Производные n-ацил- -аминокислоты или их физиологически приемлемые соли, простые или сложные эфиры, амиды или гидраты и композиция ингибирующая связывание адгезивных протеинов с тромбоцитами и агрегацию тромбоцитов

Производные n-ацил- -аминокислоты или их физиологически приемлемые соли, простые или сложные эфиры, амиды или гидраты и композиция ингибирующая связывание адгезивных протеинов с тромбоцитами и агрегацию тромбоцитов

Реферат

 

Предложены производные N-ацил-альфа-аминокислоты или их физиологически приемлемые соли, простые или сложные эфиры, амиды или гидраты формулы (I) , где L - группа формулы или H₂N(CH₂)_t; R - амидиногруппа, X - CH, Y - CH или N, R' - H, alk, alkOalk, R'' - H, alk и т.д., которые можно использовать для лечения или профилактики болезней, которые вызваны связыванием адгезивных протеинов с тромбоцитами, а также агрегацией тромбоцитов и кислотно-клеточным сцеплением. Соединения I получают отщеплением защитных групп в соответствующих соединениях или переводом цианогруппы в амидиногруппу в соответствующих нитрилах. 3 с. и 12 з.п. ф-лы, 5 табл.

Изобретение относится к новым производным N-ацил--аминокислоты и фармацевтическим композициям на их основе.

Из литературы известны различные производные аминокислот. Известны [1] соединения формулы II: H₂N(NH)CNHC₆H₄ZCOOH, не содержащие амидных групп. Эти кислоты не считаются физиологически активными. Полагают, что соответствующие кислотам II амиды I, которые вместо группы -Z-COOH содержат группу -Z-COOCH₂CON(R¹,R²), действуют как ингибиторы трипсина и плазмина и таким образом могут находить применение при лечении острого геморрагического панкреатита.

В отличие от этих соединений заявленные соединения тормозят связывание других протеинов, таких как фибриноген, фибронектин, витронектин, коллаген, ламинин и фактор Виллибранда, с соответствующими рецепторами и поэтому могут быть использованы при лечении такого, например, заболевания, как тромбоз. Эта, на удивление эффективная, тормозящая активность подтверждается ниже (см. таблицу).

Наиболее близкими являются N-ацил-альфа-аминокислоты [2] которые отличаются от предлагаемых производных радикалами Q и R', R" (см. ниже структурную формулу I), и их активность, например, как ингибитора связывания кровяных пластинок, как видно из нижеуказанных сравнительных данных, уступает активности предлагаемых соединений.

Согласно изобретению предлагаются производные N-ацил-альфа-аминокислоты формулы I где L группа формулы: или H₂N(CH₂)_t, L² где X обозначает CH; Y обозначает CH или N; t обозначает целое число от 2 до 6; R амидиногруппа; R' обозначает H, Alk, AlkOAlk; R'' обозначает h, Alk, AlkNH₂, AlkOH, AlkCOOH, Alkиндолил, AlkOCOAlk, Ph, AlkPh, где Ph необязательно имеет один или несколько заместителей, выбранных из группы OH, галоген, OAlk, причем OH- или COOH-группы в R'' могут быть переведены в простой или сложный эфир или амид или R' обозначает вместе с R'' при определенных условиях пропилен- или бутилен-группу, замещенную OH или AlkPh; R''' обозначает Alk или H; Q обозначает группу формулы или -NH(CH₂)_vOCH₂COO-T Q⁷, где U, U' H, низший алканоил; Ar F₃AlkPh или, если R' и R'' вместе с N и C атомами, с которыми они связаны, образуют пирролидиниленовое или пиперидиниленовое кольцо, может быть также группой формулы: где R² Alk, H, OCH₂COOAlk; везде Alk обозначает низший алкил; v целое число от 2 до 5; n целое число от 0 до 1; T обозначает H или низший алкил; T' обозначает H; или их физиологически приемлемые соли или их простые или сложные эфиры, или амиды, или их гидраты.

Предпочтительными являются соединения I, где L представляет группу L¹, R', R'' и R''' обозначают водород или другие указанные выше значения, причем находящиеся в R'' гидроксильные или карбоксильные группы могут быть этерифицированы с образованием простого или сложного эфира или амидированы, и T обозначает в группе Q водород или отщепляемый при физиологических условиях низший алкил; а также соединение I, где L обозначает группу L¹, R обозначает амидино, X обозначает CH, Y обозначает CH или N, Q обозначает группу Q¹, Q², Q⁴, Q⁵ или Q⁸.

Предпочтительными являются также соединения I, где Q обозначает группу Q¹, особенно где n= 1 и T обозначает водород или метил, и -N(R')C(R'', R''')CO- один из остатков Gly, Ala, D-Ala, Val, Leu, Sar, Orn, Lys, Phy, 2-метил-Pro, Phe, Tyr, 3-иод-Tyr, 3,5-дииод-Tyr, Ser(Ac), Ser, Asp, Glu, Pro, 4-бензилокси-Pro, 4-гидрокси-Pro, 2-пиперидиленкарбонил, NHCH(CH₂CH₂NH₂)CO, Trp, Tyr(Me), Tyr(гексил) и O,N(Me)₂-Tyr; в частности, соединения I, где Q обозначает группу Q², особенно если n 1, T обозначает водород и -N(R')C(R'', R''')CO является остатком Ala, или соединения I, где Q обозначает группу Q⁴, особенно такие соединения, где n 1, T обозначает водород, U и U' обозначают водород или Ac, и -N(R')C(R'', R''')CO является остатком Ala; либо соединения I, где Q обозначает группу Q⁵, особенно если n 1, T обозначает водород, Ar обозначает ,,-трифтор-м-толил и (N(R')C(R'', R''')CO- является остатком Ala; а также соединения I, где Q обозначает группу Q⁸, особенно где R² обозначает группу -OCH₂COO(H или метил), T обозначает водород или метил и -N(R')C(R'', R''')CO является остатком Pro.

Наиболее предпочтительны соединения I, выбранные из группы: [[1-[N(n-амидинобензоил)-L-аланил]-4-пиперидинил]окси]уксусная кислота, [[1-[N-[(5-амидино-2-пиридил)карбонил] -L-аланил] -4-пиперидинил] окси] уксусная кислота, [[1-[N-(n-амидинобензоил)-3-(4-гидрокси-3-иодфенил)-L-аланил] -4-пиперидинил]окси]уксусная кислота, [[1-[3-ацетокси-N-(n-амидинобензоил)-L-аланил]-4-пиперидинил]окси]уксусная кислота, [n-[[1-(n-амидинобензоил)-2-пирролидинил] карбонил] фенокси] уксусная кислота, [[1-[N-[(5-амидино-2-пиридил)карбонил] -L-тирозил] -4-пиперидинил] окси] уксусная кислота, и особенно [[1-[N-(n-амидинобензоил)-L-тирозил] -4-пиперидинил]окси]уксусная кислота.

Среди предпочтительных соединений можно назвать соединения I, где Q обозначает группу Q³, особенно где n 1 и T обозначает водород или группу Q⁶, особенно где T обозначает водород, либо соединения I, где Q обозначает группу Q⁷, особенно где v 2, T обозначает водород или бутил, а также соединения I, где -N(R')C(R'', R''')CO-является остатком N(метоксиэтил)Gly.

В частности, предпочтительны соединения I, выбранные из группы: (S)-1-[2-(5-амидинопиридин-2-илкарбониламино)-3-(4-метоксифенил)пропионил]пиперидин-4-илоксиуксусная кислота, сложный этиловый эфир (S)-1-[2-(4-амидинобензамидо)-3-(4-метоксифенил)пропионил]пиперидин-4-илоксиуксусной кислоты, (S)-1-[2-(4-амидинобензамидо)-3-(4-метоксифенил)пропионил]пиперидин-4-илоксиуксусная кислота, [1-[N-(4-амидинобензоил)-4'-гексилокси-L-фенилаланил]пиперидин-4-илокси] уксусная кислота.

В настоящем описании данного изобретения Me обозначает метил, Ac обозначает ацетил, t-Bu обозначает трет.-бутил, Boc обозначает t-бутоксикарбонил, Z обозначает бензилоксикарбонил, Fmoc обозначает 9-флуоренилметоксикарбонил, Val обозначает L-валил, Phe обозначает L-фенилаланил, Ser обозначает L-серил, Gly обозначает глицил, Ala обозначает L-аланил, Asp обозначает L-аспартил, Leu обозначает L-лейцил, Tyr обозначает L-тирозил, Sar обозначает саркозил, Orn обозначает L-орнитил, Lys обозначает L-лизил, Phg обозначает L-a-фенилглицил, Pro обозначает L-пролил, Glu обозначает L-глутамил, Trp обозначает L-триптофан.

Выражение "низший" обозначает группы с 1-6, предпочтительно с 1-4, C-атомами. Примерами низших алкильных групп являются метил, этил, пропил, изопропил, н. -, втор. или трет.-бутил и гексил. Примерами отщепляемых при физиологических условиях низших алкильных групп являются первичные и вторичные низшие алкильные группы.

Символы R', R'' и R''' в остатке a-аминокарбоновой кислоты -N(R')C(R'', R''')CO- представляют водород или в a-аминокарбоновых кислотах с открытой цепью или циклических, природных или синтетических обычные N-заместители или боковые цепи. Примерами таких N-заместителей R' и боковых цепей R'' и R''' являются возможно замещенные OH, COOH, NH₂ или арил, особенно фенил, гидроксифенил, гидроксииодфенил или гидроксидииодфенил, низший алкил. Две замещенные таким образом при необходимости низшие алкильные группы R' и R'' вместе с N- или C-атомом, с которым они связаны, могут образовывать 4- до 6-членное, особенно 5-членное кольцо. Встречающиеся в N-заместителях R' и боковых цепях R'' и R''' гидрокси- или карбоксигруппы могут быть этерифицированы с образованием простого или сложного эфира или амидированы, а встречающиеся аминогруппы могут быть проацилированы C_1-6-алканоилом или ароилом. Примерами таких групп простого эфира, сложного эфира или амида являются -O-T⁰, -COO-T⁰ или -CON(V, V'), где V и V' имеют указанное значение и T⁰ обозначает низший алкил, особенно метил, гексил и трет.-бутил, или аралкил, особенно бензил.

Примерами a-аминокарбоновых кислот с открытыми цепями являются H-Gly-OH, H-Ala-OH, H-Orn-OH и H-Tyr-OH; примерами циклических альфа-аминокарбоновых кислот, то есть таких, где R' и R'' вместе с N- или C- атомом, с которым они связаны, образуют кольцо, являются H-Pro-OH, H-Pro(4-OH)-OH и 2-пиперидинкарбоновой кислотой.

Примерами C_1-6-алканоильных групп U и U' являются формил, ацетил и пропионил. Арил обозначает фенил, при необходимости имеющий до 3-х заместителей, как алкил, OH, низший алкокси, галоген или гало-низший алкил, особенно CF₃. Ароил обозначает соответствующие группы бензоила.

Соединения формулы I можно подвергать сольватации, особенно гидратации. Гидратацию можно осуществлять в процессе способа получения или она может происходить постепенно в результате гигроскопических свойств ранее безводного соединения формулы I.

Примерами физиологически приемлемых солей соединений формулы I являются соли с физиологически переносимыми минеральными кислотами, как соляная кислота или фосфорная кислота; или с органическими кислотами, как метансульфокислота, уксусная кислота, трифторуксусная кислота, лимонная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, винная кислота, янтарная кислота или салициловая кислота. Соединения формулы I со свободной карбоксигруппой могут образовывать также соли с физиологически переносимыми основаниями. Примерами таких солей являются соли щелочных металлов, щелочно-земельных металлов, аммония и алкиламмония, как соль Na, K, Ca или тетраметиламмония. Соединения формулы I могут существовать также в форме амфотерных ионов.

Соединения формулы I, которые содержат один или несколько асимметрических атомов C, могут существовать в виде энантиомеров, диастереомеров или их смесей, в частности, в виде рацематов.

Вышеуказанные N-ацил-альфа-аминокислоты можно получать по изобретению в результате того, что а) в соединении формулы где L⁰ представляет группу формулы или R⁰¹-(CH₂)_t, в которой A представляет защищенную в случае необходимости амидиногруппу, R⁰¹ представляет защищенную в случае необходимости аминогруппу, E', E'', E''' и G имеют такое же значение, как R', R'', R''' и Q в формуле I, причем если R⁰¹ представляет амино или если A представляет амидино, по меньшей мере один из E', E'', E''' и G содержит по меньшей мере одну группу сложного эфира карбоновой кислоты и/или группу простого эфира и/или защищенную аминогруппу, отщепляют группу простого эфира или защищенную амино- или амидиногруппу или сложного эфира карбоновой кислоты; или б) в нитриле формулы , переводят цианогруппу в амидиногруппу, или в) амин формулы R'-NHC(R'',R''')CO-Q (IV) обрабатывают кислотой формулы L¹-COOH или его реакционноспособным производным, и г) в случае необходимости функционально изменяют содержащуюся в соединении формулы I реакционноспособную группу, и д) в случае необходимости соединение формулы I переводят в физиологически переносимую соль или соль соединения формулы I переводят в свободную кислоту или основание.

Примерами отщепляемых групп сложного эфира карбоновой кислоты являются бензил-OCO- и низший алкил-OCO, как t-Bu-OCO-. Примерами отщепляемых защищенных амино- и амидиногрупп являются -NH-Z, -NH-Boc и -N₃; -C(NH)NH-Z, -C(NH)-NH-Boc, C(N-Boc)N(Boc)₂ и -C(N-Boc)NH-Boc; -NHC(NH)NHNO₂ и -NHC(N-Boc)NH-Boc. Примерами отщепляемой группы простого эфира является t-Bu-O-.

Группы сложного эфира можно гидролизовать известным образом, например, при помощи основания, как гидроокись щелочного металла, например, гидроокись натрия, в растворителе, как метанол или вода; или при помощи кислоты, как соляная кислота. Сложный бензиловый эфир можно расщеплять гидрированием в присутствии катализатора на основе благородного металла, как палладий на активном угле (Pd/C) в растворителе, как метанол, этанол, муравьиная кислота или уксусная кислота, при температуре приблизительно до 40^oC, предпочтительно при комнатной температуре. При этом одновременно отщепляется содержащаяся в группе A защитная группа амидино, как Z.

Группы сложного эфира, как t-Bu-OCO, а также защитные амино или амидиногруппы, как Boc, и группы простого эфира, как t-Bu-O-, можно отщеплять при помощи кислоты, такой как муравьиная кислота или трифторуксусная кислота, при желании в растворителе, как дихлорметан, или при помощи насыщенной HCl ледяной уксусной кислоты, при температуре до 40^oC, предпочтительно при комнатной температуре.

Вариант б) можно осуществлять при реакции нитрили III' с сероводородом и триэтиламином в пиридине с получением тиоамида; последний метилированием метилиодидом в ацетоне и последующим аммонолизом с ацетатом аммония в метаноле переводят в соединение I.

Взаимодействие в) амина IV с кислотой L¹-COOH или с ее реакционноспособным производным, таким как хлорангидрид кислоты, осуществляют в присутствии основания, как пиколин, в растворителе, как дихлорметан, при температуре до 40^oC, предпочтительно при комнатной температуре.

Для функциональных превращений реакционноспособных групп по варианту способа г) используют отщепление содержащихся в группе Q групп низшего алкоксикарбонила -COO-T или -COO-T', или С_1-6-алканоилокси или ароилоксигрупп O-U или O-U', или этерификацию карбоксигруппы в кислоте I, и галогенирование, особенно иодирование содержащейся в боковой цепи R'' или R''' арильной группы.

Так, содержащиеся в группе Q бутоксикарбонил- или метоксикарбонилгруппы можно омылять при помощи кислоты, такого как водный раствор соляной кислоты или уксусной кислоты, или в основных условиях, например, при помощи водного раствора натрового щелока в метаноле, ацетоксигруппы при помощи карбоната калия в метаноле. Этерификацию карбоксигруппы осуществляют, например, реакцией кислоты с подходящим спиртом в присутствии каталитических количеств H₂SO₄.

Иодирование арильной группы, особенно гидроксифенилгруппы в боковой цепи R'' или R''', можно осуществлять реакцией соединения I с хлорамином T в присутствии иодида натрия в воде/диметилформамиде.

Амин I, где L представляет группу H₂N(CH₂)_t можно превратить в соответствующий гуанидин I, где L обозначает HN=C(NH₂)NH(CH₂)_t, причем амин обрабатывают этансульфонатом 2-S-изотиомочевины в присутствии основания, такого как Na₂CO₃ или NaOH при температурах до 40^oC.

Соединения формул II' и III' являются новыми и как таковые также представляют предмет настоящего изобретения.

Таким образом, предметом данного изобретения являются соединения формулы II: где L⁰ обозначает группу формулы и E', E'', E''' и G имеют значения R', R'', R''', как указано выше, или где L⁰ обозначает группу формулы или R⁰¹-(CH₂)_t L⁰² в которой A обозначает защищенную в случае необходимости амидиногруппу, R⁰¹ обозначает в случае необходимости защищенную аминогруппу, и E', E'', E''' и G имеют такое же значение, как R', R'', R''' или Q в формуле I, причем если R⁰¹ обозначает амино, или если A обозначает амидино, по меньшей мере один из E', E'', E''' и G содержит по меньшей мере одну группу сложного эфира карбоновой кислоты и/или группу простого эфира и/или защищенную аминогруппу.

Соединение II со значением L⁰ L⁰¹ получают обработкой амина формулы E'-NHC(E'', E''')CO-G' (V) где G' обозначает одну из групп Q¹ Q⁸, в которой группа -COO-T и имеющаяся в случае необходимости группа -COO-T' являются группами сложного эфира карбоновой кислоты, кислотой формулы или ее реакционноспособным производным, например хлорангидридом кислоты.

Это превращение можно осуществлять в случае необходимости в присутствии тетра-н-бутиламмонийгидрогенсульфата в растворителе, как дихлорметан, и основания, как водный раствор бикарбоната натрия.

Амин H-Q⁰, где Q⁰ представляет одну из аминогрупп Q¹ Q⁷, в которой группа -COO-T и имеющаяся в случае необходимости группа -COO-T' являются группой сложного эфира карбоновой кислоты, можно обрабатывать кислотой формулы до нитрила III.

Эту реакцию можно осуществлять в присутствии 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний-гексафторфосфата (HBTU) и органического основания, как N-метилморфолин, в растворителе, как диметилформамид.

Соединение II', где A представляет амидино, можно получать превращением цианогруппы в амидиногруппу в соответствующем соединению II нитриле. Последний можно получать реакцией амина вышеуказанной формулы V с кислотой формулы , или с ее функциональным производным, например, хлорангидридом кислоты.

Эту реакцию можно осуществлять в присутствии 2-хлор-4,6-диметокси-1,3,5-триазина (CDMT) и основания, как N-метилморфолин, в растворителе, как дихлорметан.

Соединение II, где L⁰ обозначает группу L⁰² с защищенной амино-группой R⁰¹, получают реакцией амина V с кислотой формулы R⁰¹-(CH₂)_t-COOH, например, в присутствии HBTU и N-метилморфолина.

Нитрил III', где Q представляет группу Q, можно получать, например, следующим образом: Амин формулы: , где R' и R'' вместе с N- и C-атомом образуют цикл, и W¹ представляет защитную группу, обрабатывают кислотой VIII или ее функциональным производным, отщепляют защитную группу и превращают полученный фенол с производным бромуксусной кислоты BrCH₂COO-T.

Реакцию амина IX с соответствующим кислоте VIII хлорангидридом кислоты можно осуществлять в присутствии основания, как триэтиламин, в диметилформамиде. Отщепление защитной группы W¹, например, бензила, можно осуществлять гидрогенолизом на Pd/C в этаноле, а реакцию вышеуказанного фенола с производным бромуксусной кислоты в диметилформамиде в присутствии карбоната калия.

Амины IV и V можно получать, например, реакцией N-защищенной аминокислоты формулы W²-N(E')C(E'',E''')COOH (X) с амином H-Q⁰ и удалением защитной группы W², например, Z или Boc, в продукте реакции.

Кислоту VII можно получать взаимодействием функционального производного кислоты VIII, например, хлорангидрида кислоты, с амином R'-NHC(R'',R''')COO-низший алкил (X') и отщеплением группы сложного эфира в продукте реакции. Эту реакцию можно осуществлять, например, в дихлорметане в присутствии триэтиламина. Группу низшего алкила, например, метил, можно удалять водным раствором LiOH в метаноле.

Можно превращать также аминокислоту формулы R'-NHC(R'',R''')COOH (X") например, глицин, реакцией непосредственно с соответствующим кислоте VIII хлорангидридом в присутствии водного раствора бикарбоната натрия, в случае необходимости в присутствии тетраметиламмоний-сульфата в дихлорметане, до кислоты VII.

Амин IX можно получать в результате того, что реагент Гриньяра бромида формулы обрабатывают соединением формулы и удаляют защитную аминогруппу W² из продукта реакции.

Используемые выше амины HQ⁰, где Q⁰ обозначает одну из аминогрупп Q¹ Q⁷, в которой группа -COO-T и имеющаяся в случае необходимости группа -COO-T' являются группами сложного эфира карбоновой кислоты, можно получать, как описано в нижеследующих примерах 1 a) b) c), 2 a), 46 a) b), 47 a) и 48 a) b).

Соединения формулы I, их сольваты и их соли тормозят как связывание фибриногена, фибронектина и фактора Виллибрандта с фибриногенным рецептором кровяных пластинок (глюкопротеин IIb/IIIa), так и связывание тех же и других адгезивных протеинов, как витронектин, коллаген и ламинин, с соответствующими рецепторами на поверхности различных типов клеток. Таким образом, указанные соединения оказывают влияние на взаимодействие клеток-клеток и клеток-матрицы. Они особенно препятствуют образованию тромбоцитов и могут применяться при борьбе или предупреждении таких заболеваний, как тромбы, кровоизлияние в мозг, инфаркт миокарда, воспаление и артериосклероз. Далее, эти соединения оказывают воздействие на клетки опухоли, причем они тормозят их метастазирование. Таким образом, их можно применять также в качестве противоопухолевых средств. Далее, они могут ускорять заживление раны. Так как они также препятствуют рассасыванию костной ткани, их можно применять при лечении остеопороза.

Торможение связывания фибриногена с фибриногенным рецептором, глюкопротеином IIb/IIIa можно обнаружить следующим образом: Глюкопротеин IIb/IIIa получают из Тритон-X-100-экстрактов кровяных пластинок человека и очищают методом лектин-афинной хроматографии (Analytical Biochemistry 151, 1985, 169-177) и методом афинной хроматографии на Arg-Gly-Asp-Ser-колонке (Science 231, 1986, 1559-62). Полученный таким путем протеин-рецептор связывают на пластинках с микротитром.

Специфическое связывание фибриногена с иммобилизированным рецептором определяют при помощи ELISA-системы ("enzyme-linked immunosorbent assay"). Нижеприведенные IC₅₀-величины соответствуют такой концентрации испытываемого вещества, которая необходима, чтобы тормозить на 50% связывание фибриногена с иммобилизированным рецептором.

Ниже приведены данные IC₅₀ для соединений, полученных по примерам табл. 1.

Эти соединения имеют низкую токсичность, однако LD₅₀ продуктов примеров 3 и 14 составляет 250 и примера 5 500 мг/кг при внутривенном назначении у мыши.

Для подтверждения явного превосходства заявленных соединений по сравнению с соединениями, описанными в европейской заявке, ниже приводятся сравнительные данные для IC₅₀, полученные для обоих соединений формулы I.

Ингибирование агрегации бляшек в человеческой плазме Человеческую плазму, обогащенную тромбоцитами, (h-PRP) получают из антикоагулированной крови с помощью 1/10 объема 90 мМ тринатрий цитрата, и агрегацию тромбоцитов измеряют путем регистрации скорости изменения световой трансмиссии с помощью агрегометра. Затем проводилось серийное разбавление с помощью ингибиторов и агрегация осуществлялась с помощью таких агонистов, как коллаген (COL), аденозинтриофосфит (ADP) или тромбин (THR) при конечной концентрации в человеческой плазме 2,5 мкг/мл, 10 мкМ и 0,2 U/мл соответственно. Значения IC₅₀ для этих трех агонистов приведены в следующих табл.2 и 3.

Концентрации COL, ADP и THR указаны в различных единицах, наиболее подходящих для трех агонистов. Коллаген (COL) является высокомолекулярным белком, ADP молекулой аденозин-5'-дифосфата, и THR ферментом. Сокращение U для THR представляет собой единицу измерения активности фермента.

Известный "неодикумарин" или "пелентан" является антикоагулянтом и антагонистом витамина K. В противоположность этому, как следует из описания и приложенной таблицы, заявленные соединения обладают действием, тормозящим как связывание адгезивных протеинов с тромбоцитами, так и агрегацию тромбоцитов, а также на взаимодействие клетка-клетка. (J. Cardiovasc. Surg. 106, 1993, 834-41 и Thrombosis and Haemostasis. 70, 1993, 817-21, а также копия реферата N 65 из Thrombosis and Haemostasis 69, 1993, 560). Из вышеуказанных источников следует, что вещество Ro 44-9883, которое соответствует продукту из примера 14, в организмах собаки и морской свинки проявляет тормозящее действие на агрегацию кровяных пластинок и потому может применяться для лечения и профилактики лечения тромбозов.

Предметом данного изобретения является также композиция, ингибирующая связывание адгезивных протеинов с тромбоцитами и агрегацию тромбоцитов, содержащая активное начало и фармацевтически инертные вспомогательные вещества, которая в качестве активного вещества содержит соединение формулы I в эффективном количестве.

Соединения формулы I, их сольваты или соли могут быть переработаны как таковые или, при желании, с другими терапевтически активными веществами в галеновую форму.

Лекарственные средства, содержащие вышеуказанные соединения, можно применять орально, через кишечник, например, в форме таблеток через рот, таблеток с лаковым покрытием, драже, капсул в твердой и мягкой желатине, растворов, эмульсий или суспензий, или ректально, в форме, например, свечей; или в виде аэрозоля. Но можно применять также парентерально, например, в форме растворов для инъекций или настоек для вливания.

Для получения таблеток, таблеток с лаковым покрытием, драже и капсул в твердой желатине можно смешивать активное вещество с фармацевтически инертными, неорганическими или органическими наполнителями. В качестве таких наполнителей для таблеток, драже и капсул в твердой желатине можно применять, например, лактозу, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновую кислоту или ее соли. Для капсул в мягкой желатине в качестве наполнителей применяются, например, растительные масла, воски, жиры, полутвердые и жидкие многоатомные спирты; однако, в зависимости от свойства активного вещества для капсул с мягкой желатиной возможно отсутствие любых наполнителей. Для получения растворов и сиропов в качестве наполнителей применяются, например, вода, многоатомные спирты, сахароза, инвертный сахар и глюкоза; для растворов для инъекций применяются, например, вода, спирты, многоатомные спирты, глицерин и растительные масла, а для свечей применяются, например, натуральные или отвержденные масла, воски, жиры и полужидкие или жидкие многоатомные спирты. Фармацевтические препараты наряду с этим могут содержать еще консерванты, агенты растворения, стабилизаторы, смачиватели, эмульгаторы, подслащивающие вещества, красители, ароматические вещества, соли для изменения осмотического давления, буферные растворы, средства для покрытия или антиокислители.

Для борьбы или предупреждения вышеназванных заболеваний дозировка активного вещества может изменяться в широких пределах и, конечно, в каждом отдельном случае должна быть приспособлена к индивидуальным условиям. В общем, при оральном назначении следовало бы устанавливать дозу около от 0,1 до 20 мг/кг, предпочтительно около от 0,5 до 4 мг/кг в день для взрослого, причем указанный верхний предел может быть и выше, если это окажется необходимым.

Пример 1. Раствор 2,43 г сложного трет.-бутилового эфира [[1-[N-(n-амидинобензоил)глицил] -4-пиперидинил] оксиуксусной кислоты в 15 мл дихлорметана/трифторуксусной кислоты 1 1 оставляют на 5 ч при комнатной температуре. После выпаривания растворителей и хроматографии [силилированный кизельгель (LiChroprep RP-18), метанол/вода-элюент] получают 0,46 г трифторацетата [[1-[N-(n-амидинобензоил)глицил]-4-пиперидинил]окси]уксусной кислоты, точка плавления 233-236^oC. MS (FAB): 363 (M + H)⁺.

Исходное вещество можно получать следующим образом: а) К раствору 50 г 4-гидроксипиперидина в 500 мл дихлорметана добавляют по очереди при 0^oC 69,1 мл триэтиламина и 70,2 мл сложного бензилового эфира хлормуравьиной кислоты. Полученную суспензию перемешивают в течение ночи при комнатной температуре и затем фильтруют. Получающийся после сгущения фильтрата остаток поглощают в уксусном эфире, промывают водой и 1 н. соляной кислотой, сушат и сгущают. Получают 73,6 г N-бензилоксикарбонил-4-гидроксипиперидина, коэффициент R_f 0,56 (уксусный эфир/метанол 9 1), MS (EI): 235 (M⁺).

b) К раствору 30,1 г N-бензилоксикарбонил-4-гидроксипиперидина в 300 мл толуола добавляют 28 мл сложного трет.-бутилового эфира бромуксусной кислоты и 1,4 г тетра-н-бутиламмонийбисульфата в 10 мл воды. После этого прикапывают раствор 125 г гидроокиси натрия в 125 мл воды. После перемешивания в течение ночи органические экстракты отделяют, сушат и сгущают. После сушки получают 34,1 г N-бензилоксикарбонил-4-[(трет. -бутоксикарбонил)метокси]пиперидина, коэффициент R_f 0,76 (уксусный эфир). MS (EI): 293 (M-C₄H₈)⁺.

с) К раствору 30 г продукта b) в 50 мл этанола добавляют 1,5 г Pd/C (10% ). Реакционную смесь гидрируют при комнатной температуре. После этого отфильтровывают катализатор, промывают этанолом и сгущают фильтрат. Получают 17,4 г сложного трет.-бутилового эфира 4-пиперидинилоксиуксусной кислоты, коэффициент R_f 0,14 (уксусный эфир/метанол 1 1). MS (EI): 215 (M⁺).

d) Реакцией 5,8 г (активированного 5,4 г CDMT) Z-глицина с 6,0 г сложного трет. -бутилового эфира 4-пиперидинилоксиуксусной кислоты и 6,3 мл N-метилморфолина в дихлорметане получают 10 г бензил-[[[4-[(N-бутоксикарбонил)метокси]пиперидинил]карбонил]метил]карбамата. MS (EI): 406 (M⁺).

е) Гидрогенолизом раствора 10 г продукта d) в 200 мл этанола в присутствии 0,7 г Pd/C (10%) и 1,4 мл уксусной кислоты выделяют после хроматографии на силикагеле с уксусным эфиром/метанолом 1 1 4,1 г сложного трет. бутилового эфира 1-[(1-глицил-4-пиперидинил)окси]уксусной кислоты, MS (EI): 273 (M + H)⁺. ИК: 1746 см^-1.

f) К смеси 4,1 г продукта е) и 0,03 г тетра-н-бутиламмонийгидросульфата в 210 мл дихлорметана/насыщенного раствора бикарбоната натрия 4 3 добавляют при комнатной температуре 2,95 г п-амидинобензоилхлорид-гидрохлорида (полученного из п-амидинобензойной кислоты превращением с хлористым тионилом в тетрагидрофуране в присутствии диметилформамида). После перемешивания в течение ночи разбавляют дихлорметаном и водой, устанавливают pH 9-10 добавлением 1 н. натрового щелока, отделяют органические экстракты, сушат и сгущают. После сушки получают 2,43 г желаемого исходного вещества, MS (FAB): 419 (M + H)⁺.

Пример 2. A) Раствор 1,5 г сложного метилового эфира [[1-[N-(n-цианбензоил)глицил]-4-пиперидинил]окси]уксусной кислоты в 215 мл пиридина/триэтиламина 40 3 насыщают сероводородом и оставляют на 24 ч при комнатной температуре. После удаления растворителей поглощают остаток в уксусном эфире и промывают насыщенным раствором хлористого натрия. Органические экстракты сушат и сгущают. После хроматографии остатка на силикагеле с уксусным эфиром в сопровождении уксусного эфира/метанола выделяют 1,34 г сложного метилового эфира [[1-[N-[n-(тиокарбамоил)бензоил]глицил]-4-пиперидинил]окси] уксусной кислоты, MS (FAB): 394 (M + H)⁺.

B) Взаимодействие 1,25 г продукта с предыдущей стадии с 7,5 мл иодистого метила в 150 мл ацетона при температуре кипения дает после фильтрования и удаления растворителя 1,65 г гидроиодида сложного метилового эфира [[1-[N-[п- [1-(метилтио)формимидоил] бензоил] глицил] -4-пиперидинил]окси]уксусной кислоты, MS (FAB): 408 (M + H)⁺.

C) Аммонолизом 1,5 г продукта B) в присутствии 0,32 г ацетата аммония в 100 мл метанола при температуре кипения получают 0,76 г гидроиодида сложного метилового эфира [[1-[N-(n-амидинобензоил)глицил] -4-пиперидинил]окси] уксусной кислоты. Точка плавления 103-105^oC. MS (FAB): 377 (M + H)⁺.

Исходный нитрил можно получать следующим образом: a) Этерификацией трифторацетата 4-пиперидинилоксиуксусной кислоты (полученного обработкой продукта примера 1c) трифторуксусной кислотой в дихлорметане) в метаноле в присутствии хлористого тионила получают гидрохлорид сложного метилового эфира 4-пиперидинилоксиуксусной кислоты, MS (EI): 173 (M)⁺.

b) Реакция 1,35 г продукта a) с 1,18 г N-(n-цианбензоил)глицина (полученного превращением глицина с n-цианбензоилхлоридом в насыщенном растворе бикарбоната натрия) в присутствии HBTU и N-метилморфолина в диметилформамиде дает после хроматографии на силикагеле (уксусный эфир/метанол 9 1 до 1 1) 1,66 г желаемого исходного нитрила, MS (EI): 359 (M)⁺.

Пример 3. Из 13 г сложного трет.-бутилового эфира [[1-N-(n-амидинобензоил)-L-аланил]-4-пиперидинил]окси]уксусной кислоты обработкой трифторуксусной кислотой в дихлорметане (как описано в примере 1) получают после перекристаллизации из метанола/простого диэтилового эфира 8,9 г трифторацетата [[1-[N-(n-амидинобензоил)-L-аланил] -4-пиперидинил]окси] уксусной кислоты. Точка плавления 120^oC (разложение). MS (FAB): 377 (M + H)⁺. []²_D⁰ +24,7^o (c 0,7, вода).

Исходное вещество можно получать следующим образом: a) Реакция 18 г Z-L-аланила с 17,4 г сложного трет.-бутилового эфира 4-пиперидинилоксиуксусной кислоты и последующий гидрогенолиз полученного продукта, как в примере 1d) и е), дает 15,8 г ацетата сложного трет.-бутилового эфира 1-[(1-L-аланил-4-пиперидинил)окси]уксусной кислоты. Точка плавления 93-96^oC. []²_D⁰ +2,0^o (c 1,0, метанол).

b) Реакция 4,7 г продукта a) с 3,4 г n-амидинобензоилхлорид-гидрохлорида, как в примере 1f), дает 4,2 г желаемого исходного вещества. MS (EI): 433 (M + H)⁺.

Пример 4. Из 0,3 г сложного трет.-бутилового эфира [[1-[N-[n-[N-(тpeт. -бутоксикарбонил)амидинобензоил] -D-аланил]-4-пиперидинил]окси]уксусной кислоты получают по аналогии с примером 1 0,1 г трифторацетата [[1-[N-(n-амидинобензоил)-D-аланил]-4-пиперидинил]окси] уксусной кислоты. Точка плавления 115^oC (разложение). []²_D⁰ -27,5^o (c 0,8, вода). MS (FAB): 377 (M + H)⁺.

Исходное вещество можно получать следующим образом: a) Взаимодействием 3 г сложного трет.-бутилового эфира 4-пиперидинилоксиуксусной кислоты с 2,43 г Z-D-аланина, как описано в примере 1d), получают после хроматографии на силикагеле при элюировании уксусным эфиром/гексаном 1 1 3,1 г бензил-[(R)-1-[[4-[(трет.-бутоксикарбонил) метокси] пиперидинил]карбонил]этил]карбамата. MS (EI): 420 (M)⁺.

b) Гидрогенолизом 3,1 г продукта a), как описано в примере 1e), получают 2,5 г ацетата сложного трет.-бутилового эфира 1-[(1-D-аланил-4-пиперидинил)окси]уксусной кислоты. MS (EI): 215 (M-C₃H₅NO).

с) Взаимодействием 1 г продукта предыдущей стадии с 0,66 г п-амидинобензоилхлорид-гидрохлорида в диметилформамиде в присутствии триэтиламина и последующей обработкой ди-трет.-бутилдикарбонатом получают после хроматографии на силикагеле с дихлорметаном/метанолом 20 1 0,3 г желаемого исходного вещества. MS (FAB): 533 (M + H)⁺.

Пример 5. Гидролизом 1,6 г сложного трет.-бутилового эфира [[1-[N-[(5-амидино-2-пиридил)карбонил]-L-аланил]-4-пиперидинил]окси] уксусной кислоты в насыщенной хлористым водородом ледяной уксусной кислоте получают после хроматографии на силилированном силикагеле RP-18 и перекристаллизации из тетрагидрофурана/уксусного эфира 0,15 г [[1-[N-[(5-амидино-2-пиридил) карбонил] -L-аланил] -4-пиперидинил] окси]уксусной кислоты. Точка плавления: выше 200^oC (разложение). MS (FAB): 378 (M + H)⁺.

Исходное вещество можно получать следующим образом: a) Взаимодействием 2,4 г ацетата сложного трет.-бутилового эфира 1-[(1-L-аланил-4-пиперидинил)окси] уксусной кислоты (пример 3a) с 1,0 г 5-циано-2-пиколиновой кислоты по примеру 1d) получают 2,43 г сложного трет.-бутилового эфира [[1-[N-[(5-циан-2-пиридил)-карбонил]-L-аланил]-4-пиперидинил] окси]уксусной кислоты, MS (FAB): 417 (M + H)⁺.

b) Последующая обработка 2,4 г продукта вышеуказанной стадии, как описано в примере 2A) B) C), дает 2 г желаемого исходного вещества. Точка плавления 142-145^oC. MS (FAB): 434 (M + H)⁺.

Пример 6. Из 1 г ацетата сложного трет.-бутилового эфира [[1-[N-(n-амидинобензоил)-L-валил] -4-пиперидинил] окси] уксусной кислоты получают по аналогии с примером 1 после кристаллизации из уксусного эфира 0,8 г [[1-[N-(n-амидинобензоил)-L-валил] -4-пиперидинил] окси] уксусной кислоты в виде трифторацетата. Точка плавления 210-211^oC. MS (FAB): 405 (M + H)⁺.

[]²_D⁰ +32,6^o (c 0,8, вода).

Исходное вещество можно получать следующим образом: a) Реакцией 2,5 г Z-L-валина с 2 г сложного трет.-бутилового эфира 4-пиперидинилоксиуксусной кислоты, как описано в примере 2б), получают 4 г сложного трет. -бутилового эфира [[1-[N-[(бензилокси)карбонил]-L-валил]-4-пиперидинил]оксиуксусной кислоты. MS (EI): 449 (M + H)⁺.

b) По аналогии с примером 1e), однако без добавления уксусной кислоты, получают из 1,9 г продукта примера 6a) 1,4 г сложного трет.-бутилового эфира 1-[(1-L-валил-4-пиперидинил)окси]уксусной кислоты. MS (EI): 315 (M + H)⁺.

c) По аналогии с примером 1f) получают из 3,3 г продукта примера 6b) и 2,5 г n-амидинобензоилхлорид-гидрохлорида после хроматографии (силикагель; дихлорметан/метанол/уксусная кислота 95 4 1) и кристаллизации из простого диэтилового эфира 1,1 г желаемого исходного ацетата. Точка плавления 179-182^oC. MS (FAB): 461 (M + H)⁺.

Пример 7. Из 1,5 г ацетата сложного трет.-бутилового эфира