2128648 - Производные сульфонамида, способы их получения, фармацевтическая композиция и способ лечения

Производные сульфонамида, способы их получения, фармацевтическая композиция и способ лечения

Реферат

Описываются новые соединения, проявляющие противоопухолевую активность, общей формулы I A-W-SO₂N(R')-B, где W представляет собой простую связь, группу -СН=СН-, R' - водород или низший алкил; А - замещенное или незамещенное ароматическое моно- или бициклическое кольцо, замещенное или незамещенное азот-, кислород - или серусодержащее ненасыщенное пяти- или шестичленное гетероциклическое кольцо, конденсированное или нет с ароматическим шестичленным кольцом, которое может иметь заместители: В - заместитель формулы II, III, IV, V, VI, где каждое из конденсированных колец может иметь заместители, при условии, что когда А представляет собой 4- (ацетамидо)фенил или 4-аминофенил; W представляет собой простую связь; B не является заместителем формулы УП или его фармацевтически приемлемые соли. Описывается способ производного сульфонамида общей формулы I, причем В имеет в качестве заместителя цианогруппу, заключающийся в том, что соединение общей формулы I, где значения W, R', A указаны выше и В в пиррольном кольце содержит заместитель, способный превращаться в цианогруппу при дегидратации, подвергают взаимодействию с гидратирующим агентом и, в случае необходимости, удаляют защитные группы полученного продукта. Описывается также противоопухолевое средство, фармацевтическая композиция, а также способ лечения опухоли, с использованием вышеуказанных соединений формулы I. 9 с. и 6 з.п. ф-лы, 4 табл.

Настоящее изобретение относится к новому производному сульфонамида или сульфонового эфира, способу получения производного и лекарственной композиции, содержащей его в качестве активного ингредиента.

Химико-терапевтические средства, которые используются при лечении раковых заболеваний, включают циклофосфамиды в качестве алкилирующих агентов; метотрексат и фторурацил в качестве антиметаболитов; адриамицин, митомицин и блеомицин в качестве антибиотиков; винкристин и этопозид в качестве лекарств, выделяемых из растений; циспластин в качестве металлокомплекса. Однако эти средства обладают недостаточной противоопухолевой активностью и, таким образом, сохраняется острая потребность в разработке нового антиопухолевого средства.

Далее, в качестве ароматических сульфамидных антиопухолевых средств заявлены производные 2-сульфаниламидохиноксалина (Патент США 4931433) и производные N-(2-анилино-3-пиридинил)бензолсульфонамида (Европейский патент A472053). Не сообщается об использовании в качестве антиопухолевых средств ароматических сульфоновых эфиров.

Целью настоящего изобретения является новое производное сульфонамида или сульфонового эфира, которое обладает превосходной антиопухолевой активностью и отличается по своей базовой структуре от антиопухолевых средств, известных из области техники. Целью настоящего изобретения является также способ получения производного и лекарственная композиция, содержащая его в качестве активного ингредиента.

Для достижения поставленной цели изобретатели провели интенсивные исследования для разработки наилучшего антиопухолевого средства. В результате исследований ими было показано, что новое гетеробициклическое производное сульфонамида и сульфонового эфира обладает превосходной антиопухолевой активностью и низкой токсичностью. Настоящее изобретение является следствием этого открытия.

Таким образом, настоящее изобретение относится к производному сульфонамида или сульфонового эфира, представленному общей формулой (I), или его фармакологически приемлемой соли где A обозначает моноциклическое или бициклическое ароматическое кольцо, которое может иметь заместители, B обозначает шестичленное ненасыщенное углеводородное кольцо или шестичленный ненасыщенный гетероцикл, содержащий в качестве гетероатома один атом азота, при этом каждое из этих колец может иметь заместители, C обозначает пятичленный гетероцикл, содержащий один или два атома азота, который может иметь заместители, W обозначает простую связь или группу, представленную формулой -CH=CH-, X обозначает группу, представленную формулой -N(R¹)-, или атом кислорода, Y обозначает атом углерода или атом азота, Z обозначает группу, представленную формулой -N(R²)-, или атом азота, R¹ и R² могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга и каждый обозначают атом водорода или низший алкил; при условии, что исключаются случаи (1), когда A обозначает 4-метилбензол, W обозначает простую связь, X является группой, представленной формулой -NH-, B обозначает метоксибензол и C обозначает незамещенный имидазол и (2) когда A обозначает 4-(ацетамидо)фенил или 4-аминофенил, W обозначает простую связь, X является группой, представленной формулой -NH-, B обозначает незамещенный фенил и C обозначает незамещенный пиразол.

Далее в настоящем изобретении заявляется использование вышеуказанного соединения в качестве лекарства.

А именно, настоящее изобретение относится и также к лекарственной композиции, включающей фармакологически эффективное количество производного сульфонамида или сульфонового эфира или его фармакологически приемлемой соли, как указано в п. 1 формулы изобретения, и фармакологически приемлемый носитель; способу лечения опухоли, который заключается в назначении пациенту фармакологически эффективной дозы производного сульфонамида, или сульфонового эфира, или его фармакологически приемлемой соли, как указано в п. 1 формулы изобретения; и использованию производного сульфонамида, или сульфонового эфира, или его фармакологически приемлемой соли для получения антиопухолевого средства, как указано в п. 1 формулы изобретения.

В указанной ранее общей формуле (I) А обозначает "моноциклическое или бициклическое ароматическое кольцо, которое может иметь заместители", и относится к ароматическому углеводородному кольцу или ароматическому гетероциклу, содержащему по крайней мере один атом азота, кислорода и серы, при этом каждое кольцо может включать от одного до трех заместителей. Подобное ароматическое кольцо, указанное для A, включает пиррол, пиразол, имидазол, тиофен, фуран, тиазол, оксазол, бензол, пиридин, пиримидин, пиразин, пиридазин, нафталин, хинолин, изохинолин, фталазин, нафтиридин, хиноксалин, хиназолин, циннолин, индол, изоиндол, индолизин, индазол, бензофуран, бензотиофен, бензоксазол, бензимидазол, бензопиразол и бензотиазол. Оно может содержать от одного до трех заместителей, и если присутствуют два или три заместителя, они могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга. Примеры таких заместителей включают аминогруппу, которая может быть замещена низшим алкилом или низшим циклоалкилом, низший алкил, низшую алкоксигруппу, гидроксигруппу, нитрогруппу, меркаптогруппу, цианогруппу, низшую алкилтиогруппу, атом галогена, группы, представленные формулой -a-b [где a обозначает простую связь, -(CH₂)_k-, -O- (CH₂)_k-, -S-(CH₂)_k- или N(R³)-(CH₂)_k (где k -целое число от 1 до 5, а R³ обозначает атом водорода или низший алкил); а b обозначает группу, представленную формулой -CH₂-d (где d обозначает аминогруппу, которая может быть замещена низшим алкилом, атом галогена, гидроксигруппу, низшую алкилтиогруппу, цианогруппу, или низшую алкоксигруппу, )], группы, представленные формулой -a-e-f [где a определено ранее; e обозначает -S(O)- или -S(O)₂-; а f обозначает аминогруппу, которая может быть замещена низшим алкилом или низшим алкоксилом, низший алкил, трифторметил, -(CH₂)_m-b или -N(R⁴)-(CH₂)_m-b (где b определено ранее; R⁴ обозначает атом водорода или низший алкил; и m обозначает целое число от 1 до 5)]; группы, представленные формулой -a-g-h [где a определено ранее; g обозначает -C(O)- или -C(S)-; и h обозначает аминогруппу, которая может быть замещена низшим алкилом, гидроксильную группу, низший алкил, низший алкоксил, -(CH₂)_n-b или -N(R⁵)-(CH₂)_n-b (где b определено ранее; R⁵ обозначает атом водорода или низший алкил; и n обозначает целое число от 1 до 5)]; группы, представленные формулой -a-N(R⁶)-g-i [где a и g определены ранее, R⁶ обозначает атом водорода или низший алкил; и i обозначает атом водорода или низший алкоксил или имеет значение, указанное для f] ; группы, представленные формулой -a-N(R⁷)-e-f [где значения a, e и f определены ранее; а R⁷ обозначает атом водорода или низший алкил); и группы, представленные формулой -(CH₂)_p-j-(CH₂)_q-b (где j обозначает атом кислорода или серы; b определено ранее; и p и q могут совпадать или отличаться друг от друга и обозначают целое число от 1 до 5).

Если заместитель является аминогруппой, замещенной двумя алкильными группами, обе алкильные группы могут быть объединены и образовывать пяти- шестичленное кольцо. Далее, если A обозначает азотсодержащий гетероцикл, имеющий гидроксигруппу или меркаптогруппу, то указанная группа вследствие резонанса моет присутствовать в виде оксо- или тиоксогруппы.

B представляет собой "шестичленное ненасыщенное углеводородное кольцо или шестичленный ненасыщенный гетероцикл, содержащий в качестве гетероатома один атом азота, и может иметь заместители" и относится к бензолу или пиридину, которые могут быть частично гидрированы и могут иметь в кольце один или два заместителя, если заместителей, то они могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга.

C обозначает "пятичленный гетероцикл, содержащий один или два атома азота, который может иметь заместители", относится к пирролу, пиразолу или имидазолу, которые могут быть частично гидрированы и могут иметь в кольце один или два заместителя, при этом если заместителей два, то они могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга.

Примеры заместителей для B или C включают атом галогена, цианогруппу, низший алкил, низший алкоксил, гидроксил, оксогруппу, группы, представленные формулой -C(O)-r (где r обозначает атом водорода, аминогруппу, которая может быть замещена низшим алкилом, низший алкил, низший алкоксил или гидроксил), аминогруппу, замещенную низшим алкилом, трифторметильную группу.

Низший алкил, упомянутый ранее в связи с R¹ и R² и заместителями для A, B и С в общей формуле (I), является линейной или разветвленной алкильной группой, имеющей от 1 до 6 атомов углерода, примеры которые включают метил, этил, н-пропил, изо-пропил, н-бутил, изо-бутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил (амил), изо-пентил, неопентил, трет-пентил, 1-метилбутил, 2-метилбутил, 1,2-диметилпропил, н-гексил, изо-гексил, 1-метилпентил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 1,1-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 2,3-диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 1-этилбутил-2-этилбутил, 1,1,2-триметилпропил, 1,2,2-триметилпропил, 1-этил-1-метилпропил и 1-этил-2-метилпропил, из них метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил и изо-бутил являются предпочтительными, при этом метил, этил, н-пропил и изо-пропил являются наиболее предпочтительными.

Низший циклоалкил, упомянутый в связи с заместителем для A, включает циклопропил, циклопентил и циклогексил. Низший алкоксил, упомянутый в связи с заместителями для A, B и C, может быть группой, полученной из вышеупомянутой низшей алкильной группы, примеры которой включают метоксигруппу, этоксигруппу, н-пропоксигруппу, изо-пропоксигруппу, н-бутоксигруппу, изо-бутоксигруппу и трет-бутоксигруппу, из которых предпочтительными являются метоксигруппа и этоксигруппа. Далее галоген, упомянутый ранее, включает фтор, хлор и бром.

Производное сульфонамида или сульфонового эфира, представленное общей формулой (I), может образовывать соль с кислотой или основанием. Настоящее изобретение включает также соли соединений (I). Примеры солей с кислотами включают соли с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота и серная кислота, и органическими кислотами, такими как масляная кислота, молочная кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, метансульфокислота и п-толуолсульфокислота, в то время как примеры солей с основаниями включают соли с неорганическими основаниями, такими как натрием, калием или кальцием, и органическими основаниями, такими как триэтиламин, аргинин и лизин.

Нет нужды говорить о том, что настоящее изобретение включает гидраты и оптические изомеры указанных соединений, если они существуют. Хотя соединения по настоящему изобретению проявляют высокую антиопухолевую активность, настоящее изобретение включает соединения, которые подвергаются метаболизму в условиях in vivo, такому как окисление, восстановление, гидролиз или сопряжение, и проявляют антиопухолевую активность. Далее, настоящее изобретение включает также соединения, которые подвергаются в условиях in vivo метаболизму, такому как окисление, восстановление или гидролиз, и образуют соединения по настоящему изобретению.

Хотя соединение (I) по настоящему изобретению может быть получено различными способами, далее в качестве примера будет описан ряд способов получения соединения (I).

1) Соединение (I) может быть получено взаимодействием сульфокислоты, представленной общей формулой (II) где Aa обозначает моноциклическое или бициклическое ароматическое кольцо, которое может иметь защищенный или незащищенный заместитель; а значение W указано ранее), или ее реакционноспособного производного с соединением, представленным общей формулой III где Ba обозначает шестичленное ненасыщенное углеводородное кольцо или шестичленный гетероцикл, содержащий в качестве гетероатома один атом азота, при этом каждое из указанных колец может иметь защищенный или незащищенный заместитель; Ca обозначает пятичленный гетероцикл, содержащий один или два атома азота, которые могут иметь защищенный или незащищенный заместитель; а значения X, Y и Z указаны ранее.

Реакционноспособное производное сульфоновой кислоты (II) может быть любым обычным производным, примерами которого являются сульфонилхлорид, сульфоновый ангидрид и N-сульфонилимидазолид, из которых сульфонилхлорид является наиболее предпочтительным. Хотя растворитель, который должен использоваться в указанной выше реакции, специально не ограничивается, предпочтительным является растворитель, в котором растворимы исходные соединения и который слабо взаимодействует с соединениями. Примером такого растворителя является пиридин, тетрагидрофуран, диоксан, бензол, этиловый эфир, дихлорметан, диметилформамид и смеси двух или более указанных растворителей. Если в процессе реакции выделяется кислота, как в случае использования галогенангидрида сульфоновой кислоты, предпочтительно, чтобы реакция проводилась в присутствии подходящего раскислителя. С этой точки зрения наиболее предпочтительным является использование растворителя, обладающего основными свойствами, такого как пиридин. Когда используется нейтральный растворитель, может быть добавлено вещество, обладающее основными свойствами, такое как карбонат щелочного металла или органический третичный амин. Конечно, растворитель, который может использоваться в реакции, не ограничивается указанными ранее. Хотя реакция обычно протекает при комнатной температуре, ее в случае необходимости можно проводить при охлаждении или нагревании. Время реакции составляет обычно от 10 минут до 20 час и может быть выбрано в соответствии с типами исходных соединений и температурой реакции.

Если получаемый продукт содержит защищенную аминогруппу или гидроксильную группу, то в случае необходимости продукт может быть превращен в производное сульфонамида или сульфонового эфира (I), содержащее свободную гидроксильную группу или аминогруппу, с помощью обычного метода удаления защиты, такого как обработка кислотой или щелочью или каталитическое восстановление.

2) Соединение (I) можно получить взаимодействием соединения, представленного общей формулой (IV) где значения Aa, Ba, W, X и Z указаны ранее, с галоидирующим агентом. Примером галоидирующего агента является N-хлорсукцинимид, N-бромсукцинимид, 1,3-дибром-5,5-диметилгидантоин, N-бромацетамид, хлор или бром. Хотя растворитель, который должен использоваться в указанной реакции, специально не ограничивается, примеры растворителя включают хлоралканы, такие как дихлорметан, хлороформ и четыреххлористый углерод; хлорированные ароматические соединения, такие как хлорбензол и дихлорбензол, и водорастворимые растворители, такие как диметилформамид, диоксан, пиридин и ацетонитрил. Температура реакции обычно составляет в интервале от минут 50^oC до 100^oC, хотя она изменяется в зависимости от типа галоидирующего агента и субстрата.

3) Соединение (I) можно получить взаимодействием соединения, представленного общей формулой (V) где значения Aa, Ba, W, X и Z указаны ранее; E обозначает заместитель, который может быть превращен в цианогруппу путем дегидратации, с дегидратирующим агентом. Пример такого заместителя, который может превращаться в цианогруппу путем дегидратации, включает (гидроксиимино)метил и карбамоил.

Иначе из исходного альдегида или карбоновой кислоты может быть получен оксид или амид кислоты, который может реагировать с дегидратирующим агентом без выделения. Дегидратирующим агентом может быть любое средство, обычно используемое при синтезе нитрилов, примером которого является уксусный ангидрид, тионилхлорид, оксихлорид фосфора, диоксид селена и 1,3-дициклогексилкарбодиимид. Хотя растворитель, который должен использоваться в указанной реакции, специально не ограничивается, предпочтительным является растворитель, в котором растворимы исходные соединения и который слабо взаимодействует с ними, и примером такого растворителя является пиридин, этиловый эфир, бензол, диметилформамид, четыреххлористый углерод, ацетонитрил, тетрагидрофуран и смеси двух или более указанных растворителей. Температура реакции обычно лежит в интервале от минут 50^oC до 150^oC, хотя она изменяется в зависимости от типа дегидратирующего агента и субстрата.

4) Соединение (I) может быть получено взаимодействием соединения, представленного общей формулой (VI) где Ab обозначает моноциклическое или бициклическое ароматическое кольцо, содержащее заместитель, который может быть превращен в аминогруппу путем восстановления и может содержать защищенный или незащищенный заместитель; значения Ba, Ca, W, X Y и Z указаны ранее, с восстановительным агентом. Заместитель, способный превратиться в аминогруппу путем восстановления, включает нитрогруппу, нитрозогруппу, гидроксиламиногруппу и азогруппу.

Хотя восстановление можно проводить любыми способами, пригодными для восстановления нитрогруппы, оно преимущественно осуществляется каталитическим восстановлением с использованием в качестве катализатора палладия на угле или оксида платины или восстановлением с использованием кислоты вместе с цинком, железом или оловом. Каталитическое восстановление обычно проводят в органическом растворителе, таком как метанол, тетрагидрофуран или диметилформамид при нормальном или повышенном давлении.

5) Соединение (I) может быть получено взаимодействием соединения, представленного общей формулой (VII) где Ac обозначает моноциклическое или бициклическое ароматическое кольцо, содержащее уходящую группу в кольце или заместитель, которое может иметь защищенный или незащищенный заместитель; значения Ba, Ca, W, X Y и Z указаны ранее, с нуклеофилом. Уходящая группа включает атом галогена, метансульфонилоксигруппу и п-толуолсульфонилоксигруппу. Нуклеофил включает амины, спирты и тиолы. Спирт или тиол может использоваться в виде соли с щелочным металлом или т.п. Хотя растворитель, который должен использоваться в указанной реакции, специально не ограничивается, предпочтительным является растворитель, в котором растворимы исходные соединения и который слабо взаимодействует с ними. Примеры таких растворителей включают тетрагидрофуран, диоксан, диметилформамид и воду. Температура реакции обычно лежит в интервале от минут 50^oC до 150^oC, хотя она изменяется в зависимости от типа дегидратирующего агента и субстрата.

Далее описывается получение исходного соединения (II) и его реакционноспособного производного, а также соединения (III).

Исходное соединение (II) и его реакционноспособное производное включают как известные соединения, так и новые соединения. Каждое из этих новых соединений может быть получено одним из известных способов, применяемых для получения известных соединений, или путем комбинации двух или большего количества указанных способов. Например, способы, приведенные в публикациях Chem. Ber., Bd. 90, 841 (1957); J. Med. Chem., Vol. 6, 307 (1963); J. Chem. Soc. (c), 1968, 1265; Chem. Lett., 1992, 1483; J. Am. Chem. Soc., Vol. 59, 1837 (1937); J. Med. Chem., Vol. 23, 1376 (1980); J. Am. Chem. Soc., Vol. 70, 375 (1948) и J. Am. Chem. Soc., Vol. 78, 2171 (1956) могут использоваться для получения новых сульфонилхлоридов.

Исходное соединение (III) включает как известные, так и новые соединения. Исходное соединение (III), где H-X- обозначает аминогруппу (H₂N-), может быть получено восстановлением соответствующего нитросоединения с помощью обычного метода восстановления нитрогруппы. Указанное восстановление преимущественно осуществляют каталитически в присутствии палладия на угле в качестве катализатора или с использованием порошкообразного цинка и соляной кислоты. Каталитическое восстановление можно обычно проводить в органическом растворителе, таком как метанол, тетрагидрофуран или диметилформамид, при нормальном или повышенном давлении.

Исходное соединение (III), где H-X- обозначает гидроксил (HO-), может быть получено диазотированием указанного выше аминопроизводного или гидролизом полученного диазосоединения.

Если исходное соединение является новым соединением, то его моно получить одним из известных способов, применяемых для получения известных соединений, или путем комбинации двух или большего количества указанных способов. Например, новое исходное соединение может быть получено с помощью способа, приведенного в публикациях Can. J. Chem., Vol. 42, 1235 (1964); Chem. Abst., Vol. 59, 8855 (1963) или Tetrahedron Lett., Vol. 30, 2129 (1989) по следующим схемам реакций: Схема реакций 1 где Qs совпадают или отличаются друг от друга и каждый обозначает заместитель; G обозначает атом галогена, а t обозначает целое число от 0 до 2.

Схема реакции 2 где значения Q и t указаны ранее.

Схема реакции 3 где значения Q, G и t указаны ранее, а DPPA обозначает дифенилфосфорилазид.

Схема реакции 4 где значения Q, G и t указаны ранее, а DDQ обозначает 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинон.

Если соединение по настоящему изобретению используют в качестве лекарства, его вводят перорально или парентерально. Хотя доза указанного соединения изменяется в зависимости от определенных симптомов; от возраста, пола, веса и чувствительности пациента; метода, времени и интервалов между введениями свойств, степени дисперсности и типа фармацевтической композиции; типа активного ингредиента и т.д., и хотя она специально не ограничивается, доза взрослого человека в день составляет от 10 до 6000 мг, предпочтительно приблизительно от 50 до 4000 мг, еще более предпочтительно от 100 до 3000 мг, и обычно вводится в 1 до 3 раз в день Твердую композицию для перорального введения получают добавлением наполнителя и, в случае необходимости, связующего, разрыхлителя, смазывающего вещества, красителя и/или модификатора активного ингредиента и формуют обычным способом из полученной смеси таблетки, таблетки с покрытием, гранулы, мелкие гранулы, порошки или капсулы.

Примеры наполнителя включают лактозу, кукурузный крахмал, сахарозу, глюкозу, сорбит, кристаллическую целлюлозу и диоксид кремния; примеры связующего включают поливиниловый спирт, этилцеллюлозу, метилцеллюлозу, камедь, гидроксипропилцеллюлозу и гидроксипропилметилцеллюлозу; примеры смазывающих веществ включают стеарат магния, тальк и оксид кремния; примеры красителя включают те, которые разрешены в качестве фармацевтических добавок; и примеры модификаторов включают порошок какао, ментол, ароматизирующий порошок, мятное масло, борнеол и порошок коры коричневого дерева. Конечно, таблетка и гранулы могут в случае необходимости быть покрыты сахаром, желатином и т.п.

Инъекцию готовят добавлением к необходимому активному ингредиенту регулятора pH буфера, суспендирующего средства, солюбилизатора, стабилизатора, изотонического средства и/или консерванта и получают обычным способом инъекцию для внутривенного, подкожного или внутримышечного введения. В случае необходимости полученную суспензию можно высушить обычным методом сублимационной сушки.

Примеры суспендирующего агента включают метилцеллюлозу, Polysorbat 80, гидроксиметилцеллюлозу, камедь, порошок трагаканта, натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы и полиоксиэтилен сорбитан монолаурат.

Примерами солюбилизатора являются отвержденное полиоксиэтиленом касторовое масло, Polysorbat 80, никотинамид, полиоксиэтилен сорбитан монолаурат макроголь и этиловый эфир жирной кислоты касторового масла.

Примеры стабилизатора включают сульфат натрия и метабисульфат натрия; примеры консерванта включают метиловый эфир п-гидроксибензойной кислоты, этиловый эфир п-гидроксибензойной кислоты, сорбиновую кислоту, фенол, крезол, и хлоркрезол.

Для иллюстрации воздействия соединения по настоящему изобретению далее приводятся Примеры проведения фармакологических экспериментов, при этом в качестве контрольного соединения для оценки воздействия используют известные гетеробициклический сульфонамид 2-сульфаниламино-5-хлорхиноксалин (CQS : открытая заявка Японии 62-426).

Экспериментальный пример 1 Антиопухолевый тест в условиях in vitro по отношению к клеткам 38 толстой кишки (раковые клетки толстой кишки мыши) 2,5 10³ (0,1 мл) клеток 38 толстой кишки, суспендированные в среде RPM11640 (продукт компании "Sanko Juinyaku"), содержащей 10% сыворотки плода коровы, пенициллин (100 единиц/мл), стрептомицин (100 мкг/мл), меркаптоэтанол (5 10^-5 М) и натриевую соль пированоградной кислоты (1 мМ), вносят в каждую ячейку планшета, содержащего 96 ячеек, и культивируют при 37^oC в течение одного дня в инкубаторе, содержащем 5% диоксида углерода.

Испытуемое соединение по настоящему изобретению растворяют в диметилсульфоксиде с концентрацией 20 мг/мл и полученный раствор разбавляют средой 10%-ная сыворотка плода коровы/RPM11640 до концентрации 200 мкг/мл. Полученный раствор разбавляют средой 10%-ная сыворотка плода коровы/ RPM1640 и получают серии разбавленных в 3 раза растворов с максимальной концентрацией 200 мкг/мл. Полученные разбавленные растворы помещают в ячейки указанного выше планшета в количестве по 0,1 мл. Полученные пластины культивируют при 37^oC в течение трех дней в инкубаторе, содержащем 5% диоксида углерода.

Затем в каждую ячейку добавляют раствор МТТ [3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолийбромида] (с концентрацией 3,3 мг/мл) в количестве 0,05 мл. Полученные смеси инкубируют в термостате еще в течение 2 час. Надосадочную жидкость удаляют откачиванием. Полученный формазан растворяют в 0,1 мл диметилсульфоксида. Определение поглощения на длине волны 540 нм проводят с помощью анализатора микропроб и используют величину поглощения в качестве показателя числа жизнеспособных клеток. Относительную величину ингибирования для испытуемого соединения рассчитывают в соответствии со следующей формулой для определения величины IC₅₀ испытуемого соединения, где IC₅₀ обозначает концентрацию, при которой подавляется 50% клеток 38 толстой кишки мыши.

Относительное ингибирование (%) = C - T / C 100 T - поглощение ячейки, содержащей испытуемое соединение; C - поглощение ячейки, не содержащей испытуемое соединение.

Полученные указанным образом величины IC₅₀ представлены в табл. 1 - 1 и 1 - 2.

Экспериментальный пример 2 Антиопухолевый тест в условиях in vivo по отношению к клеткам 38 толстой кишки (раковые клетки толстой кишки мыши) Приблизительно 75 мг клеток толстой кишки 38 подкожно трансплантируют в бок каждой мыши BDFI (в возрасте 7 недель, женские особи). Испытуемое соединение по настоящему изобретению суспендируют в физиологическом солевом растворе, содержащем 3,5% диметилсульфоксида и 6,5% Tween 80, и полученную суспензию вводят мышам внутрибрюшинно с предварительно определенной дозой один раз в день в течение 8 дней, начиная со следующего дня после трансплантации. С другой стороны, мышам контрольной группы вводят внутрибрюшинно лишь физиологический солевой раствор, содержащий 3,5% диметилсульфоксида и 6,5% Tween 80. Контрольную группу составляют десять мышей, а каждая испытуемая группа включает по шесть мышей.

На 21 день после трансплантации у каждой мыши полностью удаляют опухоль и определяют ее вес. Степень ингибирования роста опухоли определяют по следующей формуле: Степень ингибирования роста (%) = C - T / C 100 T - средний вес опухоли испытуемой группы; C - средний вес опухоли контрольной группы.

Результаты представлены в табл. 2.

Экспериментальный пример 3 Антиопухолевый тест в условиях in vivo по отношению к клеткам HCT116 (раковые клетки толстой кишки человека) Клетки HCT116 (5-8 10⁶) имплантируют подкожно в бок лишенных волосяного покрова мышей (BALB/c. nu/nu, женские особи в возрасте от 7 до 8 недель). Испытуемое соединение по настоящему изобретению суспендируют в физиологическом солевом растворе, содержащем 3,5% диметилсульфоксида и 6,5% Tween 80, и полученную суспензию вводят внутрибрюшинно мышам, прошедшим указанную обработку, с определенной дозой один раз в день в течение 4 дней, начиная со следующего дня после того, как объем опухоли увеличится приблизительно на 100 куб. мм, что составляет приблизительно 7 дней после трансплантации. С другой стороны, мышам контрольной группы вводят внутрибрюшинно лишь физиологический солевой раствор, содержащий 3,5% диметилсульфоксида и 6,5% Tween 80. Контрольную группу составляет десять мышей, а каждая испытуемая группа включает по пять мышей. На 21 день после начала введения у каждой мыши полностью удаляют опухоль и определяют ее вес. Степень ингибирования роста опухоли определяют по следующей формуле: Степень ингибирования роста (%) = C - T / C 100 T - средний вес опухоли испытуемой группы; C - средний вес опухоли контрольной группы.

Результаты представлены в табл. 3.

Как видно из результатов приведенных выше экспериментальных примеров, соединения по настоящему изобретению обладают превосходной антиопухолевой активностью и полезны в качестве антиопухолевого средства.

Примеры Далее приводятся Препаративные примеры, касающиеся получения исходных соединений, используемых для получения соединений по настоящему изобретению, и Примеры, касающиеся отдельных соединений по настоящему изобретению, хотя настоящее изобретение не огранивается указанными примерами.

Препаративный пример 1 7-Бром-1H-индол 1,0 М раствор (100 мл) винилмагнийбромида (100 ммоль) в тетрагидрофуране добавляют к 250 мл раствора 5,05 г (25 ммоль) 2-бромнитробензола в тетрагидрофуране при температуре минус 40^oC в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивают в указанных условиях в течение 40 минут и выливают в 500 мл насыщенного водного раствора хлорида аммония. Экстрагируют этиловым эфиром. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и упаривают. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле и получают 2,89 г целевого продукта.

Спектр ПМР (ДМСО-d₆) (м.д.): 6,56 (1H, дублет дублетов, J = 2,9, 1,8 Гц), 6,94 (1H, триплет, J = 7,8 Гц), 7,30 (1H, дублет, J = 7,8 Гц), 7,40 (1H, триплет, J = 2,9 Гц), 7,56 (1H, дублет, J = 7,8 Гц).

Препаративный пример 2 7-Амино-1H-индол 2,5 М раствор (16,5 мл) н-бутиллития (41,3 ммоль) в гексане добавляют по каплям к 50 мл раствора 2,70 г (13,8 ммоль) соединения, полученного в Препаративном примере 1, в тетрагидрофуране при температуре минут 70^oC в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивают при температуре минут 70^oC в течение 15 минут и при температуре от минут 20 до минут 10^oC в течение 30 минут. Полученную смесь снова охлаждают до температуры минус 70^oC и добавляют по каплям 3,9 мл (18 ммоль) дифенилфосфорилазида. Полученную смесь перемешивают при температуре минус 70^oC в течение часа и при температуре минус 40^oC в течение часа. К полученной смеси при температуре минус 40^oC добавляют 22,3 мл 3,4 М раствора бис(2-метоксиэтокси)алюмогидрида натрия (75,8 ммоль) в толуоле. Полученную смесь перемешивают при температуре от минус 30 до минус 20^oC в течение 30 минут и при комнатной температуре в течение 30 минут и добавляют фосфатный буфер с pH 7,0. Полученную смесь отфильтровывают для удаления нерастворимых соединений и фильтрат экстрагируют этиловым эфиром. Органическую фазу отделяют, последовательно промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором соли, сушат над сульфатом магния и упаривают. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле и получают 1,29 г целевого продукта.

Спектр ПМР (ДМСО-d₆) / (м.д.): 5,01 (2H, уширенный синглет), 6,25 - 6,33 (2H, мультиплет), 6,70 (1H, дублет дублетов, J = 7,9, 7,3 Гц), 6,78 (1H, дублет дублетов, J = 7,9, 0,7 Гц), 7,23 (1H, триплет, J = 2,7 Гц), 10,48 - 10,72 (1H, широкий мультиплет).

Каждое из следующий исходных соединений получают из производного 2-бромнитробензола аналогично методикам, приведенным в Препаративных примерах 1 и 2.

7-Амино-4-метокси-1H-индол 7-Амино-4-бром-1H-индол Препаративный пример 3 7-бром-3-хлор-4-метил-1H-индол N-Хлорсукцинимид (4,0 г, 30,0 ммоль) добавляют к 250 мл ацетонитрильного раствора 5,8 г (27,6 ммоль) 7-бром-4-метил-1H-индола, полученного из 2-бром-5-метилнитробензола аналогично методике, приведенной в Препаративном примере 1. Полученную смесь оставляют на ночь перемешиваться при комнатной температуре и добавляют 50 мл 1N водного раствора едкого натра. Полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой, сушат над сульфатом магния и упаривают. Полученный остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле и получают 6,7 г целевого продукта.

Производные сульфонамида, способы их получения, фармацевтическая композиция и способ лечения

Патент 2128648