Производные n-ацилпролилдипептидов

Производные n-ацилпролилдипептидов

Реферат

 

Использование: в медицине как соединения, обладающие антиамнестическим, антигипоксическим и анорексигенным действием, проявляющие низкую токсичность, способствующие улучшению способности к обучению и памяти. Сущность изобретения: производные N-ацил-пролилдипептидов общей формулы I где R¹ = (C¹ - C⁴)алкил, циклоалкил, аралкил или арил; R² = Н, (C⁴ - C⁵)алкил, карбамидоалкил или карбалкоксиалкил; R³ = гидрокси, алкокси, амино, алкиламино или диалкиламино; n = 0 - 3, при этом а) когда R¹ = фенил, R² = водород или изопропил, а n = 0, R³ = не метокси; б) когда R¹ = третбутил, R² = водород, а n = 0 или 1, R³ = не метиламино; в) когда R¹ = трет-бутил, R² = изобутил, метил, бензил или карбамидометил, а n = 0, R³ = не метиламино, г) когда R¹ = трет-бутил, R² = карбометоксиметил, n = 0, R³ = не изопропиламино. Соединения малотоксичны. Описываемые соединения получают путем конденсации требуемых кислот в гомогенной фазе при блокировании не вступающих в реакцию функциональных групп с использованием конденсирующих агентов, таких как, например, карбодиимид. 10 з.п. ф-лы, 14 табл.

Ноотропные соединения (усилители умственных возможностей) представляют собой перспективную группу лекарственных веществ. Известные ноотропные соединения включают пирацетам (N-карбамидо-метилпирролидон-2), который был широко введен в медицинскую практику в начале 80-х годов. В дальнейшем были синтезированы N-замещенные-2-пирролидоны (например, этирацетам, оксирацетам, анирацетам, прамирацетам, ролцирацетам и др.).

В патенте США N 4743616 Танаки и др. описаны N-ацилпирролидиновые соединения, имеющие эндопептидазную ингибиторную активность и оказывающие антиамнестическое действие. В отличие от производных пирацетама, соединения, описанные Танакой и др., содержат пролиновую группу.

Т. Гудашева и Р. Островская описали (Chem.Pharmac. J., 1985, N 11, pp. 1322-1329) биологически активные N-концевые производные пироглутаминовой кислоты, имеющие формулу В другом источнике (Т.А.Гудашева и др. Chem.Pharmac. J., 1988, N 3, pp. 271-2759) описано биологически активное соединения N-ацилпролина, имеющее формулу Необходимость в высокоактивных нетоксичных ноотропных препаратах, которые могут быть использованы для лечения ухудшений умственных способностей, вызванных различными деструктивными факторами, существует до сих пор. Настоящее изобретение направлено на удовлетворение этой потребности.

Настоящее изобретение относится к новой группе соединений, которые обладают различными типами психотропной активности, в частности антиамнестическим, антигипоксическим и анорексигенным действием.

Согласно настоящему изобретению предложены производные N-ацилпролилдипептидов общей формулы I где R¹=(C₄-C₅)алкил, циклоалкил, аралкил или арил; R² = H, (C₁-C₄)алкил, карбамидоалкил или карбалкоксиалкил; R³ = гидрокси, алкокси, амино, алкиламино или диалкиламино; n = 0-2; при этом а) когда R¹=фенил, R²=водород или изопропил, а n=0, R³ не метокси, б) когда R¹=трет-бутил, R²=водород, а n=0 или 1, R³ = не метиламино, в) когда R¹=трет-бутил, R²= изобутил, метил, бензил или карбамидобутил, а n=0, R³ не метиламино, г) когда R¹= трет-бутил, R²= карбометоксиметил, n=0, R³ не изопропиламино.

Производные N-ацилпролилдипептидов могут представлять собой где R¹ = изобутил, пентил, 1-адамантил, фенил, фенилметил или фенилпропил R³ = OH, OC₂H₅, NH₂, NHCH₃, N(CH₃)₂; или где R¹ = фенилметил или фенил; R³ = OC₂H₅ или NH₂; или же где R¹ = фенилметил или фенил.

Производное N-ацилпролилдипептида согласно изобретению может быть выбрано из следующих соединений: Соединения формулы I отличаются от известных ноотропных препаратов тем, что они содержат в своей структуре остаток природной аминокислоты L-пролина (вместо пирролидона), совместно с остатком второй природной аминокислоты. Эти N-ацил-L-пролиновые дипептиды имеют предельно низкую токсичность и высокоактивны.

Примерами осуществления изобретения могут служить следующие соединения: I N-фенацетил-L-пролилглицинэтиловый эфир II N-фенацетил-L-пролилглицинамид III N-фенацетил-L-пролил -- аланинэтиловый эфир IV N-фенилацетил-L-пролил -- аланинамид V N-фенилацетил-L-пролил-L-аспарагиновой кислоты диэтиловый эфир VI N-фенилацетил-L-пролил-L-аспарагинамид VII N-бензоил-L-пролилглицинэтиловый эфир VIII N-изовалерил-L-пролилглицинэтиловый эфир IX N-фенилацетил-L-пролил-L-валинэтиловый эфир X N-бензоил-L-пролил-L-валинэтиловый эфир XI N-бензоил-L-пролил -- аланинэтиловый эфир XII N-бензоил-L-пролил -- аланинамид XIII N-бензоил-L-пролилглицинамид XIV N-фенилацетил-L-пролилглицин-N-метиламид XV N-фенилацетил-L-пролилглициндиметиламид XVI N-фенилацетил-L-пролил-L-глутаминовой кислоты диэтиловый эфир XVII N-фенилацетил-L-пролил-L-лейцинамид XVIII N-фенилацетил-L-пролилглицин XIX N-фенилацетил-L-пролил-ГАМК-метиловый эфир XX N-фенилацетил-L-пролил-L-аланинэтиловый эфир XXI N-капроил-L-пролилглицинэтиловый эфир XXII N-(1-адамантоил)-L-пролилглицинэтиловый эфир XXIII N-фенилбутирил-L-пролилглициновый эфир Настоящее изобретение направлено также на получение фармацевтических составов и способы лечения, которые предусматривают использование в качестве активного вещества фармацевтически эффективных количеств N-ацилпролилдипептида формулы 1, как определено выше, предпочтительно соединение общей формулы где R¹ выбирают предпочтительно из группы, состоящей из изобутила, пентила, L-адамантила, фенила, фенилметила и фенилпропила; R³ выбирают предпочтительно из группы, состоящей из NH₂, NH CH₃, N(CH₃)₂, OH и OC₂H₅. Более предпочтительно в фармацевтический состав и методы лечения включать согласно изобретению эффективную дозу соединения формулы Здесь "фармацевтически эффективное количество" или "эффективное количество" обозначает количество, способное обеспечить эффективное лечение синдрома, из-за которого пациент страдает.

Соединения согласно изобретению обладают психотропной активностью, включая и антиамнестическую активность, и улучшают умственные функции, нарушенные вследствие мозговой травмы, интоксикации, старения и гипоксии. Эти соединения также проявляют анорексигенный эффект, антиалкогольную активность и уменьшают психические расстройства пренатально алкоголизированного потомства.

Настоящее изобретение относится также к различным способам лечения больных людей путем введения эффективной дозы соединения согласно изобретению. Такие способы предусматривают лечение людей, страдающих снижением умственных способностей вызванных мозговой травмой, старением, старческим слабоумием, и умственно отсталых детей; ожирения; нарушения центральной нервной системы (ЦНС) в результате химической интоксикации, преимущественно вызванной сатурнизмом; серповидной клеточной анемии; синдрома отмены бензодиазепина, который проявляется в виде агрессивности, тревожности и припадков; а также алкогольной зависимости.

Подробное описание изобретения Приведенные выше соединения формулы 1 были получены хорошо известными способами синтеза пептидов. Обычный процесс получения рассматриваемых соединений состоит в смешивании и конденсации требуемых аминокислот, как правило, в гомогенной фазе.

Конденсация в гомогенной фазе может быть выполнена следующим образом: а) конденсация аминокислоты, имеющей свободную карбоксильную группу и защищенную другую реакционноспособную группу, с аминокислотой, которая имеет свободную аминогруппу и защищенные другие реакционноспособные группы, в присутствии конденсирующего агента, такого как карбодиимид; б) конденсация аминокислоты, имеющей активированную карбоксильную группу и защищенную другую реакционноспособную группу, с аминокислотой, которая имеет свободную аминогруппу и защищенные другие реакционноспособные группы; в) конденсация аминокислоты, имеющей свободную карбоксильную группу и защищенную другую реакционноспособную группу, с аминокислотой, имеющей активированную аминогруппу и защищенные другие реакционноспособные группы.

Карбоксильная группа может быть активирована превращением ее в хлорангидридную, азидную, ангидридную группу или активированный эфир, такой как N-оксисукцинимидный, N-ок-сибензтриазольный, пентахлорфениловый или паранитрофениловый эфир. Аминогруппа может быть активирована превращением ее в фосфитамид или "фосфоразным" методом.

Наиболее общими для рассмотренных выше реакций конденсации являются: карбодиимидный метод; азидный метод; метод смешанных ангидридов; метод активированных эфиров. Эти методы описаны в "The Peptides". Vol.1. 1965 (Academic Press), E. Schroeder, K.Lubke, или в "The Peptides", Vol.1, 1979 (Academic Press) E.Cross, L.Meinhofen.

Предпочтительными методами конденсации при получении пептидов формулы 1 являются метод смешанных ангидридов или карбодиимидный метод. Реакцию конденсации, осуществляемую по методу смешанных ангидридов, предпочтительно проводят с соблюдением "Андерсоновских" условий (G.W.Anderson et al. J.Am. Chem. Soc, 89, 50-12-5017 (1967)). Карбоксильную составляющую (для образования смешанного ангидрида N-ацилпролина предпочтительно активируют изобутилхлорформиатом. Могут быть использованы также этилхлороформиат и метилхлороформиат.

Лучшими растворителями являются смесь этилацетата с диметилформамидом, чистый диметилформамид и хлороформ. Лучшими третичными основаниями являются N-метилфорфолин, N-этилморфолин и триэтиламин.

Реакцию конденсации, осуществляемую карбодиимидным методом, предпочтительно проводят в присутствии оксибензотриазола (W.Konig, R.Geiger, Chem. Ber., 103, 788-789 (1979)). Конденсация по карбодиимидному методу может быть также проведена в присутствии других добавок, таких как паранитрофенол, пентахлорфенол или N-оксисукцинимид.

Реакционноспособные группы, которые не должны участвовать в конденсации, могут быть защищены группами, которые легко удаляются, например, гидролизом или восстановлением. Так, карбоксильная группа может быть защищена этерфикацией этанолом, метанолом, трет-бутанолом, бензиловым спиртом.

Аминогруппу обычно эффективно защищают кислотными группами, например остатками алифатических, ароматических, гетероциклических карбоновых кислот, такими как ацетил, бензоил, пиридинкарбоксил, кислотными группами, производными от угольной кислоты, такими как этоксикарбонил, бензилоксикарбонил, третбутилоксикарбонил; или кислотными группами, производными от сульфокислоты, такой как пара-толуосульфониловая.

Термином "функциональные производные пептидов формулы 1" обозначены: 1) N-ацильные производные алифатической или ароматической кислот; 2) эфиры, производные от низших алифатических спиртов; 3) амиды, или моноалкил-, или диалкилзамещенные амиды, в которых алкильные группы имеют один или два C-атомов.

При синтезе заявляемых пролилдипептидов N-ацильные производные предпочтительно получали, используя пролин, который предварительно ацетилировали подходящей ацильной группой. Эта ацильная группа функционировала также в качестве защитной группы в дальнейшем ходе синтеза. Можно также ввести желательную аминогруппу после синтеза пептидов, ацилируя дипептиды обычными способами. Предпочтительными N-ацильными группами являются N-фенилацетил и N-бензоил.

Эфиры пептидов согласно формуле 1 получают предпочтительно путем использования аминокислоты в форме желаемого эфира. Они могут быть получены также соответствующей этерификацией полученного пептида. Предпочтительно, чтобы эфиры были производными метанола или этанола.

Амиды пептидов формулы 1 получают аммонолизом (т.е. реакцией с NH₃) алкилэфира соответствующего дипептида или реакцией с аминокислотой в виде желательного амида. Амиды дипептидов также могут быть получены введением амидной группы в соответствующий дипептид каким-либо подходящим способом, например обработкой амином в присутствии конденсирующего агента. Более предпочтительны незамещенные амиды, монометил- и диметиламиды.

Была изучена способность соединений согласно изобретению препятствовать нарушению памяти, вызываемому максимальным электрошоком или приемом скополамина. В отличие от N-ацилпирролидиновых соединений, ранее описанных Танака и др. , соединения согласно изобретению не рассчитаны на подавлением активности пролилэндопептидазы. Как описано в примерах, испытанные соединения проявляют антиамнестическую активность (пример 12). Было показано, что предпочтительное соединение, имеющее формулу 1 (см. табл. 1), способно облегчить разные фазы формирования памяти: получение информации, сохранение и восстановление ее в памяти в различных процедурах пассивного и активного избегания (примеры 12, 13). Показано, что это соединение способно повышать скорость адаптации (пример 14). Соединение 1 предотвращает снижение умственных способностей, вызванное фронтальной лобэктомией (пример 15), пренатальной алкоголизацией и пренатальной гипоксией (пример 16), старением (пример 17). Оно проявляет также антигипоксическую активность (пример 18).

При наблюдении за тем, как пирацетам взывал некоторые из вышеописанных эффектов, установлено, что уровень активной дозы для него составляет 200-800 мг/кг. В отличие от этого заявляемого соединения вызывает такие же эффекты при дозах приблизительно 0,1-0,5 мг/кг.

Описанное здесь соединение 1 имеет дополнительное полезное свойство - анорексигенное действие. В отличие от известных анорексигенных лекарств соединение 1 не вызывает адренергической стимуляции (возбуждения, увеличения кровяного давления и др.). Соединение 1, кроме того, нетоксично (пример 20) и действует при пероральном приеме (пример 12). Показано, что соединение 1 способно ослаблять абстинентный синдром при отмене бензодиазепина, уменьшая тревожность, агрессивность и выраженность пентилентетразолового киндлинга (пример 21).

Вещества согласно изобретению могут быть использованы в любой форме, которая пригодна для перорального приема, такой как пилюли, таблетки, драже. Описанные здесь вещества могут быть также использованы парентерально путем инъекций или вливаний в форме фармацевтических препаратов, содержащих активный ингредиент в сочетании с фармацевтически допустимым носителем. Вещества согласно изобретению могут быть использованы для лечения больных со снижением умственных способностей, вызванным мозговой травмой, интоксикациями, процессами старения, синдром Корсакова, болезнью Альцгеймера, органическим мозговым синдромом, алкоголизмом, включая пренатальные алкогольные повреждения, гипоксией , задержкой умственного развития детей, ожирением, инсультом, мозговыми нарушениями вследствие врожденных дисфункций или генетических отклонений, нарушением ЦНС в результате химической интоксикации, включая сатурнизм для лечения от токсикомании, включая поддержание абстиненции и отмены, и некоторыми гематологическими отклонениями, включая серповидноклеточную анемию. Предпочтительно эти вещества могут быть использованы в дозах 0,5-5,0 мг в день.

Далее изобретение подробно описано с учетом различных специфических и предпочтительных применений и в дальнейшем будет описываться со ссылками на последующие примеры. Очевидно, однако, что имеется множество вариантов расширения, вариаций и модификаций, выходящих за рамки приведенных примеров и подробного описания, но соответствующих общему изобретательскому замыслу и объему притязаний.

Примеры.

В дальнейшем используются следующие сокращения: Pro - пролил Asp - аспартил Аsn - аспарагинил Val - валил Ala - аланил -Ala --аланил Leu - лейцил Gly - глицил Glu - глутамил EtOH - этанол MeOH - метанол DMF - диметилформамид DCC - дициклогексилкарбодимид DCU - дициклогексилмочевина EtAC - этилацетат BZ - бензоил Ad - 1-адамантил OHBt - 1-оксибензтриазол Et₃N - триэтиламин Phac - фенилацетил TLC - тонкослойная хроматография В примерах была использована следующая аппаратура: точки плавления определяли по серно-кислотному прибору в открытых капиллярах без корректировки; удельное вращение плоскости поляризации света регистрировали на автоматическом поляриметре Perkin-Elmer-241; спектры ядерного магнитного резонанса (ЯМР) были получены на спектрометре Bruker AC-250; Химические сдвиги выражали в млн^-1 относительно Me₄Si.

Для обозначения резонансных сигналов использовали следующие сокращения: s - синглет, d - дуплет, t - триплет, g - квадруплет, m - мультиплет.

Константы спин-спинового взаимодействия даны в Гц.

Тонкослойную хроматографию (TLC) выполняли на силикагелевых пластинах 60F254 Merck с проявлением в иодной камере или ультрафиолетовых лучах.

В экспериментах на живых организмах использовали самцов беспородных крыс-альбиносов массой приблизительно 180-220 г и/или самцов беспородных мышей-альбиносов массой около 18-22 г.

В алкогольных тестах на живых организмах использовали потомство алкоголизированных матерей подобного вида. Самцов крыс-альбиносов линии Вистар в возрасте 24-26 месяцев использовали в экспериментах, связанных со старением.

Пример 1.

Синтез этилового эфира из N-фенилацетил-L-пропил-глицина N-Phac-L-Pro-Gly-O Et (1) a) N-фенилацетил-L-пропил, N-Phac-L-Pro-OH К 5,75 г (0,05 моль) L-пролина в 25 мл 2N NaOH добавляли по каплям с перемешиванием при температуре ниже 10^oC 12,5 мл 4N NaOH и 6,6 мл (0,05 моль) N-фенилацетилхлорида (t_кип 89 - 90^oC/10 Torr). Реакционную смесь перемешивали 15 мин, экстрагировали EtAc для удаления хлорида, затем подкисляли 2N HCl до pH 3, экстрагировали хлороформом, высушивали сульфатом натрия и выпаривали. Получали 6,2 г N-Phac-L-Pro-OH в виде белых кристаллов c: t_пл 150 - 152^oC, []²_D⁰ = -60,5^o (c = 0,4, DMF), R_f = 0,66 (силикагель, диоксан-вода 9:1).

¹H-ЯМР-спектр в CDCl₁ / (млн^-1): 1,77 - 2,29 (m, CH₂-CH₂ , Pro, 4H); 3,40 - 3,63 (m, CH₂ , Pro, 2H); 3,63 и 3,73 (каждый s, CH₂-C₆H₅, 2H); 4,56 и 4,38 (каждый dd, CH Pro, 1H); 7,18 - 7,39 (m, CH₂C₆H₅, 5H); 11,38 (ушир. s, COOH, 1H).

Рассчитано для C₁₃H₁₅NO₃ : C = 66,93; H = 6,49; N = 6,00.

Найдено: C = 66,65; H = 6,40; N = 5,86.

б) Этиловый эфир N-фенилацетил-L-пролилглицина В раствор 2,33 г (0,01 моль) N-Phac-L-Pro-OH (t_пл 150 - 151^oC) в 50 мл DMF добавляли с перемешиванием при -10^oC 1,39 мл (0,01 моль) Et₃N и затем 1,34 мл (0,01 моль) изобутилхлорформиата. Через 2 мин к реакционной смеси добавляли по каплям в течение 25 мин, 1,4 г (0,01 моль) гидрохлорида глицинэтилового эфира (t_пл 140 - 142^oC) и раствор 1,39 мл (0,01 моль) Et₃N в 25 мл DMF, чтобы избежать повышения температуры. Затем перемешивание продолжали при охлаждении в течение 30 мин и при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Осадок отфильтровывали и фильтрат выпаривали в вакууме, осадок растворяли в CHCl₃, раствор промывали 5% NaHCO₃, водой, 1N HCl и вновь водой, высушивали сульфатом натрия и выпаривали. Образованные 1,66 г (54%) масла смешивали с эфиром до получения белых кристаллов: t_пл 96 - 97^oC; []²_D⁰ = -120, c = 0,4 CHCl₃), R_f = 0,80 (силикагель, диоксан-вода 9:1).

¹H-ЯМР спектр в (CD₃)₂SO, (млн^-1): 1,18 (t, CH₃CH₂O, 55% 5H); 1,17 (t, CH₃CH₂O, 45% 3H); 1,65 - 2,35 (m, CH₂-CH₂Pro , 4H); 3,2 - 3,4 (m, CH₂ , Pro, 2H); 3,40 (s, CH₂-С₆H₅, 45% H); 3,67 (s, CH₂-C₆H₅, 55% 2H); 3,80 (d, CH₂Gly , J = 5,9, 55% 2H); 3,86 (d, J = 5,9, CH₂Gly , 45% 2H); 4,08 (q, CH₃CH₂-O, 55% 2H); 4,09 (q, CH₃CH₂-O, 45% 2H); 4,32 (dd, CH , Pro, 55% 1H); 4,48 (dd, CH , Pro, 45% 1H); 7,1 - 7,6 (m, CH₂C₆H₅, 5H); 8,29 (t, J = 5,9, NH Gly, 55% 1H); 8,63 (t, J = 5,9 NH Gly, 45% 1H).

Рассчитано для C₁₇H₂₂N₄O₄: C = 64,15; H=6,92; N=8,80.

Найдено: C=63,93; H=6,81; N=9,07.

Пример 2.

Синтез N-фенилацетил-L-пролилглицинамида Phac-L-Pro-Gly- NH₂ (II) N-Phac-L-Pro-Gly-OEt (0,53 г; t_пл 96 - 97^oC []²_D⁰-122,0 в CHCL₃, см. пример 1/б/) растворяли в 25 мл насыщенного NH₃, см. пример 1/б/) растворяли в 25 мл насыщенного NH₃ этанола. Реакционную смесь обрабатывали в течение 12 - 16 ч при комнатной температуре. Этанол затем выпаривали, а остаток промывали эфиром. Выход амида II, который был получен в виде масла, составил 0,5 г : R_f = 0,36 (силикагель, CHCl₃-MeOH 9:1); []²_D⁰ = 58,5 (C = 0,2, CHCl₃).

¹H-ЯМР спектр в CHCl₃, (млн^-1) : 1,8 - 2,3 (m, CH₂-CH₂ , Pro, 4H); 3,3 - 3,5 (m, CH₂ , Pro, 2H); 3,55 - 3,75 (m, AB-часть ABX-системы, CH₂Gly , 2H); 3,66 (s, CH₂C₆H₅, 2H): 4,07 (dd, CH , Pro, 1H); 4,37 (t, NHGly, 1H); 5,63 и 7,86 (каждый s, NH₂); 7,2 - 7,4 (m, C₆H₅, 5H).

Рассчитано для C₁₅H₁₉N₃O₃ : C=62,53; H=6,48; N=14,61.

Найдено: C=62,28; H=6,54; N=14,53.

Пример 3.

Синтез этилового эфира N-фенил-L-пролил -- аланина N-Phac-L-Pro -- Ala-OEt (III) К раствору 0,61 г (2,6 ммоль) N-фенилацетил-L-пролина (t_пл 151^oC, []²_D⁰ = -60,5 в DMF) в 25 мл CHCl₃ при -10^oC добавили 0,29 мл (2,6 ммоль) N-метилморфолина и затем дополнительно 0,35 мл (2,6 ммоль) изобутилхлорформиата. Через 2 мин в реакционную смесь добавили 0,4 г (2,6 ммоль) гидрохлорида этилового эфира - аланина (t_пл 69-71^oC) и 0,29 мл метилморфолина в 4 мл CHCl₃. Перемешивание продолжали при охлаждении 40 мин и затем при комнатной температуре 2 ч. Остаток фильтровали, а растворитель выпаривали на вращающемся испарителе. Осадок растворяли в CHCl₃ и промывали 5%-ным раствором NaHCO₃, водой, 1N HCl, водой и затем сушили над сульфатом натрия и выпаривали. Выход составил 0,58 г или 98% N-Phac-L-Pro -- Ala-OEt, который получили в виде прозрачного масла: R_f=0,52 (силикагель, CHCl₃-MeOH, 9:1); R_f= 0,53 (силикагель, диоксан-вода, 9:1); []²_D⁰ = 92,25^o (C=0,3, CHCl₃).

¹H-ЯМР спектр с (CD₃)₂SO, (млн^-1): 1,17 (t, CH₃CH₂-O, 68% 3H); 1,13 (t, CH₃CH₂O, 32% 3H); 1,7-2,2 (m, CH₂-CH₂, Pro, 4H); 2,42 (m, CH₂-Ala, 2H); 3,2-3,3 (m, CH₂, Pro, 2H); -3,40 (s, CH₂-C₆H₅, 32% 2H) при HDO-сигнале; 3,66 (m, CH₂-C₆H₅, 68% 2H); 4,01 (q, CH₃CH₂O, 32% 2H); 4,04 (q, CH₃-CH₂O, 68% 2H); 4,41 (m, CH₂-Ala, 2H); 4,21 (dd, CH, Pro, 1H); 7,1-7,36 (m, CH₂-C₆H₅, 5H); 7,93 (t, NH, 1H).

Рассчитано для C₁₈H₂₄N₂O₄: C=65,03; H=7,29; N=8,42.

Найдено: C=65,37; H=7,77; N=8,38.

Пример 4.

Синтез N-фенилацетил-L-пролил - аланинового амида N-Phac-L-Pro -- Ala-NH₂ (IV) Для сатурации этанольного раствора (15 мл) 0,36 г N-фенилацетил-L-пролил -- аланин-этилового эфира, полученного в примере 3, барботировали газообразный аммиак. Отстоявшийся в течение ночи раствор выпаривали, а остаток очищали в хроматографической колонке (силикагель), используя CHCl₃ в качестве элюента. Амид IV был получен в виде масла: выход 0,22 г (61%); R_f= 0,28 (силикагель, CHCl₃ - метанол, 9:1); []²_D⁰ = 22,8 (C=0,33; CHCl₃).

¹H-ЯМР (Me₂SO-d₆), / (млн^-1); 1,69-2,2 (m, CH₂-CH₂ Pro, 4H); 2,16-2,31 (m, CH₂-Ala 2H); 3,1-3,3 (m, CH₂ , -Ala , 2H); 3,3-3,45 (m, CH₂ Pro, 2H); 3,66 (s, CH₂-C₆H₅, 2H); 4,22 и 4,41 (каждый dd, CH Pro, 1H); 6,84, 7,36 и 6,86, 7,38 (каждый шир. s, NH₂, 2H); 7,12-7,35 (m, CH₂C₆H₅, 5H); 7,89 и 8,22 (каждый t, NH -Ala , 1H).

Рассчитано для C₁₆H₂₁N₃O₃: C=63,34; H=6,99; N=13,85.

Найдено: C=63,81; H=7,03; N=14,01.

Пример 5.

Синтез диэтилового эфира N-фенилацетил-L-пролил-L-аспарагиновой кислоты N-Phac-L-Pro-L-Asp (OEt)₂, (V) К хорошо перемешанному раствору 1 г (4,3 ммоль) N-фенилацетил-L-пролина в 40 мл абсолютного EtAc добавили 0,48 мл (4,3 ммоль) N-метилморфолина при -10^oC. После этого последовательно добавляли 0,57 мл (4,3 ммоль) изо-BuOC(O)Cl, через 2-3 мин - смесь 0,91 г (4,3 ммоль) L-Asp(OEt)₂HCl; 0,48 мл (4,3 ммол) N-метилморфолина и 15 мл EtAc. Перемешивание продолжали в течение 1 ч при -10^oC. После того как смесь отстоялась в течение 1 часа, остаток отфильтровывали, раствор выпаривали и осадок растворяли в смеси этанола и эфира. Полученный в результате твердый остаток отделяли, маточный раствор выпаривали и осадок (1,65 г) очищали в хроматографический колонке (силикагель) с использованием CHCl₃ и смеси CHCl₃-EtOH в качестве элюентов. Диэтилэфир N-фенилацетил-L-пролил-L-аспарагиновой кислоты был получен в виде масла: R_f=0,87 (силикагель, CHCl₃-EtOH, 9:3); []²_D⁰ = -38,0 (C=2,2; CHCl₃).

¹H-ЯМР (Me₂SO-d₆), (млн^-1): 1,23 (t, J=7,16 Hz, CH₃CH₂O, 90% 3H); 1,24 (t, J=7,16, CH₃CH₂O, 10% 3H); 4,10 (q, CH₃CH₂-O, 90% 2H); 4,12 (q, CH₃CH₂-O, 10% 2H); 1,25 (t, J=7,14, CH₃CH₂O, 90% 3H); 1,26 (t, J=7,14, CH₃CH₂O, 10% 3H); 4,19 (q, CH₃CH₂-O, 90% 2H); 4,21 (q, CH₃CH₂O, 10% 2H); 1,75-2,40 (m, CH₂-CH₂ Pro, 4H); 3,45-3,65 (m, CH₂ , Pro, 2H); 4,58 (dd, J=8,00; J=2,59; CH Pro, 1H); 2,78; 2,95 (dd, AB-часть ABX-системы, J_AB=17,04; J_AX=4,88; J_BX = 4,88 CH₂ Asp, 90% 2H); 2,80; 3,00 (dd CH₂ Asp, 10% 2H); 4,81 (dt, J=CH, NH 8,50; CH Asp 1H); 7,5 (d, J=8,50; NH Asp, 90% 1H); 7,03 (d, J=8,40; NHAsp, 10% 1H); 3,70 (s, CH₂C₆H₅, 2H); 7,20-7,36 (m, C₆H₅, 5H).

Рассчитано для C₂₁H₂₈N₂O₆: C=62,35; H=6,99; N=6,92.

Найдено: C=62,63; H=7,01; N=6,74.

Пример 6.

Синтез амида N-фенилацетил-L-пролил-L-аспарагина N-Phac-L-Pro-L-Asn-NH₂ (VI) Для сатурации метанольного раствора (25 мл) 0,5 г N-Phac-L-Pro-L-Asp(OEt)₂, полученного так же, как в примере 5, через него барботировали газообразный аммиак при 0^oC. После отстаивания в течение ночи раствор выпаривали, осадок растворяли в нагретой смеси этанола с хлороформом и к остатку добавляли пентан. Полученный в результате остаток собирали и высушивали; выход составлял 0,45 г амида N-фенилацетил-L-пролил- L-аспарагина: t_пл 170 - 172^oC; R_f = 0,24 (силикагель, CHCl₃-EtOH, 9:3), []²_D⁰ = -55,7 (C = 1,4 DMSO).

¹H-ЯМР (Мe₂SO-d₆), (млн-1): 1,60 - 2,30 (m, CH₂-CH₂ , Pro, 4H); 2,35 - 2,50 (m, CH₂ , Asn, 2H) при сигнале растворителя; 3,63 (s, CH₂=C₆H₅, 2H), 4,36 (m, CH Pro, 1H); 4,4 - 4,6 (m, CH Asn, 1H); 6,80 - 7,60 (m, C₆H₅, 5H); 6,8 - 7,1 (s, NH₂, 4H); 8,15; 8,25; 8,35 (каждый d, NH Asn, 1H).

Рассчитано для C₁₇H₂₂N₄O₄: C = 58,94; H = 6,41; N = 16,16.

Найдено: C = 59,23; H = 6,66; N = 6,04.

Пример 7.

Синтез этилового эфира N-бензоил-L-пролилглицина, N-BZ-L-Pro-Gly-OEt (VII) а) N-бензоил-L-пролин К хорошо перемешиваемому раствору L-пролина (5,75 г, 0,05 моль) в 2N NaOH (25 мл) добавляли капельно из разных капельных воронок 4N NaOH (12,5 мл) и бензоилхлорид (5,8 мл, 0,05 моль), поддерживая температуру около 0 - 4^oC. Смесь через 15 мин подкисляли 1N HCl. Выделившееся масло экстрагировали CHCl₃, смешанный органический экстракт высушивали (MgSO₄) и растворитель удаляли. К осадку добавляли эфир и смесь отстаивали в течение ночи при 0^oC. Отделяли кристаллы N-бензоил-L-пролина. Выход составлял 3,42 г (60%), t_кип 152 - 154^oC, []²_D⁰ = -68,5 , (C = 0,4; CHCl₃); R_f = 0,13 (силикагель, CHCl₃-CH₃OH; 9:1).

Рассчитано для C₁₂H₁₃NO₃: C = 65,73; H = 5,99; N = 6,39.

Найдено: C = 65,64; H = 6,03; N 6,54.

б) Этиловый эфир N-бензоил-L-пролилглицина К хорошо перемешиваемому раствору N-бензоил-L-пролина (2,19 г, 0,01 моль) в смеси абсолютного EtAc (50 мл) и DMF (10 мл) добавляли капельно при -10^oC N-метилморфин (1,12 мл, 0,01 моль) и изо-BuOC(O)Cl (1,34 мл, 0,01 моль). Через 2 мин добавляли смесь NH₂CH₂COOEt HCl (1,4 г, 0,01 моль), N-метилморфолина (1,12 мл, 0,01 моль), и DMF (20 мл). После 30-минутного перемешивания с охлаждением и полуторачасового при комнатной температуре растворитель удаляли в вакууме. Остаток растворяли в хлороформе, промывали 5%-ным водным раствором NaHCO₃, 1N HCl, водой и затем высушивали с помощью Na₂SO₄. После фильтрации растворитель выпаривали, к осадку добавляли эфир и отделяли полученные кристаллы эфира VII. Выход 1,67 г (76%); t_кип 63 - 65^oC []²_D⁰ = 148,0 (C = 0,4; CHCl₃); R_f = 0,71 (силикагель, CHCl₃-CH₃OH; 9:1).

¹H-ЯМР (Me₂SO-d₆) (млн^-1): 1,18 (t, J = 7,04, CH₃CH₂O, 75% 3H); 1,09 (t, J = 7,04, CH₃CH₂O, 25% 3H); 1,73 - 2,28 (m, CH₂-CH₂ , Pro, 4H); 3,3 - 3,4 (m, CH₂ Pro, 2H); 3,60 и 3,74 (dd, J = 5,87 и J = 8,22; CH₂Gly , 25% 2H); 3,85 (d, J = 5,87, CH₂Gly , 75%, 2H); 4,10 (q, CH₃ CH₂O), 75 % 2H); 4,13 (q, CH₃CH₂O, 25% 2H); 4,47 (dd, CH Pro, 25% 1H); 4,48 (dd, CH Pro, 75% 1H), 7,33 - 7,62 (m, C₆H₅, 5H); 8,36 (t, J = 5,87; NH, 75% 1H); 8,40 (t, J = 5,87; NH, 25% 1H).

Рассчитано для C₁₆H₂₀N₂O₄: C = 63,14; H = 6,16; N = 9,20.

Найдено: C = 63,56; H = 6,87; N = 9,48.

Пример 8.

Синтез этилового эфира N-изовалерил-L-пролилглицина Изо-C₄H₉C(O)-LPro-Gly-OЕt (VIII) а) N-изовалерил-L-пролин К хорошо перемешиваемому раствору L-пролина (1,15 г; 0,01 моль) в 2N- водн. NaOH (5 мл) добавляли одновременно по каналам при температуре около 0 - 4^oC 4N-водн. NaOH (2,5 мл) и изовалерил хлорид (1,4 мл; 0,012 моль). Через 15 мин смесь подкисляли (pH 2 - 3) 1N HCl и экстрагировали с помощью CHCl₃. Смешанный органический экстракт высушивали, используя MgSO₄ и растворитель удаляли. N-изовалерил-L-пролин был получен в виде масла. Выход составил 0,85 г; R_f = 0,66 (силикагель, n-C₄H₉OH-AcOH-H₂O, 5:1:2); []²_D⁰ = -129,3 (C = 0,6; CHCl₃).

¹H-ЯМР (CDCl₃), / (млн^-1): 0,99 (d, -CH(CH₃)₂, 6H); 2,25 (m, CH(CH₃)₂, 1H); 2,3 (m, CH₂CH(CH₃)₂, 2H); 1,9 - 2,65 (m, CH₂-CH₂, 4H); 3,45 - 3,70 (m, CH₂ Pro, 2H); 8,85 (шир. s, COOH, 1H).

Рассчитано для C₁₀H₁₇NO₃: C = 60,27; H = 8,62; N = 7,02.

Найдено: C = 60,34; H = 8,74; N = 7,23.

б) Этиловый эфир N-изовалерил-L-пролилглицина (VIII) К хорошо перемешиваемому раствору N-изовалерил-L-пролина (0,74 г; 0,0037 моль) в abs.EtAc (15 мл) добавляли N-этилморфолин (0,45 мл; 0,0037 моль) и изо-BuOC(O)Cl (0,5 мл; 0,0037 моль). Через 2 - 3 мин капельно добавляли при температуре от -10 до -5^oC смесь NH₂CH₂COOEt HCl (0,52 г; 0,0037 моль), N-этилморфолина (0,47 мл, 0,0037 моль) и DMF (10 мл). Перемешивание продолжали в течение 30 мин с охлаждением и 1,5 ч при комнатной температуре. Остаток отделяли фильтрацией и маточную жидкость выпаривали. Осадок растворяли в хлороформе, промываемом 5%-ным водным раствором NaHCO₃, водой, IN водным раствором HCl, водой и затем высушивают посредством MgSO₄. После фильтрации растворитель выпаривают, а остаток (0,6 г) очищают в хроматографической колонке (силикагель), используя CHCl₃ в качестве элюента. Получают 0,49 г (49%) эфира VIII в виде прозрачного масла, R_f = 0,55 (силикагель, CHCl₃-MeOH 9:1), []²_D⁰ - 113,4^o (C 0,3; CHCl₃), ПМР-спектр в CDCl₃, (м.д. ): 0,99 (д, J=5,97, CH(CH₃)₂, 6H): 2,22 (м, CH(CH₃)₂, 1H), 1,27 (т, J=7,16, OCH₂CH₃, 3H), 4,18 (кв, OCH₂CH₃, 2H), 1,75-2,60 (м,CH₂-CH₂Pro,4H), 3,35-3,70 (м, CH₂Pro 2H), 3,96 и 4,02 (каждый дд, CH₂Gly,2H), 3,85-4,10 (м, CH₂CH(CH₃)₂), 6,50 и 7,59 (каждый т, NHGly 1H).

Найдено, % : C 58,78; H 8,74; N 9,87 C₁₄H₂₄H₂O₄ Вычислено, % : C 59,12; H 8,52; N 9,85.

Пример 9.

Этиловый эфир N-фенилацетил - L - пролил- L -валина, N - Phac - L - Pro - L - Val - OC₂H₅ (IX) Получен в условиях примера 1 из 2,33 г (0,01 м) N - фенилацетил- L -пролина и 1,8 г (0,01 моль) хлоргидрата этилового эфира L -валина с выходом 72% в виде масла, R_f = 0,64 (силикагель, диоксан-вода 9:1), []²_D⁰ = -99,3^o (C = 0,35; CHCl₃).

ПМР спектры CDCl₃, м.д.): 0,83 и 0,86 (каждый д, J = 6,9, CH(CH₃)₂Val 90% 6H); 0,89 и 0,95 (каждый д, J=6,9, CH(CH₃)₂ Val, 10% 6H); 1,27 (т, CH₃-CH₂-O, 90% 3H), 1,28 (т, CH₃-CH₂-O, 10% 3H); 1,7-2,5 (м,C