табл. 6).

Дополнительно было проведено исследование влияния изучаемого препарата на эмоционально-двигательное состояние животных в тесте "электропол". В данном тесте мышей из обеих групп попарно подвергали удару током и регистрировали эмоциональный компонент реакции (писк), двигательный (прыжки) и агрессивный (драка). За 20 мин до эксперимента мышам вводили предлагаемый препарат (2 и 20 мг/кг), в контроле соответствующий объем воды.

Результаты исследований (табл. 7) показали, что изучаемый препарат несколько усиливает реакцию страха, двигательную активность (на 1,5 балла), а у отдельных животных реакцию агрессии. Вместе с тем порог страха и агрессии повышался у опытных животных, получивших предлагаемый препарат.

Известно, что отдельные препараты, обладающие возбуждающим действием, могут повышать температуру тела экспериментальных животных. Исследования в данном тесте показали, что под влиянием предлагаемого препарата температура тела несколько повышается (табл. 7).

Исследовалось противосудорожное действие применяемого препарата и его эффекты в тестах взаимодействия. Возбуждающее действие предлагаемого препарата давало основание предполагать наличие у него потенциирующего влияния при введении смертельной дозы коразола (150 мг/кг) и воздействии электрошока.

При исследовании в тесте взаимодействия с коразолом было обнаружено, что предлагаемый препарат обладает слабым, но антикоразоловым эффектом (табл. 8). При этом предлагаемый препарат увеличивал только продолжительность жизни животных в 2 с лишним раза, не меняя латентного периода коразоловых судорог (контроль 350,9 с, опыт 361,1 с) и не блокируя тонико-экстензорной фазы (ТЭЗ) судорожного припадка.

При воздействии электрошока предлагаемый препарат в дозе 20 мг/кг массы защищал животных от гибели и блокировал тонико-экстензорную фазу (табл. 8).

В тестах взаимодействия с гексаналом, апоморфином и ареколином эффектов предлагаемого препарата не выявлено.

Таким образом, в опытах на мышах с использованием специального набора тестов выявлена слабая стимулирующая и умеренная противосудорожная активность предлагаемого препарата.

Отсутствие у предлагаемого препарата вытрезвляющего и потенциирующего в отношении этанола действия, но наличие способности повышать возбудимость и одновременно при максимальном электрошоке блокировать тонико-экстензорную фазу (ТЭФ) указывало на возможность нахождения у него свойств, присущих препаратам регуляторам энергетического метаболизма.

В целях изучения влияния предлагаемого препарата на энергетический метаболизм и выяснения механизмов его действия определялась скорость дыхания и фосфорилирования в присутствии сукцината и -оксибутирата в митохондриях печени: (а) животных, длительно получавших этанол и предлагаемый препарат; (в) животных, длительно получавших этанол при воздействии предлагаемого препарата in vitro; (с) интактных животных при воздействии предлагаемого препарата in vitro.

Исследование (а) проводилось в двух группах крыс-самцов массой 300-350 г. Опытной и контрольной группам животных (по 10 крыс) в течение 6-ти мес были предоставлены условия "свободного выбора между 15%-ным этанолом и водой. После того, как к концу 3-его мес в обеих группах суточное потребление этанола достигло 8-10 г/кг, части животных (опыт) начали вводить предлагаемый препарат в дозе 20 мг/кг в/ж ежедневно 1 раз в сут в течение 3 мес. Контрольная группа животных в эти же сроки получала соответствующий объем воды. В конце эксперимента за 10 дн до забоя животным обеих групп оставлялась только одна поилка с 15% -ным этанолом. За сутки до следующей стадии эксперимента контрольная и опытная группы лишались этанола (суточная депривация) с заменой в поилке этанола на воду. Затем животные декапитировались, при вскрытии визуально оценивалось состояние всех органов. Из печени крыс готовили густые (1:1) гомогенаты и выделяли митохондрии. Дыхание митохондрий регистрировали с помощью закрытого электрода типа Кларка на полярографе LP-2А (Чехия).

Дыхание и окислительное фосфорилирование в гомогенатах и суспензии митохондрий регистрировали в стандартной среде инкубации (сахара 0,2 М, KH₂PO₄ 0,02 M, KCI 0,015 М, MgCI₂ 0,05 М).

Хронический эксперимент показал, что в опытной группе на фоне введения предлагаемого препарата животные меньше потребляли этанола (до 4-5 г/кг в сут, контроль 6-8 г/кг). Эти данные дополнительно подтвердили антиалкогольный эффект препарата при длительном его воздействии. В покое скорость дыхания митохондрий на сукцинате в опыте и контроле практически не отличались. В то же время у животных контрольной группы, получавших только этанол, было выявлено существенное снижение (в сравнении с интактными животными) дыхания на сукцинате при первой и, особенно, второй добавке АДФ аденозиндифосфорная кислота, был снижен также и уровень свободного окисления в присутствии ДНФ - 2,4-денитрофенол (фиг. 1).

В опытной группе наблюдались более высокие показатели дыхания на сукцинате при первой добавке АДФ, а при второй оно не только достигало нормальных значений, но и сопровождалось повышением скорости фосфорилирования (фиг. 1). У этих животных отмечался также и более высокий уровень окисления сукцината в присутствии ДНФ (выше, чем у интактных животных).

В отличие от янтаратзависимого дыхания изменение окисления b-оксибутирата (дыхание на НАД(никотинамидадениндинуклеотид окисленный)-зависимых субстратах) под влиянием хронической алкоголизации происходило в меньшей степени, что и наблюдалось при первой добавке АДФ (фиг. 2). Однако при второй добавке АДФ нормализация скорости окисления субстрата и повышение процессов фосфорилирования наблюдались только у животных, получивших предлагаемый препарат (фиг. 2). Такого рода результаты показывают, что интоксикация этанолом неблагоприятно сказывается и на окислении НАД-зависимых субстратов, а предлагаемый препарат и в этом случае способствует большей сохранности одной из важнейших функций митохондрий.

Таким образом полученные результаты с очевидностью показали, что под влиянием хронической алкоголизации в митохондриях нарушается дыхание на сукцинате и НАД-зависимых субстратах, и эти нарушения проявляются при функциональной нагрузке, роль которой в этом случае выполняет добавка АДФ. Введение животным предлагаемого препарата позволяет в значительной степени уменьшить или полностью предотвратить повреждающее влияние этанола на биоэнергетические процессы в митохондриях.

Проводилась специальная серия исследований in vitro (в) по изучению непосредственного влияния предлагаемого препарата на дыхание митохондрий. Для исследований использовались гомогенат или митохондрии крыс, получавших только этанол в течение 6-ти месяцев. Для контрольных исследований печень получали от интактных животных. Условия эксперимента (в) такие же, как и эксперимента (а). При полярографических исследованиях в ячейку, кроме основных субстратов, добавляли или предлагаемый препарат, или ацельдегид (АцА) в конечных концентрациях, соответственно, 100 мкМ и 60 мкМ.

В связи с тем, что исследования проводились на ткани печени, полученной от животных, подвергшихся 6-ти месячной алкоголизации, 10 дн до эксперимента использовавших в качестве жидкости только этанол и лишенных его за сутки до забоя, можно считать, что речь идет о состоянии абстиненции подопытных животных. Для купирования этого состояния идеальными лечебными препаратами являются этанол и паральдегид (тример АцА). Поэтому в инвитровых исследованиях кроме предлагаемого препарата использовалась добавка АцА.

Исследования показали, что под влиянием этанола у животных, как и в предыдущем эксперименте (а) обнаруживается снижение дыхания на сукцинате и скорость фосфорилирования как при первой, так и при второй добавке АДФ. В этом эксперименте обнаруживалось нарушение процессов дыхания и фосфорилирования и на НАД-зависимых субстратах. При добавлении АцА в большинстве случаев наблюдалось увеличение скорости дыхания на всех субстратах в присутствии АДФ. У предлагаемого препарата был выявлен аналогичный эффект. Вместе с тем, и в присутствии АцА степень увеличения скорости дыхания зависела от исходного состояния митохондрий глубины нарушений биоэнергетических процессов. В частности, при резком нарушении скорости окисления сукцината и фосфорилирования в присутствии АДФ добавление и АцА, и предлагаемого препарата сопровождалось незначительным увеличением процессов дыхания. Более того, в аналогичной концентрации у АцА проявлялось его токсическое действие. От исходного состояния митохондрий зависел и характер влияния АцА и предлагаемого препарата на процессы свободного окисления в присутствии ДНФ.

Таким образом, исследования позволили установить, что в период депривации после хронического воздействия этанола в митохондриях печени наблюдается существенное снижение скорости дыхания на сукцинате и НАД-зависимых субстратах и фосфорилирования в присутствии АДФ. В подобной ситуации отчетливо обнаруживается влияние на биоэнергетические процессы и предлагаемого препарата, и АцА, а характер их эффектов зависит от исходного состояния митохондрий (от степени нарушения процессов дыхания).

Изучалось влияние (серия с) предлагаемого препарата и АцА при их воздействии на интактные митохондрии. Из печени животных готовился гомогенат или выделялись митохондрии. Условия эксперимента такие же, как в предыдущих сериях опытов (а) и (в) по изучению влияния предлагаемого препарата на биоэнергетические процессы в тканях печени.

Данные о выявлении изучаемого препарата и АцА на биоэнергетические процессы митохондрий, получены на гомогенатах и митохондриях от интактных животных. И в этом эксперименте, как и в предыдущих, характер изменений свободного дыхания в присутствии ДНФ, скорости фосфорилирования и дыхания на сукцинате и b-оксибутирате в присутствии АДФ, предлагаемого препарата и АцА зависел от исходного состояния митохондрий.

Все эти результаты дают основание отнести предлагаемый препарат к регуляторам биоэнергетических процессов, способным как активировать, так и тормозить процессы дыхания митохондрий.

Проведенные сравнительные исследования показали, что тормозящее действие предлагаемого препарата выявляется значительно реже, существенно отличается от тормозящих эффектов седуксена и g-оксиаминомасляной кислоты (ГОМКа), которые с постоянством снижают скорость дыхания и фосфорилирования митохондрий в присутствии АДФ, сукцината и, особенно, b-оксибутирата.

Дополнительно также было показано, что добавление предлагаемого препарата к инкубационной среде предохраняет митохондрии от "старения" т.е. от разрушения и резкого падения скорости дыхания и фосфорилирования в присутствии сукцината и АДФ, наблюдающиеся через 2-3 ч после выделения митохондрий.

В общей сложности исследование влияния предлагаемого препарата на биоэнергетические процессы in vivo и in vitro выявило способность препарата оказывать коррегирующий эффект при изменении скорости дыхания и фосфорилирования в присутствии сукцината, b-оксибутирата и АДФ в митохондриях, выделенных из печени как интактных (в отношении этанола) животных, так и крыс, подвергшихся хронической алкоголизации.

Характер влияния предлагаемого препарата на дыхание митохондрий in vitrо напоминает действие низких концентраций АцА, но отличается от эффектов седуксена и ГОМКа, которые преимущественно резко тормозят скорость дыхания и фосфорилирования в присутствии АДФ и b-оксибутирата (т.е. тормозят окисление НАД-зависимых субстратов).

Таким образом, доклинические испытания предлагаемого препарата выявили у него целый ряд свойств, позволяющих отнести его к группе регуляторов метаболизма, и, в частности, к регуляторам энергетического обмена митохондрий.

Предлагаемый препарат обладает способностью уменьшать потребление этанола у крыс "хронических алкоголиков" и ослаблять у этих животных патологическое влечение к алкоголю в период депривации. Вместе с тем важно подчеркнуть, что он не потенциирует действие алкоголя, чем принципиально отличается от барбитуратов, транквилизаторов и ГОМКа. В связи с этим можно предполагать, что длительный прием предлагаемого препарата в период лишения этанола не должен сопровождаться формированием пристрастия к нему.

Важным является и тот факт, что предлагаемый препарат уменьшает "старение" митохондрий, т.е. предохраняет их от разрушения. Это его свойство может иметь исключительно важное значение для сохранения функции митохондрий мозга при тяжелых формах абстинеции, сопровождающихся явлениями психоза.

На основании полученных данных предлагаемый препарат может быть рекомендован больным, страдающим хроническим алкоголизмом, в качестве средства для купирования алкогольного абстинентного синдрома и влечения к алкоголю в период длительного его лишения.

С учетом способности препарата оказывать регулирующее влияние на биоэнергетические процессы в митохондриях и уменьшать формирование влечения к алкоголю, он может быть рекомендован при однократном приеме в качестве пробы для выявления "скрытой тяги" к алкоголю в период ремиссии.

В отношении предлагаемого препарата проводились клинические испытания. Изучено его влияние на 12 добровольцах 30-40 лет (практически здоровых людях), на 64 практически здоровых подростах 16-17 лет с различным нервно-психическим и эмоциональным статусами, с различной степенью социальной адаптированности и пр. а также на 544 больных алкоголизмом II-III стадий в возрасте от 18 до 55 лет, контрольные группы которых (113 человек) получали терапию с применением нейролептиков, антидепрессантов и транквилизаторов.

В группе добровольцев (средний возраст 37,5 лет, 9 мужчин, 3 женщины, из них 8 врачей, 2 педагога, 1 психолог, 1 журналист) исследования проводились в 2 этапа с интервалом 7 дн. Результаты исследований фиксировались в специальном протоколе с учетом изменений состояния через каждые 15 мин. Для объективной оценки использовалась доза препарата от 0,2-0,3 до 0,6-0,7 г на прием. Препарат принимался сублингвально. Наблюдение за испытуемым продолжалось 405 ч.

Анализ результатов показал, что у большинства испытуемых через 10-15 мин после приема препарата появлялось ощущение общей расслабленности, снятия напряженности, на 15-й 25-й минутах отмечалось состояние седации, комфортности, желание общения и обмена мнениями об изменениях, происшедших в их состоянии. Все испытуемые отмечали, что пропадала скованность, чувство неловкости, стеснительности. На 45-й 75-й минутах появлялось состояние свежести, желание делать какую-либо работу.

В большинстве случаев предлагаемый препарат назначался во 2-ой половине рабочего дня, когда у испытуемых начинала появляться сонливость, неприятная тяжесть в голове, ощущение общей усталости. Наблюдения показали, что указанные ощущения через 1,5-2 ч полностью исчезали, а состояние психического и физического комфорта после приема предлагаемого препарата ощущалось испытуемыми еще в течение 4,5-5 ч. Практически все пациенты отмечали в этот день глубокий сон, ощущение отдыха и удовлетворенности после пробуждения.

У четырех испытуемых через 1,5 ч после приема предлагаемого препарата усиливался аппетит. Аналогичный эффект наблюдался при проведении 2-го этапа исследований через неделю.

У трех добровольцев-женщин в течение многих лет имели место проявления астенического синдрома невыясненной этиологии с преобладанием повышенной утомляемости, постоянным чувством разбитости, снижения аппетита, головных болей, нарушений сна.

Предлагаемый препарат назначался пациенткам по 0,2 г 3 раза в день в течение 3-х недель. Все испытуемые отмечали отчетливое улучшение состояния и повышение работоспособности с концентрацией внимания.

В другой категории испытуемых (64 подростка-учащихся 16-17 лет, в т.ч. 46 юношей и 18 девушек) изучалось влияние предлагаемого препарата на самочувствие, эмоциональное состояние, психофизиологические реакции, умственную работоспособность. Для оценки нервно-психического и эмоционального статусов, степени социальной адаптированности и вегетативной стабильности использовались специальные тесты программы международных комплексных обследований подростков INTERADOL (J. Komareket all, 1989). Наряду с этим применялись: опрос и визуальные наблюдения, оценка динамики эмоционального состояния с помощью теста Люшера, исследование динамики умственной работоспособности с помощью теста на сложение 184 пар цифр (таблица Крепилина), определение динамики объема кратковременной памяти и внимания (тест Шульте), исследование пульса и артериального давления.

Все подростки получали предлагаемый препарат в дозе 0,2 г подъязычно. все оценки проводились до и через 30 мин после приема предлагаемого препарата.

Под влиянием предлагаемого препарата в 25% случаев (I группа подростки, злоупотребляющие алкоголем и испытывающие к нему тягу) отмечены выраженные сосудистые реакции (покраснение кожи лица, рук, туловища, появление умеренного потоотделения). Большинство подростков этой группы ощущали легкое головокружение, улучшение настроения с оценкой состояния "как после выпитой рюмки". Данная группа подростков характеризовалась наличием астено-невротических отклонений, хронического эмоционального стресса, средним и низким уровнем социальной адаптации.

У 34% подростков (II групп) с высоким нейротизмом, эмоциональной неустойчивостью после приема предлагаемого препарата отмечалось отчетливое улучшение настроения, появление уверенности в себе.

У 32% подростков (III группа) реакции на предлагаемый препарат не выявлено, а в 9% случаев (IV группа) предлагаемый препарат вызывал "ухудшение настроения" с чувством недовольства собой.

В IV и, особенно, в III группах преобладали подростки с устойчивым эмоциональным статусом, отсутствием аст