Консервант донорской роговицы

Консервант донорской роговицы

Реферат

 

Изобретение заключается в том, что консервант донорской роговицы содержит в качестве биологически активного вещества выделенную из роговиц крупного рогатого скота смесь гликозаминогликанов и дополнительно - реополиглюкин и гентамицин в следующем соотношении компонентов, мас. %: смесь гликозаминогликанов 2,5-3,0; гентамицин 0,2-0,3; реополиглюкин 96,7. Применение консерванта донорской роговицы обеспечивает морфологическую сохранность трансплантационного материала до 20 суток и может быть использовано для создания запаса материала для нужд трансплантологии.

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для консервации донорской роговицы.

Известны консерванты, применяемые в офтальмологии / -глобулин, среда 199, среда ИГЛА/. Эти среды не физиологичны, не содержат в своем составе биологические компоненты, ограничивают срок хранения донорского материала и не соответствуют для длительной консервации.

Наиболее близким по технической сущности является Optisol /Chiron, USA/, в котором в качестве действующего начала применяется 25% раствор хондроитинсульфата (ХС). Состав удовлетворяет специфическим требованиям, предъявляемым к средствам для консервации донорской роговицы. Однако Optisol дорогостоящий, препарат имеет ограниченный срок хранения донорского материала до 14 суток, импортируется в ограниченном количестве и за высокую цену.

Нами была поставлена задача разработать отечественный аналог, обеспечивающий длительное хранение донорской роговицы и предотвращающий ее деструктивные изменения.

Для решения поставленной задачи предложен консервант донорской роговицы из водорастворимой смеси гликозаминогликанов, реополиглюкина и гентамицида в следующем соотношении компонентов, мас.%: Смесь гликозаминогликанов - 2,5-3,0 Гентамицин - 0,2 - 0,3 Реополиглюкин - 97,3 - 96,7 Смесь гликозаминогликанов (ГАГ) содержит кератансульфат (КС) и хондроитинсульфат в соотношении 1:3. Смесь выделяют из роговиц крупного рогатого скота (КРС). Выделенная смесь имеет следующий элементарный состав, %: углерод 40,16; сера 1,21; кислород 31,15; водород 6,96; азот 11,1; зола 9,52. В качестве декстрана, улучшающего осмотические свойства, предложен реополиглюкин /Машковский, "Лекарственные средства, 1987, ч. II, с. 100/, в качестве антибиотика - гентамицин /Машковский, "Лекарственные средства, 1987, ч. II, с. 242/.

Способ приготовления консерванта заключается в следующем: предварительно из роговиц глаз КРС путем щелочно-солевого гидролиза и последующей ферментативной деструкции выделяют смесь ГАГ. Готовый раствор ампулируют, высушивают до получения порошкообразного вещества белого цвета путем лиофильной сушки. Порошок в ампулах стерилизуют -облучением в дозе 25 КГР. Для приготовления консерванта порошок смеси гликозаминогликанов (ГАГ) 2,5-3,0 (г) растворяют в реополиглюкине - 100 мл. Для профилактики роста микроорганизмов добавляют гентамицин 0,2-0,3 (г).

Для экспериментальной оценки концентрации ГАГ было приготовлено пять составов консерванта, содержащих различные количества ГАГ (2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 5,0%).

На основании полученных результатов сроков сохранности донорской роговицы оптимальные концентрации ГАГ составили 2,5-3,0%. При концентрациях ГАГ менее 2,5% срок хранения роговицы уменьшается, падает также процент ее приживаемости. Использование концентрации ГАГ более 3,0% в консерванте не приводит к увеличению срока сохранности роговицы и процента ее приживаемости. Поскольку стоимость препарата при этом возрастает, концентрации ГАГ более 3,0% использовать не рационально.

Пример 1. Для приготовления 20 мл консерванта 0,5 г стерильного порошка ГАГ растворяют в 20 мл реополиглюкина, после чего добавляют 0,04 г гентамицина.

Пример 2. Для приготовления 20 мл консерванта 0,6 г стерильного порошка ГАГ растворяют в 20 мл реополиглюкина, после чего добавляют 0,06 г гентамицина.

Полученный препарат представляет собой прозрачную бесцветную жидкость без запаха. Препарат пригоден для хранения роговицы донора до 20 суток.

Применение нового консерванта для длительного хранения донорской роговицы приводит к заметному улучшению роговичной ткани, обеспечивает сохранность структуры всех ее слоев, прозрачности, увеличивая срок сохранности до 20 суток.

Материалом для исследований служили роговицы трупных глаз, взятых через 4-6 часов после смерти. В связи с ухудшением эпидемилогической обстановки необходимо до проведения кератопластики провести анализы RW, гепатит и ВИЧ-инфекцию. Отсрочка операции в среднем на 30-36 часов требует нахождения донорского материала в биологической среде, приближенной по составу самой роговице, что обеспечивает ее прозрачную сохранность. Данное условие достигается предлагаемым консервантом. Смесь ГАГ /КХ и ХС/ выделяется из роговицы глаз КРС и является наиболее приближенной по составу самой роговице.

Для оценки структурной сохранности роговицы использовали метод электронной микроскопии. При исследовании роговиц, находящихся в новом консерванте в течение 20 суток, обнаружили удовлетворительную структурную сохранность клеток эпителия, эндотелия и кератоцитов роговицы. Через 10 суток хранения в консерванте эпителиальная ткань сохраняла свою многослойность при незначительном ее отеке. Лишь небольшие деструктивные изменения, выражающиеся в небольшом лизисе ядерного хроматина и отека митохондрий, наблюдаются в единичных клетках как эпителия и эндотелия, так и керацитов, коллагеновое волокно остается без видимых изменений.

К 20 дню консервации клетки роговицы глаза человека выглядят почти так же, как и через 10 дней консервации.

Однако, к 30 дню консервации изменения в эпителии, эндотелии и кератоцитах усиливаются. Ядерный хроматин уплотняется и располагается преимущественно у ядерной оболочки, которая к этому времени становится неровной. Отечность митохондрий усиливается, митохондрии увеличиваются в объеме. Кристы в митохондриях теряют свою правильную ориентацию и начинают располагаться более беспорядочно.

Таким образом, результаты электронно-микроскопического исследования подтверждают, что консервант, содержащий 2,5-3,0% раствор ГАГ, обеспечивает сохранность донорской роговицы до 20 суток и может быть использован для создания запаса донорского материала для нужд трансплантации.

Формула изобретения

Консервант донорской роговицы на основе биологически активного вещества, отличающийся тем, что в качестве биологически активного вещества используют выделенную из роговиц глаз крупного рогатого скота водорастворимую смесь гликозаминогликанов и дополнительно содержит реополиглюкин и гентамицин в следующем соотношении компонентов, мас.%: Смесь гликозаминогликанов - 2,5 - 3,0 Гентамицин - 0,2 - 0,3 Реополиглюкин - 97,3 - 96,7