Способ получения (6s)- или (6r)-тетрагидрофолиевой кислоты

Способ получения (6s)- или (6r)-тетрагидрофолиевой кислоты

Реферат

 

Использование: в медицине. Сущность изобретения: способ получения (6S)- или (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты или солей присоединения этой кислоты к серной кислоте или сульфоновым кислотам путем взаимодействия (6R, S)-тетрагидрофолиевой кислоты и серной кислоты или соответствующей сульфоновой кислоты, полученную соль присоединения к кислоте подвергают фракционной кристаллизации и при необходимости полученные соли обрабатывают основанием. Получены новые соли присоединения (6S)- и (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты к серной кислоте или сульфоновым кислотам. 2 с. и 8 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к способу получения N-[4-[[(2-амино-1,4,5,6,7,8-гексагидро-4-оксо-(6S)-птеридинил)метил] амино] бензоил] -L-глутаминовой кислоты (именуемой в дальнейшем (6S)-тетрагидрофолиевой кислотой) и ее солей, а также к N-[4-[[(2-амино-1,4,5,6,7,8-гексагидро-4-оксо-(6R)-птеридинил)метил] амино] бензоил] -L-глутаминовой кислоты (именуемой в дальнейшем (6R)-тетрагидрофолиевой кислотой) и ее солей.

Производные тетрагидрофолиевой кислоты содержат 2 асимметрических центра. При том в результате синтеза этих производных из фолиевой кислоты, т. е. N-(птероил)-L-глутаминовой кислоты, в остатке глутаминовой кислоты оптически-активный атом С находится в (L)-форме, в то время как оптически активный атом С в положении 6, образовавшийся в результате гидрирования двойной связи в положении 5, 6 птероильного остатка, находится в рацемической форме, т.е. в (6R,S)-форме. Итак, синтетические производные тетрагидрофолиевой кислоты состоят из смеси (1:1) двух диастереомеров. В живых организмах, например в печени, соли тетрагидрофолиевой кислоты (ТГФК) встречаются только в одной форме диастереомеров, причем 5,6,7,8-ТГФК имеется в (6S)-форме.

Соли ТГФК, преимущественно кальциевая соль 5-формил-5,6,7,8-ТГФК (лейковорин) или 5-метил-5,6,7,8-ТГФК используют как лекарственное средство для лечения мегалобластической анемии, вызываемой недостаточным поступлением фолиевой кислоты в организм, как антидот для повышения переносимости антагонистов фолиевой кислоты, в частности аминоптерина и метотрекстата, в противораковой терапии ("leucovorin rescue"), для усиления терапевтического эффекта 5-фторурацила, для лечения таких аутоиммунных заболеваний, как псориаз и ревматический артрит, а также для повышения переносимости определенных противопаразитарных средств, например комбинированного препарата, содержащего триметоприм и сульфаметоксазол в химиотерапии.

ТГФК служит исходным веществом в получении различных ее производных.

Для получения (6S) или (6R)-ТГФК до сих пор применялись следующие методы: энзиматические, физико-химические, химические.

Энзиматические методы включают в себя восстановление фолиевой кислоты до 7,8-дигидрофолиевой, осуществляемое обычно химическим путем, с последующим энзиматическим восстановлением последней до (6S)-5,6,7,8-ТГФК, например, по способу, описанному автором L. Rees с сотр. в Tetrahedron 42(1), 117-36 (1986), или согласно Европейскому патенту ЕР-А2-О 356 934.

Недостатком этого способа является трудность в приостановлении синтеза на стадии химического восстановления до 7,8-дигидрофолиевой кислоты. Кроме того, в результате энзиматического восстановления получают очень низкий выход по объему в единицу времени. Способ также требует дорогостоящего кофактора, например НАДФН, и сложной методики переработки продуктов. Наконец, известные до сих пор энзиматические способы получения оптически чистой ТГФК для получения этого соединения в крупнопромышленных масштабах не пригодны.

Известны также попытка хроматографического разделения диастереомеров (см. J.Feeney с сотр. Biochemistry, 20, 1837/1981 г). Но и этот метод оказался непригодным для получения диастереомеров в крупнопромышленных масштабах.

Известен также физико-химический способ асимметрического восстановления фолиевой кислоты на хиральных электродах (см. S. Rwee с сотр. Bioelectrochem. Bioenerg. 7, 693-698, 1980 г.). В связи с малыми допустимыми в течение процесса восстановления концентрациями фолиевой кислоты (обычно 10^-3М) и трудно осуществимым отделением асимметрического индуктора после восстановления названные реакции непригодны для получения оптически чистой ТГФК в крупнопромышленных масштабах.

Существует еще химический способ асимметричного гидрирования фолиевой кислоты в присутствии оптически активного катализатора (см. например, P.H. Boyle с сотр. J.Chem. Soc. Chem. Commun. 1974 г. 10, 375-6). Но этот синтез требует применения весьма дорогостоящих катализаторов, отделение которых от конечного продукта представляет трудоемкий процесс.

Поэтому до сих пор не существует способа, пригодного для получения в крупнопромышленных масштабах чистой ТГФК.

Таким образом, задача данного изобретения заключается в разработке простого, пригодного для практического применения и экономически выгодного способа получения оптически чистой ТГФК.

Неожиданно было обнаружено, что из водных растворов (6R,S)-ТГФК или ее солей после добавления сульфоновых кислот или серной кислоты выделяется соответствующая соль присоединения, обогащенная оптически чистой ТГФК. Эту соль можно отделить фильтрацией. Затем из фильтра можно выделить диастереомерную соль присоединения. Обе соли можно очищать как химическим, так и оптическим путем, перекристаллизацией и/или выделением ТГФК с последующим ее переводом в соль присоединения. Факт обогащения оптически чистой ТГФК в результате кристаллизации соли присоединения ее к сульфоновой кислоте или серной кислоте тем неожиданнее, что при перекристаллизации других солей, например соли присоединения ТГФК к хлористоводородной кислоте, обогащения оптически чистого компонента не наблюдается (W. Frick с сотр. Helv. Chim. Acta, 57, 2658-61, 1974 г.). При применении других сильных кислот, таких как бромистоводородная, йодистоводородная, азотная, фосфорная, муравьиная, щавельная, хлор-, дихлор- и трихлоруксусная кислоты, также не удалось достичь обогащения одной из эпимерных форм ТГФК.

Предметом настоящего изобретения является способ получения (6S)- и (6R)-ТГФК и ее солей присоединения к сульфоновым кислотам и серной кислоте, отличающийся тем, что (6R,S)-ТГФК подвергают реакции с сульфоновой кислотой или с серной кислотой, полученную соль присоединения подвергают фракционной кристаллизации и при необходимости из полученных диастереомерных солей присоединения обработкой основанием высвобождают и выделяют (6S) и/или (6R)-ТГФК.

Применяемую при этом (6R,S)-ТГФК можно использовать после выделения или же предпочтительно в виде продукта восстановления фолиевой кислоты или же предпочтительно в виде продукта восстановления фолиевой кислоты непосредственно ин ситу.

Пригодными для предлагаемого способа сульфоновыми кислотами являются ароматические сульфоновые кислоты с числом атомов С от 6 до 14, аралифатические сульфоновые кислоты с числом атомов С от 7 до 9 или алифатические сульфоновые кислоты с числом атомов С от 1 до 3.

В качестве ароматических сульфоновых кислот можно использовать бензол- или толуолсульфоновую кислоту, ксилол-, нитробензол-, хлорбензол-, нитротолуол-, нафталинсульфоновую кислоту, замещенные нафталинсульфоновые кислоты, нафталинди- или камфорсульфоновую кислоту.

В качестве аралифатической сульфоновой кислоты предпочтительно используют фенилметансульфоновую кислоту, а в качестве алифатических сульфоновых кислот преимущественно метан- и этансульфоновые кислоты.

Предпочтительными солями присоединения являются таковые с бензол- или толуолсульфоновой кислотой и серной кислотой.

Процесс кристаллизации проводят в полярной среде. Особенно пригодными для этих целей являются вода или смесь воды с низшей алифатической водорастворимой карбоновой кислотой, в частности уксусной кислотой, а также молочной кислотой, или жидким водорастворимым амидом, таким как формид ДМФ, диметилацетамид, 1-метилпирролидон, 2-пиперидинон. Смесь обычно содержит не менее 50% воды. Применение такой смеси обычно повышает оптическую чистоту продуктов, но при этом может уменьшаться выход. В зависимости от желаемой цели и конкретного исходного материала легко можно определить оптимальные реакционные условия путем проведения систематических опытов.

Ввиду чувствительности ТГФК к окислению рекомендуется использовать антиоксиданты, например 2-меркаптоэтанол.

При кристаллизации сначала обычно выпадает соль присоединения (6S)-ТГФК, а диастереомерное (6R)-соединение концентрируется в фильтратах.

Из полученных солей путем добавления основания без затруднения можно высвободить обогащенную оптически чистую ТГФК.

Другим методом химической и оптической очистки продукта является перекристаллизация солей присоединения (6S) и (6R)-ТГФК и/или повторный перевод в соли присоединения с помощью сульфоновой кислоты и/или серной кислоты после высвобождения ТГФК.

Предлагаемый способ представляет собой очень простой и особенно экономически выгодный метод получения (6S) и (6R)-ТГФК и ее солей с сильными основаниями или кислотами.

Предметом данного изобретения также являются новые соли присоединения (6S)-тетрагидрофолиевой кислоты к серной кислоте или сульфоновым кислотам, выбранным из ряда: толуол-4-сульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, метан-, этан-, фенилметан-, камфор-10-, нафталин-1-, нафталин-2-, сульфоновая кислота и нафталин-1,5-дисульфоновая кислота, или соль присоединения (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты к серной кислоте, или толуол-4-сульфоновой кислоте, или бензолсульфоновой кислоте.

Предпочтительной солью присоединения является соль, представляющая собой бензолсульфонат (6S)-тетрагидрофолиевой кислоты или бензолсульфонат (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты; толуол-4-сульфонат (6S)-тетрагидрофолиевой кислоты или толуол-4-сульфонат (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты; сульфат (6S)-тетрагидрофолиевой кислоты или сульфат (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты; соль присоединения (6S)-тетрагидрофолиевой кислоты к метан-, этан- или фенилметан-, или камфор-10-, или нафталин-1-, или нафталин-2- сульфоновым кислотам, или к нафталин-1,5-дисульфоновой кислоте; Предметом настоящего изобретения являются также соли присоединения (6S) или (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты к сульфоновым кислотам или серной кислоте в качестве полупродуктов для получения оптически чистых 5,10-метилентетрагидрофолиевой, 5-метилтетрагидрофолиевой, 5-формилтетрагидрофолиевой кислоты и их солей с сильными основаниями и кислотами.

Получение оптически чистых 5,10-метилентетрагидрофолиевой, 5-метил- или 5-формилентетрагидрофолиевой кислоты осуществляют взаимодействием вышеуказанных солей присоединения с формальдегидом.

Ниже приведен ряд примеров получения, например, 5-формил-(6S)-тетрагидрофолиевой кислоты из (6S)-тетрагидрофолиевой кислоты (пример 20), а также в достаточной мере описана реакция (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты, приводящая к получению 5-формил-(6R)-тетрагидрофолиевой кислоты. Это подтверждено тем, что и эта реакция, как и реакция рацемической тетрагидрофолиевой кислоты, может проводиться в одних и тех же условиях. Т.е (6R,S)-тетрагидрофолиевая кислота вступает в реакцию с образованием 5-формил-(6R, S)-тетрагидрофолиевой кислоты. В процессе этой реакции не происходит превращения обеих диастереомерных форм. Следует отметить, что как (6S)-тетрагидрофолиевая кислота, так и (6R)-тетрагидрофолиевая кислота ведут себя в описанной реакции одинаково и реакции протекают с одинаковой скоростью. Ясно, что конформация у С-6 атома не играет никакой роли.

То же самое относится и к реакции тетрагидрофолиевой кислоты при получении 5,10-метилентетрагидрофолиевой кислоты и 5-метилтетрагидрофолиевой кислоты. Все эти реакции относятся к известному уровню техники и описаны бесчисленное множество раз (см. R.L.Blakley, Chemistry and Biochemistry of Folates, 1984, стр. 93-109, в частности, стр. 99, раздел 1(5-формилтетрагидрофолиевая кислота), стр. 102, раздел 2 (5,10-метилентетрагидрофолиевая кислота) и стр. 103, раздел 2 (5-метилентетрагидрофолиевой кислота).

Абсолютная конфигурация у С-6 атома природной тетрагидрофолиевой кислоты должна быть определена [согласно J.C.Fontecilla-Camps с сорт. JACS 101(20), 6114/5, 1979)] как S, а такие же у С-6 природные 5-метилентетрагидрофолиевая кислота и 5,10-метилентетрагидрофолиевая кислота как R [см. Kalbematten с сотр. Helv. Chim. Acta, 64(8), 2627 (1981), примеч. 4] Ни при одной из описанных реакций не происходит превращения конфигурации у С-6. Исходя из "природной" тетрагидрофолиевой кислоты [(6S)-тетрагидрофолиевой кислоты] также получают ее "природные" производные, например 5-формил-(6S)-тетрагидрофолиевую кислоту или 5,10-метилен-(6S)-тетрагидрофолиевую кислоту. И, наоборот, при использовании "неприродной" тетрагидрофолиевой кислоты [(6R, S)-тетрагидрофолиевой кислоты] получают "неприродные" производные тетрагидрофолиевой кислоты, например 5-формил-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту, 5-метил-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту или 5,10-метилен-(6R)-тетрагидрофолиевую кислоту.

Примеры, иллюстрирующие изобретение.

Для определения содержания ТГФК, 5-формил-, 5-метил- и 5,10-метилен-ТГФК применяли метод ВСЖХ со следующими параметрами: Растворитель А: 0,03 M Na₂HPO₄ + 0,03 M KH₂PO₄ в воде Растворитель В: 1 часть смеси 0,03 M Na₂HPO₄ + 0,03 M KH₂PO₄ в воде, 3 части ментола с последующим доведением значения pH смеси до 7,8 Градиент: в течение 25 мин от 2% до растворителя В до 95% растворителя В Колонка: ODS (гиперсил) Детекция: УФ-излучение 300 нм Для определения (6S)-доли ТГФК применяли метод ВСЖХ со следующими параметрами.

Образование производного: ТГФК или ее соль присоединения растворяют в смеси ацетонитрила и воды (1:1) и подвергают реакции с 2,3,4,6-тетра-о-ацетил- - -D-глюкопираносилизотиоцианатом.

Растворитель: 2,5 части ацетонитрила, 1,5 части метанола, 6,0 части лимонной кислоты (0,02 М).

Колонка: RP-8 (Лихросфер).

Детекция: УФ-излучение 270 нм.

Пример 1. 14,2 г толуол-4-сульфоновой кислоты (150 мол.) при 60^oC в атмосфере азота растворяют в 440 мл воды, содержащей 0,1% 2-меркаптоэтанола. В течение 5 минут в раствор вводят 25,0 г чистой (6R,S)-ТГФК. Полученную взвесь охлаждают до 40^oC. Через 2-5 часов отфильтровывают выпавший продукт и промывают его водой и этанолом.

В результате получают 16,9 г соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 86,7% (по данным ВСЖХ).

Перекристаллизацией полученного продукта из смеси 110 мл N,N'-диметилформамида и 220 мл воды получают соль присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 97,5% (по данным ВСЖХ).

[]²_D⁵= -60,6(C=0,5% в ДМФ) Для высвобождения (6S)-ТГФК 170 мл воды, содержащей 0,1% 2-меркаптоэтанола, в атмосфере азота охлаждают до 10^oC. Затем вводят 5,0 г соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте. К полученной взвеси до 2^oC отфильтровывают выпавший продукт и промывают его водой и этанолом.

В результате получают 3,7 г (6S)-ТГФК с долей (6S)-компонента в 97,7% (по данным ВСЖХ).

[]²_D⁵= -44,5(C=1% в воде) Пример 2. 13 г толуол-4-сульфоновой кислоты (135 мол.) при 20^oC в атмосфере азота растворяют в 200 мл уксусной кислоты и 200 мл воды, содержащей 0,2% 2-меркаптоэтанола. В раствор быстро вводят 25,0 г чистой (6S,R)-ТГФК. Полученный раствор затравливают небольшим количеством соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте. Через 5 часов отфильтровывают выпавший продукт и промывают его смесью уксусной кислоты и воды, а затем этанолом.

В результате получают 12,7 г соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 93,6% (по данным ВСЖХ).

10,0 г полученной таким образом соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте при 25^oC в атмосфере азота взвешивают в 100 мл воды, а 30%-ным раствором едкого натра доводят значение pH взвеси до > 3,5. Значение pH полученного в результате раствора с помощью 37%-ной соляной кислоты доводят до <1. Через 12 часов отфильтровывают выпавший продукт, который затем промывают водой и этанолом.

Получают 8,9 соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 99,7% (по данным ВСЖХ).

[]²_D⁵= -62,0(C=0,5% в ДМФ) Пример 3. 14,30 г толуол-4-сульфоновой кислоты (150 мол.) при 27^oC в атмосфере азота растворяют в 220 мл L(+)-молочной кислоты и 200 мл воды, содержащей 0,2% 2-меркаптоэтанола. В раствор быстро вводят 25,0 г чистой (6S, R)-ТГФК. Полученный раствор затравливают небольшим количеством соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте и охлаждают до 20^oC. Через 15-20 часов отфильтровывают выпавший продукт и промывают его смесью молочной кислоты и воды, а затем этанолом.

В результате получают 15,1 г соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 92,5% (по данным ВСЖХ).

Пример 4. 14,3 г толуол-4-сульфоновой кислоты (150 мол.) при 27^oC в атмосфере азота растворяют в 110 мл 1-метил-2-пирролидона и 110 мл воды, содержащей 0,4% 2-меркаптоэтанола. В раствор быстро вводят 25,0 г чистой (6S, R)-ТГФК. Полученный раствор разбавляют 220 мл воды и охлаждают до 20^oC. Через 15-20 часов отфильтровывают выпавший продукт и промывают его смесью 1-метил-2-пирролидона и воды, а затем этанолом.

В результате получают 13,3 г соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 94,7% (по данным ВСЖХ).

Пример 5. 11,5 г толуол-4-сульфоновой кислоты (150 мол.) при 27^oC в атмосфере азота растворяют в 90 мл N,N'-диметилформамида и 90 мл воды, содержащей 0,4% 2-меркаптоэтанола. В раствор быстро вводят 20 г чистой (6R, S)-ТГФК. Полученный раствор разбавляют 180 мл воды и охлаждают до 20^oC. Через 15-20 часов отфильтровывают выпавший продукт и промывают его смесью N, N'-диметилформамида и воды, а затем этанолом.

В результате получают 11,3 г соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 91,4% (по данным ВСЖХ).

Пример 6. 11,5 г толуол-4-сульфоновой кислоты (150 мол.) при 27^oC в атмосфере азота растворяют в 90 мл N,N'-диметилформамида и 80 мл воды, содержащей 0,4% 2-меркаптоэтанола. В раствор быстро вводят 20 г чистой (6R, S)-ТГФК. Полученный раствор разбавляют 160 мл воды и охлаждают до 20^oC. Через 15-20 часов отфильтровывают выпавший продукт и промывают его смесью N, N'-диметилформамида и воды, а затем этанолом.

В результате получают 11,0 г соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 91,5% (по данным ВСЖХ).

Пример 7. 12 г бензолсульфоновой кислоты (150 мол.) при 70^oC в атмосфере азота растворяют в 440 мл воды, содержащей 0,1% 2-меркаптоэтанола. В течение 5 минут в раствор вводят 25,0 г чистой (6R,S)-ТГФК. Полученную взвесь охлаждают до 60^oC. Через 2-5 часов отфильтровывают выпавший продукт и промывают его водой и этанолом.

В результате получают 13,8 г соли присоединения (6S)-ТГФК к бензолсульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 92,4% (по данным ВСЖХ).

10,0 г полученной таким образом соли присоединения (6S)-ТГФК к бензолсульфоновой кислоте при 25^oC в атмосфере азота взвешивают в 100 мл воды, а 30%-ным раствором едкого натра доводят значение pH взвеси до > 3,5. Значение pH полученного в результате раствора с помощью 37%-ной соляной кислоты доводят до <1. Через 12 часов отфильтровывают выпавший продукт, который затем промывают водой и этанолом.

Получают 9,0 г соли присоединения (6S)-ТГФК к бензолсульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 99,8% (по данным ВСЖХ).

[]²_D⁵= -63,5(C=1% в ДМФ) Если заменить в этом примере 150 мол. бензолсульфоновой кислоты 55 мол. бензолсульфоновой кислоты и 50 мол. соляной кислоты, то в одинаковых условиях кристаллизации получают 12,7 г соли присоединения (6S)-ТГФК к бензолсульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 91,6% (по данным ВСЖХ).

Для высвобождения (6S)-ТГФК значение pH фильтрата с помощью раствора едкого натра доводят до 3,5. После охлаждения до 5^oC отфильтровывают выпавший продукт и промывают его водой и этанолом.

10 г полученного остатка растворяют при 50^oC в атмосфере азота в 150 мл воды, содержащей 0,1% 2-меркаптоэтанола, и 39 мл 2 н. серной кислоты. После медленного охлаждения в течение 15 ч при 20^oC и последующего выдерживания в течение 12 ч отфильтровывают выпавший продукт и промывают его водой и этанолом.

Получают 9,7 г соли присоединения (6S)-ТГФК к серной кислоте с долей (6S)-компонента в 97,7% (по данным ВСЖХ).

Пример 8. 30 мл 2 M серной кислоты при 60^oC растворяют в 130 мл воды, содержащей 0,2% 2-меркаптоэтанола и 164 мл ледяной уксусной кислоты. В течение 5 минут в раствор вводят 20 г чистой (6R,S)-ТГФК. Полученный раствор охлаждают до 50^oC. Через час отфильтровывают выпавший продукт и промывают его водой и этанолом.

Получают 11,0 г соли присоединения (6S)-ТГФК к серной кислоте с долей (6S)-компонента в 65,5% (по данным ВСЖХ).

Путем двукратной перекристаллизации 10 г соли присоединения (6S)-ТГФК к серной кислоте из смеси диметилформамида и воды (1:3) получают 3,9 г соли присоединения (6S)-ТГФК к серной кислоте с долей (6S)-компонента в 94,3% (по данным ВСЖХ).

Пример 9. (6R,S)-ТГФК, полученную in sity по одному из способов, описанных в литературе (см. например, R.L. Blakley с сотр. Folates and Pterins, 1, 93-104 (1984 г)), как таковую подвергают реакции взаимодействия с толуол-4-сульфоновой кислотой.

50 г фолиевой кислоты при 25^oC в атмосфере азота взвешивают в 200 мл воды, как указано, например, автором C.Temple в J.Med. Chem. 22, 731 (1979 г. ). Используя примерно 40 г 30%-ного раствора едкого натра, доводят значение pH раствора до 12. После добавления 25 г боргидрида натрия (630 мол.) в 110 мл нагревают реакционную массу до 70-75^oC и выдерживают ее при этой температуре в течение 90 мин. Полученный таким образом раствор натриевой соли (6R, S)-ТГФК охлаждают до 25^oC, после чего по каплям добавляют 30 г толуол-4-сульфоновой кислоты (150 мол.), растворенной в 200 мл ледяной уксусной кислоты. С помощью 96 г 37%-й соляной кислоты доводят значение pH раствора до <1. Через 12 ч отфильтровывают выпавший продукт и промывают его смесью уксусной кислоты и воды, а затем этанолом.

Получают 32,9 г соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте с выходом в 82% и долей (6S)-компонента в 95,4% (по данным ВСЖХ). 3,0 полученной таким образом соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте при 25^oC в атмосфере азота взвешивают в 30 мл воды и с помощью около 3 г 30%-ного раствора едкого натра доводят значение pH взвеси до 11,6. К полученному в результате раствору добавляют 0,9 г толуол-4-сульфоновой кислоты (120 мол.), растворенной в 36 мл ледяной уксусной кислоты. Затем с помощью 22,2 г 37%-ной соляной кислоты доводят значение pH раствора до <1. Через 12 ч отфильтровывают выпавший продукт и промывают его смесью уксусной кислоты и воды, а затем этанолом.

Получают 1,81 г соли присоединения (6S)-ТГФК к толуол-4-сульфоновой кислоте с выходом в 100% и долей (6S)-компонента в 98,9% (по данным ВСЖХ).

Пример 10. Заменяя толуол-4-сульфоновую кислоту в примере 9 эквивалентным количеством бензолсульфоновой кислоты, аналогичным образом можно получить соль присоединения (6S)-ТГФК к бензолсульфоновой кислоте.

Получают 32,2 г соли присоединения (6S)-ТГФК к бензолсульфоновой кислоте с выходом в 80% и долей (6S)-компонента в 94,2% (по данным ВСЖХ).

Пример 11. Заменяя толуол-4-сульфоновую кислоту в примере 9 эквивалентным количеством серной кислоты, аналогичным образом можно получить сульфат (6S)-ТГФК кислоты.

Получают 27,1 г сульфата (6S)-ТГФК выходом в 85% и долей (6S)-компонента в 69,2% (по данным ВСЖХ).

Пример 12. Перекристаллизацией соли присоединения (6R,S)-ТГФК к метансульфоновой кислоте получают соль присоединения (6S)-ТГФК к метансульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 68,3% (по данным ВСЖХ).

Пример 13. Перекристаллизацией соли присоединения (6R,S)-ТГФК к этансульфоновой кислоте получают соль присоединения (6S)-ТГФК к этансульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 62,2% (по данным ВСЖХ).

Пример 14. Перекристаллизацией соли присоединения (6R,S)-ТГФК к фенилметансульфоновой кислоте получают соль присоединения (6S)-ТГФК к фенилметансульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 60,2% (по данным ВСЖХ).

Пример 15. Перекристаллизацией соли присоединения (6R,S)-ТГФК к камфор-10-сульфоновой кислоте получают соль присоединения (6S)-ТГФК к камфор-10-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 60,8% (по данным ВСЖХ).

Пример 16. Перекристаллизацией соли присоединения (6R,S)-ТГФК к нафталин-1-сульфоновой кислоте получают соль присоединения (6S)-ТГФК к нафталин-1-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 74,1% (по данным ВСЖХ).

Пример 17. Перекристаллизацией соли присоединения (6R,S)-ТГФК к нафталин-2-сульфоновой кислоте получают соль присоединения (6S)-ТГФК к нафталин-2-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 84,0% (по данным ВСЖХ).

Пример 18. Перекристаллизацией соли присоединения (6R,S)-ТГФК к нафталин-1,5-сульфоновой кислоте получают соль присоединения (6S)-ТГФК к нафталин-1,5-сульфоновой кислоте с долей (6S)-компонента в 65,8% (по данным ВСЖХ).

Пример 19. 50 г полученной по примеру 8 соли присоединения (6S)-ТГФК к серной кислоте при 20^oC в атмосфере азота растворяют в 500 мл воды с 200 мл 2-н. раствора едкого натра. После добавления 7,5 мл 36%-го формальдегида (125 мол.) к раствору добавляют смесь 275 мл ледяной уксусной кислоты и 275 мл 2 н. серной кислоты. После охлаждения до 2^oC отфильтровывают выпавший продукт и промывают его этанолом.

Получают 39,6 г 5,10-метилен-(6S)-ТГФ-кислоты с выходом в 98,6% и долей (6S)-компонента в 99,6% (по данным ВСЖХ).

Пример 20. 28 г полученной по примеру 10 соли присоединения (6S)-ТГФ-кислоты к бензолсульфоновой кислоте при температуре около 25^oC в атмосфере азота растворяют в 130 мл воды с 30%-ным раствором едкого натра. После добавления 44 мл 36%-ной муравьиной кислоты разделяют раствор пополам и к одной половине добавляют 3 г NaBH₄. Через 12 ч подкисляют раствор, добавляя к нему 10 мл 37% -ной соляной кислоты. Выпавший продукт отфильтровывают и промывают водой и этанолом.

Получают 11 г 5-метил-(6S)-ТГФК с выходом в 95,8% и долей (6S)-компонента в 99,5% (по данным ВСЖХ).

К другой половине раствора добавляют избыточное количество хлорида кальция, а выпадающий в осадок продукт отфильтровывают и промывают водой и этанолом.

Получают 14 г кальциевой соли 5-формил-(6S)-ТГФК с выходом в 96,2% и долей (6S)-компонента в 99,7% (по данным ВСЖХ).

Формула изобретения

1. Способ получения (6S)- или (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты или солей присоединения этой кислоты к серной кислоте или сульфоновым кислотам, отличающийся тем, что (6R, S)-тетрагидрофолиевую кислоту подвергают взаимодействию с серной кислотой или соответствующей сульфоновой кислотой, полученную соль присоединения к кислоте подвергают фракционной кристаллизации и при необходимости полученные соли обрабатывают основанием с выделением (6S)- или (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что кристаллизацию осуществляют в полярной среде, предпочтительно в воде или в смеси воды с низшей алифатической водорастворимой карбоновой кислотой, в частности с уксусной или молочной, или в смеси воды с жидким водорастворимым амидом, в частности с метилпирролидоном, формамидом, диметилформамидом или диметилацетамидом.

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что в качестве сульфоновой кислоты используют ароматическую сульфоновую кислоту с числом атомов углерода 6 14, аралифатическую сульфоновую кислоту с числом атомов углерода 7 9 или алифатическую сульфоновую кислоту с числом атомов углерода 1 3.

4. Способ по одному из п.1, 2 или 3, отличающийся тем, что в качестве соли присоединения используют соль присоединения к бензолсульфоновой кислоте, толуол-4-сульфоновой кислоте или к серной кислоте.

5. Соль присоединения (6S)-тетрагидрофолиевой кислоты к серной кислоте или сульфоновым кислотам, выбранным из ряда толуол-4-сульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, метан-, этан-, фенилметан-, камфор-10-, нафталин-1-, нафталин-2-сульфоновая кислота и нафталин-1,5-дисульфоновая кислота, или соль присоединения (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты к серной кислоте, или толуол-4-сульфоновой кислоте, или бензолсульфоновой кислоте.

6. Соль по п.5, представляющая собой бензолсульфонат (6S)-тетрагидрофолиевой кислоты или бензолсульфонат (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты.

7. Соль по п.5, представляющая собой толуол-4-сульфонат (6S)-тетрагидрофолиевой кислоты или толуол-4-сульфонат (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты.

8. Соль по п. 5, представляющая собой сульфат (6S)-тетрагидрофолиевой кислоты или сульфат (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты.

9. Соль по п.5, представляющая собой соль присоединения (6S)-тетрагидрофолиевой кислоты к метан-, этан-, или фенилметан-, или камфор-10-, или нафталин-1-, или нафталин-2- сульфоновым кислотам, или к нафталин-1,5-дисульфоновой кислоте.

10. Соли присоединений (6S)- или (6R)-тетрагидрофолиевой кислоты к сульфоновым кислотам или серной кислоте в качестве полупродуктов для получения оптически чистых 5,10-метилентетрагидрофолиевой, 5-метилтетрагидрофолиевой, 5-формилтетрагидрофолиевой кислоты и их солей с сильными основаниями и кислотами.