Способ получения 10-дезацетилбаккатина iii

Способ получения 10-дезацетилбаккатина iii

Реферат

 

Изобретением являются способы получения 10-дезацетилбеккатина III из различных частей тисса (Taxus sp.), отличающийся тем, что: 1)обрабатывают измельченные части тисса алифатическим спиртом для получения спиртового экстракта, содержащего 10-дезацетилбаккатин III, 2) разбавляют спиртовой экстракт, при необходимости концентрированный водой, 3) нерастворимые продукты, присутствующие в полученном водноспиртовом растворе, отделяют фильтрованием, декантацией или центрифугированием, 4) почти полностью удаляют спирт из полученного водно-спиртового раствора, 5) экстрагируют 10-дезацетилбаккатин III, содержащийся в полученной таким образом водной фазе, подходящим органическим растворителем, 6) удаляют растворитель из полученного таким образом органического экстракта, 7) селективно кристаллизуют 10-дезацетилбаккатин III из полученного таким образом остатка, потом 8) выделяют очищенный 10-дезацетилбаккатин III или 1) обрабатывают измельчнные части тисса алифатическим спиртом для получения спиртового экстракта, содержащего 10-дезацетилбаккатин III, 2) экстрагируют спиртовой экстракт органическим растворителем, 3) отделяют декантацией полученную водно-спиртовую фазу, 4) разбавляют водой водно-спиртовую фазу, 5) отделяют фильтрованием, декантацией или центрифугированием нерастворимые продукты, содержащиеся в полученном водно-спиртовом растворе, 6) экстрагируют 10-дезацетилбаккатин III из отфильтрованной водно-органической фазы органическим растворителем, 7) полностью или частично удаляют растворитель из органичесого экстракта, содержащего 10-дезацетилбаккатин III, 8) селективно кристализуют 10-дезацетилбаккатин III из раствора или полученного остатка в органическом растворителе и 9) выделяют 10-дезацетилбаккатин III. 2 с. и 30 з.п.ф-лы.

Изобретение относится к способам селективного получения промежуточных продуктов, используемых для полусинтетических способов получения таксола, таксотера или их аналогов из различных частей растений, содержащих эти промежуточные продукты.

Более конкретно, изобретение относится к получению 10-дезацетилбаккатина III из коры, ствола, корней или листьев различных видов тисса.

Таксол и таксотер, а также их аналоги общей формулы которые проявляют ценные противоопухолевые и противолейкемические свойства, представляют собой прекрасные химиотерапевтические агенты для лечения ряда раковых заболеваний, таких как, например, рак груди, простаты, ободочной кишки, желудка, почек или тестикул и, более конкретно, рака яичников.

Так, в общей формуле (I) Ar может означать возможно замещенный фенильный радикал, R может быть атомом водорода или ацетильным радикалом, или N-замещенным карбамоильным радикалом, R' является атомом водорода или N-замещенным карбамоильным радикалом и R₁ является фенильным радикалом или R₂-O-радикалом, в котором R₂ является алкильным, алкенильным, алкинильным, циклоалкильным, циклоалкенильным, бициклоалкильным, фенильным или гетероциклильным радикалом.

Таксол соответствует продукту общей формулы (I), в которой Ar и R₁ являются фенильным радикалом и R является ацетильным радикалом и R' является атомом водорода, а таксотер соответствует продукту общей формулы [1], в которой Ar является фенильным радикалом R и R' являются атомом водорода и R₁ является трет.-бутоксирадикалом.

Таксол, который существует в природном состоянии в различных видах тисса, в которых он находится в незначительных количествах, трудно выделить без проведения полной разрушающей обработки растения. Например, таксол может быть выделен по методике C. H.O. HUANG et coll., J. Natl. Prod., 49, 665 (1986), который заключается в обработке измельченной коры Taxus brevifolia метанолом, концентрировании экстракта, экстракции концентрата дихлорметаном, повторном концентрировании, диспергировании остатка в смеси гексан-ацетон (I-I по объему), очистке растворимой части хроматографией на колонке с флорисилом для получения сырого таксола, который очищают последовательными перекристаллизациями из смесей метанол-вода и гексан-ацетон, потом хроматографией и снова кристаллизацией. Количества экстрагированного таким образом таксола могут составлять от 0,005 до 0,017% от обработанной части растения.

Таксотер, который не существует в природном виде, может быть получен полусинтетическим путем из 10-дезацетилбаккатина III формулы: по методикам которые описаны, например, в патентах США N 4814470 или N 4924012 или в международной заявке PCT WO 92/09589.

Таксол также может быть получен по способам, которые включают применение 10-дезацетилбаккатина III, или проходя через промежуточное получение таксотера в условиях, описанных в патенте США N 4857653, или через этерификацию баккатина III в условиях, описанных в европейских патентах EP 400971 или EP 428376, или путем этерификации 10-дезацетилбаакатина баккатина III и ацетилирования в условиях, описанных в патенте США N 4924011.

Различные виды тисса (Taxus baccata, Taxus brevifolia, Taxus canadensis, Taxus cupidata, Taxus floridana, Taxus media, Taxus wallichiana) содержат производные таксана, основная часть которых по существу является таксолом и 10-дезацетилбаккатином III, другие производные, более конкретно, являются цефаломаннином, 10-дезацетилцефаломаннином или баккатином III, необязательно связанными с сахарами.

Тогда как таксол находится главным образом в стволе и в коре, 10-дезацетилбаккатин III находится главным образом в листьях. Кроме того, содержание 10-дезацетилбаккатина III в листьях обычно превышает концентрацию в них таксола, который находится в коре, стволе или в листьях.

Результатом этого является то, что особенно важно иметь возможность располагать 10-дезацетилбаккатином III, что является существенным при получении намного более значительных количеств таксола, чем при прямой экстракции из тисса, а также при получении таксотера.

При экстракции 10-дезацетилбеккатина III из листьев тисса не проводят полного разрушения растения, листья которого могут быть использованы снова после каждого цикла роста.

Обычно известные способы экстракции производных таксана, содержащихся в различны частях тисса (кора, ствол, корни, листья ...) требуют применения длительных и дорогостоящих хроматографических методик, которые позволяют полностью и количественно разделить производные таксана, исходно присутствующие в растении.

Согласно способу, описанному в патенте США N 4814470, в котором применяют мацерацию хвои в этаноле, экстракцию таким органическим растворителем, как метиленхлорид, и последовательные хроматографии, можно выделить примерно 40% 10-дезацетилбаккатина, содержащегося в листьях.

Различные компоненты производных таксана, присутствующие в различных частях тисса, также могут быть выделены по способам с применением "обратной" жидкофазной хроматографии, которые описаны, в частности в международной заявке PCT WO 92/07842. Эти способы по существу заключаются в обработке сырых экстрактов тисса "обратной" жидкофазной хроматографией на адсорбенте, на котором фиксируются производные таксана, элюировании производных таксана и их выделении. Согласно этому способу можно выделить примерно 25% 10-дезацетилбаккатина III, содержащегося в листьях.

Теперь обнаружено, что и это является объектом изобретения, что 10-дезацетилбаккатин III может быть селективно экстрагирован из различных частей тисса и, более конкретно, из листьев простым способом, не требующим хроматографических методик. Например, можно экстрагировать примерно 75% 10-дезацетилбаккатина III, имеющегося в листьях.

Более конкретно, способ согласно изобретению заключается в том, что 1) обрабатывают измельченные части тисса (Taxus Sp.) алифатическим спиртом, чтобы получить спиртовой экстракт, содержащий 10-дезацетилбаккатин III, 2) разбавляют водой спиртовой экстракт, необязательно концентрированный, 3) отделяют нерастворимые продукты, имеющиеся в полученном водно-спиртовом растворе, фильтрацией, декантацией или центрифугированием, 4) почти полностью удаляют спирт из водно-спиртового раствора, 5) экстрагируют 10-дезецетилбаккатин III из полученной таким образом водной фазы с помощью подходящего органического растворителя, 6) удаляют растворитель из полученного таким образом органического экстракта, содержащего 10-дезацетилбаккатин III, 7) селективно кристаллизуют 10-дезацетилбаккатин III из полученного таким образом остатка в органическом растворителе, 8) выделяют очищенный 10-дезацетилбаккатин III, или же в том, что: 1) обрабатывают измельченные части тисса (Taxus Sp.) алифатическим спиртом, чтобы получить спиртовой экстракт, содержащий 10-дезацетилбаккатин III, 2) экстрагируют спиртовой экстракт органическим растворителем, 3) отделяют декантацией полученную водно-спиртовую фазу, 4) разбавляют водой водно-спиртовую фазу, 5) отделяют нерастворимые продукты, имеющиеся в полученном водно-спиртовом растворе, фильтрацией, декантацией или центрифугированием, 6) экстрагируют 10-дезапетилбаккатин III из отфильтрованной водно-спиртовой фазы органическим растворителем, 7) удаляют полностью или частично растворитель из органического экстракта, содержащего 10-дезацтилбаккатин III, 8) селективно кристаллизуют 10-дезацетилбаккатин III из раствора или полученного остатка в органическом растворителе, 9) выделяют очищенный 10-дезацетилбаккатин III.

Способ согласно изобретению может быть осуществлен с любой подходящей частью тисса, такой как кора, ствол, корни или листья. Тисс, используемый для осуществления способа согласно изобретению, предпочтительно относится к видам Taxus baccata, Taxus brevifolia, Taxus canadensis, Taxus cupidata, Taxus floridana, Taxus media или Taxus wallichiana. Особенно выгодно использовать листья тисса (Taxus baccata, Taxus brevifolia), которые обычно более обогащены 10-дезацтилбаккатионом III. Для лучшего осуществления способа предпочтительно использовать различные части тисса в измельченной форме и необязательно высушенными. Используемые фрагменты могут иметь размеры от 0,5 мм до нескольких миллиметров. Из соображений удобства может быть выгодно использовать фрагменты, средние размеры которых менее 1 мм. Измельченные при необходимости высушенные части тисса могут быть получены путем проведения операций измельчения и при необходимости сушки, которые при необходимости предшествуют или следуют за операциями замораживания и размораживания свежих частей растений или включаются в операции замораживания и размораживания свежих частей растений.

Спиртовой экстракт получают при перемешивании смеси, которая может быть нагретой, измельченных и при необходимости высушенных частей тисса со спиртом, обычно выбранным из метанола, этанола, пропанола, изопропанола и трет-бутанола. Особенно выгодно использовать метанол.

Спиртовой экстракт, содержащий 10-дезацетилбаккатин III, может быть обработан по одной из следующих методик.

1) Спиртовой экстракт, содержащий 10-дезацетилбаккатин III, разбавляют при добавлении воды, чтобы получить водно-спиртовой раствор.

Для осуществления способа выгодно работать в определенных условиях разбавления и содержания спирта в водной фазе, чтобы избежать потерь 10-дезацетилбаккатина III и устранить по возможности большое количество нерастворимых продуктов. В этих условиях может быть необходимо концентрировать спиртовой экстракт, содержащий 10-дезацетилбаккатин III, до разбавления водой.

Более конкретно, разбавление при добавлении воды в спиртовой экстракт, при необходимости сконцентрированной отгонкой, предпочтительно при пониженном давлении должно быть выполнено таким образом, чтобы массовое отношение между разбавленной смесью и сухим материалом, содержащимся в спиртовом экстракте, было между 4 и 8, разбавленная смесь вода-спирт содержит 10-30 мас.% спирта.

Продукты, нерастворимы в полученном таким образом водно-спиртовом растворе, удаляют по обычным методикам, предпочтительно фильтрованием, декантацией или центрифугированием. Когда удаление проводят фильтрованием, может быть выгодным работать в присутствии фильтрующего агента, такого как инфузорная земля (цеолит), и флокулянта.

Предпочтительно удаление спирта из полученного таким образом водно-спиртового раствора осуществляют при отгонке, предпочтительно при пониженном давлении, при необходимости в присутствии противовспенивающего агента, чтобы избежать или ограничить термическое разложение компонентов в среде.

Обычно 10-дезацетилбаккатин III, содержащийся в полученном таким образом водном растворе, содержание спирта в котором обычно ниже 1%, экстрагируют один или несколько раз органическим растворителем, выбранным среди простых эфиров, таких как метил-трет.бутиловый эфир, этил-трет.бутиловый эфир, метил-н-бутиловый эфир, метил-н-амиловый эфир, этил-трет.амиловый эфир, трет. -бутил-изопропиловый эфир, этил-изобутиловый эфир, трет.-бутил-н-пропиловый эфир или этил-н-гексиловый эфир, и сложных алифатических эфиров, таких как этилацетат, пропилацетат, изопропилацетат, н-бутилацетат, трет. бутилацетат, метил-трет. бутилацетат, трет. бутил-пропионат, или трет-амилацетат. Особенно интересными являются метил-трет. бутиловый эфир, этил-трет.бутиловый эфир, этилацетат или н-бутилацетат. Еще более специально, выгодно использовать этилацетат н-бутилацетат.

2) Спиртовой экстракт, который содержит воду, происходящую из использованных листьев тисса, экстрагируют подходящим органическим растворителем, выбранным среди ароматических углеводородов, таких как толуол или ксилол.

Водно-спиртовой экстракт разбавляют добавлением воды таким образом, чтобы экстракт содержал 20 - 40% спирта, потом фильтруют или декантируют, или центрифугируют, чтобы отделить имеющиеся нерастворимые вещества. Полученный водно-спиртовой раствор, который содержит 10-дезацетилбаккатин III, экстрагируют один или несколько раз органическим растворителем, выбранным среди простых эфиров, таких как метил-трет. бутиловый эфир, этил-трет. бутиловый эфир, метил-н-бутиловый эфир, метил-н-амиловый эфир, этил-трет. амиловый эфир, трет. бутил-изопропиловый эфир, этил-изобутиловый эфир, трет. бутил-н-пропиловый эфир или этил-н-гексиловый эфир, и алифатических сложных эфиров, таких как этилацетат, пропилацетат, изопропилацетат, н-бутил-ацетат, трет. бутилацетат, метилтрет. бутилацетат, трет. бутилпропионат или трет. амилацетат. Особенно интересными являются метил-трет. бутиловый эфир, этил-трет. бутиловый эфир этилацетат или н-бутилацетат. Особенно предпочтительно использовать этилацетат или н-бутилацетат.

Органические экстракты, полученные тем или другим путем, при необходимости промывают водным раствором слабого основания (например, водным раствором карбоната натрия) и/или водой. После необязательной сушки из экстракта удаляют органический растворитель, полностью или частично, по обычным методикам и, в частности, отгонкой, возможно при пониженном давлении, чтобы получить раствор или остаток, обычно твердый, из которого выделяют 10-дезацетилбаккатин III.

Селективную кристаллизацию 10-дезацетилбаккатина III проводят из раствора в органическом растворителе или из смеси органических растворителей. В качестве растворителей, обеспечивающих селективную кристаллизацию 10-дезацетилбаккатина III, могут быть выгодно использованы нитрилы, такие как ацетонитрил или пропионитрил, при необходимости в смеси с алифатическим спиртом, таким как метанол, этанол, пропанол, изопропанол или н-бутанол, или со сложным алифатическим эфиром, таким как этилацетат, изопропилацетат, н-бутилацетат или трет. бутилацетат, или кетоном, таким как ацетон, метилэтилкетон, метилпропилкетон, метил-н-бутилкетон или метилизобутилкетон. Особенно выгодно проводить селективную кристаллизацию из ацетонитрила, при необходимости в присутствии этанола и/или ацетона, и/или этилацетата, и/или н-бутилацетата.

Выпавший в осадок 10-дезацетилбаккатин III может быть выделен фильтрованием, декантацией или центрифугированием.

10-Дезацетилбаккатин III, полученный согласно способу экстракции настоящего изобретения, может быть использован для получения таксола или таксотера, или их производных в условиях, описанных более конкретно в патентах EP 0253738, EP 0253739, EP 0336840, EP 0336841, WO 92/09589, EP 0400971 и EP 0423376.

Пример 1. В перколятор помещают 200 л метанола, 1,4 кг стекловаты и 250 кг измельченных листьев тисса (Taxus bassata), средний размер частиц которых составляет примерно 0,8 мм. Прибавляют 400 л чистого метанола. Проводят перколяцию, подавая в перколятор сверху свежий растворитель с расходом 870 л/ч и собирая метанольный экстракт внизу перколятора. Длительность перколяции составляет 5 ч при 20^oC. Собранный метанольный раствор упаривают при пониженном давлении (70-80 кПа) при 40^oC в испарителе, чтобы получить концентрат, в котором содержание сухого материала составляет 40 - 80 мас.%.

Используют метанольный экстракт, (полученный в описанных выше условиях), содержащий 353 г сухого экстракта, 420 г метанола и 40 г воды, количество имеющегося 10-дезацетилбаккатина III составляет 1130 мг.

В реактор емкостью 2 л вводят метанольный экстракт, потом при перемешивании 1590 см³ воды смесь перемешивают в течение часа, потом прибавляют последовательно 35 г цеолита при перемешивании в течение часа и 25 см³ флокулянта "ZETAG 87". Полученную в результате суспензию фильтруют через фильтр из спеченного стекла N 4 диаметром 130 мм. Нерастворимые продукты и цеолит промывают 100 г смеси вода - метанол (8 - 2 по массе).

Фильтрат помещают в реактор емкостью 2 л, потом прибавляют 2 см³ SILICONE 426R. Смесь разгоняют при пониженном давлении (7,3 - 11 кПа) при температуре 35 - 42^oC, температура наружной бани 45 - 50^oC. Получают 909 г дистиллята и 1432 г концентрата, содержащего 0,5% метанола.

Концентрат экстрагируют 1 раз 700 см³ этилацетата, потом 2 раза 350 см³ этилацетата. Объединенные органические фазы промывают 2 раза 700 см³ 0,1 М раствора карбоната натрия, потом 1 раз 350 см³ воды. Значение pH равно 8. Концентрируют досуха 1049 г органической фазы при пониженном давлении (1,33 - 21,3 кПа). Таким образом получают 16,2 г сухого вещества.

Пример 2. В емкость объемом 500 см³ вводят 45,5 г сухого экстракта, содержащего 9,3% 10-дезацетилбаккатина III, полученного в условиях, описанных в примере 1, потом прибавляют 18 см³ этилацетата. Гомогенную смесь перемешивают и нагревают до 50^oC. Затем прибавляют 136 см³ ацетонитрила в течение 15 мин при 50^oC. Суспензию перемешивают в течение примерно 1 ч, затем охлаждают до температуры около 20^oC в течение примерно 3 ч. Отфильтровывают осадок на фильтре из спеченного стекла N 3 (диаметр 35 мм), потом промывают 20 см³ ацетонитрила, затем 2 раза 20 см³ диизопропилового эфира. Продукт сушат при пониженном давлении (1,33 кПа) при 40^oC в течение 20 ч. Таким образом получают 5,2 г белого продукта, содержащего 75,8% 10-дезацетилбаккатина III.

Выход кристаллизации составляет 93,6%.

Пример 3. В емкость объемом 1 л вводят 275,2 г этилацетатного раствора 39,6 г сухого материала, содержащего 3,48 г 10-дезацетилбаккатина III. Этот раствор концентрируют при пониженном давлении (6,0 кПа). Собирают 164 г этилацетата. В концентрат добавляют 36 см³ этанола, потом охлаждают до 10^oC. Затем медленно, в течение 0,5 ч при перемешивании (30 об/мин) прибавляют 60 см³ ацетонитрила. Суспензию перемешивают в течение 1 ч при 10^oC, потом быстро прибавляют 84 см³ ацетонитрила. Перемешивают 15 ч при 10^oC. Осадок отфильтровывают на фильтре из спеченного стекла N 3 (диаметр 35 мм), потом промывают 2 раза 20 см³ ацетонитрила, потом 2 раза 20 см³ диизопропилового эфира. Продукт сушат в течение 12 ч при пониженном давлении (0,27 кПа) при 40^oC. Таким образом получают 2,85 г белого кристаллического порошка, содержащего 93,8% 10-дезацетилбаккатина III.

Маточные воды от кристаллизации и промывки (247 г) концентрируют при пониженном давлении (2,7 кПа) при 40^oC. Затем медленно прибавляют 72 см³ ацетонитрила. Смесь перемешивают в течение 15 ч при температуре около 20^oC. Осадок отфильтровывают и промывают 2 раза 5 см³ диизопропилового эфира. После сушки получают 0,662 г тонкого порошка, содержащего 62,7% 10-дезацетилбаккатина III.

Пример 4. Используют метанольный экстракт, полученный в условиях, описанных в примере 1, состоящий из 1840 г сухого экстракта, 1117 г метанола и 329 г воды, и содержащий 7,17 г 10-дезацетилбаккатина III.

В реактор емкостью 10 л вводят метанольный экстракт, потом 3 раза экстрагируют 1,5 л толуола при сильном перемешивании. Отделяют водно-метанольную фазу (3020 г) декантацией, разбавляют добавлением 3800 г воды, потом фильтруют. При этом отделяют 42 г остатка.

Отфильтрованный водно-метанольный раствор 3 раза экстрагируют 1540 см³ н-бутилацетата. Объединенные органические фазы концентрируют при пониженном давлении (1,33 кПа) при 40^oC, чтобы получить раствор, содержащий 30% сухого экстракта, потом фильтруют. Промывают 4 г полученного остатка 50 см³ н-бутилацетата. Объединяют органические фильтраты и снова концентрируют их при пониженном давлении (1,33 кПа) при 40^oC, чтобы получить раствор, содержащий 65% сухого остатка (или 95 г).

Полученный таким образом концентрат вводят в емкость объемом 500 см³. Прибавляют 45 см³ этанола. Гомогенную смесь перемешивают и нагревают до 40^oC. Затем в течение 1 ч прибавляют при 40^oC 270 см³ ацетонитрила. Суспензию охлаждают до -10^oC при постепенном перемешивании в течение 2 ч, потом выдерживают при -10^oC в течение ночи. Отфильтровывают осадок на фильтре из спеченного стекла, промывают 2 раза 35 см³ ацетонитрила, потом 2 раза 35 см³ диизопропилового эфира, потом сушат в течение ночи при пониженном давлении (1,33 кПа) при 40^oC.

Таким образом получают 5,92 г белого продукта, содержащего 84,2% 10-дезацетилбеккатина III.

Выход по отношению к 10-дезацетилбеккатину III, содержащемуся в исходном метанольном экстракте, составляет 69,5%.

Формула изобретения

1. Способ получения 10-дезацетилбаккатина III экстракцией различных частей тисса (Taxus sp.) алифатическим спиртом, отличающийся тем, что: 1) обрабатывают измельченные части тисса алифатическим спиртом для получения спиртового экстракта, содержащего 10-дезацетилбаккатин III, 2) разбавляют спиртовой экстракт, при необходимости концентрированный, водой, 3) нерастворимые продукты, присутствующие в полученном водно-спиртовом растворе, отделяют фильтрованием, декантацией или центрифугированием, 4) почти полностью удаляют спирт из полученного водно-спиртового раствора, 5) экстрагируют 10-дезацетилбаккатин III, содержащийся в полученной таким образом водной фазе, подходящим органическим растворителем, 6) удаляют растворитель из полученного таким образом органического экстракта, 7) селективно кристаллизуют 10-дезацетилбаккатин III из полученного таким образом остатка, 8) выделяют очищенный 10-дезацетилбаккатин III.

2. Способ получения 10-дезацетилбаккатина III экстракцией различных частей тисса (Taxus sp.) алифатическим спиртом, отличающийся тем, что: 1) обрабатывают измельченные части тисса алифатическим спиртом для получения спиртового экстракта, содержащего 10-дезацетилбаккатин III, 2) экстрагируют спиртовой экстракт органическим растворителем, 3) отделяют декантацией полученную водно-спиртовую фазу, 4) разбавляют водой водно-спиртовую фазу, 5) отделяют фильтрованием, декантацией или центрифугированием нерастворимые продукты, содержащиеся в полученном водно-спиртовом растворе, 6) экстрагируют 10-дезацетилбаккатин III из отфильтрованной водно-органической фазы органическим растворителем, 7) полностью или частично удаляют растворитель из органического экстракта, содержащего 10-дезацетилбаккатин III, 8) селективно кристаллизуют 10-дезацетилбаккатин III из раствора или полученного остатка в органическом растворителе, 9) выделяют 10-дезацетилбаккатин III.

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что получают спиртовой экстракт при перемешивании измельченных при необходимости высушенных частей тисса в алифатическом спирте, выбранном среди метанола, этанола, пропанола, изопропанола и трет.-бутанола.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что алифатическим спиртом является метанол.

5. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что измельченные, при необходимости высушенные части тисса получают при операциях измельчения и при необходимости сушки, которые могут предшествовать или следовать за операциями замораживания и размораживания свежих частей растения или включаются в операции замораживания и размораживания свежих частей растения.

6. Способ по одному из пп.1, 3, 4 или 5, отличающийся тем, что разбавляют водой метанольный экстракт, при необходимости концентрированный таким образом, чтобы соотношение между массами разбавленной смеси и сухого материала, содержащегося в спиртовом экстракте, составляло между 4 и 8 и чтобы разбавленная смесь вода-спирт содержала 10 - 30% спирта, чтобы получить водно-спиртовой раствор.

7. Способ по одному из пп.1, 3, 4 или 5, отличающийся тем, что нерастворимые продукты выделяют из водно-спиртового раствора фильтрованием, декантацией или центрифугированием.

8. Способ по одному из пп.1, 3, 4 или 5, отличающийся тем, что удаляют спирт из водно-спиртового раствора отгонкой, при необходимости при пониженном давлении.

9. Способ по одному из пп.1, 3, 4 или 5, отличающийся тем, что экстрагируют 10-дезацетилбаккатин III из водной фазы, полученной после удаления спирта, органическим растворителем.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что органический растворитель выбран среди простых эфиров и алифатических сложных эфиров.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что простые эфиры выбирают среди метил-трет. бутилового эфира, этил-трет.бутилового эфира, метил-н-бутилового эфира, метил-н-амилового эфира, этил-трет.амилового эфира, трет.бутилизопропилового эфира, этилизобутилового эфира, трет.бутил-н-пропилового эфира и этил-н-гексилового эфира.

12. Способ по п.9, отличающийся тем, что сложные алифатические эфиры выбирают среди этилацетата, пропилацетата, изопропилацетата, н-бутилацетата, трет.-бутилацетата, метил-трет.бутилацетата, трет.бутилпропионата и трет.амилацетата.

13. Способ по п.9, отличающийся тем, что органическим растворителем является этилацетат или н-бутилацетат.

14. Способ по пп.2 - 5, отличающийся тем, что спиртовую фазу экстрагируют органическим растворителем, выбранным среди ароматических углеводородов.

15. Способ по п.11, отличающийся тем, что ароматический углеводород выбран среди толуола и ксилола.

16. Способ по одному из пп.2 - 5, отличающийся тем, что разбавляют водно-спиртовую фазу, отделенную декантацией, при добавлении воды таким образом, чтобы содержание спирта в растворе составляло 20 - 40мас.%.

17. Способ по одному из пп.2 - 5, отличающийся тем, что нерастворимые продукты выделяют из разбавленного водно-спиртового раствора фильтрованием, декантацией или центрифугированием.

18. Способ по одному из пп.2 - 5, отличающийся тем, что экстрагируют 10-дезацетилбаккатин III из водно-спиртовой фазы органическим растворителем.

19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что растворитель выбран среди простых эфиров и алифатических сложных эфиров.

20. Способ по п.19, отличающийся тем, что простые эфиры выбирают среди метил-трет. бутилового эфира, этил-трет.бутилового эфира, метил-н-бутилового эфира, метил-н-амилового эфира, этил-трет.амилового эфира, трет.бутилизопропилового эфира, этилизобутилового эфира, трет.бутил-н-пропилового эфира и этил-н-гексилового эфира.

21. Способ по п.20, отличающийся тем, что сложные алифатические эфиры выбирают среди этилацетата, пропилацетата, изопропилацетата, н-бутилацетата, трет.бутилацетата, метил-трет.бутилацетата, трет.бутилпропионата, трет.амилацета.

22. Способ по п. 20, отличающийся тем, что органический растворитель является этилацетатом или н-бутилацетатом.

23. Способ по одному из пп.2 - 5, отличающийся тем, что полностью или частично концентрируют органический экстракт, содержащий 10-дезацетилбаккатин III, путем отгонки при необходимости при пониженном давлении.

24. Способ по одному из пп.1 - 5, отличающийся тем, что селективно кристаллизуют 10-дезацетилбаккатин III из органического растворителя, выбранного среди алифатических нитрилов, при необходимости, смешанных с алифатическим спиртом, или алифатическим сложным эфиром, или алифатическим кетоном.

25. Способ по п.24, отличающийся тем, что алифатические нитрилы выбраны среди ацетонитрила и пропионитрила.

26. Способ по п. 24, отличающийся тем, что алифатический спирт выбран среди метанола, этанола, пропанола, изопропанола и н-бутанола.

27. Способ по п. 24, отличающийся тем, что сложный алифатический эфир выбран среди этилацетата, изопропилацетата, н-бутилацетата и трет.бутилацетата.

28. Способ по п.24, отличающийся тем, что кетон выбран среди ацетона, метилэтилкетона, метилпропилкетона, метил-н-бутилкетона и метилизобутилкетона.

29. Способ по п. 24, отличающийся тем, что селективную кристаллизацию проводят из ацетонитрила, при необходимости ассоциированного с этанолом и/или этилацетатом, или н-бутилацетатом, и/или ацетоном.

30. Способ по одному из пп.1 - 5, отличающийся тем, что очищенный 10-дезацетилбаккатин III выделяют фильтрованием, декантацией или центрифугированием.

31. Способ по пп.1 - 30, отличающийся тем, что 10-дезацетилбаккатин III экстрагируют из листьев тисса.

32. Способ по п.31, отличающийся тем, что тисс принадлежит к разновидности Taxus Baccata, Taxus brevifloria, Taxus canadensis, Taxus cupidata, Taxus froridana, Taxus media или Taxus wallichiana.