Амиды сульфамидо- и сульфамидокарбонилпиридин-2-карбоновых кислот, способы их получения и фармацевтическая композиция

Амиды сульфамидо- и сульфамидокарбонилпиридин-2-карбоновых кислот, способы их получения и фармацевтическая композиция

Реферат

 

Амиды сульфамидo- и сульфамидокарбонилпиридин-2-карбоновых кислот формулы I, где А = R³, а B = -Х-NR⁶R⁷ или B = R³, а А = -Х-NR⁶R⁷; X - простая связь или -СО-; R¹, R², R³ - одинаковые или различный и означают водород, незамещенный С₁-С₄-алкил, -(С₁-С₆)-алкокси, фтор, бром; R⁴, R⁵ - независимо друг от друга - Н, С₁-С₈ алкил, С₆-С₁₀-арил, С₇-С₁₁ар-С₁-С₆-алкил, С₁-С₈-алкилокси, возможно однократно замещенные гидрокси, карбокси, С₁-С₆-алкилоксикарбонилом, С₁-С₆-алкокси; R⁶-Н, С₁-С₆-алкил, одновалентный физиологически приемлемый катион - Na⁺, K⁺; R⁷ - остаток формулы II (за исключением SO₂H). Y-[C-U]_r-D-W, где Y-SO₂; С-связь, С₁-С₈-алифатический алкандиил; U-связь, -O-; D-связь; W-Н, тиенил, С₆-С₁₀-арил, причем U означает -O- в том случае, если С не означает связь, а W предпочтительно замещено, например, группой -O-(CH₂)_xC_fH_(2f+1-q)F_q; f = 1-8; q = 0,1-(2f+1), r = 1,2; X = 0-8. Используют в качестве фармацевтической композиции с антифиброзной активностью. Соединение I, где Х - простая связь, получают из аминопиридин-2-карбоксилата и производного сульфоновой кислоты, с последующим взаимодействием полученного соединения с амином. Соединение I, где Х означает -СО-, получают из карбоксилат эфира пиридин-2-карбоновой кислоты. 2 с. и 5 з.п.ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к амидам сульфамидо- и сульфамидокарбонилпиридин-2-карбоновых кислот, а также к их применению в фармацевтических композициях для лечения фиброзов.

Соединения, ингибирующие ферменты пролин- и лизингидроксилазу, благодаря своему влиянию на специфичные в отношении коллагена реакции гидроксилирования оказывают весьма селективное тормозящее действие на синтез коллагена. В ходе этих реакций под действием фрементов пролин- и лизингидроксилазы происходит гидроксилирования связанного в белок пролина, соответственно лизина. При подавлении этих реакций под действием ингибиторов образуются не полностью гидроксилированные, не обладающие нормальной функциональной способностью молекулы коллагена, которые лишь в небольших количествах способны переходить из клеток во внеклеточное пространство. Кроме того, такой не полностью гидроксилированный коллаген не может встраиваться в коллагеновую матрицу и поэтому очень легко поддается протеолитическому отщеплению. Следствием этого является уменьшение общего количества отлагающегося во внеклеточном пространстве коллагена.

Поэтому ингибиторы пролингидроксилазы могут найти применение при лечении заболеваний, клиническая картина которых в значительной степени определяется отложением коллагена. К таким заболеваниям относятся, в частности, фиброзы легких, печени и кожи (склеродермия), а также атеросклероз.

Известно (K. Majamaa и др., Eur. J.Biochem. 138 (1984) 239 - 245), что пиридин-2,4- и пиридин-2,5-дикарбоновые кислоты являются эффективными ингибиторами фермента пролингидроксилазы. Однако в случае культур клеток эти соединения оказывают эффективное тормозящее действие только при очень высоких концентрациях (Tschank, G и др., Biochem.J. 238 (1987) 625 - 633).

В патенте ФРГ A 3432094 описано использование диэфиров пиридин-2,4- и пиридин-2,5-дикарбоновых кислот с 1-6 атомами углерода в эфирной части в качестве лекарственных препаратов для ингибирования пролин- и лизингидроксилаз.

Однако эти (низший) алкилированные диэфиры имеют тот недостаток, что они слишком быстро расщепляются в организме с образованием кислот и поэтому в месте их действия в клетке оказываются в недостаточно высокой концентрации. Поэтому они мало пригодны для непосредственного использования в качестве лекарственных препаратов.

В патентах ФРГ A 3703959, A 3703962 и A 3703963 описаны в общей форме смешанные амидоэфиры, алкилированные (алкилами с большим числом атомов углерода) диэфиры и диамиды пиридин-2,4- и пиридин-2,5-дикарбоновых кислот, эффективно тормозящие синтез коллагена в опытах на животных.

Задача настоящего изобретения состояла в получении соединений, обладающих более сильным антифибриотическим действием по сравнению с известными соединениями.

Решением этой задачи явилось получение амидов сульфонамидо- и сульфонамидокарбонилпиридин-2-карбоновых кислот общей формулы 1 где A = R³, а B = -X-NR⁶R⁷ или B = R³, а A = -X-NR⁶R⁷; X - означает простую связь или -CO-; R¹, R², R³ - одинаковые или различные и означают водород, незамещенный C₁-C₆-алкил, -(C₁-C₆) алкокси, галоген, в частности фтор или бром; R⁴ и R⁵ независимо друг от друга означают водород, C₁-C₈-алкил, C₅-C₁₀-арил, C₇-C₁₁-ар-C₁-C₆-алкил, C₁-C₈-алкилокси, возможно однократно замещенные гидрокси, карбокси, C₁-C₆-алкилоксикарбонилом, C₁-C₆-алкокси; R⁶ означает водород, C₁-C₆-алкил, - одновалентный физиологически приемлемый катион, в частности Na⁺, K⁺; R⁷ означает остаток формулы II (за исключением - SO₂H) Y - [C-U)_r-D-W, где Y означает SO₂; C означает связь или неразветвленный или разветвленный алифатический C₁-C₈-алкандиил; U означает связь, -O-; D означает связь; W - означает водород, тиенил, C₆-C₁₀-арил; причем U означает -O- в том случае, если C не означает связь, а W - предпочтительно замещено, например, группой; -O-[CH₂]_xC_fH(2_f+1-q)F_q, f = 1-8, предпочтительно 1-5; q = 0,1-(2f+1).

Наиболее предпочтительны соединения общей формулы 1, в которой W замещено 1-2 группами, включающими: галоген, трифторметил, C₁-C₈-алкил, C₆-C₁₀-арил, C₁-C₈-алкокси, C₁-C₈-алкокси-C₁-C₈-алкил, C₆-C₁₀-арилокси, N-(C₁-C₈)-алкилкарбамоил, N,N-ди-C₁-C₈-алкилкарбамоил, N-(C₃-C₈)-циклоалкилкарбамоил, N-(C₁-C₈)- алкил -N((C₆-C₁₀)арил-(C₁-C₈)алкил)карбамоил, N-(С₁-С₈)-алкил, C₆-C₁₀-арилкарбамоил, N-C₁-C₈- алкоксиарилкарбамоил, C₁-C₈-алканоил-N-C₁-C₈-алкиаламино, C₆-C₁₀-арилокси-C₁-C₈-алканоил- N-(C₁-C₈)-алкиламино, C₁-C₈-алканоиламино, цикло C₃-C₈-алканоиламино, C₆-C₁₀-ар-C₁-C₈-алканоиламино, N-C₁-C₈-алкилкарбамоил-C₁-C₈-алкилоки- C₆-C₁₀-арил, C₃-C₈-циклоалкил-C₁-C₆-алканоиламино- C₁-C₈-алкил, C₆-C₁₀-арилокси-C₁-C₈-алканоиламино, C₆-C₁₀-ароил-N-(C₁-C₈)-алкиламино, (C₇-C₁₁-ар-(C₁-C₆)-алканоил-N- (C₁-C₁₀)-алкиламино, C₁-C₈- алканоиламино-C₁-C₈-алкил, C₃-C₈- циклоалканоиламино-C₁-C₈-алкил, C₆-C₁₀-ароиламино-C₁-C₈-алкил, C₇-C₁₁-ар-C₁-C₈-алканоиламино- C₁-C₈-алкил. Предметом настоящего изобретения является также способ получения соединения общей формулы I, где X означает простую связь, R¹, R², R³ одинаковые или различные и означают водород, незамещенный C₁-C₆-алкил, -(C₁-C₆)-алкокси, галоген, в частности фтор или бром; R⁴ и R⁵ независимо друг от друга означает водород, C₁-C₈-алкил, C₆-C₁₀-арил, C₇-C₁₁-ар-C₁-C₆-алкил, C₁-C₈-алкилокси, возможно однократно замещенные гидрокси, карбокси, C₁-C₆ алкилоксикарбонилом, C₁-C₆-алкокси; R⁶ означает водород, C₁-C₆-алкил, - одновалентный физиологически приемлемый катион, в частности Na⁺, K⁺; R⁷ означает остаток формулы II (за исключением -SO₂H) Y-[C-U)_r-D-W где Y означает SO₂; C означает связь или неразветвленный или разветвленный алифатический C₁-C₈-алкандиил; U означает связь, -O-; D означает связь; W означает водород, тиенил, C₆-C₁₀-арил; причем U означает -O- в том случае, если C не означает связь, а W - предпочтительно замещено, например, группой; -O-[CH₂]_xC_f+1-q)F_q, f = 1-8, предпочтительно 1-5; q = 0,1-(2f- +1); путем взаимодействия аминопиридин-2-карбоксилата формулы II где A'=R³, и B'=-NHR⁶ или A'=-NHR⁶, а B'=R³, подвергают взаимодействию с производным сульфоновой кислоты общей формулы 3 Z - R⁷ где Z - отщепляемая группа, и образующееся в результате соединение II, где A' = R³, B'=-NR⁶R⁷ или A'=-Nr⁶R⁷ а B' = R³, подвергают взаимодействию с амином формулы H-NR⁴R⁵, с образованием соединения общей формулы 1.

Предметом изобретения является способ получения соединения формулы 1, в которой X означает -CO-; R¹, R², R³ - одинаковые или различные и означают водород, незамещенный C₁-C₆-алкил, -(C₁-C₆)алкокси, галоген, в частности фтор или бром; R⁴ и R⁵ независимо друг от друга означают водород, C₁-C₈-алкил, C₆-C₁₀-арил, C₇-C₁₁-ар-C₁-C₆-алкил, C₁-C₈-алкилокси, возможно однократно замещенный гидрокси, карбокси, C₁-C₆ алкилоксикарбонилом, C₁-C₆-алкокси; R⁵ означает водород, C₁-C₆-алкил, - одновалентный физиологически приемлемый катион, в частности Na⁺, K⁺; R⁷ означает остаток формулы II (за исключением - SO₂H) Y - [C - U]_r-D-W, где Y означает SO₂; C означает связь или неразветвленный, или разветвленный алифатический C₁-C₈-алкандиил; U означает связь, -O-; D означает связь; W означает водород, тиенил, C₆-C₁₀-арил; причем U означает -O- в том случае, если C не означает связь, а W предпочтительно замещено, например, группой: -O-[CH₂]_xC_fH_(2f+1-q)F_q, f = 1 - 8, предпочтительно 1 - 5; q = 0,1-(2f + 1); согласно которому карбоксилат эфира пиридин-2-карбоновой кислоты формулы 7: где A'' = R³, B'' = CO₂H или A'' = CO₂H, а B'' = R³, подвергают взаимодействию с производным сульфоновой кислоты формулы 8: R⁶HNR⁷, VIII и образующееся в результате соединение формулы 7, где A'' = R³, B'' = -CONR⁶R⁷ A'' = CONR⁶R⁷; а B'' = R³ подвергают взаимодействию с амином формулы 6: HNR⁴R⁵, где R¹, R², R³ - одинаковые или различные и означают водород, незамещенный C₁-C₆-алкил, -(C₁-C₆) алкокси, галоген, в частности фтор или бром; R⁴ и R⁵ независимо друг от друга означают водород, C₁-C₈-алкил, C₆-C₁₀-арил, C₇-C₁₁-ар-C₁-C₆-алкил, C₁-C₈-алкилокси, возможно однократно замещенные гидрокси, карбокси, C₁-C₆ алкилоксикарбонилом, C₁-C₆-алкокси; R⁶ означает водород, C₁-C₆-алкил, - одновалентный физиологически приемлемый катион, в частности Na⁺, K⁺; R⁷ означает остаток формулы II (за исключением -SO₂H) Y - [C - U)_r-D-W, где Y означает SO₂; C означает связь или неразветвленный или разветвленный алифатический C₁-C₈-алкандиил; U означает связь, -O-; D означает связь; W означает водород, тиенил, C₆-C₁₀-арил; причем, U означает -O- в том случае, если C не означает связь, а W - предпочтительно замещено, например, группой: -O-[CH₂]_xC_fH_(2f+1-q)F_q, f = 1 - 8, предпочтительно 1 - 5; q = 0,-(2f + 1).

Способы согласно изобретению иллюстрируются нижеприведенными схемами.

Схема 1 иллюстрирует получение соединений формулы 1, в которых X означает простую связь (см. в конце текста).

5-аминопиридин-2-карбоксилаты формулы 1 подвергают взаимодействию с производными сульфоновой или карбоновой кислот формулы 2, у которых Z означает гидроксильную группу или отщепляющуюся группу, которая может быть отщеплена нуклеофильно, например F, Cl, Br, J или тозилат. Указанную реакцию проводят в среде апротонного органического растворителя или смеси растворителей. Подходящими, в частности, являются следующие растворители: дихлорметан, тетрахлорметан, бутилацетат, этилацетат, толуол, тетрагидрофуран, диметоксиэтан, 1,4-диоксан, ацетонитрил, N,N-диметилформамид, N,N-диметилацетамид, диметилсульфоксид, нитрометан и/или пиридин. Реакцию можно проводить в присутствии кислотосвязывающего средства, например аммиака, триэтиламина, трибутиламина, при температуре 0 - 180^oC, предпочтительно 0 - 80^oC. Для получения соединений, у которых Z означает гидркосильную группу, могут использоваться известные в химии пептидов методы конденсации.

Соединения формулы 1a могут быть также получены путем омыления соединений формулы 3 в пиридин-2-карблоновые кислоты, которые затем известными в химии пептидов методами подвергают взаимодействию с соответствующими аминами формулы 5 или путем непосредственного взаимодействия соединений формулы 3 с аминами формулы 5. При желании полученные соединения могут быть окислены до пиридин-N-оксидов формулы 1b.

В общем виде эти методы окисления описаны, например, в "E. Klinsberg, Pyridine and its Derivitives, Interscience Publishers, New York, 1961, Part 2, 93".

Окисление с использованием перекиси водорода описано, например, в "E. Ochiai, J. Org. Chem. 18, 534 (1953)".

Исходные соединения подробно описаны в заявках ФРГ P 3826471.4, 3828140.6, 3924093.2, 4001002.3, а также в патентах ФРГ A 3703959, 3703962 и 3703963.

Получение соединений формулы 1 описаны N. Finch и др. в J. Med. Chem. (1978), т. 21, стр. 1269 и Schneider и Harris, J. Org. Chem. (1984), т. 49, стр. 3683.

Вышеописанная последовательность реакций в соответствии со схемой 1 для получения соединений формулы 1a или 1b с сульфонамидной группой в 5-положении может быть также использована для получения соединений, содержащих такую сульфонамидную группу в 4-положении. При этом в качестве исходных используют соединения формулы 1, у которых X означает связь, Y = SO₂, R⁴ означает атом водорода, а R⁵ - оксиалкил, алкоксиалкил или его производное, получают из соответствующим образом замещенных производных сульфоновой кислоты формулы 2 и метиловых эфиров 4- (или 5) амино-пиридин-2-карбоновой кислоты формулы 1 и последующего аминолиза соединений формулы 3 (схема 1) с использованием соответствующих аминов.

Для получения соединений формулы 1, у которых X = -CO-, а Y = SO₂, i) производные пиридин-2-карбоновых кислот или соответствующие эфиры формулы 11 подвергают взаимодействию с аминами формулы 5 или ii) производные пиридин-5-карбоновых кислот формулы 12 подвергают взаимодействию с сульфонамидными производными формулы 9, или iii) производные амидов пиридин-5-карбоновых кислот формулы 13 подвергают взаимодействию с производными сульфоновых кислот формулы 2 (сравни схему 2), причем соединения формулы 12, соответственно 13, получаются из соединения формулы 7 известными способами.

Схема 2 иллюстрирует получение соединений формулы 1a или 1b, у которых X = -CO-, а Y = SO₂ (см. в конце текста).

Согласно CA (т. 68, 1968, 68840 h) из замещенных пиридин-2,5-дикарбоновых кислот формулы 7 в условиях реакции этерификации могут быть получены 5-карбоксиаты эфиров пиридин-2-карбоновых кислот. Подходящей, например, является реакция этерификации метанолом в присутствии серной кислоты. При этом продолжительность реакции выбирают таким образом, чтобы полная этерификация с образованием диэфира протекала лишь в незначительной степени, соответственно, чтобы являющиеся побочными продуктами диэфиры можно было отделить от основных продуктов.

Соединения формулы 11 получают из соединений формулы 8 и сульфонамидных производных формулы 9 (Y = SO₂). При этом может оказаться целесообразным активировать оба исходных реагента с помощью вспомогательных реагентов (Houben - Weyl: Methoden der Organischen Chemie, Band IX, Kapitel 19, стр. 636 - 637).

В качестве реагентов для активации карбоновых кислот можно использовать известные специалистам вещества, такие как тионилхлорид, оксалилхлорид, пивалоилхлорид или производные эфиров хлормуравьиной кислоты. Не всегда необходимо выделять эти активированные производные соединений формулы 8. В большинстве случаев целесообразно после получения их in situ или в виде сырого продукта подвергать взаимодействию с сульфонамидными производными формулы 9.

Целесообразно вначале подвергать соединения формулы 9 взаимодействию с неорганическим или органическим основанием, например гидроксидом, карбонатом, алкоксидом, гидридом или амидом натрия или калия, аммиаком, триэтиламином, трибутиламином, пиридином, при -20 - +150^o, предпочтительно 0 - 80^oC, и затем образующуюся реакционную смесь подвергать взаимодействию с соединением формулы 8 или его активированной формой. Реакцию следует проводить в среде инертного растворителя, например метиленхлорида, метанола, этанола, ацетона, этилового эфира уксусной кислоты, толуола, тетрагидрофурана, ацетонитрила, N, N-диметилформамида, N,N-диметилацетамида, нитрометана, диметилсульфоксида или их смесей. По другому варианту эфиры формулы 11 могут быть получены с помощью обычных используемых для конденсации реагентов (таких как смесь N,N-дициклогексилкарбодиимида и 4-N, -N-диметиламинопиридина).

Взаимодействию эфиров пиридин-2-карбоновых кислот формулы 11 с аминами формулы HNR⁴R⁵ приводит к образованию соединений формулы 1a' в соответствии с настоящим изобретением.

По другому варианту для получения соединений формулы 1a' соединения формулы II (R = низший алкил) омыляют в производные пиридин-2-карбоновой кислоты формулы II (R = H), которые затем известными в химии пептидов методами подвергают реакции сочетания с аминами HNR⁴R⁵ с образованием заявляемых соединений формулы 1a'.

Последующее получение пиридин-N-оксидо формулы 1b' осуществляется в соответствии с вышеприведенной схемой 1 (реакция с переводом соединения формулы 1a в соединение формулы 1b).

Вышеописанная последовательность реакций в соответствии со схемой 2, по которой осуществляется получение соединений формулы 1a' или 1b' с карбонилсульфонамидной группой в 5-положении, может также использоваться и для получения такого типа соединений, содержащих карбонилсульфонамидную группу в 4-положении. При этом в качестве исходного материала используют соединения общей формулы 7' Соединения формулы 1, у которых X = CO, Y = SO₂, R⁴ означает атом водорода, а R⁵ - оксиалкил, алкоксиалкил или его производное, получают путем взаимодействия соответствующим образом замещенных сульфонамидов формулы 9 и метилового эфира пиридин-2- или -4(соответственно 5)-карбоновых кислот и последующего аминолиза образующихся соединений формулы II (R = низший алкил) соответствующими аминами.

Для получения соединений формулы 1, у которых NR⁴R⁵ означает глицил, соединения формулы 3 и 11 (R = низший алкил) омыляют в производные пиридин-2-карбоновых кислот формулы 4 и 11 (R = H), которые затем подвергают реакции конденсации с соответствующими производными глицина. Свободные амиды глицила, у которых NR⁴R⁵ означает NHCH₂CO₂H, получают путем омыления амидов глициловых эфиров или каталитического гидрирования бензилового эфира глицила.

Для получения соединений общей формулы 1 (1a, 1b, 1a', 1b') по схемам 1 и 2 используются соединения, у которых R⁶ означает атом водорода. После этого предпочтительно проводят реакцию солеобразования с получением соединений, у которых R⁶ означает физиологически приемлемый катион. В качестве солеобразователей предпочтительно использовать N-алкиламины, (окси)алкиламины и (алкоксиалкил)амины, такие как, например, 2-этаноламин, 3-пропаноламин, 2-метоксиэтиламин, 2-этоксиэтиламин и ,,- трис-(оксиметил)метиламин (=трисбуфер, трометан) или основные аминокислоты, такие как, например, гистидин, аргинин и лизин.

Предлагаемые в соответствии с настоящим изобретением соединения формулы 1 обладают ценными фармакологическими свойствами и отличаются, в частности, антифиброзной активностью.

Полагают, что ингибиторы пролил-4-гидроксилазы пригодны как антифиброзные агенты.

Фермент пролил-4-гидроксилаза имеет альтернативное название - проколлаген-пролин, 2-оксоглютарат-4-диоксигеназа (Dorland's Ilustrated Medical Dictionary, 27 th Edition, W.B. Saunders Co, 1988). Пролил-4-гидркосилаза является ферментом класса оксидиоредуктаз, которые катализируют реакцию в биосинтезе коллагенов. Согласно Kaule and Gunzler, Analytical Biochemistry 184, 291 - 297 (1990) посттрансляционно синтезированная аминокислота гидроксипролин участвует в водородных связях, которые необходимы для структуры и функционирования коллагена при 37^oC. Способность соединений по изобретению ингибировать ферментную активность пролил-4-гидроксилазы может быть определена путем измерения количества сукцината, образовавшегося из исходного 2-оксоглутарата в присутствии фермента, кислорода, Fe⁺⁺, подходящего полипептидного субстрата и некоторых других химических агентов. Активность соединения по ингибированию пролил-4-гидроксилазы выражают в виде степени разбавления исходного концентрированного раствора, при котором достигается 50% ингибирование фермента. Таким образом, чем больше разбавление, тем сильнее способность соединения ингибировать фермент.

Для определения эффекта ингибирования пролил-4-гидроксилазы соединения согласно изобретению исследовали в экспериментах по перфузии печени. Ингибирующую активность измеряли в полученном перфузате.

Методика: кормленных самцов крысы Вистара с весом тела 200 - 300 г анестезировали пентобарбиталом (5 мг/100 г, внутрибрюшинно). После катетеризации воротной вены печень промывали 100 мл физиологического раствора с добавкой гепарина (5 МЕ/мл) при 37^oC в течение 3 минут, во время чего происходил отток через надрезанную каудальную полую вену. После этого орган вырезали и связывали с аппаратом для перфузии, и проводили перфузию в течение 2 часов с рециркулирующей средой (100 мл) со скоростью 30 мл/мин. Перфузионной средой является БКР (буфер Кребса-Рингера), содержащий бычьи эритроциты. Бычью кровь смешивали с цитратным раствором в отношении 1:1 сразу на бойне. Смесь центрифугировали 10 минут (6000 U/мин), и супернатант удаляли. Ту же процедуру повторяли один раз с физиологическим раствором и два раза с БКР. Конечная перфузионная среда содержала 33,3% осадка эритроцитов и 66,7% КРБ (Schimassek, H., (1963): Biochem. Z. 336, 460 - 467).

Составы использованных в данном испытании растворов следующие: Цитратный раствор: Моногидрат глюкозы - 22.6 г Тринатрийцитрат - 4.0 г Лимонная кислота - 5.5 г NaCl - 4.2 г Добавление 1.000 мл дистиллированной воды б) Буфер Кребса - Рингера (БКР) NaCl - 8.0 г KCl - 0.2 г NaHCO₃ H₂O - 1.0 г NaH₂PO₄ H₂O - 0.1 г CaCl₂ - 0.2 г MgCl₂ 6H₂O - 0.1 г Бычий альбумин - 16.0 г Добавление 898 мл дистиллированной воды и доведение pH до 7.4.

Аппарат для перфузии (Ryoo, H. and Tarver, H., (1968); P.S.E.B.M. 128, 760 - 772).

Центральным элементом аппарата являлся цилиндр с регулируемой температурой с вставляемым основанием в качестве опоры для органа. Выпускная труба удлинена, и нижний конец этой трубы присоединен к перистальтическому насосу. При возвращении перфузата к органу он проходит через теплообменник (стеклянная спираль), который поддерживает температуру перфузата 37^oC. Перфузат на два цилиндра барботировали смесью CO₂/O₂ (объемное отношение 5: 95) со скоростью 70 мл газа в минуту. Для предотвращения пенообразования к перфузату добавляли 14 мкл/мл, 0.1% Генапола (Genapol) PF-10. Пробы для анализа отбирали из перфузата в том месте, где перфузат поступал в печень в определенные моменты времени.

Обработка: Исследуемые соединения добавляли к перфузату печени в моменты времени 0 и 65 минут в концентрации 2 100 мкг/мл. Через 120 минут перфузии отбирали аликвоту перфузата.

Аналитические методики: Ингибирующую активность метаболитов, образованных в течение 2-часового периода перфузии в печени, измеряют в анализе с пролил-4-гидроксилазой in vitro. Фермент выделяют из 14-дневных эмбрионов цыплят (Tuderman, L., Kuutti-Savalainen, E. R. and Kivirkko, K.1. (1975) Eur, J. Biochem. 52, 9 - 16). Испытание на ферментную активность проводят согласно Kaule, G. and Gunzler, V. , (1990) Anal. Biochem. 184, 291 - 297. Кривые доза-ответ получены путем использования неразбавленного перфузата печени и перфузата с последовательными разбавлениями.

Результаты вышеуказанного испытания, полученные для различных соединений по данному изобретению, представлены в таблице в конце описания в виде степени разбавления перфузата, при которой происходит 50%-ное ингибирование фермента (пролил-4-гидролазы). Номера примеров в таблице соответствуют номерам примеров.

При проведении опытов соединения в соответствии с настоящим изобретением проявляли активность при концентрации 1-100 мг/кг.

Активность фиброгенеза может быть определена с помощью радиоиммунологического анализа пропептида с концевыми атомами азота коллагена типа III или сшитых доменов с концевыми атомами азота или углерода коллагена типа IV (7-коллагена, соответственно коллагена типа IV NC₁) в сыворотке.

С этой целью определяют концентрацию оксипролина, проколлагена III-петида, 7 -коллагена и коллагена -NC типа IV в печени a) необработанных (контрольных) крыс; b) крыс, которым вводили четыреххлористый углерод (CCl₄ - контроль); c) крыс, которым вначале вводили CCl₄, а затем соединение в соответствии с настоящим изобретением (эти методы испытаний описаны Rouiller C в Euperimental toxic injury of the liver в The liver, C.Rouiller, т. 2, 57 335-476, New York, Academic Press, 1964).

Соединения формулы 1 могут найти применение в качестве медикаментов в форме фармацевтических препаратов, содержащих их, при желании, в комбинации с фармацевтически приемлемыми носителями. Предлагаемые соединения могут найти применение в качестве лекарственных средств, например, в форме фармацевтических препаратов, содержащих эти соединения в смеси с подходящим для внутреннего, чрескожного или парентерального введения фармацевтическим органическим или неорганическим носителем, например водой, гуммиарабиком, желатином, молочным сахаром, крахмалами, стеаратом магния, тальком, растительными маслами, полиалкиленгликолями, вазелином и т.п.

Для этой цели они могут вводиться орально в дозах 0,1-25 мг/кг/день, предпочтительно 1-5 мг/кг/день, или парентерально в дозах 0,01-5, предпочтительно 0,01-2,5, наиболее предпочтительно 0,5-1,0 мг/кг/день. В тяжелых случаях указанная дозировка может быть увеличена. Во многих случаях, однако, достаточными оказываются и меньшие дозы. Приведенные данные ориентированы на взрослых пациентов с весом примерно 75 кг.

Соединения согласно изобретению используют при получении лекарственных средств, предназначенных для лечения и профилактики вышеназванных нарушений обмена веществ.

Предметом настоящего изобретения, кроме того, являются фармацевтические композиции, содержащие одно или более соединений формулы 1 и/или их физиологически приемлемых солей.

Лекарственные средства получаются обычными, известными специалисту способами. В качестве лекарственных средств фармакологически активные соединения в соответствии с настоящим изобретением (= активное вещество) применяются или сами по себе, или, что предпочтительнее, в комбинации с подходящими фармацевтическими вспомогательными добавками или носителями в форме таблеток, драже, капсул, свечей, эмульсий, суспензий или растворов. При этом концентрация активного вещества в таких формах составляет до примерно 95, предпочтительно 10-75%.

Подходящими вспомогательными добавками или носителями для той или иной лекарственной формы помимо растворителей являются, например, гелеобразователи, основа для свечей, вспомогательные добавки при изготовлении таблеток и другие носители активных веществ, а также антиоксиданты, диспергаторы, эмульгаторы, антивспениватели, вкусовые добавки, консерваторы, агенты растворения или красители.

Нижеследующие примеры иллюстрируют изобретение.

Пример 1 (2-оксиэтил)амид 5-[((4-метоксифенилсульфонил)амино)-карбонил] пиридин-2-карбоновой кислоты.

a) Хлорангидрид -метиловый эфир пиридин-2-карбоновой кислоты 5-карбоновой кислоты.

14,5 г (80 ммоль) метилового эфира пиридн-2-карбоновой кислоты 5-карбоновой кислоты в 200 мл безводного толуола смешивают с 6,48 мл тионилхлорида и 2 мл безводного N,N-диметилформамида. Смесь нагревают при перемешивании в течение 3 часов при 70^oC. После этого ее концентрируют в вакууме и растворяют остаток в 150 мл тетрагидрофурана.

b) Метиловый эфир 5-[((4-метоксифенилсульфонил)амино)-карбонил] пиридин-2-карбоновой кислоты.

К 16,45 г (88 ммоль) амида 4-метоксибензолсульфоновой кислоты в 200 мл тетрагидрофурана добавляют при 0^oC 19,75 г (176 ммоль) третбутилата калия. После перемешивания смеси в течение 3 часов при комнатной температуре к ней добавляют при 0-5^oC раствор, полученный в примере a). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов, после чего добавляют к ней 300 мл этилацетата, дважды проводят экстракцию водным раствором NaHCO₃, подкисляют водную фазу концентрированным водным раствором соляной кислоты, трижды проводят экстракцию дихлорметаном, экстракты высушивают, концентрируют и остаток перекристаллизовывают из метанола. В результате получают 9,9 г бесцветного кристаллического продукта. Темп. плавл. 197-199^oC.

c) 2,1 г (6 ммоль) полученного в вышеприведенном примере соединения растворяют в 10 мл этаноламина и перемешивают раствор в течение 5 часов при 50^oC. После этого к нему добавляют 40 мл воды, подкисляют при охлаждении льдом (5-10^oC) концентрированной HCl, отсасывают выпадающий в осадок твердый материал и промывают его несколько раз водой. В результате получают 1,96 г целевого соединения в виде бесцветных кристаллов. Темп. плавл. 221-223^oC.

Пример 2 Амид глицилметилового эфира 5-[((4-метоксифенилсульфонил)амино)- карбонил]-пиридин-2-карбоновой кислоты.

a) 5-[((4-метоксифенилсульфонил)амино)-карбонил] -пиридин-2-карбоновая кислота.

3,0 г (8,6 ммоль) соединения, полученного в примере 1b), растворяют в 100 мл метанола и смешивают приготовленный раствор при 0-5^oC с 17,2 мл (17,2 ммоль) 1 н NaOH. После перемешивания в течение 4 часов при комнатной температуре смесь концентрируют в вакууме, остаток растворяют в воде, добавляют к раствору при 0-5^oC 17,2 мл (17,2 ммоль) 1 н HCl, отсасывают выпадающий осадок, промывают его несколько раз водой, получая в результате 2,58 г целевого соединения. Темп. плавл. 234-236^oC.

b) К 1,81 г (5,4 ммоль) полученного соединения в 25 мл безводного тетрагидрофурана добавляют при 0^oC 1,8 г (5,94 ммоль) триэтиламина, перемешивают смесь при этой температуре в течение 20 минут, добавляют к ней по каплям 0,71 г (5,94 ммоль) пивалоилхлорида и перемешивают в течение 3 часов при 0^oC. После этого к смеси добавляют 0,75 г (5,98 ммоль) гидрохлорида глицинметилового эфира, перемешивают ее в течение 3 часов при 0^oC, нагревают до 20^oC и оставляют стоять на ночь. К реакционному раствору добавляют затем 2 н HCl, трижды проводят экстракцию дихлорметаном, экстракты высушивают, концентрируют, остаток подвергают хроматографии на силикагеле с использованием в качестве подвижной фазы смесь этилацетата и метанола в соотношении 4:1, соответствующие фракции концентрируют и перекристаллизовывают остаток из диизопропилового эфира. В результате получают 1,44 г целевого соединения. Темп. плавл. 150-152^oC.

Пример 3 (2-оксиэтил)амид 5-[((фенилсульфонил)амино)карбонил] -пиридин-2- карбоновой кислоты.

a) Метиловый эфир 5-[((фенилсульфонил)амино)карбонил]-пиридин-2- карбоновой кислоты.

Указанное соединение получают способом, аналогичным примеру 1b), используя в качестве исходных материалов 3,46 г (22 ммоль) амида бензолсульфоновой кислоты, 2,46 г (22 ммоль) третбутилата калия и 4,0 г (20 ммоль) хлорангидрида метилового эфира пиридин-2-карбоновой кислоты 5-карбоновой кислоты. После перекристаллизации из метанола получают 1,6 г целевого соединения. Темп. плавл. 197-198^oC.

b) Целевое соединение получают таким же образом, как это описано в пример 1c), исходя из метилового эфира 5-[((фенилсульфонил)амино)карбонил]-пиридин-2-карбоновой кислоты и этаноламина, в виде бесцветного кристаллического вещества. Темп. плавл. 249-250^oC.

Пример 4 (2-оксиэтил(амид 5-[(4-фторфенилсульфонил)амино] -пиридин-2-карбоновой кислоты.

a) Метиловый эфир 5-[(4-фторфенилсульфонил)амино]-пиридин-2-карбоновой кислоты.

3,8 г (25 ммоль) метилового эфира 5-амино-пиридин-2-карбоновой кислоты растворяют в 75 мл безводного пиридина и полученный раствор порциями смешивают с 5,8 г (30 ммоль) хлорангидрида 4-фторбензолсульфокислоты. При этом температура реакционного раствора повышается до 35^oC. Через час реакционный раствор упаривают в вакууме, остаток растирают с водой, промывают водой и высушивают. В результате получают 7,3 г продукта. Темп. плавл. 183 - 185^oC.

b) 3,1 г (100 ммоль) полученного соединения в 10 мл аминоэтанола нагревают в течение часа при температуре бани 100^oC. Затем реакционную смесь разбавляют 100 мл воды, подкисляют при охлаждении разбавленным вдвое концентрированным водным раствором соляной кислоты, выпадающий осадок отсасывают, промывают и высушивают. Для дополнительной очистки полученный сырой продукт растворяют в 25 мл холодного метанола и смешивают раствор с водой до начала помутнения. В результате получают 2,9 г целевого соединения в виде бесцветного кристаллического материала. Темп. плавл. 144 - 146^oC.

Пример 5 (2-метоксиэтил)амид 5-[(4-фторфенилсульфонил)амино]-пиридин-2-карбоновой кислоты.

0,5 г (1,61 ммоль) метилового эфира 5-[(4-фторфанилсульфонил)амино]-пиридин-2-карбоновой кислоты (соединение, полученное в примере 4a) перемешивают в течение 3 часов при 70^oC в 5 мл 2-метоксиэтиламина. После этого реакционную смесь упаривают, остаток растворяют в воде, подкисляют раствор концентрированной HCl, отсасывают выпадающий осадок, промывают его водой. В результате получают 0,53 г целевого соединения в виде бесцветных кристаллов. Темп. плавл. 154^oC.

Пример 6 (Глицилметиловый эфир)амид 5-[(4-фторфенилсульфонил)амино]-пиридин-2-карбоновой кислоты.

a) 5-[(4-фторфенилсульфонил)амино]-пиридин-2-карбоновая кислота.

1,6 г (5,16 ммоль) соединения, полученного в примере 4a), добавляют при перемешивании при 20^oC к 100 мл 1,5 н метанольного раствора NaOH и продолжают перемешивание в течение еще часа. После этого реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток растворяют в 30 мл воды и подкисляют раствор концентрированным водным раствором HCl до pH 1. В результате получают 1,5 г продукта. Темп. плавл. 240^oC (с разложением).

b) К 1,5 г (5,07 ммоль) полученного соединения в 100 мл безводного тетрагидрофурана добавляют при 20^oC, при перемешивании, 1,5 мл (10,7 ммоль) триэтиламина. Через 30 минут к смеси добавляют при 0^oC 0,53 мл (5,4 ммоль) этилового эфира хлормуравьиной кислоты, перемешивают смесь в течение 30 минут при 0^oC, добавляют к ней 0,65 г (5 ммоль) гидрохлорида глицинметилового эфира, перемешивают в течение часа при 0^oC, нагревают до 20^oC, упаривают в вакууме, смешивают остаток с 50 мл насыщенного водного раствора NaHCO₃, трижды проводят экстракцию дихлорметаном, экстракты высушивают, упаривают и остаток подвергают хроматографии на силикагеле, используя в качестве подвижной фазы этилацетат. Целевое соединение получают, упаривая соответствующие фракции, после перекристаллизации остатка из диэтилового эфира. Выход 0,77 г. Темп. плавл. 146 - 148^oC.

Пример 7 5-[(2,5-бис(1,1,1-трифторэтокси)фенилсульфонил)амино] -пиридин-(2-оксиэтил)амид.

a) Метиловый эфир 5-[(2,5-бис(1,1,1-трифторэтокси)фенилсульфонил)амино] -пиридин-2-карбоновой кислоты получают таким же образом, как и с примере 4a), исходя из 0,5 г (3,3 ммоль) метилового эфира 5-аминопиридин-2-карбоновой кислоты и 1,3 г (3,5 ммоль) хлорангидрида 2,5-бис(1,1,1-трифторэтокси)бензолсульфоновой кислоты. 1,3 кристаллического продукта получают после обработки остатка после упаривания водой. Темп. плавл. 158 - 160^oC.

Целевое соединение получают по способу, аналогичному примеру 4b), исходя из 0,4 г (0,82 ммоль) вышеуказанного соединения и 5 мл аминоэтанола. После хроматографии на силикагеле остаток после упаривания соответствующих фракций перекристаллизовывают из диэтилового эфира. Выход 0,38 г. Темп. плавл. 165 - 167^oC.

Пример 8 (2-оксиэтил)амид 5-[((4-н-бутоксифенилсульфонил)амино)карбонил] -пиридин-2-карбоновой кислоты.

a) Амид 4-н-бутоксибензолсульфоновой кислоты.

К 10 г хлорангидрида 4-н-бутоксибензолсульфоновой кислоты добавляют по каплям при охлаждении льдом 100 мл метанольного раствора