Аналоги 15-деоксиспергуалина, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе

Аналоги 15-деоксиспергуалина, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе

Реферат

 

Настоящее соединение относится к новым промышленным продуктам, соединениям со структурой, подобной 15-дезоксиспергуалину. Эти новые структуры имеют формулу: где n=6 или 8; A является простой связью, группой CH₂, группой CHF, группой CH(OH), группой CH(OCH₃), группой CH₂NH или группой CH₂O; и их соли соединения. Эти новые соединения являются полезными в качестве иммунодепрессантов. 3 с. и 7 з.п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к новым соединениям со структурой, близкой к структуре 15-деоксиспергуалина. Оно также относится к способу их получения и к их применению в фармацевтической композиции, обладающей иммунодепрессантной активностью.

Известно, что 15-деоксиспергуалин является производным спергуалина, последний является антибиотиком, выделенным из культуры Bacillus laterosporus. Первые исследования 15-деоксиспергуалина показали его противоопухолевую активность, а позже исследования показали его иммуноподавляющую активность.

По этому поводу можно, например, сослаться на следующие публикации: G. Dickneite "15-Деоксиспергуалин: от цитостаза до иммуноподавления", Behring Inst. Mitt. , N 82, 231- 239 (1988), G. Dickneite "Влияние ()-15-Деоксиспергуалина на экспериментальную трансплантацию и его иммунофармакологический способ действия", Behring Inst. Mitt. N 80, 93-102 (1986), и K. Nemoto "Дезоксиспергуалин при летальном заболевании мыши пересадка-к-хозяину", Transplantation, т.51, 712-715, N 3 март 1991.

Несмотря на реальную активность в области иммуноподавления 15-дезоксиспергуалин не обладает достаточной химической стабильностью. Поэтому исследования касались получения более стабильных производных путем замены остатка альфаоксиглицина в дезоксиспергуалине на другие - W - аминокислоты.

В этом отношении можно, например, сослаться на K. Nishizawa "Синтез и биологическая активность аналогов спергуалина", J. Antibiotic, 1988, 42(П), 1629-1643 и EP-A-O 105 193.

С этой же целью заявителем разработаны новые аналоги 15-дезоксиспергуалина, которые структурно отличаются от продуктов, предложенных в EP-A-O 105193, и являются химически стабильными и обладают иммуноподавляющей активностью, превышающей аналогичную активность известных соединений.

Продукты согласно изобретению отличаются от известных продуктов инверсией связи CO-NH, соединяющей остаток гуанидингексила или гуанидиноктила с центральной аминокислотой.

Соединения-аналоги 15-дезоксиспергуалина согласно изобретению представляют собой соединения общей формулы I: в которой n равно 6 или 8; A - простая связь, группа CH₂, группа CH(OH), группа CHF, группа CH(OCH₃), группа CH₂NH или группа CH₂O, их аддитивные соли.

Среди аддитивных солей можно назвать соли с кислотами, полученными при взаимодействии минеральной кислоты или органической кислоты с соединением формулы I. Предпочтительными для солеобразования минеральными кислотами являются соляная, бромистоводородная, серная и фосфорная кислоты. Предпочтительными органическими кислотами для солеобразования являются фумаровая, малеиновая, метансульфоновая, щавелевая, лимонная и трифторуксусная кислоты.

Соединения формулы I могут быть получены по известным способам при применении классических реакций, например, образования амидной связи, и в частности, применяя методы, известные в химии пептидов.

Согласно изобретению способ получения соединений формулы I и их аддитивных солей заключается в том, что он включает стадию снятия защиты с соединения формулы VII: в которой n и A имеют указанные выше значения; R₁ - защитная группа типа алкоксикарбонила, например путем реакции с сильной кислотой, с заменой R₁ на H.

Среди защищающих групп, которые пригодны для этой цели, можно упомянуть остатки, приведенные ниже с их классическими сокращениями: Ados = адамантилоксикарбонил Aos = трет.-амилоксикарбонил Boc= трет. -бутоксикарбонил/другая номенклатура: (1,1= диметилэтокси/карбонил) Fmoc=9-фторенилметилоксикарбонил Foc=фурфурилоксикарбонил Iboc=изоборнилоксикарбонил Z =бензилоксикарбонил Z (p-Cl)=п-хлорбензилоксикарбонил Z (p-OMe) - п-метоксибензилоксикарбонил Среди этих групп, называемых далее "аминозащитными", группа R₁ предпочтительно представляет собой группу Boc.

На практике способ получения соединения формулы I или одной из аддитивных солей заключается в том, что его осуществляют согласно одному из указанных вариантов: - вариант A, который включает стадии, состоящие из: (a) взаимодействия соединения формулы II: в которой n равно 6 или 8; R₁ - аминозащитная группа, например группа (1,1-диметилэтокси)карбонил, с кислотой или хлорангидридом кислоты формулы III: в которой X - хлор или группа OH; A - простая связь, группа CH₂, группа CHF, группа CH(OCH₂C₆H₅) или группа CH(OCH₃); R₂ - C₁-C₃-алкил, линейный или разветвленный или фенилметильная группа, в органическом растворителе (например, хлорированном растворителе, например дихлорметане или хлороформе), в присутствии активатора карбоксильной группы (например, карбодиимида, такого как, например, 1,3-дициклогексилкарбодиимида) и в присутствии нуклеофильного агента (а именно 1-оксибензотриазола), при температуре между 0^oC и примерно 40^oC, в соотношении примерно 1 моль соединения II на примерно 1 моль соединения III, чтобы получить соединение формулы IV: в которой R₁, R₂ и n имеют указанные выше значения; A - прямая связь, CH₂, CHF, CH(OCH₂C₆H₅) или CH(OCH₃) б) омыления соединения формулы IV, полученного таким образом, в органическом растворителе в присутствии сильного основания с получением соединения формулы V: в которой R₁ и n имеют указанные выше значения; A - простая связь, CH₂, CHF, CH(OCH₂C₆H₅) или CH(OCH₃), в) конденсации полученного таким образом соединения V с амином формулы VI: в которой R₁ имеет значения, указанные выше, в условиях, идентичных условиям стадии (a) с получением соединения формулы VII: в которой R₁ и n имеют значения, указанные выше; A - простая связь, CH₂, CHF, CH(OCH₂C₆H₅) или CH(OCH₃), г) при необходимости, снятия защиты с соединения формулы VII, в которой A является группой CH(OCH₂C₆H₅) с помощью каталитического гидрирования, чтобы получить соединение формулы VII, в которой A является группой CH(OH), д) снятия защиты с соединения УП, полученного на стадии в) или на стадии г), где A является простой связью, CH₂, CHF, CH(OH), или CH(OCH₂), чтобы удалить защитную группу R₁, например, при действии сильной кислоты, например, трифторуксусной кислоты, и получить таким образом аддитивную соль соединения формулы I, где A является простой связью, CH₂, CHF, CH(OH) или CH(OCH₃), и е) при необходимости, получение соединения формулы 1 в виде свободного основания при действии сильного основания, с последующим переводом свободного основания, в соли присоединения; - вариант B, который включает стадии: (a) взаимодействия соединения формулы VI: в которой R₁ - аминозащитная группа, указанная выше, например (1,1-диметилэтокси)карбонил) с кислотой или хлорангидридом кислоты формулы III: в которой X - атом хлора или группа OH; A - простая связь, группа CH₂, группа CH(OCH₂C₆H₅), группа CH(OCH₃), или группа CHF; R₂ - C₁-C₃-алкил, линейный или разветвленный, или фенилметильная группа, в органическом растворителе (а именно, хлорированном растворителе, например, дихлорметане или хлороформе), в присутствии активатора карбоксильной группы (а именно, карбодимиида, например, 1,3- дициклогексилкарбодиимида) и в присутствии нуклеофильного агента (а именно, 1-оксибензотриазола), при температуре между 0^oC и примерно 40^oC, при соотношении примерно 1 моль соединения VI на примерно 1 моль соединения III, с получением соединения формулы VIII: в которой R₁ и R₂ имеют указанные выше значения; A - простая связь, группа CH₂, группа CH(OCH₂C₆H₅), группа CH(OCH₃) или группа CHF, б) омыление соединения формулы VIII, полученного таким образом, в органическом растворителе в присутствии сильного основания с получением соединения формулы IX: в которой R₁ имеет значения, указанные выше; A - простая связь, группа CH₂, группа CH(OCH₂C₆H₃), группа CH(OCH₃) или группа CHF, в) конденсацию соединения формулы IX, полученного таким образом, с амином формулы II: в которой n равно 6 или 8, и R₁ имеет значения, указанные выше, в условиях, идентичных условиям стадии (a) с получением соединения формулы VII: в которой R₁ и n имеют указанные выше значения; A - простая связь, группа CH₂, группа CH(OCH₂C₆H₅, группа CH(OCH₃) или группа CHF, г) при необходимости, снятие защиты с соединения формулы VII, в которой A является группой CH(OCH₂C₆H₅), путем каталитического гидрирования, чтобы получить соединение формулы VII, в которой A является группой CH(OH), д) снятие защиты с полученного таким образом соединения формулы VII под действием сильной кислоты (например, трифторуксусной кислоты), чтобы получить аддитивную соль соединения формулы I, где A является простой связью, группой CH₂, группой CH(OH), группой CH(OCH₃) или группой CHF, е) при необходимости, получение соединения формулы I в виде свободного основания под действием сильного основания с последующим переводом свободного основания в соль присоединения, - вариант C, который включает следующие стадии: (а) ацилирование NH₂-конца основания формулы X: в которой R₁ - защитная группа, указанная выше, например (1,1-диметилэтокси)карбонил; n равно 6 или 8, с помощью хлорформиата или симметричного карбоната (например, бис-(4-нитрофенил/карбоната), в инертном растворителе при комнатной температуре 15-25^oC, (б) аминолиз полученного таким образом соединения амином формулы VI: в которой R₁ имеет указанные выше значения, чтобы получить соединение формулы VII: в которой R₁ и n имеют указанные выше значения; A - группа CH₂NH, в) снятие защиты с полученного таким образом соединения VII при действии сильной кислоты (например, трифторуксусной кислоты), чтобы получить соль присоединения соединения формулы I, где A является CH₂NH, и г) при необходимости, получение соединения формулы I в виде свободного основания при действии сильного основания, с последующим переводом свободного основания в соль присоединения, и - вариант D, который включает следующие стадии: (a) взаимодействие соединения формулы VI: в которой R₁ - амино-защитная группа, указанная выше, например 1,1-диметилэтокси/карбонил), с карбонатом формулы III': в которой R₂- C₁-C₃-алкил линейный или разветвленный, или фенилметил, в инертном органическом растворителе (например, таком ароматическом растворителе, как толуол), при температуре кипения с обратным холодильником при соотношении примерно 1 моль соединения VI на примерно 1 моль соединения III', чтобы получить соединение формулы: в которой R₁ и R₂ имеют указанные выше значения; A - группа CH₂O, б) омыление соединения формулы VIII, полученного таким образом, в органическом растворителе в присутствии сильного основания, чтобы получить соединение формулы IX: в которой R₁ имеет указанные выше значения; A - группа CH₂O, в) конденсацию полученного таким образом соединения формулы IX с амином формулы II: в которой R₁ имеет указанные выше значения; n равно 6 или 8, в органическом растворителе (например, хлорированном растворителе, например, дихлорметане или хлороформе), в присутствии активатора карбоксильной группы (например, карбодиимида, такого как 1,3-дициклогексилкарбодиимида) и в присутствии нуклеофильного агента (например, 1-оксибензотриазола) при температуре между 0^oC и примерно 40^oC, при соотношении примерно 1 моль соединения IX на примерно 1 моль соединения II, чтобы получить соединение формулы VII: в которой R₁ и n имеют указанные ранее значения; A - группа CH₂O, г) снятие защиты с соединения VII, полученного таким образом, при действии сильной кислоты (например, трифторуксусной кислоты), чтобы получить соль присоединения соединения формулы I, где А является CH₂O, и д) при необходимости, получение соединения формулы I в виде свободного основания при действии сильного основания, с последующим переводом свободного основания в соль присоединения.

Соединение VI, где R₁ является группой (1,1-диметилэтокси)карбонилом, может быть получено по методике, предложенной Раймондом Дж.Бержероном, "Общий синтез ()-15-дезоксиспергуалина", J. Org. Chem. 1987, 52, 1700-1703.

Соединения формулы IV можно получить образованием смешанного ангидрида с последующим аминолизом: кислоту формулы III вводят во взаимодействие с хлорформиатом, например, изобутипхлорформиатом, в присутствии одного эквивалента третичного основания, например, N-метилморфолина, в инертном растворителе при температуре около -30^oC в течение примерно 0,5 ч, потом добавляют в реакционную среду основание II.

Образование амидной связи также может быть осуществлено по известным для специалистов методикам, например, ацилированием соответствующего амина хлорангидридом кислоты в инертном растворителе в присутствии сильного органического основания.

Промежуточные соединения формулы VII, в которой R₁ является амино-защитной группой, например, типа оксикарбонила, n равно 6 или 8 и A является простой связью, группой CH₂, группой CH(OH), группой CH(OCH₃), группой CH₂NH, группой CH₂O, группой CHF или группой CH(OCH₂C₆H₅), являются новыми соединениями.

Соединения согласно изобретению могут входить в фармацевтические композиции, проявляющие иммунодепрессантные свойства, в которые вводят фармацевтически допустимые добавки. Активный ингредиент вводят в фармакомпозицию в терапевтически эффективном количестве.

Изобретение иллюстрируется примерами и результатами фармакологических испытаний соединений изобретения и сравнительными результатами, полученными с известными из уровня техники продуктами. Использованная ниже номенклатура является номенклатурой, употребляемой в Chemical Abstracts, согласно этой номенклатуре сложный диэфир типа трет. бутил- и этил-алкандиоата обозначен как "алкандиовая кислота, (1,1-диметил-этил) этиловый эфир".

Приготовление 1 (((6-Аминогексил)имино)метилен)бис-карбаминовая кислота, бис-(1,1-диметилэтиловый)эфир.

При перемешивании при комнатной температуре прибавляют 17,23 г (0,148 моль) 1,6-гександиамина к раствору 43 г (0,148 моль) N,N'-бис(трет.бутоксикарбонил-S-метилизотиомочевины в 300 мл тетрагидофурана. Реакционную среду перемешивают в течение 16 ч. После выпаривания растворителя полученный остаток хроматографируют на оксиде кремния, элюируя смесью хлороформ/этанол 3: 1 (объем/объем), потом смесью этилацетат/метанол/раствор аммиака концентрацией 32% в воде 6:3:0,1 (объем/объем/объем). Таким образом получают 19,7 г (выход 37%) желтого масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,25-1,60 (м, 28Н), 2,7 (т, 2Н), 3,5 (к, 2Н), 8,3 (т, 1Н), 11,5 (с, 1Н).

Работая по аналогичной методике, получают следующий продукт: (((8-Аминооктил)имино)метилен)бис-карбаминовая кислота, бис-(1 1-диметилэтиловый) эфир.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,3-1,7 (м, 32Н), 2,7 (т, 2Н), 3,4 (к, 2Н), 8,3 (т, 1Н), 11,5 (с, 1Н).

Приготовление II 6-((1,1-Диметилэтокси)карбонил)-12-оксо-2,6,11-триаза-тетрадекандиовая кислота, 1-(1,1-диметилэтил)-14-этиловый эфир.

Прибавляют 0,82 г (410^-3 моль) 1,3-дициклогексилкарбодиимида к раствору, охлажденному до 0^oC, из 0,53 г (410^-3 моль) этилмалоната в 20 мл безводного хлороформа. После 0,5 ч перемешивания прибавляют по каплям при 0^oC 1,04 г (310^-3 моль) 10-амино-6-((1,1-диметилэтокси)карбонил-2,6-диазадекановой кислоты, 1,1-диметилэтилового эфира в растворе в 5 мл безводного хлороформа. Перемешивают 5 ч при комнатной температуре и прибавляют 1,06 г (810^-3 моль) этилмалоната и 1,64 г (810^-3 моль) 1,3-дициклогексилкарбодиимида. Перемешивают 1 ч и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Полученный пастообразный остаток хроматографируют на оксиде кремния, элюируя смесью этилацетата/гексана 1: 1 (объем/объем) потом этилацетатом. Получают 0,95 г (выход 69%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,25 (т, 3Н), 1,40-1,70 (м, 24Н), 3,10-3,35 (м, 10Н), 4,2 (к, 2Н).

Приготовление III 6-((1,1-Диметилэтокси)карбонил)-12-оксо-2,6,11-триаза-тетрадекандиовая кислота, 1-(1,1-диметилэтиловый) эфир.

Растворяют 0,95 г (2,0710^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении II, в смеси 20 мл 1Н гидроксида натрия и 20 мл диметоксиэтана 1:1 (объем/объем). Перемешивают 15 мин при комнатной температуре и уменьшают до трети объем реакционной среды, которую подкисляют затем до pH, лежащего между 2 и 3, 1Н соляной кислотой. Потом 2 раза экстрагируют 50 мл хлороформа. После упаривания при пониженном давлении органических фаз полученный остаток хроматографируют на оксиде кремния, элюируя смесью этилацетата:метанола 3:1 (объем/объем), потом метанолом. Таким образом получают 0,75 г (выход 84%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (диметилсульфоксид-d₆): 1,40 (с, 18Н), 1,55 (м, 6Н), 2,90 (м, 4Н), 3,15 (м, 6Н).

Приготовление IV 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-20-((1,1-диметилэтокси) карбонил)-12,14-диоксо-2,4,11,15,20, 24-гексаазапентакоз-2-ендиовая кислота, бис-(1,1-диметилэтиловый)эфир Прибавляют при перемешивании при 0^oC к раствору 0,5 г (1,1610^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении III, в 30 мл безводного хлороформа 0,46 г (2,3210^-3 моль) 1,3-дициклогексилкарбодиимида и 0,0155 г (0,110^-3 моль) гидрата-1-оксибензотриазола. После 0,5 ч перемешивания реакционной среды прибавляют по каплям при 0^oC 0,42 г (1,1610^-3 моль) (((6-аминогексил)имино)метилен)бис-карбаминовой кислоты, бис-(1,1-диметилэтилового) эфира (полученного по методике приготовления 1 выше). Снова перемешивают реакционную смесь при 0^oC в течение 1,5 ч, потом прибавляют 0,23 г (1,1610^-3 моль), 1,3-дициклогексилкарбодиимида и продолжают перемешивание в течение 24 ч при комнатной температуре. Растворитель выпаривают при пониженном давлении и полученный остаток хроматографируют на оксиде кремния, элюируя смесью этилацетата/гексана 1:1 (объем/объем), потом этилацетатом и, наконец, смесью этилацетата/метанола 9: 1 (объем/объем). Таким образом получают 0,7 г (выход 73%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,3-1,7 (м, 50Н). 3,1-3,3 (м, 12Н), 3,4 (к, 2Н), 4,8 и 5,3 (с шир, 1Н), 6,8 и 7,15 (с шир, 2Н), 8,3 (т, 1Н), 11,5 (с, 1Н).

Пример 1 N-(4-((3-(Амино)пропил)амино)бутил)-N'-(6-((аминоиминометил)- -амино)гексил)-пропандиамид, транс-(трифторацетат) Растворяют 0,7 г (0,910^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении IV, в 10 мл трифторуксусной кислоты и 10 мл безводного дихлорметана. Реакционную смесь перемешивают 24 ч при комнатной температуре, потом выпаривают растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток поглощают 150 мл дистиллированной воды и лиофилизуют. Остаток очищают ЖХСД (жидкостной хроматографией при среднем давлении) на обратимой фазе (оксид кремния RP 18) элюируя смесью вода (ацетонитрил) трифторуксусная кислота 7:2:1 (объем/объем/объем). Получают 0,43 г (выход 66%) очень гигроскопичного твердого продукта.

¹H-ЯМР (диметилсульфоксид-d₆): 1,2-1,6 (м, 12Н), 1,9 (м, 2Н), 2,9-3,1 (м, 14Н), 7,2 (с шир 4Н), 7,7 (т, 1Н), 8 (м, 5Н), 8,7 (с шир. 2Н).

¹³H-ЯМР (диметилсульфоксид-d₆): 22,5, 23,4, 25,4, 25,6, 25,7, 28,0, 28,5, 35,8, 37,6, 38,2, 40,3, 43,0, 43,5, 46,1, 156,6, 166,9(2C).

Приготовление V 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-14-оксо-2,4,13- -триазагексадек-2-ендиовая кислота, 1-(1,1-диметилэтил)-16-этиловый эфир Работают по методике приготовления IV и исходя из 1,32 г (1010^-3 моль) этилмалоаната и 2 г (5,1810^-3 моль) (((8-аминооктил)имино)метилен)-бис-карбаминовой кислоты, бис-(1,1-диметилэтилового) эфира, получают 1,96 г (выход 75%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,25-1,70 (м, 33Н), 3,25 (к, 2Н), 3,30 (с, 2Н), 3,40 (к, 2Н), 4,2 (к, 2Н), 7,25 (с, 1Н), 8,3 (с, 1Н), 11,5 (с, 1Н).

Приготовление VI 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-14-оксо-2,4,13-триазагексадек-2-ендиовая кислота, 1-(1,1- диметилэтиловый) эфир Работают по методике приготовления III и исходя из 1,96 г (3,9210^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении V, получают 1,92 г (выход: 100%) целевого продукта в виде масла ¹H-ЯМР: (CDCl₃): 1,25-1,70 (м, 3OH), 3,27-3,39 (м, 6Н), 7,25 (с, 1Н), 8,40 (с, 1Н).

Приготовление VII 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино-22-((1,1-диметилэтокси) карбонил)-14,16-диоксо-2,4,13,17,22,26-гексаазагептакоз-2-ендиовая кислота, бис-(1,1-диметилэтиловый)эфир Работают по методике приготовления IV и исходя из 1,85 г (3,9210^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении VI, и 1,35 г (3,9210^-3 моль) 10-амино-6-((1,1-диметилэтокси) карбонил)-2,6-диазадекановой кислоты, 1, 1-(диметилэтилового) эфира, получают 0,41 г (выход 13%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,30-1,70 (м, 54H), 3,1-3,5 (м, 14H), 4,8 и 5,3 (с шир., 1H), 6,7 и 7,1 (с шир., 2H), 8,3 (т, 1H), 11,5 (с, 1H).

Пример 2 N-(4-((3-амино)пропил)амино)бутил)-N'-(8-((аминоиминометил) амино)октил)-пропандиамид, трис-(трифторацетат).

Работают по методике примера 1 и исходя из 0,41 г (0,5110^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении VII, получают 0,24 г (выход 65%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (диметилсульфоксид)-d₆): 1,2-1,6 (м, 16Н), 1,9 (м, 2Н), 2,9-3,1 (м, 14Н), 7,2 (с шир., 4Н), 7,7 (т, 1Н), 8 (м, 5Н), 8,7 (с шир. 2Н).

¹³С-ЯМР (диметилсульфоксид)-d₆): 22,9, 23,7, 26,0, 26,1, 26,3, 28,4, 28,5, 28,6, 36,2, 37,9, 38,6, 40,7, 43,3, 43,8, 46,4, 156,8, 166,7, 166,9.

Приготовление VIII 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-13-метокси-12-оксо-2,4,11- триазатетрадек-2-ендиовая кислота, 1-(1,1-диметил-этил)-14-метиловый эфир Работают по методике приготовления IV и исходя из 1,8 г (1210^-3 моль) 2-метоксипропандиовой кислоты, метилового эфира, и 4 г (11,10^-3 моль) (((6-аминогексил)имино)метилен)бис-карбаминовой кислоты, бис-(1,1-диметилэтилового)эфира, и заменив хлороформ на дихлорметан, получают 4,8 г (выход 87%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,35-1,65 (м, 26H), 3,2 (м, 2H), 3,35 (к, 2H), 3,45 (с, 3H), 3,8 (с, 3H), 4,3 (с, 1H), 6,7 (т, 1H), 8,3 (т, 1H), 11,5 (с, 1H).

Приготовление IX 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-13-метокси-12-оксо-2,4,11-триазатетрадек-2-ендиовая кислота, 1-(1,1-диметилэтиловый) эфир Работают по методике приготовления III и исходя из 4,6 г (9,410^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении VIII, получают 4 г (выход 89%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,3-1,65 (м, 26H), 3,1-3,5 (м, 4H), 3,6 (с, 3H), 4,3 (с, 1H), 6,7 (т, 1H), 8,4 (т, 1H), 11,5 (с шир., 1H).

Приготовление X 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-20-((1,1-диметилэтокси) карбонил)-13-метокси-12,14-диоксо-2,4,11,15, 20, 24-гексаазапентакоз-2-ендиовая кислота, бис-(1,1-диметилэтиловый) эфир Работают по методике приготовления IV и исходя из 3,77 г (810^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении IX, и 2,7 г (810^-3 моль) 10-амино-6-((1,1-диметилэтокси)карбонил)-2,6-диазадекановой кислоты, 1,1-(диметилэтилового) эфира, и заменив хлороформ на дихлорметан, получают 4 г (выход 63%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,3-1,8 (м, 5OH), 3,0-3,45 (м, 12H),3,6 (с, 3H), 4,1 (м, 1H), 4,8 и 5,3 (с шир.1H), 6,9 (с шир., 2H), 8,3 (т, 1H), 11,5 (с, 1H).

Пример 3 N-(4-((3-(амино)пропил)амино)бутил)-N'-(6-((аминоиминометил)амино) гексил)-2-метоксипропандиамид, трис-(трифторацетат) Работают по методике примера 1 и исходя из 3,47 г (4,310^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении X, получают 2,86 г (выход 89%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (диметилсульфоксид-d₆): 1,25-1,70 (м, 12H), 1,9 (м, 2H), 2,85-3,2 (м, 12H), 3,25 (с, 3H), 4,1 (с, 1H), 6,8-8,7 (м, 12H).

¹³C-ЯМР (CD₃OD): 24,2, 25,3, 27,36, 27,37, 29,9, 30,2, 37,9, 39,2, 40,2, 42,5, 45,7, 58,6, 158,7, 169,4, 169,8.

Приготовление XI 6-((1,1-Диметилэтокси)карбонил)-13-метокси-12-оксо-2,6,11- триазатетрадекандиовая кислота, 1-(1,1-диметилэтил)-14-метиловый эфир.

Работают по методике приготовления IV и исходя из 2,62 (17,710^-3 моль) 2-метоксипропандиовой кислоты, метилового эфира, и 3,45 г (10,010^-3 моль) 10-амино-6-((1,1-диметилэтокси) карбонил)-2,6-диазадекановой кислоты, 1,1-(диметилэтилового) эфира, получают 1,5 г (выход 18%) продукта, целевого в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,4-1,8 (м, 24H), 3,1-3,4 (м, 8H), 3,5 (с, 3H), 3,8 (с, 3H), 4,3 (с, 1H), 4,8 и 5,3 (с, шир., 1H), 5,7 (с, 1H).

Приготовление XII 6-((1,1-Диметилэтокси)карбонил)-13-метокси-12-оксо-2,6-11- триазатетрадекандиовая кислота, 1-(1,1-диметилэтиловый) эфир Работают по методике приготовления III и исходя из 1,5 г (3,110^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XI, получают 1,18 г (выход 81%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,4-1,8 (м, 24H), 3,15-3,35 (м, 8H), 3,5 (с, 3H), 4,3 (с, 1H), 5,2-5,7 (с двойной, 1H), 6,3-6,9 (с двойной, 1H).

Приготовление XIII 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-22-((1,1-диметилэтокси)-карбонил) -15-метокси-14,16-диоксо-2,4,13,17,22,26-гексаазагептакоз-2-ендиовая кислота, бис-(1,1-диметилэтиловый эфир Работают по методике приготовления IV и исходя из 1,18 г (2,5610^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XII; получают 1,4 г (выход 65%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,3-1,8 (м, 54H), 3,1-3,7 (м, 15H), 4,1 (с, 1H), 4,8 и 5,3 (с шир., 1H), 6,9 (с шир. 2H), 8,3 (т,1H), 11,5 (с, 1H).

Пример 4 N-(4-((3-(амино)пропил)амино)бутил)-2-метокси-N'-(8-((аминоиминометил) амино)октил)-пропандиамид, трис-(трифторацетат) Работают по методике примера 1 и исходя из 1,37 г (1,6510^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XIII, получают 0,89 г (выход 70%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (диметилсульфоксид-d₆): 1,2-1,7 (м, 16H), 1,9 (м, 2H), 2,9-3,10 (м, 12H), 3,3 (с, 3H), 4,1 (с, 1H), 6,8-8,7 (м, 12H).

¹³C-ЯМР (D₂O): 23,8, 25,0, 26,5, 27,0, 27,3, 28,5, 29,1, (2C), 37,5, 39,8, 40,2, 42,5 45,1, 48,2, 58,4, 63,9, 82,5, 157,8, 169,8, 170,2.

Приготовление XIV 6-((1,1-Диметилэтокси)карбонил-13-окса-12-оксо-2,6,11-триазапентадекандиовая кислота, 1-(1,1-диметилэтил)-15-метиловый эфир К раствору 4,5 г (21,410^-3 моль) ((феноксикарбонил)окси)-уксусной кислоты, метилового эфира, в 100 мл толуола прибавляют при перемешивании 7,4 г (21,410^-3 моль) 10-амино-6-((1,1-диметилэтокси)карбонил-2,6-диазадекановой кислоты, 1,1-(диметилэтилового) эфира, в растворе в 20 мл толуола. Реакционную среду кипятят с обратным холодильником в течение 15 ч. Выпаривают растворитель при пониженном давлении и полученный остаток очищают хроматографией на оксиде кремния, элюируя смесью метилциклогексан/этилацетат 7:3 (объем/объем), потом этилацетатом. Получают 8,4 г (выход 85%)целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,45-1,65 (м, 24H), 3,05-3,25 (м, 8H), 3,8 (с, 3H), 4,7 (с, 2H), 4,9 и 5,3 (с шир., 1H).

Приготовление XV 6-((1,1-Диметилэтокси)карбонил)-13-окса-12-оксо-2,6,11- триазапентадекандиовая кислота, 1-(1,1-диметилэтиловый) эфир Работают по методике приготовления III и исходя из 8,45 г (18,310^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении ХIV, получают 6,7 г (выход 81%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,3-1,8 (м, 24H), 3,10-3,25 (м, 8H), 4,7 (с, 2H), 5,0 (т, 1H), 6,8 (с, 1H).

Приготовление XVI 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-21-((1,1-диметилэтокси)-карбонил)-14-окса-12,15- диоксо-2,4,11,16,21,25-гексаазагексакоз-2-ендиовая кислота, бис-(1,1-диметилэтиловый) эфир Работают по методике приготовления IV и исходя из 3 г (6,710^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XV, и 2,4 г (6,710^-3 моль) (((6-аминогексил)имино)метилен)бис-карбаминовой кислоты, бис-(1,1-диметилэтилового) эфира, получают 3,85 г (выход 73%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃, D₂O): 1,35-1,65 (м, 5OН), 3,10-3,30 (м, 12H), 4,55 (с, 2H), 5,2-5,5 (с шир. 1H), 6,4 (с. шир., 1H).

Приготовление XVII 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-23-((1,1-диметил-этокси)-карбонил)-16-окса-14,17-диоксо-2,4,13,18,23,27-гексаазаоктакоз-2-ендиовая кислота, бис-(1,1-диметилэтиловый)эфир Работают по методике приготовления IV и исходя из 1,5 г (3,3510^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XV, и 1,3 г (3,3510^-3 моль) (((8-аминооктил)имино)метилен)-бис-карбаминовой кислоты, бис-(1,1-диметилэтилового)эфира, получают 1,56 г (выход 57%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,40-1,80 (м, 54H), 3,10-3,40 (м, 12H), 4,5 (с, 2H), 5,1-5,4 (с шир., 1H), 6,3 (с шир., 1H), 5,3 (т, 1H), 11,5 (с шир., 1H).

Пример 5 2-(((4-((3-(Амино)пропил)амино)бутил)амино)карбонилокси)-N-(6-((аминоиминометил)амино)гексил)-ацетамид, трис-(трифторацетат).

Работают по методике примера 1 и исходя из 3,85 г (4,910^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XVI, получают 2,61 г (выход 72%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (диметилсульфоксид-d₆): 1,25-1,55 (м, 12H), 1,9 (м, 2H), 2,80-3,10 (м, 12H), 4,35 (с, 2H), 5,5-8,6 (м, 12H).

¹³С-ЯМР (D₂O): 23,6, 24,5, 26,2, 26,3, 26,7, 28,6, 29,0, 37,3, 39,8, 40,6, 41,9, 45,2, 48,2, 63,7, 157,5, 159,2, 174,4.

Пример 6 2-(((4-((3-(Амино)пропил)амино)бутил)амино)карбонилокси-N-(8-((аминоиминометил)амино)октил)-ацетамид, трис-(трифторацетат) Работают по методике примера 1 и исходя из 1,56 г (1,910^-3 моль), продукта, полученного в приготовлении XVII, получают 0,96 г (выход 66%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (диметилсульфоксид-d₆): 1,2-1,6 (м, 16H), 1,9 (м, 2H), 2,8-3,2 (м, 12H), 4,35 (с, 2H), 6,8-8,6 (м, 12H).

¹³C-ЯМР (D₂O): 23,6, 24,5, 26,5, 26,6, 26,7, 28,6, 28,9, (2С), 29,0, 37,9, 40,0, 40,6, 41,9, 45,2, 48,2, 64,7, 158,0, 159,0, 172,1.

Приготовление XVIII 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-13-фенилметокси-12-оксо-2,4, 11-триазатетрадек-2-ендиовая кислота, 1-(1,1-диметилэтил)-14-этиловый эфир Работают по методике приготовления IV и исходя из 1,3 г (5,4610^-3 моль) 2-фенилметоксипропандиовой кислоты, этилового эфира, и 1,95 г (5,4610^-3 моль (((6-аминогексил)имино)-метилен)-бис-карбаминовой кислоты, бис-(1,1-диметилэтилового) эфира, получают 1,57 г (выход 50%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,2-1,8 (м, 29H), 3,25 (к, 2H), 3,4 (к, 2H), 4,2 (к, 2H), 4,4 (с, 1H), 4,5-4,8 (двойной д, 2H), 6,7 (с, 1H), 7,3 (с, 5H), 8,3 (т, 1H), 11,5 (с, 1H).

Приготовление XIX 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино-13-фенилметокси-12-оксо-2,4, 11-триазатетрадек-2-ендиовая кислота, 1-(1,1-диметилэтиловый) эфир Работают по методике приготовления III и исходя из 1,57 г (2,710^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XVIII, получают 1,4 г (выход 94%) целевого продукта в виде желтоватого масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,2-1,8 (м, 26H), 3,2-3,5 (м, 4H), 4,4 (с, 1H), 4,6-5,0 (двойной д, 2H), 6,8 (с, 1H), 7,3 (с, 5H), 8,3 (т, 1H).

Приготовление XX 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино-20-((1,1-диметил-этокси) карбонил)-12,14-диоксо-13-фенилметокси-2,4,11,15,20, 24-гексаазапентакоз-2-ендиовая кислота, бис-(1,1-диметилэтиловый)эфир Работают по методике приготовления IV и исходя из 1,4 г (2,5410^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XIX, и из 0,88 г (2,5410^-3 моль) 10-амино-6-((1,1-диметилэтокси)- карбонил)-2,6-диазадекановой кислоты, 1,1-(диметилэтилового) эфира, получают 2,1 г (выход 94%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,3-1,8 (м, 5OН), 3,1-3,5 (м, 12H), 4,3 (с, 1H), 4,8 (с, 2H), 6,8-7,0 (м, 2H), 7,3 (с, 5H), 8,3 (т, 1H), 11,5 (с, 1H).

Приготовление XXI 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-20-((1,1-диметил-этокси) карбонил)-13-окси-12,14-диоксо-2,4,11,15,20, 24-гексаазапентакоз-2-ендиовая кислота, бис-(1,1-диметилэтиловый) эфир К раствору 1,27 г (1,4510^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XX, в 120 мл этанола, прибавляют 0,1 г 10%-ного палладия на угле. Перемешивают при комнатной температуре и в атмосфере водорода при атмосферном давлении в течение 2 ч. Затем отфильтровывают катализатор и выпаривают органическую фазу. Таким образом получают 1 г (выход 88%) маслянистого остатка, который используют без дополнительной очистки для получения продукта примера 7.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,2-1,8 (м, 50Н), 3,1-2,6 (м, 12H), 4,3 (с, 1H), 4,6-5,3 (с шир., 3H), 8,3 (с, 1H), 11,5 (с, 1H).

Пример 7 N-(4-((3-(амино)пропил)амино)бутил)-2-окси-N'-(6-((амино-иминометил) амино)гексил)-пропандиамин, трис-(трифторацетат).

Работают по методике примера 1 и исходя из 1 г (1,2710^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XXI, получают 0,6 г (выход 65%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (диметилсульфоксид-d₆): 1,2-1,6 (м, 12H), 1,85 (м, 2H), 2,7-3,2 (м, 12H), 4,3 (с, 1H), 6,8-8,6 (м, 12H).

¹³C-ЯМР (D₂O): 23,5, 24,4, 26,0, 26,2, 28,4, 28,8, 37,2, 39,1, 39,9, 41,7, 45,1, 48,0, 73,0, 154,8, 171,1, 171,4.

Приготовление XXII 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-12-оксо-2,4,11,14- -тетраазапентадек-2- ендиовая кислота, 1-(1,1-диметилэтил)-15-фенилметиловый эфир.

К раствору, охлажденному до -30^oC, 3 г (1410^-3 моль) карбобензилоксиглицина и 2,8 г (2810^-3 моль) N-метилморфолина в 50 мл тетрагидрофурана прибавляют по каплям 1,6 г (1410^-3 моль) изобутилхлорформиата в растворе в 5 мл тетрагидрофурана. Реакционную смесь перемешивают 0,5 ч и прибавляют 5,4 г (1410^-3 моль) (((6-аминогексил)имино)метилен)-бис-карбаминовой кислоты, бис-(1,1-диметилэтилового) эфира в растворе в 20 мл тетрагидрофурана. Перемешивают еще 2 ч при -30^oC, потом 24 ч при комнатной температуре. После фильтрации реакционной смеси и выпаривания фильтрата при пониженном давлении полученный остаток очищают хроматографией на оксиде кремния, элюируя смесью этилацетата/метилциклогексана 1:1 (объем/объем). Таким образом получают 7,16 г (выход 91%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,3-1,7 (м, 26H), 3,2 (к, 2H), 3,4 (к, 2H), 3,8 (д, 2H), 5,15 (с, 2H), 5,5 (с шир., 1H), 6,0 (с шир., 1H), 7,3 (с. 5H).

Приготовление XXIII 13-амино-3-(((1,1-диметилэтокси)карбонил)амино-12-оксо-2,4-11- триазатридек-2-еновая кислота, 1,1-диметилэтиловый эфир.

Работают по методике приготовления XXI и исходя из 7,1 г (1310^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XXII, получают 5,3 г (выход 98%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,3-1,6 (м, 28H), 3,25-3,45 (м, 6H), 7,3 (с, 1H), 8,3 (т, 1H), 11,5 (с, 1H).

Приготовление XXIV 3-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино-21-((1,1-диметил-этокси)- -карбонил)-12,15-диоксо-2,4,11,14,16,21,25-гектаазагексакоз-2-ендиовая кислота, бис-(1,1-диметилэтиловый) эфир.

К раствору 5,3 г (1210^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XXIII, в 50 мл безводного тетрагидрофурана прибавляют 4,3 г (1310^-3 моль) бис-(4-нитрофенил) карбоната маленькими порциями. Реакционную смесь перемешивают 1 ч при комнатной температуре и прибавляют по каплям 4,5 г (1310^-3 моль) 10-амино-6-((1,1-диметилэтокси)карбонил)-2,6-диазадекановой кислоты, 1,1(диметилэтилового) эфира в растворе в 50 мл безводного тетрагидрофурана. Снова перемешивают 24 ч при комнатной температуре и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на оксиде кремния, элюируя этилацетатом. Таким образом получают 6,01 г (выход 64%) целевого продукта в виде масла.

¹H-ЯМР (CDCl₃): 1,3-1,7 (м, 50Н), 3,1-3,35 (м, 12H), 3,8 (д, 2H), 4,8 и 5,8 (с шир., 3H), 6,9 (т, 1H), 8,3 (т, 1H), 11,5 (с, 1H).

Пример 8 N-(4-((3-(амино)пропил)амино)бутил-N'-((((6-((аминоиминометил) амино)гексил)амино)карбонил)метил)мочевина, трис-(трифторацетат) Работают по методике примера 1 и исходя из 6 г (7,610^-3 моль) продукта, полученного в приготовлении XXIV, получают 4,75 г (выход 86%) целевог