Производные циклических пептидов или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, фармацевтическая композиция

Производные циклических пептидов или их фармацевтически приемлемые соли, способ получения, фармацевтическая композиция

Реферат

 

Описываются новые соединения формулы I, где значения радикалов обозначены в п. 1 формулы, фармацевтически приемлемые соли, проявляющие противогрибковую и противопаразитарную активность. Описывается также способ получения вышеуказанных соединений и фармацевтическая композиция на основе соединений формулы I, обладающая противокандидозной и противопневмоцистной активностью. 3 c. и 14 з.п. ф-лы, 29 табл.

Изобретение относится к циклическим пептидным противогрибковым средствам. В особенности оно относится к ацильным производным циклических пептидных противогрибковых средств класса эхинокандина, к способу лечения грибковых и паразитарных инфекций и к препаратам, используемым в этом способе.

Соединения, предлагаемые изобретением, являются полусинтетическими противогрибковыми средствами, так как они являются производными циклических пепидных противогрибковых средств, получаемых культивированием различных микроорганизмов. Известно большое количество циклических пептидных противогрибковых средств. Среди них эхинокандин B (A30912A), акулеации, мулудокандин, спориофунгин L-671329, FP 901379 и S 31794/F1. Все такие противогрибковые средства структурно характеризуются циклическим гексапептидным ядром. Аминогруппа одной из аминокислот цикла, несущая ацил жирной кислоты, образует боковую цепь вне ядра. Например, эхинокандин B содержит линолеоил в боковой цепи, тогда как акулеацинпальмитоил. Эти жирнокислотные боковые цепи циклических гексапептидов можно удалить ферментативным деацилированием с получением свободного ядра /см. формулу I в описании: где R₂ - водород/. Новое ацилирование аминогруппы ядра дает полусинтетические противогрибковые соединения. Например, ядро эхинокандина B дает большое число противогрибковых средств при реацилировании неприродными радикалами боковых групп /см. Дебоно, патент США N 4293489, C 07 C 103/52, 1981/. Среди таких противогрибковых соединений предложен силофунгин, представленный формулой I, где R - метил, R₁ - водород и R₂ - n (н-октилокси)бензоил.

Ферментативное деацилирование циклических гексапептидов осуществляют деацилазой, производимой микроорганизмом Actino planes utahensis и близкими микроорганизмами как описано Эботтом в патенте США N 4293482, C 07 C 103/52, 1981.

В настоящем изобретении предложены ацилированные циклические гексапептиды с уникальными боковыми ацильными группами, которые придают повышенную противогрибковую и антипаразитарную активность, например, против патогенных штаммов Candida albicans. Предложен также способ удаления аминальной и бензильной гидроксигрупп для получения дидезоксисоединения формулы I, где R - водород.

Резюме изобретения.

Предложены соединения формулы I R₁ - метил RII и RIII независимо метил или водород; R и RV - независимо, гидроксигруппа или водород R₁ - водород, R₇ - гидрокси-, водород или фосфонооксигруппа, и 1) R₂ - замещенный бензоил формулы: где A) R₃ - полиоксаалкил формулы -O-(CH₂)_m-/O-(CH₂)_n/_p -O-C₁-C₁₂-алкил где m и n = 2 - 4, p = 0 - 1, или B) R₃ - ненасыщенная углеводородная группа формулы: -Y-C₁-C₁₂-алкил, где Y- группа или -CH=CH-, или C) R₃ - группа формулы -O-(CH₂)_mG, где m определено выше и G - (C₇-C₁₀)-бициклоалкил или C₇-C₁₄-трициклоалкил, или II) R₂ - ацил формулы в которой Z - группа -O-, -CH=CH-, -CH₂-CH₂-, CH₂- или "углерод-углеродная связь".

A) R₄- водород, (C₂-C₁₂)-алкинил, замещенный (C₂-C₁₂)-алкинил, (C₁-C₁₂)-алкокси или (C₃-C₁₂)-циклоалкоксигруппа, фенил, или B) R₄- фенил, замещенный аминогруппой, (C₁-C₁₂)-алкилтиогруппой, галогеном, (C₁-C₁₂)-алкилом, (C₂-C₁₂)-алкенилом, (C₂-C₁₂)-алкинилом, (C₁-C₁₂)-замещенным алкилом, (C₂-C₁₂)-замещенным алкенилом, (C₂-C₁₂)-замещенным алкинилом, (C₁-C₁₂)-алкоксигруппой, трифтомерилом, фенилом, замещенным фенилом или полиоксаалкилом формулы: -O-(CH₂)_m/O-(CH₂)_n/_p-O- (C₁-C₁₂)-алкил, где n, m, p определены выше, или C) R₄ - фенил, замещенный (C₁-C₆)-алкоксигруппой, причем последняя может быть замещена фтором, бромом, хлором или иодом или D) R₄ - (C₁-C₁₂)-алкоксигруппа, замещенная (C₃-C₁₂)-циклоалкилом (C₂-C₁₂)-алкилом или фенилом, который, в свою очередь, замещен полиоксаалкилом, который определен выше, или E) R₄ - группа формулы -O-(CH₂)_p'-W-R₅, где p' = 2-4, W - пирролидино, пиперидино-, или пиперазиногруппа и R₅ - водород, (C₁-C₁₂)-алкил, (C₃-C₁₂)-циклоалкил, бензил или (C₃-C₁₂)-циклоалкилметил или F) R₄ - группа формулы: -Y-R₆, где R₆ - (C₁-C₁₂)алкил, замещенный (C₁-C₁₂)алкил, (C₇-C₁₀)бициклоалкил; (C₇-C₁₄)трициклоалкил, фенил, незамещенный или замещенный аминогруппой, (C₁-C₁₂)-алкокси, трифторметилом или группа -O-(CH₂)_p'-W-R₅, причем p' = 2-4, W - пирролидино-, пиперидиногруппа, R₅ - водород, (C₁-C₁₂)-алкил, (C₃-C₁₂)циклоалкил, бензил, (C₃-C₁₂)циклоалкилметил, или (C₁-C₆)алкоксигруппа, замещенная бромом, фтором, иодом или хлором; значения Y определены выше; III) R₂ - группа формулы или или IV) R₂ - нафтоил, замещенный группой R₄; где R₄ - водород, фенил, (C₁-C₁₂)алкоксигруппа или их фармацевтически приемлемые соли, при условии, что если R^I - метил, R^V - метил, R^III - метил, R и R^V - гидроксигруппа, R₁ - водород, R₇ - гидрокси или фосфонооксигруппа, то R₂ - не является группой формулы в которой R₃ - группа -O-(CH₂)_m-/O-(CH₂)_n/_p-O- (C₁-C₁₂)-алкил, где p = 0, ни группой формулы в которой Z углерод-углеродная связь или -O-; R₄ - (C₁-C₁₂)-алкоксигруппа; ни нафтоилом, замещенным R₄, где R₄ - водород, фенил или (C₁-C₁₂)-алкоксигруппа.

Предложены также препараты и способы ингибирования паразитарной и грибковой активности, использующие соединения по изобретению, и способ получения дидезоксиформы соединений.

Термин "C₁-C₁₂-алкил" обозначает нормальную или разветвленную алкильную группу, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, пентил, трет-бутил, гексил, гептил, октил, нонил, децил, ундецил, и додецил, и им подобные.

Термин "C₂-C₁₂-алкенил" обозначает винил, 1-пропен-2-ил, 1-бутен-4-ил, 1-пентен-5-ил, 1-бутен-ил и им подобные.

Термин "C₂-C₁₂-алкинил" обозначает этинил, пропинил, петнинил, бутинил и им подобные.

Термин "C₁-C₁₂-алкилтиогруппа" обозначает метилтио-, этилтио или трет-бутилтиогруппа и им подобные.

Термин "C₁-C₁₂-алкоксигруппа" обозначает нормальный или разветвленный оксиалкил, например, метокси-, этокси-, пропокси-, бутокси-, гептилокси-, октилокси-, или додецилоксигруппа и им подобные.

Термин "C₃-C₁₂-циклоалкоксигруппа" обозначает цилкопропоркси- или циклобутоксигруппа и им подобные.

Термин "C₃-C₁₂-циклоалкенил" обозначает цилкопропенил, циклобутенил, циклопентенил и им подобные.

Термин "C₁-C₁₂-алкил" замещенный C₂-C₁₂-алкенил", замещенный C₂-C₁₂-алкинил" обозначает алкил, алкенил или алкинил, замещенные одной или двумя группами, такими как галоген, гидрокси-, защищенная гидрокси-, амино-, защищенная амино, C₁-C₇-ацилокси-, нитро-, карбокси-, защищенная карбокси-, карбамоилокси-, циано-, метилсульфониламино- или C₁-C₁₂-алкоксигруппа, карбамоил, фенил, замещенный фенил.

Термин "замещенный фенил" обозначает фенил, замещенный 1-3 группами, такими как галоген, гидрокси-, замещенная гидрокси-, циано-, нитро-, C₁-C₁₂-алкокси-, карбокси, замещенная карбокси-, амино- или метилсульфониламиногруппа, C₁-C₁₂-алкил-, карбоксиметил, гидроксиметил, аминометил или трифторметил.

Термин "C₃-C₁₂-циклоалкил" обозначает циклопропил, циклобутил-, циклопентил, циклогексил и циклогептил.

Термин "C₁-C₄-алкиламиногруппа" обозначает метиламино-, этиламино-, или н-бутиламиногруппа и им подобные.

Термин "ди C₁-C₄-алкиламиногруппа" обозначает диметиламино-, диэтиламино-, ди-н-пропиламино-, ди-н-бутиламино-, метилэтиламино- или метил-н-бутиламиногруппа и другие третичные аминогруппы.

Термин "C₁-C₁₂-алканоиламиногруппа" обозначает ациламиногруппу, производную карбоновой C₁-C₁₂ кислоты, например формамид-, ацетиламино-, пропиониламино- или бутириламиногруппа и им подобные.

Термин "C₃-C₁₂-циклоалкиламиногруппа" обозначает C₃-C₇-циклоалкил, описанный выше и замещенный метилом.

Термин "C₇-C₁₀-бициклоалкил" и C₇-C₁₄-трициклоалкил" обозначает бицикло/2,2,1/гепт/2-ил, бицикло/2,2,1/гепт-4-ен-2-ил, бицикло/3,3,1/ион-3-ил, бицикло/3,3,1/нон-2-ил, бицикло/3,2,1/окт-2-ил, бицикло/2,2,2/окт-2-ил, бицикло/2,2,2/окт-5-ен-2-ил, адамантил или им подобные.

Термин "дидезокси" обозначает соединения формулы, где R - водород.

Термин "ингибирование" в связи с методами ингибирования паразитарной и грибковой активности имеет значение обычного определения, то есть останавливать, замедлять или профилактически препятствовать или предотвращать.

Термин "активность" в связи с паразитарной и грибковой активностью включает ее рост и сопутствующие характеристики и следует из существования паразита или грибка. Термин "контактирование" в связи с методами ингибирования паразитарной и грибковой активности при контактировании с соединениями изобретения имеет значение обычного определения. Однако термин не подразумевает каких-либо других ограничений, например накладываемых механизмом ингибирования, и методы заключают дух изобретения, который заключается в ингибировании паразитарной и грибковой активности при действии соединений или, другими словами, соединения, используемые в методах, являются причиной ингибирования.

Примерами ацильных групп R₂ в формуле I являются бензоил, замещенный полиоксаалкилом, например 2-метоксиэтокси (p = 0, m = 1) 2-этоксиэтокси-, 2-(2-токсиэтокси)этокси- (m = 2, p = 1, n = 2), 3-(2-этоксиэтокси)пропокси- или 3-(2-метоксиэтокси)бутоксигруппой и подобные им.

Примеры групп R₃, если R₂ - бензоил, замещенный ненасыщенной группой Y - C₁-C₁₂-алкил, включают ацетиленовые группы -C C- (C₁-C₁₂-алкил и -CH₂= CH-C₁-C₁₂-алкил в цис- или трансформе, например, пропенил, бутенил, гексенил, деценил и им подобные, пропинил, бутинил, гексинил, ундецинил и подобные аликины.

Примерами ацильных групп, если R₂-группа формулы являются дифениловые эфиры (Z - группа -O-), дифенилацетилены стильбены (Z - группа -CH=CH-) и бифенилы (Z - углерод-углеродная связь). Среди примеров таких бифенильных групп, где Z - углерод-углеродная связь, например, связь фенил-фенил, есть 4-(4-бутоксифенил)бензоил, 4-(4-циклобутилметоксифенил)бензоил, 4-(4-циклобутилметоксифенил)бензоил, 4-(4-циклогексилэтоксифенил)бензоил, 4-(4-н-гексилоксифенил)бензоил, 4-фенилбензоил: 4-/11-аминоундецикло)фенил/бензоил, 4-/4-11-формамидоундециклокси)фенил/бензоил, 4-(4-изопентилоксифенил)бензоил, и им подобные. Примерами дифенилэфирных ацильных групп R₂, если Z -O-, являются 4-(4-бутоксифенокси)бензоил, 4-(4-гексилоксифенокси)бензоил, 4-(4-этоксифенокси)бензоил, 4-(4-бензилоксифенокси)бензоил, 4-/4-(3-хлорбутокси)фенокси/бензоил, 4-(4-додецилоксифенокси)бензоил, 4-/4-(3-диметиламинопропокси)фенокси/бензоил и им подобные. Примерами дифенилацетиленовых и стильбеновых ацильных групп, если Z - тройная или двойная углерод-углеродная связь, являются 4-стирилбензоил, 4-(4-метоксистирил)бензоил, 4-(4-бутоксистирил)бензоил, 4-фенилэтинилбензоил, 4-(4-этоксифенилэтинил)бензол, 4-(4-циклогексилоксифенилэтинил)бензоил и им подобные. Примерами ацильных групп R₂, если Z - связь и R₄- группа -O-(CH₂)_pW-R₅, являются 4-[4(2-N-циклогексилпиперидин-4-ил-этокси/фенилбензоил, 4-[4-(4-бензилперидино)этокси/фенилбензоил, 4-4-(2-(4-циклогексилперидино)этокси/фенил] бензоил и им подобные. Примерами ацильных групп, где R₄- группа y-R₆, являются 4-/4-(фенил-этинил)фенокси/бензоил, 4-(4-гексинилфенил)бензоил, 4-(4-стирилфенокси)бензоил, 4-(4-(4-бензилфенилэтинил)фенил/бензоил, 4-[4-/4-(4-метилпиперидиноэтокси)фенилэтинил/фенил] бензоил и подобные ацилы. Ацильные группы, где R₄-группа -O-(CH₂)_p'WR₅ образуют соли основных аминогрупп пиперидина и пиперазина с органическими и неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная и фосфорная кислота, сульфокислоты, уксусная, хлоруксусная, трифтоуксусная, бензойная, изофталевая, салициловая, лимонная, яблочная, янтарная, малоновая и другие кислоты.

Таблицы (1 - 25) содержат дополнительные примеры циклических пептидов формулы I. Таблица 1 содержит примеры циклических пептидов с ацильной группой R₂ формулы Таблица 2 иллюстрируют соединения формула I, где R₂ - группа формулы Таблица 3 иллюстрирует соединения формула I, где R₃ имеет значения, указанные в таблице 2 и R₄ представляет группы формулы (табл.3).

Ацилциклогексапептиды формулы I обладают антипаразитарной активностью, например, они особенно активны против инфекций грибками и Candida Parapsi Josis. Они также обладают значительной активностью против Aspergillus Junu-gatus.

Они активны как in vitro, так и in vivo и соответственно полезны в борьбе с системными грибковыми инфекциями.

Соединения изобретения также ингибируют рост некоторых организмов, первоначально ответственных за условно-патогенные инфекции у индивидуумов с подавленным иммунитетом. Например, соединения изобретения ингибируют рост Pneumocystics carinii причинного организма пневмоцистной пневмонии у больных СПИД.

Противогрибковую активность соединений изобретения определяют in vitro стандартными методами разбавления на агаре и методами диффузии дисков, в которых получают минимальные ингибирующие концентрации (МИК). Стандартные in vivo методы на мышах применяют для определения эффективной дозы (ЭД) испытываемых соединений в регуляции системных грибковых инфекций.

Таблица 4A-E (см. ниже) содержат МИК в микрограммах на миллилитр (мкг/мл) для соединения изобретения против Candida albicns и Candida parapsilosis и для некоторых соединений, эффективную дозу, ЭД₅₀, на мышах.

В таблицах 4A-E R^I-метил, R^II-метил, R^III-метил, R^V-гидроксигруппа, R₇-гидроксигруппа, R₁-водород. В таблице E - R-водород.

В таблице 4A R₂ - группа формулы где R₃ имеет значения, приведенные в таблице 4.

В таблице 4B R₂ - группа формулы где R₃ имеет указанные выше значения.

В таблице 4C все значения такие же, как в таблице 4B, за исключением того, что Z-углерод-углеродная связь.

В таблице 4D приведены активности соединений со значением R₂ как определено.

В таблице 4E указаны активности дидезоксисоединений (R - водород для приведенных R₂).

Недидезоксисоединения формула I получают с аминоядром циклических гексапептидов формула I, когда R₂ - водород, Аминоядра получают из известных природных продуктов известным ферментативным деацилированием, удаляющим жирнокислотную боковую цепь природного соединения. Например, эхинокардин B, представленный формулой I, где R^I-R^III-метил, R и R^V-гидроксигрупа, и R₁ - водород, R₇ - OH, R₂-линолеол, дезацилируют для получения ядра эхинокандина B (R₂ - водород)деацилазой, производимой организмом Actinoplanes utahensis как описано в патентах США N 4293482 и 4304716.

Известные природные циклические гексапептиды, N-деацилированные для получения исходных аминоядер, включают эхинокандин B (также известный как A-30912A), акулеацин (пальмитоильная боковая цепь), тетрагидроэхинокандин B (стеароильная боковая цепь), мулундокандин (разветвленная боковая C₁₅-цепь L-671329 (разветвленная боковая C₁₆-цепь), S 31794/F1 (тетрадеканоильная боковая цепь), спориофунгин (разветвленная боковая C₁₅-цепь) FR 901379 (пальмитоильная боковая цепь). Аминоядра, полученные N-деацилированием, затем ацилируют известными способами для получения N-ацилированных циклических гексапептидов формулы I, где R₂ - ацил, определенный выше. Ацилирующим реагентом предпочтительно является активный эфир карбоновой кислоты RCOOH, такой как 2,4,5-трихлорфениловый эфир. Кислоту - предшественник R₂COOH получают гидролизом нитрилов R₂CN или эфиров R₂COO-(C₁-C₄)-алкил. Эти промежуточные нитрилы и эфиры получают известными способами.

Алкоксиароматические соединения (например, фенил и бифенил), представленные в таблицах 5 - 10, получают одним из двух следующих методов: A. Гидроксиароматическое соединение (1 эквивалент) растворяют в ацетонитриле (200-300 мл) и основание, такое как трет-бутоксид калия или карбонат калия (1 эквивалент), добавляют. Затем добавляют алкилбромид-, йодид или пара- толуолсульфонат (1 эквивалент) и раствор кипятят с обратным холодильником 6 часов. Растворитель испаряют в вакууме, остаток растворяют в эфире и 2H гидроксиде натрия. Эфирный слой сушат над сульфатом магния и упаривают. Остаток представляет собой алкоксиароматический продукт.

B. Гидроксиароматическое соединение (1 эквивалент), алканол (1 эквивалент) и трифенилфосфин (1 эквивалент) растворяют в тетрагидрофуране (200-300 мл и добавляют диэтилазодикарбоксилат (1 эквивалент) по каплям в течение 10 мин. при комнатной температуре. Через 17 часов растворитель удаляют в вакууме, остаток растворяют в эфире. Органический слой экстрагируют 2Н раствором гидроксида натрия, сушат над сульфатом магния и упаривают с образованием продукта, который кристаллизуют из смеси эфир- пентан или, если продукт содержит третичный амин, получают хлористоводородную соль и кристаллизуют из смеси метанол-этилацетат.

Алкенил- или аклинилароматические соединения, приведенные в таблицах 11 - 14, получают следующим образом способом.

Ароматический бромид, йодид или трифторметансульфонат (1 эквивалент) растворяют в ацетонитриле (600 мл на 0,1 моль ароматического реагента) в атмосфере азота. Добавляют алкил или алкен (1 эквивалент), триэтиламин (2 эквивалента), дихлорид палладия (0,05 эквивалента), трифенилфосфин (0,1 эквивалент) и йодид меди (0,025 эквивалента) и раствор кипятят 17 часов. Растворитель удаляют в вакууме и остаток суспендируют в эфире (300 мл). Твердый материал удаляют фильтрованием и фильтрат промывают 1Н раствором хлористоводородной кислоты. Органический слой сушат над сульфатом магния и упаривают для получения продукта.

Ароматические бороновые кислоты, приведенные в таблице 15, получают следующим образом: Ароматический галогенид (1 эквивалент) в тетрагидрофуране охлаждают до -78 град.C. Добавляют бутиллитий (1,2 эквивалента). Через 15 минут добавляют триизопропилборат (2 эквивалента) и спустя 10 минут перемешивания убирают охлаждающую баню. Когда реакционная смесь нагреется до комнатной температуры, добавляют воду для разложения реакционной смеси, затем 1Н HCl. Органический слой удаляют при пониженном давлении, твердый остаток выделяют фильтрованием, промывают гексаном и получают чистую бороновую кислоту.

Терфениловые эфиры, приведенные в таблице 16, получают следующим образом.

Ароматическую бороновую кислоту (1 эквивалент), метил-4-йодбензоат (1 эквивалент) и карбонат калия (1,5 эквивалента) смешивают в толуоле, продутом азотом. Альтернативно можно использовать трихлорфениловый эфир йодбензоата. Добавляют тетракис (трифенилфосфин)палладий (0,03 эквивалента) и кипятят с обратным холодильником в течение 7 часов. Раствор декантируют для удаления карбоната кальция и упаривают в вакууме. Остаток растирают с ацетонитрилом и твердый продукт выделяют фильтрованием.

Ароматические нитрилы или эфиры карбоновых кислот из таблиц 5 - 16, можно превратить в карбоновые кислоты одним из двух следующих методов гидролиза: A. Ароматический натрил растворяют в этаноле и избытке 50% раствора гидроксида натрия и кипятят 2 часа. Добавляют воду до образования твердого осадка. Осадок собирают фильтрованием, добавляют диоксан и 6Н раствор хлористоводородной кислоты кипятят 17 часов. Добавляют воду и образующаяся карбоновая кислота кристаллизуется. Ее выделяют фильтрованием и сушат под вакуумом.

B. Метилкарбоксилат растворяют в метаноле, добавляют избыток 2Н раствора гидроксида натрия и раствор кипятят с обратным холодильником в течение 6 часов. Раствор подкисляют избытком хлористоводородной кислоты и добавляют воду до прекращения образования осадка. Карбоновую кислоту выделяют фильтрованием и сушат под вакуумом.

Карбоновые кислоты превращают в 2,4,5-трихлорфениловые эфиры, приведенные в таблицах 17-25 следующим общим способом: Ароматическую кислоту (1 эквивалент), 2,3,4,5-трихлорфенол (1 эквивалент) и N, N'-дициклогексилкарбодиимид (1 эквивалент) растворяют в метиленхлориде. Смесь перемешивают 17 ч и фильтруют. Фильтрат упаривают до сухого состояния и растворяют в эфире, фильтруют и добавляют пентан до начала кристаллизации. Кристаллический продукт выделяют фильтрованием и сушат под вакуумом.

Дидезоксисоединения формула I получают удалением бензильной и аминальной гидроксигрупп. Способ включает обработку недидезоксисоединения формула I, где R₂ - водород или ацил, сильной кислотой, такой как трихлоруксусная или трифтоуксусная кислота или эфират трифторида бора, и восстановителем, таким как цианоборгидрид натрия или триэтилсилан, предпочтительно триэтилсиланом. Реакцию проводят при температуре от -5 до 70 град.C в растворителе, таком как метиленхлорид, хлороформ или уксусная кислота, предпочтительно в метиленхлориде. Кислота должна присутствовать в количестве 2-60 моля на моль субстрата, восстановитель должен присутствовать в количестве 2-60 моля на моль субстрата. Способ приводит к селективному удалению аминальной и бензильной гидроксильных групп.

Соединения формула I имеют улучшенные свойства по сравнению с ранее известными N-ацильными гексапептидными противогрибковыми средствами. Например, в целом соединения обладают пероральной пригодностью - свойством, которое является важным для любого системного противогрибкового средства.

Также многочисленные N-ацильные соединения формулы обладают повышенной противогрибковой активностью и повышенной водорастворимостью.

Среди N-ацилгексапептидов формула I некоторые являются предпочтительным вариантом изобретения. Соединения, в которых R₂ - дифенильная ацильная группа в которой Z - углерод-углеродная связь и R₄-алкокси-, циклоалкокси- или циклоалкилалкоксигруппа, являются предпочтительными противогрибковыми средствами. Также предпочтение отдается соединениям с Z - углерод-углеродная связь, и R₄- группа формулы -Y-R₆, где R₆ - (C₁-C₁₂)-алкенил фенил или замещенный фенил и Y-ацетиленовая связь.

Далее, предпочтительными соединениями являются те, где Z-углерод-углеродная связь и R₄ группа -O-(CH₂)_p-W-R₅ (R₅-пиперидин).

Примеры предпочтительных соединений первой группы включают соединения с 4-(4-алкоксифенил)бензойной группой, в которой алкоксигруппа(C₅-C₁₀)-алкоксигруппа или (C₅-C₁₄)-алкоксигруппа, замещенная (C₃-C₇)-алкилом, например, соединения формула I, где R₂ - 4-(4-н-гексилоксифенил)бензоил, (4-н-гептилоксифенил)бензоил, 4-(4-н-октилоксифенил)бензоил, 4-/4-(3,3-диметилбутокси)фенил/бензоил, 4-/4-(фенилэтинил)фенил/бензоил и 4-/4-(2-циклогексилоксиэтокси)фенил/бензоил.

Примеры предпочтительных соединений второй группы с R₄-группой формулы - Y - R₆ включают 4-/4-(фенилэтинил)фенил/бензоил и 4-/4-(н-бутилэтинил)фенил/бензоил.

Примеры предпочтительных соединений третьей группы R₄-группа -O-(CH₂)_p-W-R₅ представлены соединениями с R₅-группами формулы где R₅ - пиперидино-, 4-н-пропилпиперидино-, 4-бензилпиперидино-, 4-циклогексилпиперидино-, и 4-циклогексилметилпиперидиногруппа и их фармацевтпически приемлемые соли с кислотами, например, хлоргидраты, сульфаты или фосфаты.

Предпочтительные циклогексапептиды представлены соединениями формула I, где R^I и R^II - метил, R₁ - водород и R₂- предпочтительный ацил, определенный выше.

В таблице 26 перечислены предпочтительные заместители R₂, если R, R₇ и R^V - гидроксигруппа, R^I - R^III-метил и R^I - водород.

N-Ацилгексапептиды изобретения применяют для лечения грибковых инфекций как системных, так и кожных. Соответственно изобретение предлагает способ лечения грибковых инфекций людей и животных, который предусматривает введение хозяину эффективного нетоксичного количества N-ацилциклогексапептида формула I. Предпочтительно способ заключается во введении N-ацилгексапептида формула I, где R^I и R^II-метил, R₁ - водород и R₂ - предпочтительный ацил, определенный выше.

Противогрибковое соединение можно вводить парентерально, например, внутримышечно, внутрибрюшинно или подкожно, назально, перорально или местно для кожных инфекций. Вводимая доза будет изменяться в зависимости от таких факторов, как природа и тяжесть инфекции, возраст и общее состояние здоровья хозяина и устойчивость отдельного хозяина к определенному противогрибковому средству. Схема приема также может изменяться в зависимости от таких факторов и противогрибковое средство может быть введено в одной дневной дозе или в нескольких дозах в течение дня. Лечение может длиться от 2-3 дней до 2-3 недель или дольше.

Изобретение также предлагает фармацевтические препараты для введения противогрибковых соединений изобретения. Препараты содержат N-ацилгексапептиды формула I или их фармацевтические приемлемые, нетоксичные соли и фармацевтически приемлемый носитель.

Для парентерального введения препарат содержит соединение формула I и физиологически приемлемый разбавитель, такой как деионизированая вода, физиологическая соль, 5% декстроза или другие обычно используемые разбавители. Препарат может содержать солюбилизирующее средство, такое как полиэтиленгликоль или полипропиленгликоль или другие солюбилизирующие средства. Препараты могут быть изготовлены в стерильных сосудах, содержащих противогрибковое средство и наполнитель в форме сухого или лиофилизированного порошка. Перед использованием добавляют физиологически приемлемый разбавитель и раствор отбирают шприцем для введения пациенту. Для перорального введения противогрибковое средство вносят в желатиновые капсулы или запрессовывают в таблетки, такие таблетки также содержат связующее, диспергатор или подходящий наполнитель, пригодный для изготовления таблеток нужного размера. Для диаметрии и гериатрии противогрибковое средство можно вводить в ароматные жидкие суспензии, растворы или эмульсии. Предпочтительная система перорального носителя содержит (по объему): 80% линолевой кислоты, 5% кремофора PH-60 и 87% стерильной воды. Соединение добавляют в систему в количестве 2,5-40 мг/кг. Препарат N-ацилгексапептида для инъекции содержит 50-500 мг на ампулу, для перорального применения желатиновая кислота или таблетка содержит 100-500 мг активного компонента.

Предпочтительные препараты содержат активный компонент формула I, где R^I и R^III-метил, R₁ - водород и R₂ - 4-/4-(фенилэтинил) фенил/бензоил, в желатиновой капсуле или активный компонент формула I, где R^I и R^II - метил, R₁ - водород и R₂ -4-4-/2-(4-циклогексилпиперидино)этокси/фенил бензоил, или его хлоргидрат в таблетке или желатиновой капсуле.

Предложен также метод лечения больных пневмоцистной пневмонией. Метод можно применять профилактически для предотвращения инфекции, вызываемой организмами Pneumocystis carinis. N-Ацилциклопептиды можно вводить парентерально, например, внутримышечно, внутривенно или внутрибрюшинно, инъекцией, перорально или ингаляцией непосредственно в дыхательные пути легких. Предпочтительно циклические пептиды вводят ингаляцией с помощью аэрозольных препаратов соединений.

Эффективное количество циклического пептида составляет 3-100 мг/кг массы пациента. Лекарство можно вводить в одной дневной дозе или в нескольких дозах, например 2-4, в течение дня. Количество индивидуальных доз, путь подачи, частота дозировки и срок терапии будут изменяться в соответствии с такими факторами, как интенсивность и степень инфекции, возраст и общее состояние здоровья пациента, отклик пациента на терапию и устойчивость пациента к лекарству. Известно, что пневмоцистная пневмония (ПЦП) у больных СПИД упорно не поддается лечению вследствие природы инфекции. Например, при тяжелых прогрессирующих инфекциях поверхности воздушных путей трубчатые органы засоряются инфицирующим веществом, так как паразит активно развивается в легочной ткани. Больной с прогрессирующей инфекцией соответственно нуждается в высоких дозах лекарства в течение длительного времени. Наоборот, иммунодефицитные больные, которые нетяжело инфицированы и восприимчивы к ПЦП, могут быть вылечены более низкими и менее частыми дозами.

Активность циклопептидов формула I показана на иммуноподавленных крысах. Тексты выполнялись следующим образом.

Через неделю после начала иммуноподавления крыс заражали паразитом внутритрахейно и выдерживали в режиме имуноподавления в течение последующего времени испытания. Профилактическое лечение начали через день после заражения, терапевтическое лечение начали спустя 3-4 недели после развития умеренной ПЦП. 8 или 120 животных были определены в следующие группы: животные, получающие испытываемые соединения, инфицированные контрольные животные, не подвергавшиеся лечению, животные, подвергавшиеся лечению триметоприм-сульфаметоксазолом, и неинфицированные контрольные животные, не подвергавшиеся лечению. Эффективность различных лечений оценивалась наблюдением за весом животных и за продолжительностью существования их в течение исследования и определением тяжести ПЦП при вскрытии трупа. Для оценки интенсивности инфекции P. carinii использовали окрашенные мазки-отпечатки легких и окрашенные гомогенаты легких.

Иммунодефицитных крыс, использовавшихся в опытах, получали следующим образом.

Самки крыс Льюиса, весящие 120-140 г каждая, подвергали подавлению иммунитета ацетатом метилпреднизолона в количестве 4 мг/100 г в течение второй недели и 2 мг/100 г в течение следующих недель. Все крысы, за исключением неинфицированных контрольных крыс, были заражены внутритрахейно 0,1-0,2 мл модифицированной средой Дулбекко, содержащей 10⁵ - 10⁶ P.Carinii (трофозоиты, предцисты и цисты), собранных с легких тяжело инфицированных донорных животных (показатель инфицирования 6), сохранявшихся на холоду (жидкий азот). Крыс выдерживали в режиме иммуноподавления для развития ПЦП в течение 3-4 недель перед началом терапии испытываемыми соединениями. Вес тела регистрировали ежедневно и крыс распределяли на лечебные группы такие, что каждая группа имела однородное распределение процента потерь веса среди животных.

Крыс лечили испытываемыми соединениями 2-3 недели, затем производили вскрытие. При профилактических исследованиях введение испытываемых соединений начинали через день после заражения и продолжали до вскрытия трупа. Вслед за периодом оценки испытываемых соединений крыс вскрывали и результаты оценивали с помощью мазков/отпечатков, окрашенных Гиемса (Giemsa) или сереброметенамином, и(или) с помощью гомогенатов легких, окрашенных сереброметенамином (с. ниже). Вскрытие трупа выполняли следующим образом. Подопытных крыс наркотизировали смесью хлоргидрата кетамина и ксилазина и обескровливали через правое предсердие. Внутренние органы брюшной и грудной полостей осматривали с целью обнаружения нарушений. Малая часть легочной ткани из левой доли каждой крысы использовалась для приготовления мазков-отпечатков, описанных ниже.

Для определения общего числа паразитов (трофозоитов, предцист и цист) применяли мазки-отпечатки, окрашенные Гиемса. Мазки-отпечатки из крыс в группах, лечение которых показало какую-либо антипневмоцистную активность (судя по показателю инфицирования, полученному на препаратах, окрашенных Гиемса), и из крыс в контрольных группа также окрашивали метамин-сербером - специфическим красителем для стенок цист организмов. Использовали следующим показателим инфицирования: Показатель - Основание 0 - p паразитов не найдено 1 - 1-5 паразитов/10 масляных участков 2 - около 1 паразита/участок 3 - 2-10 паразитов/участок 4 - 10-100 паразитов/участок 5 - 100-1000 паразитов/участок Показатель 6 оставлен для инфекций, мазки/отпечатки которых содержат > 1000 организмов/участок (слишком много, чтобы считать). Препараты, окрашенные Гиемса, исследовали с помощью микроскопа с конечной кратностью увеличения 1008Х, а препараты, окрашивеные метенамин-серебром - с конечной кратностью увеличения 400Х.

Количественное определение цист в легочной ткани крыс осуществляли следующим образом.

Малую часть легочной ткани из левой доли каждой крысы использовали для приготовления мазков-отпечатков. Остаток каждого легкого взвешивали, помещали в трубку, содержащую сбалансированный солевой раствор Хэнка (ССРХ), взятый в 40-кратном количестве относительно веса легкого, и гомогенизировали в гомогенизаторе тканей Бринкмана. 2 мкл гомогенизированного образца, разбавленного ССРХ 1:4, помещали в ячейки покрытого тефлоном приспособления с 12 ячейками, окрашивали метенамин-серебром и считали число цистов как описано выше для мазков-отпечатков.

Ниже представлена активность и эффективность двух предпочтительных N-ацилциклогексапептидов для подопытных животных.

Соединение формула I, в котором R^I и R^II-метил, R₄ - водород, R₂ - 4-/4-(фенилэтинил)фенил/бензоил, при введении в форме аэрозольного раствора с концентрацией 5 мг/мл в течение 1 часа, дважды в неделю в течение 6 недель приводит к 90% уменьшению цист P.Carinii в легких. При пероральном введении в количестве 10 мг/кг в течение 3 недель число цист в легких уменьшается на 99% по сравнению с контрольными инфицированными носителями.

Предпочтительные N-ацилциклопептиды при пероральном или инъекционном внутрибрюшинном введении эффективно удаляют цисты из легких тяжело инфицированных крыс. Например, при введении соединения в количестве 10 или 40 мг/кг в течение 4,8 или 12 дней число цист в легких тяжело инфицированных крыс снижается на 99%, такая же эффективность наблюдается при внутрибрюшинном введении в количестве 1 мг/кг.

При пероральном исследовании на профилактическую активность предпочтительное соединение показывает снижение на 99% цист в одном из двух испытаний при введении в количестве 1 мг/кг и при более высоких дозах 5 или 4 мг/кг.

Другое предпочтительное соединение изобретения, представленное формулой I, в которой R^I и R^II - метил, R₁ - водород, R₂ - 4-[4-(2-циклогексилпиперидино)этокси] фенил-бензоил, в форме хлоргидрата также эффективно при лечении ПЦП. Аэрозольная профилактика (2 лечения по 60 мин дважды в неделю в течение 5 недель) оказалась высокоэффективной для предотвращения ПЦП у инфицированных иммуноподавленных крыс. Аэрозольная терапия раствором с концентрацией 5, 10, 25 или 50 мг/мл снижает число цист в легких на 99% по сравнению с контрольными животными. Подобные результаты получены также при внутрибрюшинном введении.

Другие примеры соединений и способ их получения далее приведены в описании.

N-Ацидирование циклогексапептидного ядра.

Для получения производных ядра А30912А предложен следующий общий способ.

В таблице 27 приведены такие производные.

Пример.

Ядро А30912А и 2,4,5-трихлорфенола сложный эфир растворяют в диметилформамиде (25-50 мл) и перемешивают при комнатной температуре 17-65 часов. Растворитель удаляют в вакууме и остаток суспендируют в эф