Производные галихондрина b, производные конденсированных пиранов (варианты), производные гидрированного фурана, производные гидрированного пирана, производные енона галихондрина b, производные енона норгалихондрина

Производные галихондрина b, производные конденсированных пиранов (варианты), производные гидрированного фурана, производные гидрированного пирана, производные енона галихондрина b, производные енона норгалихондрина

Реферат

 

Сущность: производные галихондрина могут быть использованы в медицине, при производстве протвоопухолевых лекарств и имеют структурную формулу I, приведенную в тексте описания, где R₁ и R₂ - C₁-C₆-алкил; A - незащищенная или защищенная группа формулы: - CH₂CH₂OH; B - незащищенная или защищенная OH-группа; m = n = 1. Промежуточные соединения имеют структурную формулу II, приведенную в тексте описания, где R₁ - C₁-C₆-алкил; R₂ - защищенная OH-группа, R₃0 - группа CHO, CO₂D, где D - C₁-C₅-алкил; R₄ - OH-группа незащищенная или защищенная; R₅ - OH-группа, защищенная или незащищенная или защищенная CH₂CH₂OH группа, структурную формулу III, приведенную в тексте описания, где X - OH-группа; R₁; R₂; R₃ - защищенная OH-группа; R₄ - CO₂D, где D -C₁-C₅-алкил; структурную формулу IV, приведенную в тексте описания, где R₁-R₅ - защищенная OH-группа; R₆ - кислород; R₇-R₈ - C₁-C₅-алкил; X - галоген; структурную формулу V, приведенную в тексте описания, где R₁-R₃ - защищенная OH-группа; R₄ -кислород; R₅-R₆ - C₁-C₅-алкил; R₇ - группа CO₂D, где D - C₁-C₅-алкил; X - галоген, структурную формулу VI, приведенную в тексте описания, где R₁-R₆ -защищенная OH-группа, R₈-R₁₁ - C₁-C₅-алкил; R₁₂-R₁₃ - метилиден; R₁₄-R₁₅ - кислород, структурную формулу VII, приведенную в тексте описания, где R₁-R₄ -защищенная OH-группа; R₅-R₈ - C₁-C₅-алкил; R₉-R₁₀ -метилиден; R₁₁ - группа CO₂D, где D - C₁-C₅-алкил; R₁₂ и R₁₃ - атом кислорода. 7 с. и 9 з.п. ф-лы, 2 табл., 3 ил.

Изобретение было разработано при поддержке Национального института здравоохранения, Национального института рака (разрешение N 5 P37 CA22215). В соответствии с этим правительство США имеет определенные права на это изобретение.

Данная заявка является частичным продолжением заявки на патент США рег. N 07/849769, поданной 12 марта 1992 г.

Изобретение относится к галихондринам, и к родственным им соединениям, таким, как синтетические промежуточные соединения галихондринов, а также к производным указанных промежуточных соединений.

Галихондрины представляют собой класс полиэфирных макролидов, первоначально выделенных из морских губок Halichondria okadai Kadota. Примерами галихондринов являются галихондрин B, норгалихондрин B и гомогалихондрин B, структуры которых были полностью выявлены. Галихондрины обладают исключительно высокой in vitro и in vivo - противоопухолевой активностью. Однако очень ограниченные запасы галихондринов в природе не позволяют полностью оценить их возможное клиническое применение.

В одном из своих вариантов изобретение относится к новым соединениям, которые могут быть использованы для синтеза галихондрина B и норгалихондрина B, а также к производным этих новых соединений.

Один класс соединений по изобретению имеет следующую формулу: где каждый из R₁ и R₂ представляет собой H- или C₁-C₁₀-алкил, алкенил или алкинил (предпочтительно, C₁-C₆-алкил, например, метил); а каждый из A и B представляет собой H-, HO- со спиртозащитной группой или без таковой; незамещенный углеводород, или замещенный углеводород со спиртозащитной группой или без таковой; где полное число атомов углерода в A и B составляет 0 - 18 (без учета атомов углерода в любых спиртозащитных группах, если они присутствуют); и каждый из m и n является 0 - 3 (предпочтительно 1). Если оба A и B являются замещенными или незамещенными углеводородами, то они могут быть соединены вместе в одном или нескольких положениях.

Следует отметить, что линия между двумя атомами в структурных формулах, приведенных в описании, означает простую связь, если это не оговорено особо.

Термин "замещенный углеводород" или "замещенный алкил" означает углеводород или алкил, который содержит функциональную группу, такую, как галоген, кето, сложноэфирная группа, аминогруппа, или спиртовая группа (-OH). Если функциональной группой является -OH, то эта группа может быть защищена спиртозащитной группой. Примерами спиртозащитных групп служат, но не ограничиваются ими, следующие группы: R₅-O-, R₅-CO-O-,R₅-O-CO-O-, или , где R₅ представляет собой C₁-C₁₀-алкил, C₂-C₁₀-алкенил, C₂-C₁₀-алкинил, C₇-C₂₀-аралкил, C₇-C₂₀-алкарил, фенил, или тетрагидропиранил, а каждый из R₆, R₇ и R₈ представляет собой C₁-C₆-алкил, C₂-C₆-алкенил или фенил. При этом следует отметить, что кислород, присутствующий в правом конце перечисленных спиртозащитных групп, является тем же самым кислородом, который присутствует в защищаемой -OH-группе.

Ниже приводятся примеры четырех спиртозащитных групп: p-метоксифенилметил (MePhCH₂O- или "MPM"), (т-бутилдиметилсилил или "TBS"), пивалоил ("Py") и CH₂-CH-CH₂-O-CO-O-.

Предпочтительно, чтобы каждый из A и B в указанной формуле представлял собой HO-; HO-группу, связанную со спиртозащитной группой; или замещенный углеводород, выбранный из группы, состоящей из R₃-CO-R₄-; R₃-CH(OH)-R₄; R₃-CH(OH)-R₄-, связанной со спиртозащитной группой; R₃-O-CO-; R₃-O-CO-R₄; HO-R₄-; и HO-R₄-, связанной со спиртозащитной группой, где каждый из R₃ (одновалентный) и R₄ (двухвалентный) представляет собой алкил, алкенил или алкинил. Предпочтительно также, чтобы полное число атомов углерода в A и B составляло 0 - 15 или 0 - 12 (без учета углерода, присутствующего в спиртозащитных группах, если они присутствуют), а каждый из m и n составлял 0 - 2.

В некоторых предпочтительных соединениях рассматриваемого класса каждый из A и B представляет собой HO-; HO-, связанную со спиртозащитной группой; HO-R₄-; или HO-R₄-, связанную со спиртозащитной группой. Особенно предпочтительно, чтобы A представлял собой HO-R₄- или HO-R₄-связанную со спиртозащитной группой.

В соединении, заявленном в п. I формулы изобретения, стереохимия C.25, C.31, C.35 и C.36 представляет собой либо R, S, R и R, либо S, R, S и S, соответственно.

Изобретение также относится к способу введения терапевтически эффективного количества одного или нескольких описанных соединений в целях ингибирования роста опухоли (например, меланомы, фибросаркомы, моноцитарного лейкоза, карциномы толстой кишки, карциномы яичника, карциномы молочной железы, остеосаркомы, или ras-трансформирующей фибробластомы) у млекопитающих.

Другим классом соединений по изобретению являются соединения, имеющие формулу: где R₁ представляет собой H или C₁-C₁₀-алкил (например, метил), каждый из R₂ и R₄ представляет собой -OH-группу, или защищенную -OH-группу; R₃ представляет собой -CH₂-B, -CO-O-D, или -CH-O; а R₅ представляет собой -CHO, -CH₂-B, или -CO-O-D, B является -OH-группой или защищенной -OH-группой, D является -H или C₁-C₁₀-алкилом, а E является замещенным или незамещенным C₁-C₃₀ или C₁-C₁₀-алкилом. Например, R₂ может представлять собой -OMPM, R₄ может представлять собой -OTBS, а R₅ может представлять собой -CH₂-OTBS (т. е., -CH₂-B, где B является -OTBS). Предпочтительно, R₄ является TBSO-, а R₅ является TBSO-CH₂-.

В одном примере соединений этого класса, R₃ имеет следующую формулу: где R₆ представляет собой -H или C₁-C₁₀-алкил (например, метил); R₇ представляет собой -COH, -CH₂-B, или -CO-O-D; а каждый из R₈ и R₉ представляет собой -H, метилиден (т.е., =CH₂), C₁-C₅-алкил (например, метил) или C₂-C₅-алкенил. Предпочтительно, чтобы R₁ представлял собой метил, а R₅ представлял собой CH₂-B. Линия между R₈ (или R₉) и атомом на кольце, с которым он связан, означает либо простую связь (если R₈/R₉ является H), либо двойную связь (если R₈/R₉ является =CH₂).

Другим примером соединений этого класса являются соединения формулы: где каждый из R₁₀, R₁₁ и R₁₂ является -OH или защищенной -OH. Предпочтительно, чтобы каждый из R₁ и R₆ представлял собой метил, R₄ представлял собой защищенную -OH-группу, R₅ представлял собой -CH₂-B, а каждый из R₈ и R₉ представлял собой метил или метилиден. Особенно предпочтительно, чтобы R₄ представлял собой TBSO-, а R₅ представлял собой TBSO-CH₂-.

Еще одним примером соединений этого класса являются соединения формулы: В этих соединениях предпочтительно, если каждый из R₁ и R₆ являются метилом, R₄ является защищенной -OH-группой (например, TBSO-), R₅ является -CH₂-B (например, TBSO-CH₂-), а каждый из R₈ и R₉ является метилом или метилиденом.

Еще одним классом соединений изобретения являются соединения следующей структуры.

где X представляет собой галоген (например, -I или -Br) или активированный спирт (например, -OSO₂CF₃); каждый из R₁, R₂ и R₃ представляет собой -OH или защищенную OH; а R₄ представляет собой -CHO, -CH₂-B, или -CO-O-D; где B является -OH или защищенной -OH, и D является -H или C₁-C₁₀-алкилом. Предпочтительно, если каждый из R₁, R₂ и R₃ представляет собой -OTBS, а R₄ представляет собой -CO-OCH₃.

Еще одним классом соединений изобретения являются соединения следующей структуры: где каждый из R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ представляет собой -OH или защищенную -OH; R₆ представляет собой O или защищенный кетон; каждый из R₇ и R₈ представляет собой -H, C₁-C₅-алкил, или C₂-C₅-алкенил; а X представляет собой галоген (-I или -Br) или активированный спирт (например, -OSO₂CF₃). Примерами подходящих защищенных кетонов по изобретению являются, но не ограничиваются ими, . Углерод у левого конца является углеродом кетона (т.е., , который требует защиты. В предпочтительном соединении, каждый из R₁, R₂, R₃ и R₄ является TBSO-; R₅ является -OMPM; R₆ является O; каждый из R₇ и R₈ является метилом, а X является йодом. Стереохимия C.46, C.47, C.50, C.51, и C.53 представляет собой, предпочтительно, S, S, S, S и R, соответственно.

Другим классом соединений изобретения являются соединения следующей структуры: где каждый из R₁, R₂ и R₃ представляет собой -OH или защищенную -OH; R₄ представляет собой O или защищенный кетон; каждый из R₅ и R₆ представляет собой -H или C₁-C₅-алкил; R₇ представляет собой -CH₂-B, -CHO или -CO-O, X представляет собой галоген или активированный спирт, где B является -OH или защищенной -OH, а D является -H или C₁-C₁₀-алкилом. Стереохимия C.42, C.48 и C. 50 предпочтительно представляет собой S, S и R соответственно. В наиболее предпочтительном соединении, каждый из R₁ и R₂ является TMSO-; R₃ является -OMPM; R₄ является O; каждый из R₅ и R₆ является метилом; R₇ является -CO-OCH₃; X является йодом; а стереохимия C.46 и C.51 представляет собой S и R соответственно.

Еще одним классом соединений изобретения являются соединения следующей структуры где каждый из R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ и R₆ представляет собой -OH или замещенную -OH; каждый из R₈, R₉, R₁₀ и R₁₁ представляет собой -H, C₁-C₅-алкил, или C₂-C₅-алкенил; каждый из R₁₂ и R₁₃ представляет собой метил или метилиден; каждый из R₁₄ и R₁₅ представляет собой O или защищенный кетон. Стереохимия C.42, C.46, C.47, C.48, C.50, C.51 и C.53 предпочтительно представляет собой S, S, S, S, S, S и R соответственно. В наиболее предпочтительном соединении, каждый из R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ является TBSO-; R₅ является -OMPM; R₇ является O или защищенным кетоном; каждый R₈, R₉, R₁₀ и R₁₁ является -H или C₁-C₅-алкилом; а каждый из R₁₂ и R₁₃ является метилом или метилиденом.

В объем изобретения также входят соединения формулы: где каждый из R₁, R₂, R₃ и R₄ представляет собой -OH или защищенную -OH; каждый из R₅, R₆, R₇ и R₈ представляет собой -H, C₁-C₅-алкил, или C₂-C₅-алкенил; каждый из R₉ и R₁₀ представляет собой метил или метилиден; R₁₁ представляет собой - CHO, -CH₂-B или -CO-O-D; каждый R₁₂ и R₁₃ представляет собой O или защищенный кетон; где B представляет собой -OH или защищенную -OH, а D представляет собой -H или C₁-C₁₀-алкил. Стереохимия C.42, C. 48 и C.50 предпочтительно представляет собой S, S и R соответственно. В наиболее предпочтительном соединении, каждый из R₁, R₂ и R₄ представляет собой TBSO-; R₃ представляет собой -OMPM; каждый из R₅, R₆, R₇ и R₈ представляет собой метил; каждый из R₉ и R₁₀ представляет собой метилиден; R₁₁ представляет собой -CO-OCH₃.

Изобретение также относится к способу синтеза новых соединений и использования этих соединений в химическом синтезе. Один из наиболее предпочтительных способов предусматривает осуществление Ni(II)/Cr(II)-опосредованной реакции взаимодействия альдегида с винилгалидом. Эта реакция приводит к непосредственному образованию углерод-углеродной связи между химически нестабильными группами. Как будет показано ниже, для синтеза галихондрина B и норгалихондрина B с хорошим выходом может быть использована Ni(II)/Cr(II)-опосредованная реакция с образованием углерод-углеродных связей между C₁₁ и C₁₂, ₁₃ и C₁₄, ₂₆ и C₂₇, C₂₉ и C₃₀, и C₃₈ и C₃₉.

Таким образом, соединения и методы по изобретению дают возможность синтезировать галихондрины с относительно хорошим выходом. Кроме того, изобретение позволяет получить конечные материалы в количествах, достаточных для проведения исследований полного спектра их биологических активностей. Указанный метод позволяет также получать новые соединения в чистом виде.

Другие отличительные особенности и преимущества изобретения будут понятны из нижеследующего подробного описания предпочтительных вариантов его осуществления, иллюстрируемых фиг.1-3, а также из формулы изобретения.

На фиг.1 приведены структуры галихондрина B, норгалихондрина B, и гомогалихондрина B, на фиг.2 - структуры енона галихондрина B и енона норгалихондрина; на фиг. 3 - структуры четырех испытуемых соединений, родственных галихондрину.

Соединения по изобретению могут быть использованы для синтеза галихондрина B1 и норгалихондрина B2 (структуры которых показаны на фиг.1).

Схему 1 и 2, приведенные в конце текста описания, в совокупности иллюстрируют общий метод синтеза двух указанных соединений. Далее будет показано, что предпочтительные соединения могут быть модифицированы, например, с использованием различных стандартных спиртозащитных групп и той же самой общей схемы для синтеза соединений 1 и 2. Будет также показано, что для синтеза аналогов соединений 1 и 2 исходные соединения могут быть слегка модифицированы (например, путем замещения метильной группы этилом).

Схема 1 иллюстрирует синтез правой половины ряда соединений галихондрина B (т.е., галихондрина B, норгалихондрина B и гомогалихондрина B). Связь C.21 - C.22 (т.е., связь между атомами углерода в положениях 21 и 22) может быть образована в результате реакции окисления первичного спирта 3 (реакция Десс-Мартина) с получением альдегида; реакции Хорнера-Эммонса в условиях строгого контроля; и сопряженной реакции восстановления полученного енона с использованием реагента Страйкера без изомеризации двойной связи. Восстановлением водородом полученного насыщенного кетона дает смесь двух возможных диастереоизомеров в соотношении приблизительно 1:1. Без установления стереохимии диастереомерных спиртов оба диастереомера затем трансформируют отдельно в соответствующие мезилаты, которые используют в последующей реакции сочетания. Однако важно отметить, что указанные два диастереоизомерных спирта легко превращаются друг в друга с помощью реакции Mitsunomu.

В результате Ni(II)/Cr(II)-опосредованной реакции сочетания соединения 5 с соединением 6 получают смесь двух возможных аллиловых спиртов в соотношении приблизительно 6:1, которую затем подвергают реакции циклизации, индуцированной с помощью основания, и получают нужный тетрагидропиран с полным выходом 50 - 60%, и небольшое количество нежелательного диастереомера. Стереохимия в положениях C.23 и C.27 может быть установлена с помощью NOE-экспериментов. Соединение 5 (мезилат) является абсолютно лабильным, очевидно благодаря участию C.20-эфирного кислорода вместе с мезилатной группой. При этом было обнаружено, что соединение 5 является достаточно устойчивым в условиях Ni(II)/Cr(II)-реакции сочетания.

Ni(II)/Cr(II)-опосредованная реакция сочетания C.14-альдегида, полученного из соединения 7, с соединением 8, и последующая реакция окисления Dess-Martin дают транс-енон с полным выходом 77%. После удаления р-метоксифенилметильной ("МРМ") группы в положении С.30 и гидролиза метилового сложного эфира в положении С.1, указанный енон подвергают лактонизации в условиях Yamaguchi, в результате чего получают лактоненон 9 с полным выходом 63%.

Полициклическая кольцевая система вокруг С.8 - С.14 - части четко и эффективно образуется после обработки соединения 9 соединением (n-Bu)₄ NF ("TBAF"), а затем p-Ts OHPy ("PPTS"), с выходом 64%. ¹H-ЯМР-спектр показал, что продукт TBAF-стадии является главным образом насыщенным кетоном. Региоселективность реакции Михаэля является исключительно высокой в отношении образования нужного пятичленного кольца, тогда как стереоселективность в отношении нужного диастереомера составляет приблизительно (5-6):1. Нежелательный аддукт реакции Михаэля, выделенный из нужного продукта после PPTS - обработки, может быть затем рециркулирован в TBAF-условиях. И, наконец, после корректировки защитных групп полициклического продукта получают правую половину 10 соединений ряда галихондринов B. Альтернативный синтез полициклической кольцевой системы из соединений 7 и 8 показан ниже (см. пример 2, часть, озаглавленную "Соединение 10").

Теперь рассмотрим схему 2. Реакцию сочетания правой половины 10 галихондрина B с левой половиной II осуществляют с использованием Ni(II)/Cr(II), после реакции окисления Dess-Martin, в результате чего получают ожидаемый транс-енон с полным выходом 60% (схема 2). Затем, в трех стадиях без выделения продукта в каждой стадии, полученный енон превращают в галихондрин B. ¹Р-ЯМР-спектр показал, что продукт TBAF-стадии имел частично структуру A. Этот способ предусматривает разблокирование т-бутилдиметилсилильной ("TBS") группы в положении С.48, образование гемикеталя С.48-гидроксильной группой и С. 44-кетоном и присоединение (реакция Михаэля) гидроксильной группы гемикеталя к ненасыщенному , -кетону. Затем завершают образование 5,5-спирокеталя путем разблокирования С.41 МРМ-группы с последующей обработкой кислотой. Гидроксильная группа у С.41 должна быть защищена отдельно от других, для того, чтобы избежать образование спирокеталя между гидроксильными группами у С. 41 и С. 48 и С.44-кетоном. Хотя эта трехстадийная трансформация вводит три новых хиральных центра, однако ее стереоселективность является очень высокой. Полный выход описанной трехстадийной трансформации составляет 50 - 50%, а полученный в результате этой трансформации синтетический галихондрин B идентичен натуральному галихондрину B1, что было подтверждено спектроскопическими (¹Н-ЯМР, МС, ИК, []²_D¹ ) и хроматографическими данными.

Синтез норгалихондрина B2 осуществляют практически тем же способом, что и галихондрин B за исключением того, что гидролиз С.53-метилового сложного эфира необходимо проводить в самой последней стадии синтеза. Полный выход синтеза норгалихондрина B составляет величину, сравнимую с полным выходом галихондрина B. Сравнение данных спектроскопии (¹Н-ЯМР, МС, ИК, []²_D¹ ) и хроматографии показали, что полученный синтетический норгалихондрин B идентичен натуральному норгалихондрину B2.

Относительно структуры галихондрина B, норгалихондрина B и гомогалихондрина B ранее были сделаны предварительные заключения, которые опирались главным образом на три очевидных факта, а именно: 1) сравнение данных спектроскопии с данными, полученными для структуры норгалихондрина A, которая была совершенно точно установлена с помощью рентгеновского анализа; 2) биогенетические соображения относительно стереохимии галихондрина Bs в положении С. 50 и далее и 3) предположение о том, что абсолютная стереохимия галихондрина Bs идентична стереохимии норгалихондрина A, которая была установлена исходя из экситонной хиральности его С.12, С.13-бис-n-бромбензоатов. Благодаря описанному синтезу была точно установлена относительная и абсолютная стереохимия галихондрина B и норгалихондрина B.

Процедуры полного химического синтеза галихондрина B1 и норгалихондрина B2 более подробно описаны ниже и включают в себя получение различных соединений, входящих в объем изобретения. Кроме того, ниже описаны процедуры для получения других соединения по изобретению, которые являются родственными галихондринам. В описании изобретения представлены также результаты биологических тестов, проиллюстрировавших противоопухолевую активность некоторых синтетических соединений, которые являются родственными галихондринам. Эти результаты показали, что противоопухолевая активность галихондрина Bs может быть в значительной степени отнесена на счет правой половины его молекулы.

При этом следует отметить, что в следующих примерах во избежание повторений не использовали тех же самых или сходных реакционных условий. В любом случае любой специалист исходя из подробных описаний приведенных примеров, может получить соединения по изобретению.

Синтез галихондрина B и норгалихондрина B.

Соединение 1.

Соединение 1, галихондрин B получали из соединений 10 и 11 с помощью следующей процедуры: (1) Получение C₃₈-альдегида.

К перемешанному раствору C₃₈-спирта (т.е. соединения 10, имеющего 38-углеродный скелет) (8,1 мг, 9,0 мкМ) в метиленхлориде (1,0 мл), при комнатной температуре добавляли твердый NaHCO₃ (50 мг), а затем периодинановый реагент Dess-Martin (15 мг, 36 мкМ). Через 30 мин добавляли еще 15 мг (36 мкМ) реагента Dess-Martin. Через 90 мин (всего), ТСХ (этилацетат/гексан, 2:1) указывала на отсутствие эфира (59 мл) и водного раствора насыщенного гидрокарбоната натрия (5 мл), содержащего Na₂S₂O₃ (10 мас.%). Затем полученную двухфазовую смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин. Выделенную органическую фазу еще раз промывали смесью NaHCO₃/Na₂S₂O₃ в течение 10 мин, а затем водой (5 мл) и солевым раствором (5 мл). После этого органическую фазу осушали сульфатом натрия, фильтровали через стекловату и концентрировали. Полученный таким образом C₃₈-альдегид ( 8 мг, 8,9 мкМ) использовали в последующей стадии без дополнительной очистки.

(2) Получение енона галихондрина B (C₃₈-кетона).

К перемешанному раствору C₃₈-альдегида (8 мг, 8,9 мкМ) и соединения 11 (24 мг, 22 мкМ) в диметилформамиде ( 1 мл), в атмосфере азота добавляли порошкообразный CrCl₂, содержащий NiCl₂ (0,1 мас.%) (всего прибл. 30 мг). После перемешивания при комнатной температуре в течение 11,5 ч, ТСХ (элюент: гексан/этилацетат/CHCl₃, 1: 2:1) указывала на отсутствие остаточного альдегида. После этого смесь разбавляли насыщенным водным NH₄Cl (10 мл) и H₂O (2 мл), а затем экстрагировали этилацетатом (4 5 мл). Объединенные этилацетатные экстракты промывали водой (2 10 мл), солевым раствором (10 мл), осушали сульфатом натрия, фильтровали через слой стекловаты и концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной ТСХ ("ПТСХ"), элюируя гексаном/этилацетатом/-CHCl₃ (1: 2:1), и получали C₃₈-аллиловые спирты (11 мг, 6,0 мкМ, выход 67%) в виде прозрачного бесцветного маслообразного вещества при соотношении диастереомеров приблизительно 1:1.

К перемешанному раствору C₃₈-спиртов (8,0 мг, 4,4 мкМ) в метиленхлориде (2,00 мл) при комнатной температуре добавляли твердый гидрокарбонат натрия (50 мг), а затем периодинановый реагент Dess-Martin (14,8 мг, 35 мкм). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч добавляли еще 14,8 мг реагента Dess-Martin. Через 90 мин (всего) реакционную смесь разводили диэтиловым эфиром (6 мл) и водным раствором (10 мл), насыщенным гидрокарбонатом натрия и содержащим Na₂S₂O₃ (10 мас.%). Полученную двухфазовую смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин. Отделенную органическую фазу промывали в течение 10 мин водным NaHCO₃/Na₂S₂O₃, водой и солевым раствором (прибл. 10 мл). Органическую фазу осушали сульфатом натрия, фильтровали через стекловату и концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной ТСХ (элюент: гексан/этилацетат, 1:1) и получали енон галихондрина B (7,4 мг, 4,1 мкМ, выход 93%) в виде прозрачного бесцветного маслообразного вещества. Структура этого енонового продукта показана на фиг.2 (верхняя часть).

(3) Получение галихондрина B (соединение 1).

К перемешанному раствору енона (3,7 мг, 2,0 мкМ) в ДМФ (750 мкл) при комнатной температуре добавляли безводный метилацетат (50 мкл), а затем приблизительно 1 моль раствора фторида тетрабутиламмония (TBAF) в ТГФ (25 мкл, pH прибл. 7,6). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 34 ч и на этот период времени высокоэффективная ТСХ (ВЭТСХ) ([5642-пластины (E. Merck Art)] покрывали реакционным раствором, осушали с помощью высоковакуумного трубопровода в течение 20-30 мин, а затем элюировали этилацетатом/метанолом, 10: 1) показывала мажорное пятно при R_f - 0,53. Затем реакционный раствор фильтровали через 2 см слой силикагеля 60 (230 - 400 меш), добавляя этилацетат для удаления фторида тетрабутиламмония. Фильтрат концентрировали в вакууме и получали желтое маслообразное вещество, которое использовали без дополнительной очистки. ¹Н-ЯМР-анализ этого неочищенного продукта не обнаруживал протонного резонанса ,- -ненасыщенного кетона, но обнаруживал два мажорных продукта в отношении, приблизительно равном 2: 1. Это соединение соответствует соединению, имеющему неполную структуру A (см. схему 2).

Смесь описанного продукта растворяли в смеси CH₂Cl₂ (1,00 мл), водного фосфатного буфера (Na₂HPO₄/KH₂PO₄H₂O, pH 7, 100 мкл) и т-бутанола (20 мкл). К полученной быстро перемешанной смеси добавляли 2,3-дихлоро-5,6-дицианобензохинон (1,8 мг, 8 мкМ). После этого смесь обрабатывали ультразвуком в водяной бане в течение 30 с, перемешивали при комнатной температуре (не обрабатывая ультразвуком) в течение 3 мин, а затем обрабатывали ультразвуком еще 30 с и перемешивали без обработки ультразвуком в течение 16 мин. ВЭТСХ (этилацетат/метанол, 10: 1) не обнаруживала остатков исходного материала. Реакционную смесь промывали насыщенным водным гидрокарбонатом натрия (2 1 мл), водой и солевым раствором (прибл. 1 мл). Затем объединенные водные фракции экстрагировали метиленхлоридом (2 0,5 мл), а объединенные органические фракции осушали сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением оранжевого маслообразного вещества. Неочищенный продукт кроме того осушали с использованием трубопровода высокого вакуума в течение 1 ч, после чего этот продукт непосредственно использовали в последующей реакции.

Смесь описанного продукта растворяли в безводном метиленхлориде (1,00 мл) и к перемешанному при комнатной температуре раствору добавляли раствор (+/-)-камфорсульфоновой кислоты (CSA) в метиленхлориде (10 мкл, 1,00 мг CSA/1,00 мл CH₂Cl₂-раствора). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч ВЭТСХ (элюент:этилацетат/метанол, 10:1) указывала на почти полную конверсию в мажорное пятно. После этого реакционный раствор промывали насыщенным водным гидрокарбонатом натрия (2 0,5 мл), водой, солевым раствором (прибл. 0,5 мл). Объединенные водные фракции экстрагировали метиленхлоридом (2 0,5 мл), а объединенные органические фракции осушали сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Полученный остаток хроматографировали на ВЭТСХ-пластинах (элюент:этилацетат/метанол, 10:1), в результате чего получали синтетический галихондрин B, т.е. соединение 1 (1,27 мг, 1,1 мкМ, полный выход за все три стадии составлял 57%) в виде бесцветного маслообразного вещества.

Этот совместно элюированный синтетический продукт не отличался от образца натурального продукта на ВЭТСХ-пластинах в следующей системе пяти растворителей и многократного элюирования: (1) этилацетат/метанол, 10:1; (2) этилацетат/CH₂Cl₂, 10: 1; этилацетат/CHCl₃/метанол, 10:5:1; (4) этилацетат/CH₂Cl₂/метанол, 10: 5: 1; (5) этилацетат/т-бутилметиловый эфир/метанол, 10:5:1.

ИК (см^-1: 1017 см^-1, 1073, 1187, 1737, 2852, 2953, 3438, (шир.).

¹Н-ЯМР (C₆D₆, 500 МГц): BPMC (FAB) для C₆₀H₈₆O₁₉: Вычислено: 1111.5841. Найдено: 1111.5878 (М⁺).

[]_D : -51,2^o (с = 0,127, MeOH).

Соединение 2.

Соединение 2, норгалихондрин B, получали из C₃₈-альдегида (происходящего от соединения 10, описанного выше) и соединения 12.

(1) Получение енона норгалихондрина B (C₃₈-кетона).

К перемешанному раствору C₃₈-альдегида (5,4 мг, 6,1 мкМ) и соединения 12 (13 мг, 12,2 мкМ) в ДМФ (прибл. 750 мкл), в атмосфере азота добавляли порошкообразный CrCl₂, содержащий 0,1% NiCl₂ (мас.%) (всего прибл. 20 мг). Полученную зеленую смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч и в этот период времени ТСХ (элюент:этилацетат/гексан/CHCl₃) не обнаруживала остаточного количества альдегида. После этого добавляли насыщенный водный NH₄Cl (1 мл), H₂O (0,5 мл) и этилацетат (1 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 20 мин. Верхний органический слой отделяли, а нижнюю фазу кроме того экстрагировали этилацетатом (3 0,5 мл). После этого объединенные этилацетатные фракции промывали водой (2 1 мл) и солевым раствором (1 мл), а затем осушали сульфатом натрия, фильтровали через стекловату и концентрировали. Полученный остаток очищали с помощью ПТСХ (элюент:гексан/этилацетат/CHCl₃ 1:1:1), в результате чего получали аллиловые C₃₈-спирты (8 мг, 5 мкМ, выход 83%) в виде прозрачного бесцветного маслообразного вещества (смеси диастереомеров = прибл. 1:1).

К перемешанному раствору C₃₈-спирта (8 мг, 5 мкМ) в CH₂Cl₂ (1,00 мл), при комнатной температуре, добавляли твердый гидрокарбонат натрия (50 мг), а затем периодинановый реагент Dess-Martin (17 мг, 40 мкМ). После перемешивания при комнатной температуре в течение 90 мин, ТСХ (элюент:гексан/этилацетат/CHCl₃, 1: 1: 1) указывала на отсутствие исходного материала. Полученную реакционную смесь разводили диэтиловым эфиром (3 мл) и перемешивали 20 мин с водным раствором (5 мл) насыщенным гидрокарбонатом натрия и содержащим Na₂S₂O₃ (10 мас.%). Отделенную органическую фазу промывали еще в течение 10 мин смесью водного NaHCO₃/Na₂S₂O₃, а затем промывали водой и солевым раствором (прибл. 5 мл). Эту органическую фазу осушали безводным сульфатом натрия, фильтровали через стекловату и концентрировали. Остаток очищали с помощью ПТСХ (элюент:гексан/этилацетат/CHCl₃, 1:1:1) и получали енон норгалихондрина B (6,3 мг, 3,9 мкМ, выход 79%) в виде прозрачного бесцветного маслообразного продукта. Структура этого енона показана в нижней части фиг.2.

ИК (см^-1): 835 см^-1, 1088, 1252, 1463, 1737, 2929, 2953, ¹Н-ЯМР (C₆D₆, 500 МГц): BPMC (FAB): m/z (M+Na⁺) Вычислено: [C₈₆H₁₃₆O₂₁Si₃+Na]⁺: 1611.8779, Найдено: 1611.8811.

[]_D : - 32^o (с = 0,56, MeOH).

(2) Получение метилового сложного эфира норгалихондрина B.

К перемешанному раствору енона (3,15 мг, 2,4 мкМ) в ТГФ (400 мкл) и безводного метилацетата (200 мкл) добавляли приблизительно 1М раствор фторида тетрабутиламмония (TBAF) в ТГФ (20 мкл, pH прибл. 7,6). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 14,5 ч и в этот период времени ВЭТСХ ([5642-пластины E.Merck Art.] покрывали реакционным раствором, осушали в течение 20 - 30 мин с использованием трубопровода высокого вакуума, а затем элюировали этилацетатом] указывала на одно мажорное пятно при R_f = 0,45. Затем реакционный раствор фильтровали через 2 см-слой силикагеля 60 (230 - 400 меш.) этилацетатом для удаления TBAF. Фильтрат концентрировали в вакууме и получали желтое маслообразное вещество, которое использовали без дополнительной очистки.

Смесь описанного продукта растворяли в метиленхлориде (1 мл). После этого добавляли водный фосфатный буфер (pH = 7,00, 100 мкл) и т-бутанол (20 мкл), а к полученной быстро перемешанной смеси добавляли DDQ (1,8 мг, 8 мкМ). Затем смесь обрабатывали ультразвуком в водяной бане в течение 3 30 с, причем в интервалах между обработками ультразвуком, составляющими 3-5 мин, смесь просто размешивали при комнатной температуре. В этот период времени ТСХ (элюент:этилацетат) указывала на отсутствие остаточного исходного материала. После этого реакционную смесь промывали насыщенным водным гидрокарбонатом натрия (2 1 мл), водой (1 мл) и солевым раствором (1 мл). Объединенные водные фракции экстрагировали метиленхлоридом (2 0,5 мл), а объединенные органические фракции осушали сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением оранжевого маслообразного продукта. Этот неочищенный продукт осушали с помощью высоковакуумного трубопровода в течение 30 мин, после чего этот продукт использовали непосредственно в последующей стадии.

Описанный продукт растворяли в безводном метиленхлориде (1,00 мл) и к перемешанному при комнатной температуре раствору добавляли раствор (+/-)-камфорсульфоновой кислоты ("CSA") в CH₂Cl₂ (10 мкл, 1,00 мг CSA/1,00 мл раствора метиленхлорида). Через час, ВЭТСХ (этилацетат) указывала на почти полное завершение реакции. Реакционный раствор промывали насыщенным водным гидрокарбонатом натрия (2 0,5 мл), водой (0,5 мл) и солевым раствором (0,5 мл). Объединенные водные фракции экстрагировали метиленхлоридом (2 0,5 мл), а объединенные органические фракции осушали безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток хроматографировали на ВЭТСХ-пластинах (этилацетат), в результате чего получали синтетический метиловый сложный эфир норгалихондрина B (1,2 мг, 1,1 мкМ, выход за все три стадии составлял 45%) в виде бесцветного маслообразного вещества.

Совместно элюированный синтетический продукт не отличался от аутентичного образца (полученного путем обработки натурального норгалихондрина B диазометаном в метаноле) после многократного элюирования на ВЭТСХ-пластинах с использованием системы двух растворителей: (1) этилацетата и (2) CH₂Cl₂/метанола, 25:1.

ИК (см^-1): 1021, 1073, 1189, 1435, 1739, 2924, 3609.

BPMC (FAB): m/z (M+Nz⁺) для C₆₀H₈₄O₁₉ + Na⁺: Вычислено: 11315504. Найдено: 11315502.

[]_D : -46,4^o (с = 0,22, MeOH).

(3) Получение норгалихондрина B.

К перемешанному раствору метилового сложного эфира (2,2 мг, 2,0 мкМ) в ТГФ (300 мкл), при комнатной температуре добавляли 100 мкл водного 1М раствора LiOH. После перемешивания в течение 90 мин при комнатной температуре ВЭТСХ (этилацетат) указывала на завершение реакции. Затем тетрагидрофуран удаляли в потоке азота и полученный раствор разводили водой (200 мкл) и охлаждали д