4,10-диацетат-2-бензоат 5, 20-эпокси-1,2, 4,7; , 10, 13- гексагидрокситакс-11-ен-9-она со сложной эфирной группой в положении 13, образованной (2r, 2s)-n-гексаноил-3- фенилизосерином, способ его получения и фармацевтическая композиция

4,10-диацетат-2-бензоат 5, 20-эпокси-1,2, 4,7; , 10, 13- гексагидрокситакс-11-ен-9-она со сложной эфирной группой в положении 13, образованной (2r, 2s)-n-гексаноил-3- фенилизосерином, способ его получения и фармацевтическая композиция

Реферат

 

Изобретение относится к новому таксану, а именно 4,10-диацетат-2-бензоат 5 , 20-эпокси-1,2 , 4,7 , 10 , 13 -гексагидрокситакс-11-ен-9-она со сложной эфирной группой в положении 13, образованный (2R, 2S)-N-гексаноил-3-фенилизосерином, имеющему структурную формулу I, который выделяют из коры корней растений рода Taxus экстракцией. Соединение I обладает большей противоопухолевой активностью, чем таксол. Кроме того, в отличие от таксола, соединение I активно против опухолевых клеток, устойчивых к адриамицину, и в качестве лекарственного средства против лейкоза. 3 с. и 4 з.п.ф-лы, 1 табл.

Настоящее изобретение относится к новому дитерпену с таксановым ядром, обладающему противоопухолевой активностью. Согласно данным спектрофотометричекого анализа, новое соединений имеет структурную формулу I, т.е. представляет собой 4,10-диацетат-2-бензоат 5, 20-этокси-1,2, 4,7, 10, 13-гексагидрокситакс-11-ен-9-она со сложноэфирной группой в положении 13, образованной (2R, 3S)-N-гексаноил-3-фенилизоприном.

Соединение формулы 1 было выделено из коры корней рода Taxus. Выход целевого соединения составлял от 0,02 до 0,06%.

Для выделения соединений 1 предпочтительнее всего использовать растительный материал, состоящий из корней культурного сорта тиса (например, из коры корней Taxus культурный сорт (CV) Hicksii). Этот сорт широко используется в декоративных целях для украшения садов, что позволяет избежать смешанного сбора корней тиса случайного, который характеризуется чрезвычайно медленным ростом и, в результате этого, быстрой гибелью.

Соединение 1 экстрагировали хлорированными растворителями, например дихлорметаном (чистым или в смеси со спиртами (метиловым или этиловым). Экстракция растительного материала также может быть проведена кетонами (например, ацетоном - чистым или в смеси с водой).

Экстракт коры корней, наряду с соединением (1), содержит ряд других хорошо известных таксанов, как, например, таксол (2), цефаломанин (3) и их 10-диацетиопроизводные (соединения (4) и (5), соответственно). Для выделения соединения (1) из смеси указанных выше таксанов необходимо провести очистку при помощи колоночной хроматографии.

2,R'=C₆H₅;R''=COCH₃.

3,R'= -C(CH₃)=CHCH₃;R''=H.

4,R'=C₆H₅;R''=H, 5,R'= -C(CH₃)=CHCH₃;R''=H.

Для этого предпочтительнее всего в качестве стационарной фазы использовать силикагель. В качестве элюентов могут быть использованы смеси растворителей, состоящие из алифатического углеводорода (например, Н-гексана, циклогексана или н-гептана) или из ароматического углеводорода (например, толуола) с высокополярным растворителем, таким как, например, этилацетат или ацетон.

Соединение 1, содержащееся во фракциях, полученных после хроматографирования, в дальнейшем выделяют кристаллизацией из ацетона или диизопропилового эфира или их смеси с н-гексаном или н-гептаном.

Новое соединение 1 проявляет существенное структурное сродство с противоопухолевым средством таксолом (2), от которого оно отличается характером боковой цепи в положении 13 таксонового ядра. Поэтому соединение 1, помимо экстракции из растительного материала, может быть получено полусинтетическим путем, согласно методу получения таксола (2) (I.Ojima et. al., Tetrahedron 48, 6985.1992).

Вследствие структурного сродства соединений (1) и (2) можно было ожидать, что соединение 1 будет проявлять такую же противоопухолевую активность, что и (2).

Действительно, in vitro активность соединения 1 по отношению к различным опухолевым линиям, например, к раковым клеткам молочной железы, легкого, толстой кишки и яичника, сравнима с активностью таксола (как показано с таблице в конце описания). Однако новый таксан (1) неожиданно проявил более высокую активность, чем таксол, по отношению к адриамицин-устойчивым (ADP) опухолевым клеткам и клеткам лейкоза.

При исследовании in vivo, соединение (1), введенное в виде водного раствора, содержащего Cremophor^(R), оказалось более эффективным против опухолей, имплантированных голой мыши. Соответственно, предполагается, что таксан (1) может быть использован в качестве противоопухолевого препарата для лечения жидких опухолей и опухолей, устойчивых к лекарственным средствам, таких как адриамицин-устойчивые опухоли.

Согласно активным дозам, полученным для животных, дозировка соединения 1 для человека составляет от 150 до 250 мг/м² с циклами, повторяемыми с интервалом две три недели до исчезновения метастаз.

Следующий пример иллюстрирует получение соединения, представленного в настоящем изобретении.

Пример1.

4,10-диацетат-2-бензоата 5, 20-эпокси-1,2, 4,7, 10 13-гексагидрокситакс-11-ен-9-она со сложной эфирной группой в положении 13, образованной (2R,3S)-N-гексаноил-3-фенилизосерином (формула I).

50 кг измельченной коры Taxus media cv Hicksii экстрагировали при комнатной температуре 130 л смеси метиленхлорида с метанолом в соотношении 961. Затем последовательно три раза проводили экстракцию 80 л той же смесью растворителей. Каждая экстракиця проводилась в течение 24 часов.

Объединенные экстракты концентрировали под вакуумом и осадок (4300 г) обрабатывали 23 литрами смеси ацетона с толуолом, взятых в соотношении 9:1. После отделения нерастворимых частиц фильтрованием, раствор очищали при помощи колоночной хроматографии. Для этого исследуемый раствор пропускали через колонку, содержащую 27 кг силикагеля. Для элюирования также использовали смесь ацетона с толуолом (9:1). Фракции, содержащие соединение (1), объединяли и выпаривали под вакуумом до получения сухого остатка. Остаток кристаллизовали из 80 мл смеси н-гексан-ацетон в соотношении 1:1. Получали 17,5 г соединения (1), т.пл. 209^o []_D-42, (c=0.3, MeOH), M+a m/z 847.

Были получены следующие данные спектрофотометрического анализа соединения 1: IR (nujol): 3500-3300, 1 710, 1640 cm^-1 UV (MeOH): 222 (13900), 2,2 (16250), 274 (1130), 282 (960) nm CIMS (NH₃), m/z 865 (40%, M+NH₄), 848 (10, MH), 586 (30, M+NH₄-279) ¹H-NMP (300 NHz, CDCl₃, ppm, J in Hz) 5,66 (d, J=7,0; H-2), 3,78 (d, J= 7,0; H-3), 4,93 (dd, J₁=9,4, J₂=2,0; H-5), 2,54 (ddd, J₁=15,5, J₂=9,4, J₃= 6,6; H-6), 1,84 (ddd, J₁=15,5, J₂=10,9; J₃=2,0; H-6), 4,39 (ddd, J₁=10,9, J₂= 6,6, J₃= 4,1; H-7), 6,28 (s, H-10), 6,23 (t, J=6,23; H-13), 2,24 - 232 (2H, m; H-14), 1,26 (s, H-16), 1,14 (s, H-17), 1,81 (d, J=1,2; H-18), 1,67 (s, H-19), 4,17 (d, J=8,6; H-20), 4,28 (d, J=8,6; H-20b), 4,65 (dd, J₁= 4,9, J₂=2,5; H-2'), 5,56 (dd, J₁=8,9, J₂=2,5; H-3'), 2,18 (t, J=7,3; H-2''), 1,56 (m; H-3''), 1,28 - 1,20 (m; H-4'' e H-5''), 0,83 (t, J=6,7; H-6''), 8,10 (d, J= 7,8; PhCO H-2 e 6), 7,50 (t, J=7,8; PhCO H-3 e 5), 7,61 (t, J= 7,8; PhCO H-4), 7,38 (m; 3'-Ph H-2,3,4,5,6), 2,34 (s, COCH₃), 2,24 (s, COCH₃), 6,25 (d, J=8,9; NH), 2,49 (d, J=4,1; 7-OH), 1,84 (s, 1-OH), 3,55 (d, J=4,9; 2'-OH).

¹³C-NMR (75,43 Hz, CDCl₃): 78,99 (C-1), 74,93 (C-2), 45,57 (C-3), 81,07 (C-4), 84,37 (C-5), 35,59 (C-6), 72,15 (C-7), 58,56 (C-8), 203,63 (C-9), 75,55 (C-10), 138,06 (C-11), 142,05 (C-12), 72,29 (C-13), 35,59 (C-14), 43,18 (C-15), 26,79 (C-16), 21,86 (C-17), 14,81 (C-18), 9,54 (C-19), 76, 46 (С-20), 72,78 (C-1'), 73,16 (C-2'), 54,53 (C-3'), 172,90 (C-1''), 36,55 (C-2''), 25,34 (C-3''), 31,29 (C-4'') 22,28 (C-5''), 13,83 (C-6''), 129,09 (PhCO C-1), 130,19 (PhCO C-2 e C-6), 128,68 (PhCO C-3 e C-5), 133,68 (PhCO C-4), 133,11 (Ph C-1), 126,94 (Ph C-2 e C-6), 128,93 (Ph C-3 e C-5), 128,23 (Ph C-4), 22,58 (COCH₃), 20,84 (COCH₃), 171,23 (COCH₃), 170,23 (COCH₃), 166,95 (PhCO).

C₄₆H₅₇NO₁₄: определено,%: C=65,11; H=6,86; N=1,60; рассчитано, %: C=65,15; H=6,78; N=1,65.

Пример 2 препаративной формы композиции Раствор для перорального введения Соединение (1) - 30 мг полисорбат 80 - 0,5 мг Безводная лимонная кислота - 0,005 мл Дегидрированный спирт по потребности - До 1 мл4

Формула изобретения

1. 4, 10-Диацетат-2-бензоат 5, 20-эпокси-1,2, 4,7, 10, 13-гексагидрокситакс-11-ен-9-она со сложной эфирной группой в положении 13, образованной (2R, 2S)-N-гексаноил-3-финилизосерином формулы I 2. Способ получения соединения I, включающий экстракцию растительного материала культурного сорта тиса хлорированными углеводородами или их смесями с низкомолекулярными спиртами, хроматографирование полученного выпариванием под вакуумом высушенного экстракта с применением смесей алифатических или ароматических углеводородов с высокополимерными растворителями в качестве элюентов и очистку выделенного из полученных фракций соединения I кристаллизацией.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что растительный материал состоит из коры корня Taxus media cv Hicksii.

4. Способ по пп.2 - 4, отличающийся тем, что экстракцию проводят смесью метиленхлорида с метанолом.

5. Способ по пп. 2 - 4, отличающийся тем, что для хроматографического разделения применяют силикагель в качестве стационарной фазы и смеси толуола с ацетоном в качестве элюента.

6. Способ по пп.2 - 5, отличающийся тем, что для кристаллизации применяют ацетон, диизопропиловый эфир или их смеси с н-гексаном или н-гептаном.

7. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента она содержит соединение формулы I по п.1.

РИСУНКИ

Рисунок 1