Аналоги 15-дезоксиспергуалина, способ их получения, способ получения промежуточных соединений (варианты), аминозащищенные соединения в качестве промежуточных соединений и фармацевтическая композиция на основе аналогов 15-дезоксиспергуалина

Аналоги 15-дезоксиспергуалина, способ их получения, способ получения промежуточных соединений (варианты), аминозащищенные соединения в качестве промежуточных соединений и фармацевтическая композиция на основе аналогов 15-дезоксиспергуалина

Реферат

 

Изобретение относится в качестве новых промышленных продуктов к соединениям структуры, аналогичной таковой 15-дезоксиспергуалина, формулы I NH₂C(= NH)NH(CH₂)_n - NHC(= О)AC(= О)NH(CH₂)₄NH(CH₂)^*₂CH(CH₃)NH₂ (I) R₁NHC(= NR₁)NH(CH₂)_nNHC(= 0) AC(= 0)NH(NH₂)₄NH(CH₂)^*₂CH(CH₃)NHR₃ (II), в которой А обозначает простую связь, группу-СН₂-, группу -CH₂О, группу - CH₂NH, группу-CH(OH)-, группу - СНF- или группу -OH(OCH₃); и n равно 6 или 8, и их солям присоединения. Эти новые соединения особенно пригодны в качестве иммунодепрессивных агентов. Изобретение также относится к способу получения вышеуказанных соединений I удалением защитных групп из соединений формулы II. Способ получения соединений формулы II конденсацией кислоты с амином или взаимодействием амина с карбонатом. Заявлены соединения формулы II, а также фармакомпозиция, обладающая иммунодепрессивной активностью, содержащая в качестве активного начала соединения формулы I. 8 с. и 4 з. п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к новым соединениям - аналогам 15-дезоксиспергуалину, к способу их получения и к применению их фармакомпозиции в качестве иммунодепрессивных агентов.

Известно, что 15-дезоксиспергуалин, первоначальные исследования которого относились к противоопухолевой активности, обладает хорошей иммунодепрессивной активностью. Эта активность констатируется в многочисленных публикациях, особенно: "Deоxyspergualin in lethal murine graft-versus-host disease", Transplantation. т. 51, 712 - 715, N. 3 (март, 1991 г.) и "15-deoxyspergualin: From Cytostasis to Immunosuppression", Behring Inst. Mitt., No. 82, 231 - 239 (1988).

Однако 15-дезоксиспергуалин не обладает химической стабильностью, поэтому пытались разработать более стабильные производные, например, заменяя -гидроксиглициновый остаток 15-дезоксиспергуалина различными - или -аминокислотами, или модифицированную цепь, несущую гуанидиновую функцию. Примеры таких модификаций изложены в европейских заявках на патент А-О 181 592 или А-О 105 193.

В настоящем изобретении предлагаются новые соединения, общая структура которых остается аналогичной 15-дезоксиспергуалину, но которые химически стабильны и обладают иммунодепрессивной активностью, выше таковой известных продуктов уровня техники.

Соединения, согласно изобретению, отличаются, в частности, от известных продуктов уровня техники инверсией амидной связи, соединяющей гуанидино-гексильный остаток с центральной цепью молекулы, природой центральной цепи и введением разветвленной цепи, содержащей хиральный центр в спермидиновой части молекулы.

Более конкретно, изобретение относится к аналогам 15-дезоксиспергуалина общей формулы I: , в которой A обозначает простую связь, группу -CH₂-, группу -CH₂O-, группу -CH₂NH-, группу -CH(OH)-, группу -CHF- или группу -CH(OH₃)-; n равно 6 или 8 и к их кислотно-аддитивным солям.

В формуле (I) и в других формулах, т. е. (II), (IV), (VI), (XI), (XI') и (XII), которые следуют ниже, C обозначает асимметрический атом углерода, т. е. хиральный атом углерода.

Согласно изобретению, способ получения соединений формулы (I) и их кислотно-аддетивных солей включает удаление защитных групп из соединений формулы II: , в которой A и n имеют вышеуказанные значения и R₁, R₂ и R₃, одинаковые или разные, каждый обозначает защитную группу аминной функции, путем одной или нескольких реакций, известных специалисту, для замены всех групп R₁, R₂ и R₃ атом водорода.

Изобретение относится также к использованию соединений формулы (I) и их нетоксичных аддитивных солей в фармацевтических композициях, предназначенных для использования в терапии против иммунных нарушений или против малярии, или в качестве фармакологического реагента.

Под аддитивными солями понимают соли присоединения кислоты, получаемые за счет взаимодействия неорганической или органической кислоты с соединением формулы (I). Предпочтительными неорганическими кислотами для солеобразования являются соляная, бромоводородная, серная и фосфорная кислоты. Предпочтительными для солеобразования органическими кислотами являются фумаровая, малеиновая, метансульфоновая, щавелевая, лимонная и трифторуксусная кислоты.

Принимая во внимание наличие асимметрического атома углерода и природу группы A, соединения формулы (I) могут содержать один или два хиральных атома углерода. Когда A означает -CH₂-, -CH₂O- или CH₂NH-, то соединения формулы (I) могут находиться в форме рацематов, где ^*C имеет конфигурацию (R, S), и энантиомеров, где ^*С имеет конфигурация (R) или (S). Когда A обозначает -CH(OH)-, -CHF- или -CH(OCH₃)-, соединения формулы (I), которые содержат два хиральных центра, могут находиться в виде эквимолекулярной смеси четырех диастереоизомеров, "полурацематов" (R,S)-A-(R)-^*C, (R,S)-A-(S)-^*C, (R)-A-(S, R)-^*C и (S)-A-(S,R)-^*C и каждого из четырех диастереомеров.

Практически предпочитают, чтобы асимметрический атом углерода ^*C, имел конфигурацию (S, R) или (R).

Соединение формулы (I) можно получать известными способами, основанными на классических реакциях с образованием амидной связи, а также на основе методов химии пептидов.

Способ получения, который предлагается согласно изобретению, включает удаление защитных групп из соединения формулы (II).

Практически защитные группы R₁, R₂, R₃, которые нужно заменить на атом водорода, представляет собой группы, защищающие аминофункции, и известны в области химии пептидов для временного блокирования неполностью замещенных "аминных" функций.

Из групп, которые пригодны для этой цели, можно использовать: (а) группы оксикарбонильного типа, например алкоксикарбонильные и бензилоксикарбонильные группы: Boc = трет-бутилоксикарбонил (или (1,1-диметилэтокси)карбонил) Fmoc = 9-флуоренилоксикарбонил; Foc = фурфурилоксикарбонил; Z - бензилоксикарбонил; Z(p-Cl) = 4-хлорбензилоксикарбонил или Z(p-OMe) = 4-метоксибензилоксикарбонил; (б) группы бензильного типа, например: Bn = фенилметил.

Из этих амино-защитных групп предпочтительными группами являются Boc и Bn.

Способ получения соединения формулы (I) или одной из его кислотно-аддитивных солей заключается в том, что он включает удаление защитных групп из соединения формулы (II): , в которой A обозначает простую связь, группу -CH₂-, группу -CHF-, группу -CH(OH₃)-, группу -CH(OH)-, группу -CH(OH₂C₆H₅), группу -CH₂O- или группу -CH₂NH-.

n равно 6 или 8 R₁, R₂, R₃, идентичные или разные, представляют каждый аминозащитную группу, такую как алкилоксикарбонильная, где (алкил является низшим алкилом) или арилоксикарбонильная группа; путем одной или нескольких обработок в зависимости от природы амино-защитных групп, например, если, по крайней мере, один из R₁, R₂ или R₃ обозначает алкилоксикарбонильную группу, где радикал алкил является низшим алкилом, то обработку вышеуказанного соединения формулы II ведут с помощью сильной кислоты, такой как трифтоуксусная кислота, или, если по крайней мере один из R₁, R₂ или R₃ обозначает арилоксикарбонильную группу или если A обозначает группу -CH(OCH₂C₆H₅)-, то осуществляют каталитическое гидрирование в присутствии палладия-на-угле или соли палладия для получения соединения формулы (I) в форме свободного основания или одной из его кислотно-аддитивных солей и затем при необходимости полученную соль переводят в форму свободного основания путем обработки сильным основанием, затем полученное свободное основание переводят в другие кислотно-аддитивные соли.

Для получения соединения формулы (II) работают согласно одному из следующих методов.

Метод А. Осуществляют конденсацию кислоты формулы (III): , в которой n равно 6 или 8; A обозначает группу -CH₂-, группу -CH(OCH₃)-, группу -CH(OCH₂C₆H₅)-, группу -CHF- или простую связь; R₁ обозначает амино-защитную группу, выбранную из алкоксикарбонильной группы, где радикал алкил означает низший алкил, или арилоксикарбонильной группы, где радикал арил означает 9-флуоренилметил, фурфурил, бензил, 4-хлорбензил или 4-метоксиметил, с амином общей формулы IV: , в которой R₂ и R₃ одинаковые или разные, каждый обозначает амино-защитную группу, указанную выше, путем активации кислоты: - либо с помощью агента сочетания карбодиимидного типа (в частности, 1,3-дициклогексилкарбодиимид), в присутствии нуклеофильного агента (например, 1-гидроксибензотриазола), в органическом растворителе, в частности в хлорированном растворителе, таком как хлороформ или дихлорметан, и при температуре 0 - 40^oC; - либо путем образования смешанного ангидрида, например, с помощью изобутилхлорформиата в присутствии основного агента, такого как N-метилформолин, в органическом растворителе, например в тетрагидрофуране, и при температуре от -35 до +20^oC; используя по 1 моль соединения формулы (III) примерно на 1 моль соединения формулы (IV) для получения соединения формулы (II): , в которой n, A, R₁, R₂ и R₃ имеют вышеуказанные значения.

Метод Б. Осуществляют взаимодействие соединения формулы (IV): , в которой R₂ и R₃ идентичные или разные, и представляет каждый амино-защитную группу, выбранную из алкилоксикарбонильной группы, где радикал алкил означает низший алкил, или арилоксикарбонильной группы, где радикал означает 9-флуоренилметил, фурфурил, бензил, 4-хлорбензил или 4-метоксибензил с кислотой или хлорангидридом кислоты формулы (V): , в которой X обозначает атом хлора или группу OH; A обозначает простую связь, группу -CH₂-, группу -CHF-, группу -CH(OCH₃)-, или группу -CH(OCH₂C₆H₅)-; R₄ обозначает алкильную группу с 1 - 3 C-атомами, линейную или разветвленную, или фенильную группу; в органическом растворителе, в частности в хлорированном растворителе, таком как дихлорметан или хлороформ, в присутствии активатора карбонильной группы, такого как карбодиимид (в частности, 1,3-дициклогексилкарбодиимид или карбонилдиимидазол), и нуклеофильного агента (в частности, 1-гидроксибензотриазола), когда X обозначает группу OH, или в присутствии третичного амина (например, триэтиламин), когда X обозначает атом хлора, при температуре 0 - 40^oC, используя по 1 моль соединения формулы (IV) примерно на 1 моль соединения формулы (V), для получения соединения формул (VI): , в которой A, R₂, R₃ и R₄ имеют вышеуказанные значения; омыляют полученное соединение формулы (VI) в органическом растворителе в присутствии сильного основания для получения соединения формулы (VII): , в которой A, R₂ и R₃ имеют вышеуказанные значения и конденсируют полученное соединение формулы (VII) с амином формулы (VIII): , в которой n равно 6 или 8; а R₁ обозначает амино-защитную группу, указанную выше, в условиях, идентичных условиям вышеуказанного метода A, для получения соединений формулы (II): , в которой A, n, R₁, R₂ и R₃ имеют вышеуказанные значения.

Метод В. Ацилируют концевую группу NH₂ основания формулы (IX): , в которой R₁ означает амино-защитную группу, указанную выше, в частности, Boc-группу, и n равно 6 или 8; с помощью хлорформиата или симметричного карбоната (например, бис-(4-нитрофенио)карбоната), в инертном растворителе (например, дихлорметан), при комнатной температуре ( 15 - 25^oC); и осуществляют аминолиз полученного соединения с помощью амина формулы (IV): , в которой R₂ и R₃, идентичны или разные, представляют каждый амино-защитную группу, указанную выше, в частности, Boc-группу или фенилметильную группу; в инертном растворителе, таком как дихлорметан, для получения соединения формулы (II): , в которой n, R₁, R₂ и R₃ имеют вышеуказанные значения и A обозначает группу -CH₂-NH-.

Метод Г. Осуществляют взаимодействие амина формулы (IV): , в которой R₂ и R₃, идентичные или разные, представляют каждый амино-защитную группу, указанную выше, с карбонатом формулы (Х): , в которой R₅ обозначает алкильную группу с 1-3 C-атомами или фенилметильную группу, в инертном растворителе (в частности, ароматическом растворителе, например, толуол), при температуре от комнатной до температуры рефлюкса реакционной смеси, используя по 1 моль соединения формулы (IV) примерно на 1 моль соединения формулы (X), для получения соединения формулы (XI): , в которой R₂, R₃ и R₅ имеют вышеуказанное значение, или соединения формулы (XI'): , в которой R₂ и R₃ имеют вышеуказанное значение: омыляют полученное соединение формулы (XI) или (XI') в органическом растворителе в присутствии сильного основания для получения соединения формулы (XII): , в котором R₂ и R₃ имеют вышеуказанное значение, и конденсируют полученное соединение формулы (XII) с амином формулы (VIII): , в которой n равно 6 или 8 и R₁ означает указанную выше амино-защитную группу, например, Boc-группу; в условиях, идентичным условиям, описанным для метода A, для получения соединения формулы (II): , в которой n, R₁, R₂ и R₃ имеют вышеуказанные значения, а A обозначает группу -CH₂O-.

Изобретение относится также к аминозащищенным соединениям формулы II: , где A обозначает простую связь, группу -CH₂-, группу -CHF-, группу -CH(OH)-, группу -CH(OCH₃)-, группу -CH(OCH₂C₆H₅)-, группу -CH₂O- или группу -CH₂NH-, n равно 6 или 8, R₁, R₂, R₃, идентичные или разные, и каждая является алкилоксикарбонильной группой, где радикал алкил означает низшую алкильную группу, и арилоксикарбонильной группой, где арил означает 9-флуоренилметил, фурфурил, бензил, 4-метоксибензил, в качестве промежуточного соединения в синтезе соединений формулы I.

Новые соединения формулы I обладают иммунодеприссивной активностью и могут использоваться в качестве активного начала для фармацевтических композиций иммунодепрессивного действия.

Таким образом, другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция иммунодепрессивной активности, содержащая активное начало и фармацевтически приемлемые добавки, отличающаяся тем, что в качестве активного начала она содержит, по крайней мере, одно соединение формулы I в эффективном количестве,.

Изобретение подробнее поясняется нижеследующими примерами и результатами фармакологических испытаний, получаемыми при использовании соединений согласно изобретению, по сравнению с результатами, получаемыми с известными продуктами уровня техники. Используемая в примерах номенклатура соответствует таковой, предлагаемой в Chemical Abstracts; согласно этой номенклатуре сложный моноэфир акландикислоты с трет-бутанолом называется "1,1-диметилэтиловый эфир алкандикислоты", а сложный диэфир типа трет-бутил- и этилалкандиоата называется здесь "(1,1-диметилэтил)этиловый эфир алкандикислоты".

В экспериментальной части "приготовления" относятся к промежуточным продуктам, а примеры относятся к продуктам согласно изобретения.

Когда соединения содержат в своей структуре асимметрический атом углерода, то отсутствие специального указания означает, что речь идет о практически эквимолекулярной смеси двух энантиомеров (рацемической смеси).

Когда те же соединения обозначаются указанием (R) или (S) непосредственно после идентификации положения заместителя, то это означает, что содержащий этот заместитель углерод имеет (R) или (S)-конфигурацию, согласно правилам Cahn, Ingold и Prelog.

Когда соединения содержат в своей структуре два центра асимметрии, то отсутствие специального указания означает, что речь идет о смеси диастереоизомеров.

Спектральные характеристики сигналов ядерного магнитного резонанса (ЯМР) даются для протона (¹H) или для изотопа 13 углерода (¹³C): указывается химсдвиг по отношению к сигналу TMC, форма сигнала (с. для синглета; д. для дублета; т. для триплета; к. для квадруплета; м. для мультиплета; с.ш. - для сигнала уширенного) и число протонов, относящихся к сигналу. Для сведения ¹H-ЯМР-спектры снимают при 300 мГц.

Приготовление 1. 4-[N-(3-Гидроксибутил)-N-(фенилметил)амино]бутаннитрил.

5 г (2810^-3 моль) 3-[N-(фенилметил)амино]-1-метилпропанола растворяют в 60 мл бутанола и добавляют 3,56 г (3410^-3 моль) карбоната натрия, 1,06 г (710^-3 моль) иодида калия, затем 7,4 г (7010^-3 моль) 4-хлорбутиронитрила в виде раствора в 10 мл бутанола. Реакционную смесь при перемешивании кипятят с обратным холодильником в течение 20 часов. После охлаждения отфильтровывают и нерастворимые части промывают с помощью 60 мл диэтилового эфира. Объединенные фильтраты концентрируют при пониженном давлении и полученный остаток обрабатывают с помощью 100 мл дихлорметана.

Полученный раствор экстрагируют с помощью 50 мл 1M соляной кислоты; полученную водную кислую фазу промывают 2 раза 50 мл дихлорметана, затем подщелачивают путем медленного добавления 50 мл 5н. раствора гидроксида натрия. Продукт экстрагируют из водной фазы 3 раза по 50 мл дихлорметана. Полученную органическую фазу сушат над карбонатом калия, затем концентрируют при пониженном давлении. Полученную желтую жидкость (7 г) затем перегоняют в вакууме, получая 6,02 г (выход 87%) целевого продукта. Т.кип. = 160-170^oC /0,05 мм рт.ст. (0,05 мм рт.ст. соответствуют примерно 0,066 Па).

Приготовление 2. 3 -[N-(3-цианопропил)-N-(фенилметил)амино]-1-метипропиловый эфир метансульфокислоты.

Готовят раствор 9,11 г (3710^-3 моль) полученного согласно приготовлению 1 продукта в 150 мл безводного диэтилового эфира и охлаждают до 0^oC. После этого добавляют 11, 23 г (11110^-3 моль) триэтиламина, затем прикапывают 4,66 г (4010^-3 моль) метансульфонилхлорида. По окончании добавления перемешивают при 0^oC в течение 1 часа, затем в течение 15 часов при комнатной температуре. Медленно добавляют 120 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия, затем реакционную среду экстрагируют 3 раза по 50 мл диэтилового эфира. Органические фазы объединяют и сушат над карбонатом калия, после чего концентрируют при пониженном давлении. Таким образом получают 11,7 г (выход 98% в расчете на сырой продукт) целевого продукта в виде желтого вязкого масла. Продукт используют без дополнительной очистки в следующей стадии, однако его можно очищать путем хроматографии на диоксиде кремния и элюирования с помощью смеси н-гептана с диэтиловым эфиром (7:3 по объему).

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃ : 1,33 (д., 3H); 1,76 (м., 3H); 1,86 (м., 1H); 2,37 (т. , 2H); 2,53 (м. 4H); 2,89 (с., 3H); 3,48 (д., 1H); 3,57 (д., 1H); 4,84 (м., 1H); 7,28 (м., 5H).

Приготовление 3. 3-[N-(3-цианопропил)-N-(фенилметил)-амино]-1-метил-1-азидопропан.

Готовят раствор 10,59 г (3310^-3 моль) продукта из приготовления 2 в 70 мл диметилсульфоксида и добавляют 6,43 г (10010^-3 моль) азида натрия. Реакционную смесь перемешивают в течение 15 часов при 45-50^oC, затем охлаждают, добавляют 100 мл воды, затем экстрагируют с помощью 100 мл диэтилового эфира. Водную декантированную фазу снова экстрагируют 3 раза по 30 мл диэтилового эфира и объединенные органические фазы промывают 50 мл водного насыщенного раствора хлорида натрия, затем сушат над сульфатом магния. После удаления растворителя при пониженном давлении, остаточную жидкость очищают путем хроматографии на диоксиде кремния и элюирования смесью н-гептана с диэтиловым эфиром (7: 3 по объему). Таким образом получают 7,8 г (выход 78%) целевого продукта в форме бесцветного вязкого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 1,11 (д., 3H); 1,58 (м., 2H); 1,77 (м., 2H); 2,34 (т., 2H); 2,52 (м., 4H); 3,50 (м., 3H); 7,26 (м., 5H).

Приготовление 4. 1,1-Диметиловый эфир 9-циано-3-метил-6-(фенилметил)-2,6-диазононановой кислоты.

В колбу для гидрирования емкостью 250 мл вводят 3,00 г (1110^-3 моль) продукта, полученного согласно приготовлению 3, и 2,85 г (1310^-3 моль) ди-трет-бутилдикарбоната (продукт структуры: O[CO C(CH₃)₃]₂ в виде раствора в 30 мл безводного этилацетата и добавляют 0,3 г 10%-ного палладия-на-угле. Смесь гидрируют при перемешивании при комнатной температуре и под давление 210⁵ Па в течение 15 часов. Затем катализатор удаляют путем отфильтровывания, после чего фильтрат концентрируют при пониженном давлении.

Остаточный продукт очищают путем хроматографии на силикагеле, элюируя смесью н-гептана с диэтиловым эфиром (45:55 по объему). Таким образом получают 3,47 г (выход 91%) целевого продукта в форме бесцветного вязкого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 1,06 (д., 3H); 1,44 (с., 9H); 1,45-1,80 (м.4H); 2,33 (т. , 1H); 2,48 (м., 3H); 3,50 (к., 2H); 3,70 (с.ш., 1H); 5,08 (с.ш., 1H); 7,27 (м., 5H).

Приготовление 5. 1,1-Диметиловый эфир 10-амино-3-метил-6-(фенилметил)-2,6-диазадекановой кислоты.

В аппарат для гидрирования вводят суспензию 2 г никеля Ренея в 180 мл безводного этанола. Эту суспензию насыщают путем барботирования в течение 10 мин газообразным аммиаком, затем добавляют 2,95 г (810^-3 моль), полученного в приготовлении 4 продукта в виде раствора в 20 мл безводного этанола. Затем реакционную смесь подвергают гидрированию под давлением 10⁶ Па в течение 15 часов при 40^oC.

После охлаждения катализатор удаляют путем отфильтровывания и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаточное масло очищают путем хроматографии на силикагеле, элюируя смесью метанола с 32% аммиака (100:1 по объему). Таким образом получают 2,7 (выход 91%) целевого продукта в форме бесцветного вязкого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 1,04 (д. , 3Н); 1,31 (с., 2H); 1,44 (с., 9H); 1,30-1,75 (м., 6H); 2,63 (е., 2H); 2,25-2,70 (м., 4H); 3,43 (д., 1 H); 3,60 (д., 1H); 3,60-3,75 (м., 1H); 5,74 (с.ш., 1H); 7,30 (м., 5H).

Приготовление 6. 1-(1,1-Диметилэтил)-14-этиловый эфир 3-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-амино]-12-оксо-2,4, 11-триазатетрадец-2-ен-дикислоты.

1,05 г (810^-3 моль) моноэтилового эфира малоновой кислоты растворяют в 15 мл безводного хлороформа, затем охлаждают до 0^oC и добавляют 1,65 г (810^-3 моль) 1,3-дициклогексилкарбодиимида и 0,108 г (0,810^-3 моль) 1-гидроксибензотриазол-гидрата. После перемешивания в течение 0,5 часа при 0^oC, добавляют раствор 1,5 г (4,1910^-3 моль) бис-(1,1-диметилэтилового) эфира [[(6-аминогексил)имино] -метилен] -бискарбаминовой кислоты в виде раствора в 5 мл безводного хлороформа. Затем оставляют при перемешивании в течение 48 часов при комнатной температуре, после чего реакционную среду концентрируют при пониженном давлении. Полученный сырой продукт очищают путем хроматографии на диоксиде кремния при среднем давлении и элюировании с помощью смеси гексана с этилацетатом (1:1 по объему). Таким образом получают 1,95 г (выход 99%) целевого продукта в форме желтого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 1,30 (т., 3H); 1,35-1,65 (м., 26H); 3,2-3,35 (м., 4H); 3,4 (т. д., 2H); 4,2 (к., 2H); 7,1-7,2 (с.ш., 1H); 3,3 (т., 1H); 11,5 (с., 1H).

Приготовление 7. 1-(1,1-Диметиловый)эфир 3-[/(1,1-диметилэтокси)карбонил]амино]-12-оксо-2,4,11-триаза тетрадец-2-ендикислоты.

1,95 г (4,1510^-3 моль) полученного в приготовлении 6 продукта растворяют в 15 мл диметоксиэтана и добавляют 8,5 мл водного 1н. раствора NaOH. Перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин, затем добавляют 25 мл и 25 мл хлороформа и осторожно подкисляют до pH 2 с помощью 1н. водного раствора HCl. Экстрагируют несколько раз хлороформом, затем органическую фазу сушат и концентрируют при пониженном давлении. Таким образом получают 1,8 г (выход 100%) целевого продукта в форме желтого цвета густого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 1,35 - 1,65 (м., 26H); 3,3-3,45 (м., 6H); 7,05 (с.ш., 1H); 8,3 (т., 1H); 9-11,5 (с.ш., 2H).

Приготовление 8. бис-(1,1-Диметилэтиловый) эфир 3-{[(1,1-диметилэтокси)карбонил] амино} -23-метил-12,14-диоксо-20 (фенилметил)-2,4,11,15,20,24-гексаазапентакоз-2-ен-дикислоты.

Поступая аналогичным приготовлению 6 образом, но исходя из 6,21 г (1410^-3 моль), полученного в приготовлении 7 продукта и 4,7 г (13,510^-3 моль) 1,1-диметилэтилового эфира 10-амино-3-метил-6-(фенилметил)-2,6-диазадекановой кислоты и после очистки путем хроматографии на диоксиде кремния при элюировании смесью этилацетата с этанолом (9:1 по объему), получают 8,5 г (выход 81%) целевого продукта в форме оранжевого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 1,01-1,03 (д., 3H); 1,23-1,70 (м., 41H); 2,4-2,7 (м., 4H); 3,05-3,3 (м., 6H); 3,35-3,45 (т.д., 2H); 3,6-3,8 (м., 3H); 5,1-5,4 (с. ш. , 1H); 7,1-7,4 (м., 5H); 7,55 (с.ш., 1H); 7,75 (с.ш., 1H); 8,3 (т., 1H); 11,5 (с., 1H).

Приготовление 9. Хлоргидрат бис-(1,1-диметилэтилового) эфира 3-[[(1,1-диметиэтокси)карбонил] -амино]-23-метил-12,14-диоксо-2,4,11,15,20, 24-гексаазапентакоз-2-ен-дикислоты.

8,5 г (10,910^-3 моль) полученного в приготовлении 8 продукта растворяют в 100 мл этанола и добавляют 0,57 г хлорида палладия и 0,7 мл концентрированной соляной кислоты. Смесь затем гидрируют при атмосферном давлении в течение 8 часов. Катализатор отфильтровывают, споласкивают его небольшим количеством этанола, затем полученный фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Таким образом получают 7,8 г (выход 98%) целевого продукта в форме бесцветного масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 1,20 (д., 3H); 1,25-1,9 (м., 41H): 2,55-2,80 (м., 2H); 2,80-3,55 (м., 10H); 3,75 (с.ш., 1H); 4,9 (д., 1H); 7,9 (м., 1H); 8,23 (с.ш., 1H); 8,3 (т., 1H); 11,5 (с., 1H).

Пример 1. Трис-(трифторацетат) N-{4-[[3-(амино)бутил]амино]бутил}-N'-[6-[(аминоиминометил)амино]гексил] пропандиамида.

7,8 г (10,8 10^-3 моль) полученного согласно приготовлению 9 продукта растворяют в 40 мл дихлорметана и добавляют 40 мл трифторуксусной кислоты. Реакционную смесь перемешивают в течение 5 часов при комнатной температуре, затем концентрируют при пониженном давлении. Остаточное масло очищают путем хроматографии на привитом диоксиде кремния RP 18 (гранулометрия 5-20 мкм) при среднем давлении и элюировании смесью воды с ацетонитрилом и трифторуксусной кислотой (8:1:1 по объему). Таким образом, полученные чистые фракции объединяют и лиофилизируют. После этого лиофилизат обрабатывают с помощью 100 мл воды и раствор промывают два раза 100 мл этилацетата, затем водную фазу снова лиофилизируют. Эту операцию повторяют два раза для удаления трифторуксусной кислоты. Таким образом получают 4,5 г (выход 57%) целевого продукта в виде аморфного твердого вещества.

¹H-ЯМР-спектр (DMCO-d₆): 1,15-1,20 (д., 3H); 1,25-1,5 (м., 8H); 1,5-1,85 (м., 4H); 1,85-2,0 (м., 2H); 2,85-3,2 (м., 12H); 3,25-3,35 (м., 1H);6,8-7,55 (с.ш., 3H); 7,6 (т., 1H); 7,09-8,1 (м., 5H); 8,5-8,76 (с.ш., 3H); ¹³C-ЯМР-спектр (D₂O): 18,01; 13,71; 26,21; 26,24; 26,35; 28,56; 28,84; 31,22; 39,51; 40,31; 41,88; 44,30; 44,60; 46,10; 48,14; 157,55; 170,01; 170,34.

Приготовление 10. 1,1-Диметилэтиловый эфир 3-метил-10-[2,4-диоксооксазолидин-3-ил)-6-(фенилметил)-2,6-диазадекановой кислоты.

Готовят раствор из 3 г (8,6 10^-3 моль) 1,1-диметилэтилового эфира 10-амино-3-метил-6-фенилметил-2,6-диазадекановой кислоты в 50 мл безводного толуола и добавляют раствор 1,8 г (8,6 10^-3 моль) метилового эфира феноксикарбонилоксиуксусной кислоты в 10 мл безводного толуола, затем 1,08 г (10,7 10^-3 моль) триэтиламина. Доводят до температуры 60^oC и выдерживают при этой температуре при перемешивании в течение 48 часов. Реакционную среду концентрируют затем при пониженном давлении и остаток, полученный таким образом, очищают на диоксиде кремния, элюируя смесью метилциклогексана с этилацетатом (1: 1 по объему). Таким образом получают 3,1 г (выход 82%) продукта в виде вязкого желтого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 1,0-1,1 (д., 3H); 1,4-1,7 (м., 15H); 2,35-2,50 (м. , 3H); 2,50-2,65 (м., 1H); 3,40-3,60 (м., 4H); 3,60-3,75 (м., 1H); 4,65 (с., 2H); 5,35 (с.ш., 1H); 7,2-7,3 (м., 5H).

Приготовление 11. 1-(1,1-Диметилэтиловый) эфир 3-метил-6-(фенилметил)-13-окса-12-щксщ-2,6,11-триазапентадекандикислоты.

3,1 г (7,1 10^-3 моль) полученного согласно приготовлению 10 продукта растворяют в 20 мл диметоксиэтана, затем добавляют 21 мл водного 1н. раствора NaOH. Перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов, затем добавляют 75 мл воды и 75 мл дихлорметана. Подкисляют до pH2 с помощью 1 н. раствора соляной кислоты и экстрагируют дихлорметаном. Органические фазы промывают один раз раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом магния, затем концентрируют при пониженном давлении. Таким образом получают 3 г (выход 93%) целевого продукта в виде густого желтого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 1,15 (д., 3H); 1,2-2,2 (м., 15H); 2,35-2,55 (т., 2H); 2,7-2,9 (т. , 2H); 2,9-3,3 (м., 4H); 3,5-3,75 (м., 1H); 4,0-4,3 (м., 2H); 4,9 (д., 1H); 5,1 (д., 1H); 7,4-7,8 (м., 5H); 12,3 (с.ш., 1H).

Приготовление 12. Бис-(1,1-диметилэтиловый) эфир 3-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил] амино] -24-метил-21-(фенилметил)-14-окса-12, 15-диоксо - 2, 4, 11, 16, 21, 25-гексаазагексакоз-2-ен-дикислоты.

Следуя методике, аналогичной приготовлению 6, но используя дихлорметан в качестве растворителя и исходя из 3 г (6,65 10^-3 моль) полученной согласно приготовлению 11 сложного эфира и 2,61 г (6,65 10^-3 моль) бис-(1,1-диметилэтилового) эфира [[(6-аминогексил)имино]метилен]-бискарбаминовой кислоты, после очистки путем хроматографии на диоксиде кремния и элюирования с помощью смеси метилциклогексана с этилацететом (3:7 по объему) получают 4 г (выход 76%) целевого продукта в виде желтого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 0,9-1,1 (д., 3H); 1,25-1,75 (м., 41H); 2,3-2,5 (м., 3H); 2,6 (м., 1H); 3,1-3,2 (с.ш., 2H); 3,2-3,35 (к., 2H); 3.35-3,45 (т. , 2H); 3,5 (к., 2H); 3,7 (м., 1H); 4,5 (с., 2H); 5,3-5,6 (с.ш., 2H); 6,3 (с. ш., 1H); 7,2-7,3 (м., 5H); 8,3 (т., 1H); 11,5 (с., 1H).

Приготовление 13. 2-{[[4-[N'-[3-(амино)бутил]-N'-(фенилметил)амино]бутил] амино]карбонилокси}-N-{6-[(аминоиминометил)амино]гексил}ацетамид-трис-(трифторацетат).

Следуя методике, аналогичной примеру 1, но исходя из 4 г полученного согласно приготовлению 12 продукта и после очистки путем хроматографии на колонке с привитым диоксидом кремния RP 18 и элюирования с помощью смеси воды с ацетонитрилом и трифторуксусной кислотой (7,5:2:0,5 по объему), получают 4,2 г (выход 99%) целевого продукта в виде густого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 1,1-1,2 (д., 3H); 1,2-1,6 (м., 10H); 1,65-2,2 (м. , 4H); 2,9-3,2 (м., 12H); 3,2-3,35 (м., 1H); 4,35 (с., 2H); 6,8-7,3 (с.ш., 1H); 7,35 (т., 1H); 7,45-7,65 (м., 5H); 7,85-8,1 (м., 3H); 9,8 (с., 1H).

Пример 2. 2-{[[4-[[3-(амино)бутил]амино]бутил]амино]карбонилокси]-N- -{ 6-[(аминоиминометил)амино]гексил}ацетамид-трис-(трифторацетат).

4,2 г (5,05 10^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении 13, растворяют в 275 мл метанола, затем добавляют 0,25 мл концентрированной соляной кислоты, после чего добавляют 0,25 г хлорида палладия. Смесь затем гидрируют при атмосферном давлении и при комнатной температуре в течение 14 часов. Реакционную среду отфильтровывают, затем фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Полученное масло обрабатывают с помощью 100 мл воды и 1 мл трифторуксусной кислоты, затем раствор промывают 3 раза по 75 мл этилацетата и лиофилизуют. Таким образом получают 3,9 г (выход 99%) целевого продукта в виде аморфного твердого вещества.

¹H-ЯМР-спектр (DMCO-d₆):1,2(д.,3H);1,25 - 1,70 (м.,12H); 1,70 - 1,9 (м., 1H); 1,9 - 2,05 (м., 1H); 2,85 - 3,15 (м.,11H); 4,3 (с.,2H); 4,3(с.,2H); 6,8-7,5 (м., 5H); 7,6-7,75(т.,1H); 7,85 - 7,95(т., 1H); 7,95-8,20(с.ш.,3H); 8,70-8,90(с.ш., 2H); ¹³C-ЯМР-спектр (D₂O): 18,02; 23,65; 26,19; 26,28; 26,76; 28,56; 28,93; 31,22; 39,77; 40,59; 41,88; 44,61; 46,11; 48,22; 63,76; 157,54; 158,21; 171,45.

Приготовление 14. Бис-(1,1-диметилэтиловый)эфир 3-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил] -амино] -25-метил-22-фенилметил-14,16- диоксо-2,4,13,17,22,26-гексаазагептакоз-2-ен-дикислоты Следуя методике, идентичной приготовлению 6, но исходя из 2,1 г (4,4510_-3 моль) 1-(1,1-диметилэтилового) эфира 3-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил] амино] -14-оксо-2,4,13-триазагексадец-2-ен- дикислоты и 1,55 г (4,4510^-3 моль) соединения, полученного в приготовлении 5, после очистки путем хроматографии на силикагеле и элюирования с помощью смеси этилацетата с этанолом и гидроксидом аммония (7:3:0,1 по объему), получают 3,26 г (выход 93%) целевого продукта в виде аморфного твердого вещества желтого цвета.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃):1,02 (д.,3H); 1,2-1,8 (м.,45H); 2,55-2,8 (м.,4H); 3,1-3,3 (м.,6H); 3,38 (т.д.,2H); 3,5-3,7 (м.,1H); 3,7-3,9 (м.,2H); 5-5,3 (с. ш.,1H); 7,1-7,45 (м.,5H); 7,5-7,6 (с.ш.,1H); 7,7-7,8 (с.ш.,1H); 8,3 (т.,1H); 11,5 (c.,1H).

Приготовление 15. Бис-(1,1-диметилэтиловый)эфир 3-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил] амино] -25-метил-14,16-диоксо- 2,4,13,17,22,26-гексаазогептакоз-2-ен-дикислоты.

3,2 г (4,0610^-3моль) полученного согласно приготовлению 14 соединения растворяют в 75 мл этанола и добавляют 0,25 г 5%-ного палладия-на-угле. Смесь подвергают гидрированию при комнатной температуре и при атмосферном давлении в течение 12 часов. Катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Таким образом получают 2,15 г (выход 74%) целевого продукта в виде аморфного твердого вещества.

¹H-ЯМР-сектр (CDCl₃): 1,15 (д. , 3H); 1,55-2,7 (м.,4H); 3,11 (с.,2H); 3,2-3,3 (м.,4H); 3,39 (т.д.,4H); 3,65-3,8 (м.,1H); 4,8-4,9 (м.,1H); 7,05 (с. ш.1H); 7,55 (с.ш.1H); 8,3 (т.,1H); 11,5 (с.,1H).

Пример 3. N-[4-[[3-(амино)бутил]амино]бутил]-N'-[8-[(аминоиминометил)амино]октил] пропандиамид-трис-(трифторацетат) Следуя методике, аналогичной примеру 1, но исходя из 2,15 г (3,0110^-3моль) соединения, полученного согласно приготовлению 15, и после очистки на силикагеле RP 18 и элюирования с помощью смеси воды с ацетоном и трифторуксусной кислотой (7,5:2:0,5 по объему) получают 2,05 г (выход 90%) целевого продукта в виде аморфного твердого вещества.

¹H-ЯМР-спектр (DMCO-d₆): 1,18 (д.,3H); 1,2-1,65 (м.,16H); 1,65-1,8 (м., 1H); 1,8-2 (м.,1H); 2,8-3,1 (м.,12H); 3,25-3,3 (м.,1H); 6,8-7,5 (с.ш.,3H); 7,55 (т.1H); 7,85-8,1 (м.,5H); 8,45-8,65 (м.,3H).

¹³C-ЯМР-спектр (D₂O): 18,01; 23,69; 26,24; 26,51; 26,69; 28,60; 28,92; 28,96; 32,21; 39,49; 40,46; 41,97; 44,31; 44,59; 46,10; 48,14; 157,89; 169,96; 170,34.

Приготовление 16. Бис-(1,1-диметилэтиловый)эфир 3-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил] амино] -23-метил-20-(фенилметил)-13- (фенилметокси)12,14-диоксо-2,4,11,15,20,24-гексаазапентакоз-2-ен-дикислоты.

2,78 г (5,0510^-3моль)1-(1,1-диметилэтилового) эфира 3-[[(1,1-диметилэтокси)карбонил] амино] -13-(фенилметокси)-12-оксо-2,4,11- триазатетрадец-2-ан-дикислоты растворяют в 50 мл безводного тетрагидрофурана (ТГФ). Раствор охлаждают до -25^oC и добавляют 1,02 г (10,110^-3 моль) N-метилморфолина и 0,69 г (5,0510^-3моль) изобутилхлорформиата. Немедленно выпадает белого цвета осадок. Перемешивают в течение 0,5 часа, затем добавляют 1,76 г (5,0510^-3моль) полученного согласно приготовлению 5 соединения, в виде раствора в 10 мл ТГФ. Перемешивают в течение 1 часа, затем концентрируют при пониженном давлении. Продукт очищают путем хроматографии на силикагеле и элюирования смесью метилциклогексана с этилацетатом (7,5:2,5 по объему. Таким образом получают 3,76 г (выход 86%) целевого продукта в виде желтого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃):1,04 (дд.,3H); 1,2-1,8 (м.,41H); 2,3-2,7 (м.,4H); 3,1-3,3(м. , 4H); 3,3-3,5 (м.,3H); 3,5-3,75 (м.,2H); 4,28 (с.,1H); 4,79 (с., 2H); 5,3-5,5 (с.ш.1H); 6,95 (с.ш.1H); 7,2-7,4 (м.,10H); 8,3 (т.1H); 11,5 (с. ,1H).

Приготовление 17. Бис-(1,1-диметиловый)эфир 3-{ [(1,1-диметилэтокси)карбонил] амино} -13-гидрокси-23-метил-12,14- диоксо-2,4,11,15,20,24-гексаазапентакоз-2-ен-дикислоты.

Следуя методике, аналогичной приготовлению 15, но исходя из 3,76 г (4,3510^-3 моль) продукта, полученного согласно приготовлению 16, получают 3,05 г (выход количественный) целевого продукта в виде желтого масла.

¹H-ЯМР-спектр (CDCl₃): 1,15 (д.,3H); 1,25-1,75 (м.,42H); 2,55-2,7 (м., 4H); 3,1-3,35 (м.,4H); 3,35-3,45 (тд.,2H); 3,6-3,8 (м., 1H); 4,42 (с.,1H); 4,75-4,85 (м.,1H); 7,2-7,45 (м.,3H); 8,3 (т.,1H); 11,5 (c.,1H).

Пример 4. N-{4-[[3-(амино)бутил]амино]бутил}-N'-[6-[ (аминоиминометил)амино]гексил]-2-гидроксипропандиамид-трис-(трифторацетат).

Следуя методике, аналогичной