Производные индолокарбазолимида, смесь их изомеров и их соли, фармацевтическая композиция с активностью, ингибирующей протеинкиназу c или киназу легкой миозиновой цепи или подавляющей иммунные реакции

Производные индолокарбазолимида, смесь их изомеров и их соли, фармацевтическая композиция с активностью, ингибирующей протеинкиназу c или киназу легкой миозиновой цепи или подавляющей иммунные реакции

Реферат

 

Производные индолокарбазолимида общей формулы I где R¹ и R² - водород, алкил, цианоалкил, азидоалкил и галоидалкил, арилсульфонилоксиалкил, аминоалкил, необязательно моно- или дизамещенный у атомов азота алкилом и необязательно замещенный в алкильной части гидроксилом, при этом два заместителя у атома азота в аминоалкильной группе вместе с атомом азота могут образовывать пирролидиновое кольцо, или представляет остаток формулы (а) , где n = 1-3; R¹¹ и R¹² - водород алкил; R³ - R¹⁰ - водород, алкил, алкокси, галоид, гидроксил, ацилокси, аминоалкил, смесь их изомеров и их соли расширяют ассортимент высокоактивных ингибиторов протеинкиназы C или киназы легкой миозиновой цепи или средств, подавляющих иммунные реакции. 2 с. и 10 з.п.ф-лы. 4 табл.

Изобретение относится к новым химическим веществам с ценными свойствами, более конкретно к производным индолокарбазолимида.

Известны производные индолокарбазола, обладающие активностью, ингибирующей протеинкиназу C или киназу легкой миозиновой цепи или подавляющей иммунные реакции (см. заявку WO 9118003, МКИ: C 07 D, A 61 К, 1991 г.).

Задачей изобретения является разработка новых производных индолокарбазола, позволяющих расширить ассортимент высокоактивных ингибиторов протеинкиназы C или киназы легкой миозиновой цепи или средств, подавляющих иммунные реакции.

Поставленная задача решается предлагаемыми производными индолокарбазолимида общей формулы где R¹ и R² одинаковы или различны и означают водород, линейный или разветвленный алкил с 1 - 6 атомами углерода, линейный или разветвленный цианоалкил, азидоалкил и галоидгидроксиалкил, каждый с 1 - 6 атомами углерода, арилсульфонилоксиалкил с 1 - 12 атомами углерода в алкильной части, линейный или разветвленный аминоалкил с 1 - 12 атомами углерода, необязательно моно- или дизамещенный у атома азота алкилом с 1 - 4 атомами углерода, и необязательно замещенный в алкильной части гидроксилом, при этом два заместителя у атома азота в аминоалкильной группе вместе с атомом азота могут образовывать пирролидиновое кольцо, или представляет остаток формулы где n означает 1 - 3, R¹¹ и R¹² одинаковы или различны и означают водород, алкил с 1 - 6 атомами углерода; R³ - R¹⁰ независимо друг от друга означают водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода, алкокси с 1 - 4 атомами углерода, галоид, гидроксил, ацилокси, аминоалкил с 1 -12 атомами углерода, при условии, что радикалы R¹ - R¹⁰ одновременно не означают водород и если R¹ означает 3-диметиламинопропил, или R³ и R¹⁰ одновременно означают хлор, гидроксил или метокси, или R⁴ и/или R⁵ означают хлор, гидроксил или метокси, или же R и/или R означают метил, метокси, хлор, бром или фтор, то остальные радикалы одновременно не означают водород, смесью их изомеров и их солями.

Предпочтительными являются производные индолокарбазолимида общей формулы (I), которые представляют собой соединения из группы, включающей 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-12-метил-5,7-диоксо- 5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло- [2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-13-метил-5,7-диоксо- 5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-3,9-диметокси-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(3-циано-2-пропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-цианометил-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с]карбазол; 3-хлор-13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-12-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а]-пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(3-цианопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло-[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12- (3-цианопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12- [3-(4-метилфенилсульфонилокси)пропил] -6,7,12,13-тетрагидро- 13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо- 5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол, 13-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-12-метил- 5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(3-азидопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло- [2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол, 12-(2-азидоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло- [2,3-а]пирроло[2,3-с]карбазол; 3-хлор-13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро- 9-метокси-12-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-2,3-диметокси-12-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-12-метил-5,7-диоксо-3-н- пропокси-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 13-(3-цианопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-12-метил-5,7-диоксо- 5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(3-цианопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3,9-диметокси-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло [3,4-с]карбазол; 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-2,3,9-триметокси-12-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-1-метокси-12-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-2-метокси-12-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(4-азидобутил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло- [2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(5-азидопентил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло-[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(2-диметиламиноэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-13- метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 13-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-2,3-диметокси-12 -метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-эпоксиметил-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; ()-12-(3-хлор-2-окси-1-пропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13- метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]-карбазол; 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-окси-12-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-окси-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-2,3-диокси-12-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3,9-диокси-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3(9)-окси-9(3)- метокси-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 6,7,12,13-тетрагидро-3,9-диокси-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а] - пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-3,9-диокси-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 13-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-окси-12-метил- 5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(3-диизопропиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-окси-13- метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирролол[3,4-с]карбазол; 12-(3-аминопропил)-6,7,12-13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 13-(3-аминопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-12-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 13-(3-аминопропил)-3-хлор-6,7,12,13-тетрагидро-9-метокси-12- метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 13-(3-изопропиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3,9-диметокси- 5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 6,7,12,13-тетрагидро-3,9-диметокси-12-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с]карбазол; 6,7,12,13-тетрагидро-12-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а] - пирроло[3,4-с]карбазол; 6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-12-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло- [2,3-а] пирроло-[3,4-с] карбазол; 6,7,12,13-тетрагидро-12,13-диметил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а] - пирроло[3,4-с]карбазол; 6,7,12,13-тетрагидро-12,13-диэтил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а] пирроло- [3,4-с]карбазол; 12-(3-диизопропиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-5,7-диоксо- 5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(3-диизопропиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил- 5,7-диоксо-5Н-индоло-[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 6,7,12,13-тетрагидро-5,7-диоксо-3,9-ди-н-пропокси-5Н-индоло- [2,3-а] пирроло[3,4-с]карбазол; и их соли.

Особенно предпочтительными производными индолокарбазолимида вышеприведенной общей формулы (I) являются соединения из группы, включающей 12-(4-аминобутил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(5-аминопентил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-6Н- индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; ()-12-(3-диметиламино-2-окси-1-пропил)-6,7,12,13- тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]- карбазол; ()-12-(3-диэтиламино-2-окси-1-пропил)-6,7,12,13- тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]- карбазол; ()-13-(3-диметиламино-2-окси-1-пропил)-6,7,12,13- тетрагидро-13-метокси-12-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло- [3,4-с]карбазол; ()-12-(3-диметиламино-2-окси-1-пропил)-6,7,12,13- тетрагидро-3-метокси-13- метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; ()-12-(3-диизопропиламино-2-окси-1-пропил)-6,7,12,13- тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]- карбазол; ()-12-(3-пирролидино-2-окси-1-пропил)-6,7,12,13- тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]- карбазол; и их соли.

В частности предпочитаются производные индолокарбазолимида вышеприведенной общей формулы (I), представляющие собой 12-(2-карбамоилэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с]карбазол; 12-[3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол в виде метилйодида; ()-12-(3-диэтиламино-2-окси-1-пропил)-6,7,12,13- тетрагидро-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол; 12-(2,3-диокси-1-пропил)-6,7,12,13-тетрагидро-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол.

Соединения общей формулы (I), которые имеют хиральный центр в остатках R¹ - R¹⁰, могут иметься в виде смеси стереоизомеров.

Основные соединения общей формулы (I), которые имеют основный центр по меньшей мере у одного из остатков R¹ - R¹⁰, предпочтительно переводят в кристаллические, фармакологически переносимые соли, что делается в целях очистки и по соображениям галеники. Соли получают известными приемами путем нейтрализации основания соответствующей органической или неорганической кислотой. В качестве кислот можно применять, например, соляную кислоту, серную кислоту, фосфорную кислоту, бромистоводородную кислоту, уксусную кислоту, винную кислоту, молочную кислоту, лимонную кислоту, яблочную кислоту, салициловую кислоту, аскорбиновую кислоту, молоновую кислоту, фумаровую кислоту, щавелевую кислоту или янтарную кислоту. Кислотно-аддитивные соли, как правило, получают известным образом путем смешивания свободного основания или его раствора с соответствующей кислотой или ее раствором в органическом растворителе, таком как, например низший спирт, например метанол, этанол или 2-пропанол, или низший кетон, например ацетон или 2-бутанон, или простой эфир, например диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран или диоксан.

Производные индолокарбазолимида вышеприведенной формулы (I) относятся к категории малотоксичных веществ.

В зависимости от природы заместителей соединения общей формулы (I) представляют собой высокоактивные ингибиторы протеинкиназы C или киназы легкой миозиновой цепи. Поэтому они годятся для лечения и/или профилактики рака, вирусных заболеваний, например инфекций СПИДа, заболеваний сердца и сосудов, например, гипертонии, тромбоза, нарушений сердечного ритма, артериосклероза, бронхолегочных заболеваний, дегенеративных заболеваний центральной нервной системы, например болезни Альцгеймера, воспалительных заболеваний, например ревматизма, артрита, заболеваний иммуной системы, например аллергий, а также псориаза. Кроме того, соединения общей формулы (I) можно применять в качестве средств для подавления иммунных реакций.

Поэтому дальнейшим объектом изобретения является фармацевтическая композиция с тормозящей протеинкиназу C или киназу легкой миозиновой цепи или подавляющей иммунные реакции активностью, содержащая по крайней мере один фармацевтически приемлемый носитель и по крайней мере одно производное индолокарбозолимида вышеприведенной общей формулы (I), смесь его изомеров или отдельный изомер или его фармацевтически приемлемую соль в эффективном количестве.

Предлагаемая фармацевтическая композиция может представлять собой любой твердый или жидкий препарат.

Соединения общей формулы (I) даются энтерально или парентерально в дозах 1 - 5 мг/кг, предпочтительно 1 - 50 мг/кг. Но соединения общей формулы (I) могут также даваться орально в жидкой или твердой форме. Предпочтительным жидким препаратом является инъецируемый раствор, а предпочтительным твердым препаратом - таблетка.

Ниже приводятся примеры предпочтительных препаратов.

Таблетка А.

Содержание активного веществам - 20 мг Общий вес - 100 мг Приготовление. 4 кг производного индолокарбазолимида формулы (I) предварительно смешивают с 1,10 кг аэрозила и затем интенсивно перемешивают с 12 кг микрокристаллической целлюлозы, 2,2 кг карбоксиметилцеллюлозы натрия и 700 г стеарата магния. Получаемую таким образом смесь используют для непосредственного прессования таблеток весом 100 мг, содержащих 20 мг активного вещества.

Таблетка Б.

Содержание активного вещества - 120 мг Общий вес 350 мг Таблетка имеет продленное действие.

Приготовление. 960 г производного индолокарбазолимида формулы (I) смешивают с 770 г лактозы и 740 г гидрированного касторового масла и, продолжая перемешивать, медленно нагревают до температуры 83^oC. Получаемый расплав пропускают через сито размером отверстий 2,5 мм. После охлаждения до комнатной температуры массу пропускают через сито размером отверстий 1 мм. Затем отсеивают 274 г сополимера на основе аммонийметакрилата, 32 г стеарата магния и 24 г двуокиси кремния и равномерно смешивают с гранулятом, включающим активное вещество. Получаемую смесь на эксцентриковом прессе прессуют в круглые, слегка выпуклые таблетки весом 350 мг, имеющие диаметр 10 мм и радиус кривизны 11 мм и содержащие 120 мг активного вещества.

Инъецируемый раствор. 10,75 г метилглюкамина растворяют в 20 г дистиллированной воды. После добавления 15 г производного индолокарбазолимида формулы (I) пополняют полиэтиленгликолем с молярной массой 200. Смесь нагревают при температуре 40^oC до полного растворения компонентов, получаемый раствор охлаждают, фильтруют через фильтр с размером пор 0,22 мкм и наполняют ампулы емкостью 1 мл.

В зависимости от природы заместителей соединения вышеприведенной общей формулы (I) получают стандартными методами, описанными в нижепредставленных примерах.

Биологическая активность соединений общей формулы (I) подтверждается следующими опытами.

1. Торможение киназы легкой миозиновой цепи (энзим ЕС 3.6.1.3;).

Киназа легкой миозиновой цепи представляет собой важный ключевой энзим регуляции тонуса гладкой мышцы (см., например, Адельштейн, Р.С., Эйзенберг, Е. , Ann. Rev. Biochem. 49, стр. 921 - 956, 1980). Так как активация энзима приводит к сокращению гладкой мышцы, можно предполагать, что ингибиторы киназы легкой миозиновой цепи ослабляют сокращение гладкой мышцы и ин виво приводят к снижению кровяного давления. За последние годы в литературе уже описаны некоторые ингибиторы киназы легкой миозиновой цепи (см. например, Наканиши, С и др., J. Biol. Chem. 263, стр. 6215 - 6219, 1988 и Mol. Pharmacol. 17, стр. 482 - 488, 1190). Однако недвусмысленное антигипертенсивное действие до сих пор еще не было доказано.

Торможение киназы легкой миозиновой цепи определялось в опыте ин витро. Для этой цели киназу из куринного желудка очищают в соответствии с методом Нгай и др. , Biochem. J. 218, стр. 863 - 867, 1984. Легкую миозиновую цепь также выделяли из куринного желудка в соответствии с методом, описанным Гезевей, Д.Р., Хеберле, И.Р., Anal. Biochem. 135, стр. 37 - 43, 1983.

Активность энзима определяли через встроение меченого ³²P фосфата в следующих условиях. Реакционная смесь в количестве 200 мкл содержала 50 ммоль гидроокиси натрия, pH 7,2, 5 ммоль хлористого магния, 100 мкмоль хлористого кальция, 100 ммоль калмодулина, 1 ммоль дитиотреитола, 250 мкмоль аденозинтрифосфата, а также 20 мкмоль легкой миозиновой цепи. Реакцию начинали путем добавления 1 нмоль киназы легкой миозиновой цепи. После 20-минутной инкубации при температуре 30^oC реакцию прекращали добавлением трихлоруксусной кислоты и пробы фильтровали. Определение встроения фосфата осуществляли путем подсчета фильтров по Церенкову.

В таблице 1 сведены результаты данного опыта, в котором исследовали некоторые соединения формулы (I).

В доказательство того, идет ли речь об избирательном торможении киназы легкой миозиновой цепи, соединения формулы (I) также исследовали в отношении их действия на протеинкиназы, например на протеинкиназу C. Результаты данного опыта также сведены в таблице 1. Кроме того, в таблицу также включены коэффициенты селективности, которые рассчитывали путем определения соотношения значений КТ₅₀ (КТ = концентрация торможения) в отношении протеин-киназы C и киназы легкой миозиновой цепи. По этим данным видно, что прежде всего соединения примеров 4, 4а, 4б, 5, 7б, 7в, 11в и 11г могут рассматриваться как потентные и избирательные ингибиторы киназы легкой миозиновой цепи, тогда как соединения примера 1 представляет собой потентные и избирательные ингибиторы протеинкиназы C.

Кроме потенции и избирательности в опытах по торможению киназы ин виво можно было доказывать еще зависящее от дозы антигипертензивное действие соединений примеров 5, 7в и 11г. При этом опыты проводили на наркотизированных, спонтанно гипертенсивных крысах. 60 минут после внутривенной дачи ингибиторов киназы легкой миозиновой цепи можно было определять указанное в таблице 2 снижение среднего артериального давления. Влияние на частоту сердечных сокращений едва ли можно было устанавливать (см. табл. 2).

2. Определение антиопухолевого действия ин витро.

Протеинкиназа C играет важную роль при регуляции дифференцирования. На основе этого свойства торможение протеинкиназы C рассматривается как новый терапевтический принцип в терапии опухолей (см., например, Гешер, А. Дейль, И. Л., Anti-Cancer Drug Design 4, стр. 93 - 105, 1989; Грунике, Х и др. Adv, Enzym Regulation 28, стр. 201-216, 1989).

Опыт по образованию колоний согласно методу Фибиг, Г.Г. и др., Eur. J. Canc. Clin. Onc. 23, стр. 937 - 948, 1987, представляет собой возможность определения ин витро антиопухолевого действия веществ. Для проведения этого опыта человеческие опухолевые клетки хранили в качестве солидной опухоли путем нанесения на обнаженные мыши. Готовили суспензию отдельных клеток, которые подавали в чашки, содержащие мягкий агар. В этих условиях опухолевые клетки размножались и образовывали колонии. Вещества с антиопухолевым действием, такие, как, например, адриамицин, могут предотвращать образование таких колоний.

Для соединений примеров 2в, 7ж и 10 можно было установить, что в зависимости от концентрации они могут тормозить рост определенных опухолевых клеток. Результаты, найденные для соединения примера 2в, сведены в табл. 3.

3. Действие, подавляющее производство ретровируса HIV.

Согласно результатам недавних исследований протеинкиназа C участвует в реактивации с латентной стадии вирусов HIV (см., например, Кинтер, А.Л. и др., J. Virol. 64, стр. 4306-4312, 1990).

При подтверждении этого гипотеза применяли промоноцитную клеточную линию U1, которая латентно инфицирована вирусом HIV-1. Без стимуляции в этих клетках нельзя замерять образование вируса HIV, а после 15-минутной стимуляции сложным эфиром форбола имеет место массивное производство вируса HIV. Если инкубировать клетку вместе с ингибитором H-7 протеинкиназы C за час до стимуляции сложным эфиром форбола, причем после симуляции осуществляют дальнейшую 48-часовую инкубацию вместе с ингибитором, то оказывается, что производство вируса HIV можно полностью подавлять.

В соответствии с этой моделью также исследовали соединения общей формулы (I). В качестве меры производства вируса HIV определялся либо вирусный протеин p24 с помощью имунноферментного твердофазного анализа или же с помощью индикаторной клетки замеряли вызываемое вирусом HIV образование синцитиев (= гигантских клеток, образующихся слиянием отдельных клеток).

В обоих методах можно было доказывать антивирусное действие соединений примеров 1 и 2в. Результаты опытов сведены в табл. 4. С помощью контрольных экспериментов можно было доказывать, что антивирусное действие в отношении ретровируса HIV не являлось результатом цитотоксичного действия.

Нижеследующие примеры поясняют получение соединений вышеприведенной общей формулы (I).

Пример 1. 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-12- метил-5,7, -диоксо-5H-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол.

500 мг (1,18 ммоль) 3-[1-(2-цианоэтил)-5-метокси-3-индолил]-4- (1-метил-3-индолил)-1H-пиррол-2,5-диона в 50 мл толуола, 225 мг (1,18 ммоль) п-толуолсульфокислоты в виде гидрата и 315 мг (1,39 ммоль) 2,3-дихлор-5,6-дициан-п-бензохинона нагревают с обратным холодильником в течение 30 минут. После охлаждения реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток перемешивают с 100 мл 0,1 н. раствора гидроокиси натрия, получаемую водную суспензию насыщают поваренной солью и два раза экстрагируют тетрагидрофураном, взятым в количестве по 100 мл. Тетрагидрофурановый раствор два раза промывают насыщенным раствором поваренной соли, взятым в количестве по 100 мл, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента смеси толуола и ацетона в соотношении 4 : 1. Выделяют фракцию со значением R_f 0,3, которую перемешивают с диизопропиловым эфиром и образовавшиеся кристаллы фильтруют. Получают 270 мг (54%) 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-12-метил-5,7-диоксо- 5Н-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с]карбазола в качестве желтых кристаллов, которые начинают разлагаться при температуре примерно 260^oC (выделение газа).

Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(2-цианоэтил)-5-метокси-3-индолил] -4-(1-метил-3-индолил)-1H- пиррол-2,5-дион (темно-желтый аморфный порошок, который начинает разлагаться при температуре примерно 200^oC) получают аналогично патенту ЕР N 329 026 взаимодействием 1-(2-цианоэтил)-5-метоксииндола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой. 1-(2-цианоэтил)-5-метокси-индол получают в количественном выходе путем присоединения акрилнитрила к 5-метоксииндолу в среде ацетонитрила в присутствии 1,8-диазабицикло[5.4]ундец-7-ена в качестве катализатора.

Аналогичным образом получают следующие соединения: 1а) 12-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-4,7-диоксо- 5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол в качестве желтых кристаллов, которые начинают разлагаться при температуре примерно 200^oC.

1б) 12-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-13-метил- 5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с] карбазол в качестве желтых кристаллов, которые начинают разлагаться при температуре примерно 300^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(2-цианоэтил)-3-индолил]-4-(5-метокси-1-метил-3-индолил)-1Н- пиррол] -2,5-дион (светло-красный аморфный порошок, который разлагается при температуре примерно 250 - 258^oC) получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(2-цианоэтил)индола с 5-метокси-1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1в) 12-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-3,9-диметокси-13- метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с]карбазол в качестве желтых кристаллов, которые начинают разлагаться при температуре примерно 270^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(2-цианоэтил)-5-метокси-3-индолил]-4-(5-метокси-1-метил-3- индолил)-1Н-пиррол-2,5-дион (оранжево-красный аморфный порошок, который разлагается при температуре примерно 255 - 263^oC) получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(2-цианоэтил)-5-метокси-индола с 5-метокси-1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1г) 12-(3-циано-2-пропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7- диоксо-5-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с] карбазол в качестве желтых кристаллов, которые начинают разлагаться при температуре примерно 270^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(3-циано-2-пропил)-3-индолил] -4-(1-метил-3- индолил)-1H-пиррол-2,5-диол (красный аморфный порошок с точкой разложения примерно 218 - 226^oC) получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(3-циано-2-пропил)индола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой. 1-(3-циано-2-пропил)индол получают с небольшим выходом путем присоединения кротоннитрила к индолу в среде ацетонитрила в присутствии 1,8-диазобицикло[5.4]ундец-7-ена в качестве катализатора.

1д) 12-цианометил-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло [2,3-а] пирроло[3,4-с]карбазол в качестве желтого аморфного порошка, который начинает разлагаться при температуре примерно 330^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-(1-цианометил-3-индолил)- -4-(l-метил-3-индолил)-1H-пиррол-2,5-дион (красный аморфный порошок) получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-цианометилиндола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1е) 3-хлор-13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-12-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а] -пирроло[3,4-с] карбазол в качестве аморфного порошка с т.пл. 281 - 286^oC. Используемый в качестве исходного продукта 3-[5-хлор-1-(2-цианоэтил)-3-индолил] -4-(1-метил-3-индолил)-1H-пиррол- 2,5-дион (оранжевый аморфный порошок с т. пл. 240 - 243^oC) получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту в результате взаимодействия 5-хлор-1-(2-цианоэтил)-индола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой. 5-хлор-1-(2-цианоэтил)индол получают путем присоединения акрилнитрила к 5-хлориндолу в среде ацетонитрила в присутствии 1,8-диазабицикло[5.4]ундец-7-ена в качестве катализатора.

1ж) 12-(3-цианопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло [2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол в качестве желтых кристаллов с т.пл. 259 - 261^oC. Используемый в качестве исходного продукта 3-[1-(3-цианопропил)-3-индолил]-4-(1-метил-3-индолил)-1Н-пиррол- 2,5-дион (темно-красный аморфный порошок) получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(3-цианопропил)индола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой. 1-(3-цианопропил)индол получают из 1-(2-цианоэтил)индола (синтез 1-[3-(4-метилфенилсульфонилокси)пропил]индола согласно J. Chem. Soc. 1967, стр. 2599 и J. Amer. Chem. Soc. 1975, 97, стр. 4095 и взаимодействие с цианидом калия в среде диметилформамида до 1-(3-цианопропил)индола).

1з) 12-(3-цианопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с] карбазол в качестве желтого аморфного порошка, который разлагается при температуре примерно 265^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(3-цианопропил)-3-индолил]-4-(5-метокси-1-метил-3-индолил)-1H- пиррол-2,5-дион (красный аморфный порошок с точкой разложения 275 - 279^oC) получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(3-цианопропил)-индола с 5-метокси-1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1и) 12-[3-(4-метилфенилсульфонилокси)пропил] -6,7,12,13-тетрагидро-13- метил-5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с] карбазол в качестве желтого аморфного порошка, который начинает разлагаться при температуре примерно 195^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-[3-(4-метилфенилсульфонилокси)пропил] -4-(1-метил-3-индолил)-1H- пиррол-2,5-дион (красный аморфный порошок) получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-[3-(4-метилфенилсульфонилокси)- пропил]индола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1к) 12-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол в качестве желтых кристаллов с т. пл. 236 - 243^oC. Получение аналогично примеру 1, но с применением двух эквивалентов п-толуолсульфокислоты в виде гидрата и двух эквивалентов 2,3-ди-хлор-5,6-дициан-п-бензохинона. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(3-диметиламинопропил)-3-индолил] -4 -(1-метил-3-индолил-3-индолил)-1Н-пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(3-диметиламинопропил)индола с 1-метил-3-индолилиуксусной кислотой. Данный целевой продукт можно также получать путем взаимодействия соединения по примеру 1и) с диметиламином.

1л) 13-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-12-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол в качестве желтых кристаллов с т.пл. 240 - 246^oC. Используемый в качестве исходного продукта 3-[1-(3-диметиламинопропил)-5-метокси-3-индолил]-4-(1-метил-3-индолил)- 1H-пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(3-диметиламинопропил)-5-метоксииндола (получаемого аналогично Synthesis 1984, 29) с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1м) 12-(3-азидопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло- [2,3-а] пирроло[3,4-с] карбазол в качестве желтых кристаллов, которые начинают разлагаться при температуре примерно 220^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(3-азидопропил)-3-индолил]-4-(1- метил-3-индолил)-1Н-пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(3-бромпропил)-индола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой. Данный целевой продукт можно также получать путем взаимодействия соединения примера 1и) с азидом натрия в среде диметилформамида.

1н) 12-(2-азидоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло [2,3-а] пирроло[2,3-с] карбазол в качестве желтых кристаллов с т.пл. 237 - 241^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(2-азидоэтил)-3-индолил] -4-(1-метил-3-индолил)-1Н-пиррол-2,5-дион получают аналогично примеру 1м и вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(2-хлорэтил)индола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1о) 3-хлор-13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-9-метокси-12-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с] карбазол в качестве желтого аморфного порошка с точкой плавления > 300^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[5-хлор-1-(2-цианоэтил)-3-индолил] -4-(5-метокси-1-метил-3-индолил)- 1H-пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 5-хлор-1-(2-цианоэтил)индола с 5-метокси-1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1п) 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-2,3-диметокси-12-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол в качестве желтых кристаллов с т.пл. 293 - 296^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(2-цианоэтил)-5,6-диметокси-3-индолил] -4-(1-метил-3- индолил)-1H-пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(2-цианоэтил)-5,6-диметокси-индола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой. 1-(2-цианоэтил)-5,6-диметоксииндол получают путем присоединения акрилонитрила к 5,6-диметоксииндолу в среде ацетонитрила в присутствии 1,8-диазабицикло [5.4]ундец-7-ена.

1р) 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-12-метил-5,7-диоксо-3-н- пропокси-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол в качестве желтого аморфного порошка с т.пл. 255 - 258^oC.

1с) 13-(3-цианопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-12-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол в качестве желтого аморфного порошка, который разлагается при температуре примерно 280 - 285^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(3-цианопропил)-5-метокси-3-индолил]-4-(1-метил-3-индолил)-1Н- пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(3-цианопропил)-5-метоксииндола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой. 1-(3-цианопропил)-5-метоксииндол получают из 1-(3-цианоэтил)-5-метокси аналогично получению 1-(3-цианопропил)-индола по примеру 1ж).

1т) 12-(3-цианопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3,9-диметокси-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а] пирроло [3,4-с]карбазол в качестве желтого аморфного порошка, который разлагается при температуре примерно 285 - 290^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(3-цианопропил)-5-метокси-3-индолил] -4-(5-метокси-1-метил-3- индолил)-1H-пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(3-цианопропил)-5-метокси-индола с 5-метокси-1-метил-3- индолилуксусной кислотой.

1у) 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-2,3,9-триметокси-12-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с]карбазол в качестве коричневого аморфного порошка, который начинает разлагаться при температуре примерно 275^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(2-цианоэтил)-5,6-диметокси-3-индолил] -4-(5-метокси-1-метил-3- индолил)-1H-пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(2-цианоэтил)-5,6-диметоксииндола с 5-метокси-1-метил-3-индолилуксусной кислотой. 1-(2-цианоэтил)-5,6-диметоксииндол получают путем присоединения акрилнитрила к 5,6-диметоксииндолу в среде ацетонитрила в присутствии 1,8-диазабицикло[5.4]ундец-7-ена.

1ф) 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-1-метокси-12-метил-5,7-диоксо- 5Н-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с]карбазол в качестве желтого аморфного порошка с т. пл. > 300^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(2-цианоэтил)-7-метокси-3-индолил]-4-(1-метил-3-индолил)-1H- пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(2-цианоэтил)-7-метоксииндола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой. 1-(2-цианоэтил)-7-метоксииндол получают путем присоединения акрилнитрила к 7-метоксииндолу в среде ацетонитрила в присутствии 1,8-диазабицикло[5.4]ундец-7-ена.

1х) 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-2-метокси-12-метил-5,7-диоксо- 5Н-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с]карбазол в качестве коричневого аморфного порошка, который разлагается при температуре примерно с 200^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(2-цианоэтил)-6-метокси-3-индолил]-4-(1-метил-3-индолил)-1H- пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(2-цианоэтил)-6-метоксииндола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой. 1-(2-цианоэтил)-6-метоксииндол получают путем присоединения акрилнитрила к 6-метоксииндолу в среде ацетонитрила в присутствии 1,8-диазабицикло[5.4]ундец-7-ена.

1ц) 12-(4-азидобутил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло [2,3-а] пирроло[3,4-с] карбазол в качестве желтого аморфного порошка с т.пл. 186 - 188^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(4-азидобутил)-3-индолил] -4-(1-метил-3-индолил)-1H-пиррол-2,5- дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту.

1ш) 12-(2-диметиламиноэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н- индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с] карбазол в качестве желтого аморфного порошка, который начинает разлагаться при температуре примерно 260^oC. Получение аналогично примеру 1к). Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(2-диметиламиноэтил)-3-индолил] -4-(1-метил-3-индолил)-1Н-пиррол- 2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(2-диметиламиноэтил)индола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1щ) 12-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с] карбазол в качестве желтого аморфного порошка с т. пл. 221 - 227^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-(2-диметиламинопропил)- -3-индолил]-4-(5-метокси-1-метил-3-индолил)-1H-пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-(3-диметиламинопропил)индола с 5-метокси-1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1ы) 13-(3-диметиламинопропил)-6,7,12,13-тетрагидро-2,3-диметокси-12-метил- 5,7-диоксо-5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол в качестве желтого аморфного порошка с т. пл. 190 - 196^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[5,6-диметокси-1-(3-диметиламинопропил)-3-индолил]-4-(1- метил-3-индолил)-1Н-пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 5,6-диметокси-1-(3-диметиламинопропил)индола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1э) 12-эпоксиметил-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7-диоксо-5Н-индоло [2,3-а] пирроло[3,4-с]карбазол в качестве коричневого аморфного порошка с т. пл. 142 - 148^oC. Применяемый в качестве исходного продукта 3-[1-эпоксиметил-3-индолил] -4-(1-метил-3-индолил)-1H-пиррол-2,5-дион получают аналогично вышеуказанному европейскому патенту путем взаимодействия 1-эпоксиметилиндола с 1-метил-3-индолилуксусной кислотой.

1ю) ()-12-(3-хлор-2-окси-1-пропил)-6,7,12,13-тетрагидро-13-метил-5,7- диоксо-5Н-индоло[2,3-а] пирроло[3,4-с]-карбазол в качестве желтого аморфного порошка с т.пл. 238 - 254^oC. Получение аналогично примеру 1э) путем взаимодействия с хлористым водородом или же в качестве побочного продукта при получении соединения примера 1ы).

Пример 2. 13-(2-цианоэтил)-6,7,12-1З-тетрагидро-3-окси-12-метил-5,7-диоксо- 5Н-индоло[2,3-а]пирроло[3,4-с]карбазол.

200 мг (0,45 ммоль) 13-(2-цианоэтил)-6,7,12,13-тетрагидро-3-метокси-12-метил-5,7-диоксо- 5Н-индоло[3,4-с] карбазола (см. пример 1) в 15 мл дихлормета