Штамм а(47) иоганесбург (94)1 (нз n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для детей

Штамм а(47) иоганесбург (94)1 (нз n2) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для детей

Реферат

 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и касается получения вакцинного штамма для живой гриппозной интраназальной вакцины для детей, соответствующего по антигенным свойствам актуальному вирусу А/Иоганесбург/33/94 (Н3N2). Вакцинный штамм А/47/Иоганесбург/94/1 - реассортант, полученный путем скрещивания эпидемического вируса А/Иоганесбург/33/94(Н3N2) с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом А/Ленинград/134/47/57 (Н2N2) - донором аттенуации, безвредным для взрослых и детей, свойства которого дают возможность гарантированно получать реассортантные вакцинные штаммы из вновь появляющихся эпидемических вирусов. Штамм А/47/Иоганесбург/49/1 активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 32 - 34^oC, характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью. Реассортант унаследовал от эпидемического вируса два гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу) от эпидемического вируса и шесть мутантных генов, кодирующих негликозилированные белки от донора аттенуации. Штамм А/47/Иоганесбург/94/1 (Н3N2) ареактогенен для детей 3 - 15 лет при интраназальном введении. Штамм депонирован в ГИСК под N 392. Вакцинный штамм А/47/Иоганесбург/94/1 по биологическим свойствам и показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам фармакопейной статьей ФС 42-298 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3 - 14 лет. 1 табл.

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди детей 3 - 14 лет живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма A/47/Иоганесбург/94/1 (H3N2). Штамм вируса гриппа A (H3N2) (патент СССР N 1838404, опублик. 30.08.93, бюлл. N 32)-прототип, утратил антигенную актуальность и вследствие этого не может вызывать защитную реакцию во время эпидемии гриппа A(H3N2).

Задачей, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса A/Иоганесбург/33/94 (H3N2).

Вакцинный штамм A/47/Иоганесбург/94/1 (H3N2) получен методом генетической реассортации эпидемического вируса A/Иоганесбург/33/94 (H3N2) с холодоадаптированным штаммом A/Ленинград/134/47/57 (H2N2) - донором аттенуации с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу A/Лениград/134/47/57 (H2N2) ГИСК N 392 (ГИСК им. Л.А.Тарасевича).

Методом рестрикционного анализа амплифицированных ДНК копий фрагментов генома родительских и реассортантного вакцинного вирусов установлено, что вакцинный штамм A/47/Иоганесбург/94/1 (H3N2) унаследовал 6 генов, кодирующих внутренние белки PB1, PB2, PA, NP, M, NS от донора аттенуации, и 2 гена, кодирующих поверхностные белки HA (гемагглютинин) и NA (нейтраминидазу) от эпидемического вируса. Методом рестрикционного анализа ДНК копий генов вакцинного штамма также подтверждено наличие мутаций в генах, кодирующих негликозилированные белки, показанных для донора аттенуации A/Ленинград/134/47.

Вакцинный штамм A/47/Иоганесбург/94/1 (H3N2) является температурочувствительным (разность титров при 32^oC и 40^oC - 7.0 lg ЭИД 50/0,2 мл) и холодоадаптированным (разность титров при 32^oC и 25^oC - 3,5 lg ЭИД 50/0,2 мл).

Таким образом, представленный вакцинный штамм A/47/Иоганесбург/94/1 (H3N2) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса A/Иоганесбург/33/94 (H3N2), структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов, температурочувствительностью и хододоадаптированностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора аттенуации.

Морфология штамма - полиморфная, типичная для вируса гриппа.

Характеристика штамма. Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 32^oC в течение 48 ч - 8,0 lg ЭИД 50/0,2 мл.

Гемагглютинирующая активность - 1:256 - 1:512.

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5-и пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Штамм ареактогенен при интраназальном введении детям 3 - 14 лет.

Пример. Группу из 84 детей в возрасте 3 - 14 лет вакцинировали интраназально в объеме 0,5 мл реассортантным штаммом A/47/Иоганесбург/94/1 (H3N2) с инфекционной активностью 7,0 lg ЭИД 50/0,2 мл. Группа детей того же возраста из 32 человек получила плацебо.

Средние реакции с кратковременным повышением температуры свыше 37,6^oC не наблюдались. Показатель реактогенности составил 0%. Слабые температурные реакции до 37,5^oC - в 2-х случаях в группе вакцинируемых и в 2-х случаях в группе плацебо (см. таблицу).

Таким образом вакцинный штамм A/47/Иоганесбург/94/1 (H3N2) ГИСК N 392 по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам фармакопейной статьей ФС 42-298 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3 - 14 лет.

Формула изобретения

Штамм вируса гриппа А(47)Иоганесбург(94)1 (Н3 N2) ГИСК N 392, используемый для получения живой интраназальной гриппозной вакцины для детей.

РИСУНКИ

Рисунок 1