Производные бензофуранилалкан-карбоновой кислоты, или смесь их изомеров, или отдельные изомеры, или их соли

Производные бензофуранилалкан-карбоновой кислоты, или смесь их изомеров, или отдельные изомеры, или их соли

Реферат

 

Изобретение относится к новым производным бензофуранилалкан-карбоновой кислоты, обладающим противовоспалительной активностью, общей формулы I в которой R¹ - группа формулы OR³, где R³ - циклоалкил, 6-членный насыщенный гетероцикл; R² - незамещенный или замещенный фенил; V - алкиленовая цепь; W - тетразолил, группа COR⁶ или CONR⁷R⁸, где R⁶, R⁷ и R⁸ - алкил, циклоалкил, фенил, водород. Соединения можно применять в качестве лекарства для лечения острых и хронических воспалительных процессов. 1 с. и 2 з.п.ф-лы, 20 табл.

Изобретение относится к новым производным алканкарбоновой кислоты, обладающим ценными биологическими свойствами, в частности к производным бензофуранилалкан-карбоновой кислоты, обладающим противовоспалительной активностью.

Известны производные бензофуранилалкан-карбоновой кислоты, обладающие противовоспалительной активностью (см. заявку EP N 0146243).

Задачей изобретения является расширение ассортимента производных бензофуранилалкан-карбоновой кислоты, обладающих противовоспалительной активностью.

Поставленная задача решается предлагаемыми производными бензофуранилалкан-карбоновой кислоты общей формулы (I) где R¹ - водород, галоид или группа формулы -OR³, где R³ означает водород, циклоалкил с 3 - 6 атомами углерода, 6-членный насыщенный или ненасыщенный гетероцикл с одним гетероатомом из чиста азота или кислорода, незамещенные или замещенные одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей галоид, циано, нитро, прямые или разветвленные алкил и алкоксикарбонил, каждый с 1 - 6 атомами углерода, остаток формулы прямые или разветвленные алкил и алкенилен, каждый с 1- 8 атомами углерода, незамещенные или замещенные 1 - 3 одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей трифторметил, дифторметил, галоид, циано, карбоксил, гидроксил, прямые или разветвленные алкокси, алкоксикарбонил, карбонил и ацил, каждый с 1 - 6 атомами углерода в алкильной или ацильной части или 5 - 7-членным насыщенным или ненасыщенным гетероциклом с 1 - 2 гетероатомами из числа азота или кислорода, с которым может быть сконденсировано ароматическое кольцо, N-метилзамещенным имидазолилом, остатком формулы или фенилом, причем все указанные кольца могут быть замещены 1 - 3 одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей нитро, галоид, карбоксил и прямые или разветвленные алкил и алкоксикарбонил, каждый с 1 - 6 атомами углерода в алкильной части, или прямые или разветвленные алкил и алкенилен, каждый с 1 - 8 углерода, замещенные группой формулы -CO-NR⁴R⁵, где R⁴ и R⁵ одинаковы или различны и означают водород, фенил, циклоакил с 3 - 7 атомами углерода, бензил, формил, прямые или разветвленные алкил и алкенил, каждый с 1 - 6 атомами углерода, незамещенные или замещенные карбоксилом, гидроксилом или прямым или разветвленным алкоксикарбонилом с 1 - 6 атомами углерода в алкильной части, или R⁴ и R⁵ вместе с атомом азота образуют 5 - 7-членный насыщенный гетероцикл, или R³ - защитная группа для гидроксила; V - прямые или разветвленные алкиленовая и алкениленовая цепи, каждая с 2 - 8 атомами углерода; W - циано, тетразолил, группа формулы -CO-R⁶, -CO-NR⁷R⁸ или остаток формулы где R⁶ означает гидрокси, циклоалкилокси с 3 - 7 атомами углерода или прямой или разветвленный алкокси с 1 - 8 атомами углерода, R⁷ и R⁸ одинаковы или различны и означают водород, фенил, прямые или разветвленные алкил и ацил, каждый с 1 - 6 атомами углерода, незамещенные или замещенные гидроксилом, или R⁷ означает водород и R⁸ - гидроксил, или R⁷ и R⁸ вместе с атомом азота образуют 5- или 6-членный насыщенный гетероцикл; R² - фенил, незамещенный или замещенный 1 - 3 одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей гидроксил, галоид, нитро, тетразолил, трифторметокси, дифторметокси, трифторметил, дифторметил, циано, карбоксил, прямые или разветвленные алкил, алкилтио, алкоксил, алкоксикарбонил, и ацил, каждый с 1 - 8 атомами углерода в алкильной или ацильной части, или фенил, незамещенный или замещенный группой формулы -NR⁹R¹⁰ и -SO₂-NR¹¹R¹², где R⁹ и R¹⁰ имеют указанное выше для радикалов R⁷ и R⁸ значение, при этом значения радикалов R⁷, R⁸, R⁹ и R¹⁰ одинаковы или различны, или R⁹ означает водород и R¹⁰ - прямой или разветвленный ацил с 1 - 6 атомами углерода, R¹¹ и R¹² имеют указанные выше для радикалов R⁷ и R⁸ значения, при этом значения радикалов R⁷, R⁸, R¹¹ и R¹² одинаковы или различны, или смесью их изомеров или отдельными изомерами или их солями.

В рамках данного изобретения предпочитаются физиологически приемлемые соли. Физиологически приемлемыми солями могут быть аммониевые соли или соли металла предлагаемых соединений вышеприведенной общей формулы (I), которые содержат свободную гидроксильную группу. В качестве таких солей в частности предпочитаются, например, натриевые, калиевые, магниевые или кальциевые соли, а также аммониевые соли, производимые от аммиака или органических аминов, таких, как, например, этиламин, ди- или триэтиламин, ди- или триэтаноламин, дициклогексиламин, диметиламиноэтанол, аргинин, лизин и этилендиамин.

Физиологически приемлемыми солями могут быть также соли предлагаемых соединений с неорганическими или органическими кислотами. Предпочитаются соли с такими неорганическими кислотами, как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота и серная кислота, и соли с органическими карбоновыми кислотами и сульфокислотами, такими, как, например, уксусная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, яблочная кислота, лимонная кислота, винная кислота, этансульфокислота, бензолсульфокислота, толуолсульфокислота и нафталендисульфокислота.

Предлагаемые соединения могут иметься в стереоизомерных формах, которые представляют собой энантиомеры или же диастереомеры. Изобретение относится как к антиподам, так и к рацемическим формам, а также к смесям диастереомеров. Рацемические формы, также как и диастереомеры, можно известным методом разделять на чистые стереоизомеры.

Предпочтительными соединениями общей формулы (I) являются соединения, у которых R¹ означает водород, фтор, хлор, бром, или группу формулы -OR³, где R³ означает водород, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, хинолил, пиридил, незамещенные или замещенные одинаковыми или различными остатками из группы, включающей фтор, хлор, бром, йод, циано, нитро, прямые или разветвленные алкил и алкоксикарбонил, каждый с 1 - 5 атомами углерода, остаток формулы прямые и разветвленные алкил и алкенилен, каждый с 1 - 6 атомами углерода, незамещенные или замещенные 1 - 3 одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей трифторметил, дифторметил, фтор, хлор, бром, йод, циано, карбоксил, гидроксил, прямые или разветвленные алкокси, алкоксикарбонил и ацил, каждый с 1 - 5 атомами углерода в алкильной или ацильной части, или хинолилом, пиридилом, пиразолилом, имидазолилом, или N-метилзамещенным имидазолилом, с которым может быть сконденсировано ароматическое кольцо, остатком формулы или фенилом, причем все кольца могут быть замещены 1 или 2 одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей нитро, фтор, хлор, бром, йод, карбоксил и прямые или разветвленные алкил и алкоксикарбонил, каждый с 1 - 5 атомами углерода в алкильной части, или прямые или разветвленные алкил и алкенилен, каждый с 1 - 6 атомами углерода, замещенные группой формулы -OC-NR⁴R⁵, где R⁴ и R⁵ одинаковы или различны и означают водород, фенил, циклопропил, циклопентил, бензил, формил, прямые или разветвленные алкил и алкенил, каждый с 1 - 5 атомами углерода, незамещенные или замещенные карбоксилом, гидроксилом или прямым или разветвленным алкоксикарбонилом с 1 - 4 атомами углерода, или R⁴ и R⁵ вместе с атомом азота образуют морфолинил, пиперидинил, пиперазинил или пирролидинил, или же R³ означает ацетил, бензил, тетрагидропиранил, бензил, триметилсилил, третбутилдиметилсилил, 4-нитробензил, 4-метоксибензил, V - прямая или разветвленная алкиленовая и алкениленовая цепь, каждая с 2 - 6 атомами углерода, W - циано, тетразолил, группа формулы -CO-R⁶, -CO-NR⁷R⁸, или остаток формулы где R⁶ означает гидроксил, циклопропилокси, циклопентилокси, циклогексилокси или прямой или разветвленный алкоксил с 1 - 6 атомами углерода, R⁷ и R⁸ одинаковы или различны и означают водород, фенил, прямые или разветвленные алкил и ацил, каждый с 1 - 4 атомами углерода, незамещенные или замещенные гидроксилом, или R⁷ означает водород и R⁸ - гидроксил, или же R⁷ и R⁸ вместе с атомом азота образуют пирролидинил, пиперидинил или морфолинил, R² - фенил, незамещенный или замещенный 1 - 3 одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей гидроксил, фтор, хлор, бром, йод, нитро, трифторметокси, дифторметокси, трифторметил, дифторметил, циано, карбоксил, тетразолил, прямые или разветвленные алкил, алкилтио, алкоксил, алкоксикарбонил и ацил, каждый с 1 - 6 атомами углерода в алкильной или ацильной части, или фенил, незамещенный или замещенный группой формулы -NR⁹R¹⁰ или -SO₂NR¹¹R¹², где R⁹ и R¹⁰ имеют указанное выше для радикалов R⁷ и R⁸ значение, при этом значения R⁷, R⁸, R⁹ и R¹⁰ одинаковы или различны, или R⁹ означает водород и R¹⁰ - прямой или разветвленный ацил с 1 - 6 атомами углерода, R¹¹ и R¹² имеют указанные выше для радикалов R⁷ и R⁸ значения, причем значения R⁷, R⁸, R¹¹ и R¹² одинаковы или различны, или смесь их изомеров, или отдельные изомеры, или их соли.

В частности предпочитаются соединения общей формулы (I), у которых R¹ - фтор, хлор, бром, или группа формулы -OR³, где R³ водород, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, хинолил и пиридил, незамещенные или замещенные одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей фтор, хлор, бром, циано, нитро, прямые или разветвленные алкил и алкоксикарбонил, каждый с 1 - 4 атомами углерода, остаток формулы прямые или разветвленные алкил и алкенилен, каждый с 1 - 5 атомами углерода, незамещенные или замещенные 1 или 2 одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей трифторметил, дифторметил, фтор, хлор, бром, циано, карбоксил, гидроксил, прямые или разветвленные алкоксил, алкоксикарбонил и ацил, каждый с 1 - 5 атомами углерода в алкильной или ацильной части, хинолилом, пиридилом, имидазолилом или N-метилзамещенным имидазолилом, с которыми может быть сконденсировано ароматическое кольцо, остатком формулы или фенилом, при этом все кольца могут быть замещены 1 - 2 одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей нитро, фтор, хлор, бром, карбоксил, прямые или разветвленные алкил и алкоксикарбонил, каждый с 1 - 4 атомами углерода, или прямые или разветвленные алкил и алкенилен, каждый с 1 - 4 атомами углерода, замещенные группой формулы -CO-NR⁴R⁵, где R⁴ и R⁵ одинаковы или различны и означают водород, фенил, бензил, циклопропил, циклопентил, формил, прямые или разветвленные алкил и алкенил, каждый с 1 - 5 атомами углерода, незамещенные или замещенные гидроксилом, карбоксилом или прямым или разветвленным алкоксикарбонилом с 1 - 3 атомами углерода, или R⁴ или R⁵ вместе с атомом азота образуют морфолинил, пиперидинил, пиперазинил или пирролидинил, или же R³ означает тетрагидропиранил, ацетил или бензил, V - прямые или разветвленные алкиленовая и алкениленовая цепь, каждая с 2 - 5 атомами углерода, W - циано, тетразолил или группа формулы -CO-R⁶, -CO-NR⁷R⁸, или остаток формулы где R⁶ означает гидроксил, циклопропилокси, циклопентилокси, циклогексилокси или прямой или разветвленный алкоксил с 1 - 5 атомами углерода, R⁷ и R⁸ одинаковы или различны и означают водород, фенил, прямые или разветвленные алкил и ацил, каждый с 1 - 4 атомами углерода, незамещенные или замещенные гидроксилом, или R⁷ означает водород, а R⁸ - гидроксил, или R⁷ и R⁸ вместе с атомом азота образуют пирролидинил, пиперидинил, или морфолинил, R² - фенил, замещенный 1 - 3 одинаковыми или различными заместителями из группы, включающей гидроксил, фтор, хлор, бром, нитро, тетразолил, трифторметил, дифторметил, дифторметокси, трифторметокси, циано, карбоксил и прямые или разветвленные алкил, алкилтио, алкоксил, алкоксикарбонил и ацил, каждый с 1 - 5 атомами углерода в алкильной или ацильной части, или фенил, замещенный группой формулы -NR⁹R¹⁰, или -SO₂-NR¹¹R¹², где R⁹ и R¹⁰ имеют указанное выше для радикалов R⁷ и R⁸ значение, при этом значения R⁷, R⁸ R⁹ и R¹⁰ одинаковы или различны, или R⁹ означает водород, а R¹⁰ - прямой или разветвленный ацил с 1 - 5 атомами углерода, R¹¹ и R¹² имеют указанные выше для радикалов R⁷ и R⁸ значения, при этом значения R⁷, R⁸ R¹¹ и R¹² одинаковы или различны, или смесь их изомеров, или отдельные изомеры, или их соли.

Соединения общей формулы (I) можно получать известными методами, например следующими методами [А] и [Б].

[А] Соединения общей формулы (II) где W и V имеют вышеуказанные значения; R¹³ означает группу формулы -OR^3', где R^3' имеет указанное для радикала R³ значение за исключением водорода, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы (III) R²-CO-CH₂-Y, где R² имеет указанное значение; Y означает типичную удаляемую группу, такую, как, например, хлор, бром, йод, тозилат или мезилат, предпочтительно бром, в среде инертного растворителя в присутствии основания.

[Б] В случае, если V означает алкенил, то соединение общей формулы (IV) где R² и R¹³ имеют указанные значения, подвергают взаимодействию с N-бромсукцинимидом в среде инертного растворителя в присутствии катализатора, получаемое при этом соединение общей формулы (V) где R² и R¹³ имеют указанные значения, подвергают гидролизу и получаемое при этом соединение общей формулы (VI) где R² и R¹³ имеют указанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы (VII) (OR¹⁴)₂P(O)-CH₂-CO-NR⁷R⁸, где R⁷ и R⁸ имеют вышеуказанные значения; R¹⁴ означает алкил с 1 - 4 атомами углерода, в среде инертного растворителя в присутствии основания.

При этом в случае свободной гидроксильной функции (R³ = H) защитные группы удаляют известными приемами, в случае получения кислот (R⁶ = OH) сложные эфиры подвергают гидролизу, а в случае получения сложных эфиров (R⁶ OH) кислоты подвергают этерификации подходящим спиртом в присутствии катализатора известными приемами, а в случае получения амидов (R³ = -CONR⁴R⁵/W = CONR⁷R⁸), сложные эфиры или же свободные карбоновые кислоты подвергают взаимодействию с аминами формулы (VIII) HN-R¹⁵R¹⁶, где R¹⁵ и R¹⁶ имеют указанные для радикалов R⁴, R⁵, R⁷ и R⁸ значения, при необходимости в присутствии вспомогательного вещества.

Вышеуказанные способы поясняются следующими реакционными схемами: Подходящими растворителями являются общепринятые органические растворители, которые не меняют в условиях реакции. Предпочтительно применяют простые эфиры, такие, как, например, диэтиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран, диметиловый эфир гликоля, ацетон, диметилсульфоксид, диметилфромамид, N-метилпирролидон, пиридил, метилэтил- или метилизобутилкетон.

Подходящими основаниями в общем являются органические или неорганические основания. Предпочтительно применяют гидроокиси щелочных металлов, такие, как, например, гидроокись натрия, бикарбонат натрия и гидроокись калия, гидроокиси щелочно-земельных металлов, такие, как, например, гидроокись бария, карбонаты щелочных металлов, такие, как, например, карбонаты натрия, карбонаты калия, карбонаты щелочно-земельных металлов, такие, как, например, карбонат кальция, алкоголяты щелочных и щелочноземельных металлов, такие, как, например, метанолят натрия, метанолят калия, этанолят натрия, этанолят калия, третбутилат калия. Из числа органических оснований предпочитаются органические амины, в частности триалкиламины с 1 - 6 атомами углерода в каждой алкильной части, такие, как, например, триэтиламин, или гетероциклы, такие, как, например, 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан, 1,8-диазабицикло[5.4.0] ундец-7-ен, или амиды, такие, как, например, амид натрия, бутиламид лития или же бутиллития пиридин или метилпиперидин. Также возможно применять в качестве основания щелочные металлы, такие, как, например, натрий, или гибриды щелочных металлов, такие, как, например, гидрид натрия, в частности предпочитается применять в качестве основания карбонат калия, бутиллитий и бикарбонат натрия.

Основание применяют в количестве 1 - 10 моль, предпочтительно 1 - 2,1 моль, на моль соединения общей формулы (III).

Вышеуказанные реакции в общем осуществляют при температурах от -70^oC до +180^oC, предпочтительно при -70^oC до +160^oC, и атмосферном давлении. Но реакцию можно также проводить при пониженном или повышенном давлении, например, в пределах от 0,5 - 5 бар.

Подходящими растворителями для осуществления бромирования являются галогенированные углеводороды, такие, как, например, дихлорметан, трихлорметан, тетрахлорметан, дихлорэтилен, трихлорэтилен и хлорбензол. Для осуществления бромирования N-бромсукцинимидом предпочтительно применяют четыреххлористый углерод для осуществления бромирования трехбромистым бором - дихлорметан, а для осуществления бромирования бромистоводородной кислотой - ледяную уксусную кислоту.

Подходящими катализаторами для осуществления бромирования обычно являются радикалообразователи, такие, как, например, перекись дибензоила и азобис-изобутиронитрил. Предпочтительно применяют перекись дибензоила. Катализатор применяют в количестве от 0,001 до 0,2 моль, предпочтительно 0,1 - 0,05 моль, на 1 моль соединения общей формулы (IV).

Основание применяют в количестве 1 - 10 моль, предпочтительно 2 - 2,1 моль, на моль соединения общей формулы (VII).

Бромирование обычно осуществляют при температурах от -30^oC до +150^oC, предпочтительно при -20^oC - +50^oC, и атмосферном давлении. Однако возможно работать и при повышенном или пониженном давлении, например, в пределах 0,5 - 5 бар.

Подходящими основаниями для осуществления гидролиза являются обычные органические основания. Предпочтительно применяют гидроокиси щелочных или щелочно-земельных металлов, такие, как, например, гидроокись натрия, гидроокись калия или гидроокись бария, карбонаты щелочных металлов, такие, как, например, карбонат натрия, карбонат калия или бикарбонат натрия, алкоголяты щелочных металлов, такие, как, например, метанолят натрия, метанолят калия, этанолят калия или третбутилат калия. В частности предпочитается применение в качестве основания гидроокиси натрия или гидроокиси калия.

Подходящими растворителями для осуществления гидролиза являются вода или органические растворители, которые общеприняты для проведения гидролиза. Предпочтительными являются спирты, такие, как, например, метанол, этанол, пропанол, изопропанол или бутанол, и простые эфиры, такие, как, например, тетрагидрофуран, диоксан, диметилформамид и диметилсульфоксид. В частности предпочитаются спирты, такие, как, например, метанол, этанол или изопропанол. Возможно и применение смеси указанных растворителей.

Гидролиз можно также осуществлять кислотами, такими, как, например, трифторуксусная кислота, уксусная кислота, хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, метансульфокислота, серная кислота или хлорная кислота, предпочтительно трифторуксусной кислотой. Гидролиз в общем осуществляют при температурах 0 - 180^oC, предпочтительно 20 - 160^oC, и атмосферном давлении Однако можно работать и при повышенном и пониженном давлении, например, в пределах 0,5 - 5 бар.

При осуществлении гидролиза основание обычно применяют в количестве 1 - 3 моль, предпочтительно 1 - 1,5 моль, на моль сложного эфира. В частности предпочитаются эквимолярные количества реагентов.

Реакцию амидирования обычно осуществляют в среде вышеуказанных растворителей, предпочтительно в среде хлорметана. При этом можно исходить из свободной карбоновой кислоты, которую переводят в активированную форму, например в галоидангидрид, который можно получать в результате взаимодействия кислоты с тионилхлоридом, треххлористым фосфором, пятихлористым фосфором, трехбромистым фосфором или оксалилхлоридом. Активированные формы предпочтительно получают путем обработки соответствующих кислот дициклогексилкарбодиимидом, гидрохлоридом N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида или карбонилдиимидазолом, при этом реакцию с амидами осуществляют in situ.

Амидирование обычно осуществляют при температурах от 20^oC до 80^oC, предпочтительно от 10 до 30^oC, и атмосферном давлении. При осуществлении этих реакций можно также использовать вышеприведенные основания, причем предпочтительно применяют триэтиламин и/или диметиламинопиридин, 1,4-диазобицикло[2.2.2]октан или 1,8-диазабицикло[5.4.0]унден-7-ен. Основание применяют в количестве 0,5 - 10 моль, предпочтительно 1 - 2 моль, на моль кислоты или сложного эфира.

Соединения общих (II) и (III) известны или могут получаться известными методами.

Соединения общей формулы (IV) в основном известны. Их можно получать, например, путем взаимодействия соединения общей формулы (X) где R¹³ имеет указанное значение, с соединением вышеприведенной общей формулы (III) в среде вышеуказанных растворителей и в присутствии вышеуказанных оснований, предпочтительно в среде ацетона и в присутствии карбоната калия.

Основание применяют в количестве 1 - 10 моль, предпочтительно 1,0 - 2,1 моль на моль соединения общей формулы (X).

Вышеуказанные реакции в общем осуществляют при температурах 30 - 110^oC, предпочтительно 40 - 80^oC, и атмосферном давлении.

Соединение общих формул (VIII), (IX) и (X) известны. Соединения общих формул (V) и (VI) в основном известны и могут получаться вышеприведенными методами.

Соединения общей формулы (VII) в основном известны и могут получаться известными методами.

Предлагаемые соединения в частности тормозят образование перекислов полиморфно-ядерными лейкоцитами, не влияя при этом на другие функции клеток, например на дегрануляцию или агрегацию. Торможению содействует увеличение клеточного циклического аденозинмонофосфата, которое достигается благодаря торможению фосфодиэстеразы типа IV, ответственной за ее деградацию.

Поэтому предлагаемые соединения можно использовать в лекарственных препаратах, применяемых для лечения острых и хронических воспалительных процессов.

Предлагаемые соединения являются особенно пригодными для лечения и профилактики острых и хронических воспалений дыхательных путей, например эмфиземы, альвеолита, шокового состояния легких, астмы, бронхита, атериосклероза, артроза, воспалений желудочно-кишечной системы и миокардита. Кроме того, предлагаемые соединения пригодны для уменьшения повреждения ткани в результате инфаркта после реоксигенации. В данном случае в целях торможения оксидазы ксантина целесообразна одновременная дача аллопуринола. Целесообразна также комбинированная терапия с пероксидной дисмутазой.

Описание опытов 1. Подготовка человеческих полиморфно-ядерных нейтрофилов.

У здоровых людей брали кровь из вены и нейтрофили выделяли путем осаждения с применением декстрана и повторного суспендирования в буферной среде.

2. Торможение образования перекисных анионных радикалов, вызванного тринуклеотидом формилметиноина, лейцина и фенилаланина.

2,5 10⁵ мл^-1 нейтрофилов смешивали с 1,2 мг/мл цитохрома C в углублениях микротитровой чашки. Предлагаемые соединения добавляли в виде смеси с диметилсульфоксидом. Концентрация предлагаемых соединений во всех углублениях составляла 2,5 нмоль до 10 мкмоль, а концентрация диметилсульфоксида 0,1 объем.%. После добавления 5 мкг мл^-1 цитохалазина B чашку инкубировали при температуре 37^oC в течение 5 минут. Затем нейтрофили стимулировали путем добавления 4 10^-8 моль тринуклеида формилметионина, лейцина и фенилаланина и образование перекислов определяли как тормозимое пероксидной дисмутазой уменьшение цитохрома C путем измерения оптической плотности при 550 нм с применением спектрофотометра типа "Thermomax microtitre plate spectrophotometer". Полученные в результате опыта данные рассчитывали по кинетической расчетной программе "Softmax", холостые углубления содержали 200 единиц пероксидной дисмутазы. Торможение образования перекислов определяли по следующему уравнению: где R_x образование перекисных радикалов в углублениях, содержащих предлагаемые соединения; R_o - образование перекисных радикалов в контрольных углублениях; R_b - образование перекисных радикалов в холостых углублениях, содержащих только пероксидную дисмутазу.

Предлагаемые соединения, которые исследовали в повторном опыте, проявляли удовлетворительную активность.

3. Определение концентрации циклического аденозинмонофосфата в полиморфно-ядерных нейтрофилах.

Предлагаемые соединения инкубировали вместе с 3,7 10⁶ полиморфноядерных нейтрофилов при температуре 37^oC в течение 5 минут до добавления 4 - 10^-8 м. тринуклеотида формилметионина, лейцина и фенилаланина. Через 6 минут белок осаждали путем добавления 1 объем.%-ной концентрированной соляной кислоты в 96 объем.% этанола, содержащего 0,1 ммоль этилендиаминотетрауксусной кислоты. После центрифугирования этанольные экстракты упаривали досуха в атмосфере азота и повторно суспендировали в буфере 50 ммоль трис/HCl с pH 7,4, содержащем 4 ммоль этилендиаминотетрауксусной кислоты. Концентрацию циклического аденозинмонофосфата в экстрактах определяли как % его содержания в контрольных средах, которые не содержали предлагаемых соединений.

Предлагаемые соединения, которые исследовали в данном опыте, проявляли удовлетворительную активность. Так, например, при применении 1 мкмоль соединения нижепредставленного примера 30 достигается увеличение концентрации циклического аденозинмонофосфата на 394% по сравнению с контрольным опытом, взятым как 100%.

4. Определение торможения фосфодиэстеразы в полиморфно-ядерных нейтрофилах.

Суспензии полиморфно-ядерных нейтрофилов (10⁷ клеток/мл) на льду подвергали ультразвуковой обработке в течение 10 сек. Обработку повторяли 6 раз. 100 мкл аликвотов инкубировали при температуре 37^oC в течение 5 минут вместе с предлагаемыми соединениями или их носителем до добавления 1 ммоль ³H-циклического аденозинмонофосфата (200 нКюри на каждый опыт). Через 20 минут реакцию прекращали путем нагрева при температуре 100^oC в течение 45 сек. После охлаждения к каждой подопытной среде добавляли 100 мг 5'-нуклеотидазы, после чего инкубировали при температуре 37^oC в течение 15 минут. Конверсию ³H-аденозина определяли путем йонообменной хроматографии на йоните типа Dowex AG-1x в виде хлорида с последующим подчетом жидкостной сцинтилляцией. %-ое торможение определяли путем сравнения с контрольными опытами, в которых не применялись предлагаемые соединения.

Предлагаемые соединения, которые исследовали в данном опыте, проявляли удовлетворительную активность.

5. Действие внутривенно введенных соединений на вызванный тринуклеотидом формилметионина, лейцина и фениланалина отек на коже морских свинок.

Морские свинки весом 600 - 800 г анестезировали пентобарбитоном в виде натриевой соли, который давали внутрипарентерально в количестве 40 г/кг, после чего внутривенно впрыскивали 0,5 мл смеси, содержащей 5 вес.% синего пентаметинового красителя и ¹²⁵I-белок сыворотки альбумина человека (1 мкл/животное). Через 10 минут с левой стороны животных (сайт впрыскивания) осуществляли три внутридермальные инъекции тринуклеотида формилметионина, лейцина и фениланалина в количестве 10 мкг, одну инъекцию гистамина в количестве 1 мкг и одну инъекцию носителя в количестве 100 мкл, причем в качестве носителя применяли солевой буферный раствор Хенка, содержащий 0,2 об. % диметилсульфоксида. Через 5 минут внутривенно давали 1 мл/кг исследуемого соединения или 1 мл/кг носителя, представляющего собой 50 об. % полиэтиленгликоля с молярной массой 400 в дистиллированной воде. Через 10 минут на противоположной стороне животных (противоположный сайт впрыскивания) осуществляли те же самые внутридермальные инъекции. По истечении 15 минут животных умерщвляли и анализировали их кровь. Радиоактивность кожи и плазмы определяли с помощью - счетчика в течение одной минуты, а степень образования отека определяли как мкл плазмы/сайт кожи. %-ное торможение, обеспечиваемое предлагаемыми соединениями, определяли по следующему уравнению: Предлагаемые соединения, которые исследовали в данном опыте, проявляли удовлетворительную активность. Так, например, соединение нижепредставленного примера 30 в количестве 1 мг/кг обеспечило 40%-ное торможение.

6. Действие орально применяемых соединений на вызываемый тринуклеотидом формилметионина, лейцина и фениланалина отек кожи морских свинок (опыты in vivo).

Морским свинкам весом 600 - 800 г не давали пищу на ночь и утром орально давали 5 мл/кг носителя, 1 вес.%-ной тилозы или исследуемые соединения в количестве 10 мг/кг, содержащиеся в 5 мг/кг 1 вес.%-ной тилозы. Через 40 минут животные анестезировали пентобарбитоном в виде натриевой соли в количестве 40 мг/кг, который давали внутрипарентерально, и внутривенно впрыскивали 0,6 мл смеси, содержащей 5 вес.% синего пентаметинового красителя и ¹²⁵J-белок сыворотки альбумина человека (1 мкКюри/животное). Через 90 минут после оральной дачи указанных веществ в 4 различных местах внутридермально впрыскивали 50 мкг/место тринуклеотида формилметионина, лейцина и фенилаланина, а в двух различных местах внутридермально впрыскивали 1 мкг/место гистамина и 100 мкл носителя, солевого буферного раствора Хенка, содержащего 1 об. % диметилсульфоксида. Через 30 минут животных умерщвляли и анализировали их кровь. Кожу и плазму анализировали при помощи - счетчика в течение одной минуты. Степень образования отека определяли как мкл плазмы/место кожи, где осуществляли впрыскивание. %-ное торможение определяли статистическим методом на основе средних значений 4 опытов, которым подвергали каждое животное, которому давали тринуклеотид формилметионина, лейцина и фениланалина. Предлагаемые соединения, которые исследовали в данном опыте, проявляли удовлетворительную активность. Так, например, соединение нижепредставленного соединения 30 в количестве 25 мг/кг обеспечило 46%-ное торможение.

Новые активные вещества можно известным образом переводить в известные препараты, например в таблетки, драже, пилюли, грануляты, аэрозоли, сиропы, эмульсии, суспензии и растворы, с использованием инертных, нетоксичных, фармацевтически пригодных носителей или растворителей. При этом терапевтически активное соединение должно иметься в концентрации примерно 0,5 - 90% от веса общей смеси, то есть в количестве, достаточном для достижения нижеуказанной дозировки.

Препараты получают, например, путем смешивания активного вещества с растворителями и/или носителями, в случае необходимости, с использованием эмульгаторов или диспергаторов, причем, например, в случае использования воды в качестве разбавителя в качестве вспомогательных растворителей можно также применять органические растворители.

Дачу активных веществ осуществляют обычным образом, предпочтительно орально или парентерально, в частности чрезъязычно или внутривенно. Для достижения желаемых результатов в общем выгодно в случае внутривенной дачи применять активные вещества в общем количестве примерно 0,001 - 10 мг, предпочтительно примерно 0,01 - 5 мг на кг веса тела, а в случае оральной дачи 2 - в общем количестве примерно 0,01 - 25 мг, предпочтительно 0,1 - 10 мг/кг веса тела.

Однако, в случае необходимости, может быть целесообразным отклоняться от указанных количеств, а именно в зависимости от вида и веса пациента, от способа дачи, от индивидуального поведения пациента относительно лекарственного препарата, вида и степени болезни, вида препарата и дачи и момента и промежутков дачи лекарственного средства. В некоторых случаях активные вещества должны даваться в количествах, меньших указанного минимального количества, в то время как в других случаях их надо применять в количестве, большем указанного максимального количества. В случае дачи больших количеств может быть целесообразным распределение ежедневной общей дозы активного вещества на несколько отдельных доз.

В нижеследующих примерах применяются следующие элюенты: I - смесь петролейного эфира и этилацетана в соотношении 6 : 1 II - смесь петролейного эфира и этилацетана в соотношении 5 : 1 III - смесь петролейного эфира и этилацетана в соотношении 5 : 2 IV - смесь дихлорметана и метанола в соотношении 95 : 5 V - смесь дихлорметана и метанола в соотношении 9 : 1 VI - дихлорметан Получение исходных соединений для получения целевых продуктов формулы (I) поясняется следующими примерами.

Пример I Сложный метиловый эфир 2'-окси-3-оксо-4'-[(тетрагидро-2H- пиран-2-ил)окси]бензолбутановой кислоты 20 г (0,089 моль) сложного метилового эфира 2',4'-диокси-3-оксо-бензолбутановой кислоты растворяют в 200 мл смеси дихлорметана и тетрагидрофурана в соотношении 95 : 5, после чего последовательно добавляют 9,2 мл (0,1 моль) 3,4-дигидро-2H-пирана и 10 мг п-толуолсульфокислоты. Суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение одного часа, после чего добавляют 400 мл раствора бикарбоната натрия, органический слой отделяют и три раза промывают водой. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и сгущают в вакууме. Остаток перекристаллизовывают из диэтилового эфира.

Выход: 12,4 г (49% от теории) Значение R_f: 0,5; элюент I.

Пример II 4-Бензилокси-2-оксиацетофенон 152,15 (1,0 моль) 2,4-диоксиацетофенона и 118,9 мл (1,0 моль) бензилбромида растворяют в 1,2 л ацетона, добавляют 138 г карбоната калия и реакционную смесь при перемешивании нагревают с обратным холодильником в течение 5 часов. Получаемый в результате фильтрации маточный раствор сгущают в вакууме и остаток перекристаллизовывают из диэтилового эфира.

Выход: 197 г (81% от теории) Значение R_f: 0,82; элюент III.

Пример III 6-Бензилокси-3-метил-2-(4-метилбензоил)бензо[b]фуран Смесь 137,7 г (0,47 моль) 4-бензилокси-2-окси-ацетофенона и 100 г (0,47 моль) - бром-4-тиоацетофенона в среде 700 мл ацетона нагревают с обратным холодильником в присутствии 65 г карбоната калия в течение 13 часов. Реакционную смесь фильтруют, растворитель удаляют в вакууме и остаток перекристаллизовывают из диэтилового эфира.

Выход: 94 г (56% от теории) Значение R