14-замещенные маркфортины

14-замещенные маркфортины

Реферат

 

14-Замещенные маркфортины общей формулы I или их фармацевтически приемлемые соли, или 12-N-оксид, где m = 0; Z, Y - кислород, R₁ - Н, С_2-7 алканоил или -С(O)NR₄N₅; R₄ и R₅ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют морфолиновое кольцо; R_14a - атом водорода, гидроксил или С_1-7 алкил; R_14b - Н или гидроксил; R_18а - алкил; R_15a, R_15b, R₂₄, R₂₅ - атом водорода. Соединения формулы I - сильные парагерквамидапаразитные агенты против эндо- и эктопаразитов, в частности паразитических червей и членистоногих, вызывающих многочисленные паразитические заболевания у людей, животных и растений. 6 з.п. ф-лы, 1 табл., 7 ил.

Маркфортины являются известными соединениями и описаны Polonsky et al. в [Journal Chemical Society Chemical Communication, 1980, 601-602 (Маркфортин А) и Tetrahedron Letters, 1981, 22, 1977-1980 (Маркфортины В и С)]. Эти соединения являются грибковыми метаболитами Penicillium roqueforti. Маркфортины близки по структуре парагерквамидам, которые также являются известными соединениями. Парагерквамиды описаны Yamazaki et al. (Tetrahedron Lett. 1981 22 135-136) и Blanchflower et al. (Journal of Antibiotics, 1991, 44, 492-497). Применение маркфортинов А, В и С описано в Патентах США 4866060 и 4923867 и некоторые их производные применяются для лечения и профилактики паразитарных заболеваний у животных.

WO 92/22555 (опубл. 23 декабря 1992) в основном описано производное маркфортина или парагерквамида (т.е., конкретной формулы (III), замещенной в положении 14 метилом или метилом и гидроксилом), однако нет описания того, как получить такие производные 14-метил-14гидроксимаркфортина.

Парагерквамид имеет следующую структуру: Маркфортин А имеет следующую структуру: Маркфортин B имеет следующую структуру: Маркфортин C имеет следующую структуру: Маркфортин D имеет следующую структуру WO 91/09961 (опубл. 11 июля 1991) описаны различные производные маркфортина и парагерквамида и их 12а-N-оксидов также, как получение VM 29919 (парагерквамида) и VM 55596 (12а-N-оксида парагерквамида) inter alia из Penicillium Sp. IMI 332995.

В патенте США 4873247 описаны производные парагерквамида и штамм Penicillium charlessi MF 5123 (ATCC 20841) для получения парагерквамида. В патенте США 4873247 (а также как и ЕР 390532-А, ЕР 301742-А) описаны различные синтетические производные парагерквамида, а также получение парагерквамида из Penicillium charlessi MF 5123 (АТСС 20841).

SmithKIine Beecham в международной заявке WO 92/22555 (опубл. 23 декабря 1992) в основном описывает 14-гидрокси-маркфортиновые соединения и способ, который использует 14-гидрокси-14-метилмаркфортиновые соединения для получения противопаразитических лекарств. Однако, никакого описания каких-либо способов получения производных 14- гидрокси-маркфортина или 14- гидрокси -14 метилмаркфортина не приводится.

Сущность изобретения.

Данное изобретение касается синтезов 14-замещенных маркфортинов А, В, С и D и их производных и применения этих соединений в качестве противопаразитических агентов. Таким образом, целью данного изобретение описание этих производных маркфортина. Дальнейшей целью данного изобретения является описание способов получения этих соединений. Еще одной целью является описание применения настоящих соединений в качестве противопаразитических агентов для лечения и профилактики паразитических заболеваний. Еще одной целью изобретения является описание композиций для лечения паразитических заболеваний, которые содержат новые соединения по данному изобретению в качестве активного ингредиента. Дальнейшие цели станут очевидны из ознакомления с нижеследующим описанием.

Описание изобретения Соединения по настоящему изобретению представлены формулой (I): или их фармацевтически приемлемые соли, где Z обозначает О, Y обозначает атом кислорода (-O-), R₁ обозначает атом водорода, C₂-C₇ алканоил (-C(O)C₂-C₇ алкил) или -C(O)NR₄R₅ группу-, где R₄ и R₅ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют морфолиновое кольцо, R_14a - атом водорода, гидроксил или C₁-C₇ алкил, R_14b - атом водорода или гидроксил, R_18a - C₁-C₇ алкил, R₂₄ - атом водорода, R₂₅ - атом водорода, R_15a и R_15b оба обозначают атом водорода, при условии, что, когда один из R_14a или R_14b обозначает гидроксил, а другой обозначает атом водорода или метил, то R_15a и R_15b могут быть атомом водорода или метилом; пунктирная линия между атомами углерода 24 и 25 представляет одинарную линию или двойную связь; при общем условии, что R_14a и R_14b оба не являются атомами водорода.

Более конкретно, изобретение относится к соединению, где пунктирная линия обозначает двойную связь между атомами углерода 24 и 25.

Предпочтительными являются соединения, выбранные из группы, включающей: 14- гидроксимаркфортин А; 14- гидрокси -14- метилмаркфортин А; 14- гидроксимаркфортин А; N-оксид 14- гидроксимаркфортин А; 14- гидрокси -14- этилмаркфортин А; 14- гидрокси-N(1)-морфолинокарбонилмаркфортин А; 14- гидрокси-N(1)-ацетилмаркфортин А; N-оксид 14- гидрокси -14- метилмаркфортин А; 14- гидрокси -14- метил-N(1)-ацетилмаркфортин А; 14- гидрокси -15- метилмаркфортин А; или 14- гидрокси -14- метил -15- метилмаркфортин А.

Еще более предпочтительными являются соединения, выбранные из группы, включающей: 14- метилмаркфортин А; 14- этилмаркфортин А; 14- гидрокси -14- этилмаркфортин А; 14- гидрокси -14- метилмаркфортин А; или 14- гидрокси -14- метил -15- метилмаркфортин А.

Наиболее предпочтительными являются 14- гидроксимаркфортин А, 14- гидрокси -15- маркфортин А и гидрокси -14- метилмаркфортин А.

Другой аспект данного изобретения касается производных 14- замещенного маркфортина А и В формулы IA: Другой аспект данного изобретения касается производных 14- замещенного тиомаркфортина А и В формулы IB: Другой аспект данного изобретения касается производных 14- замещенного маркфортина С и D формулы II: Другой аспект данного изобретения касается производных 14-замещенного тиомаркфортина С и D формулы III: Содержание углерода в различных углеводородсодержащих радикалах указывается приставкой, обозначающей минимальное и максимальное число атомов углерода в радикале, например, приставка "С_i-С_j" указывает содержание атомов углерода от целого "i" до целою "j" включительно. Так, C₁-С₃ алкил относится к алкилу с 1-3 атомами углерода включительно, или к метилу, этилу, пропилу и изопропилу.

В связи с вышесказанным, "C₁-C₇ алкил" включает алкильные группы с от 1 до 7 атомов углерода либо прямой, либо разветвленной цепи. Примеры таких низших алкильных групп являются метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил, гептил и тому подобное.

Цикло(С₃-С₈)алкил включает алкильные 3-8 членные кольца. Примерами цикло(С₃-С₈)алкильных групп являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, бицикло[2.2.1]гептил и тому подобное.

C₁-C₈ алкокси включает алкоксильные группы с от 1 до 8 атомов углерода либо прямой, либо разветвленной цепи. Примеры таких C₁-C₈ алкоксильных групп являются метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, втор-бутокси, пентокси, гексилокси, гептилокси и тому подобное.

C₂-С₇ алканоил включает алканоильные группы с от 2 до 7 атомов углерода прямой или разветвленной цепи. Примеры таких С₂-С₇ алканоильных групп включают ацетил, пропионил, изопропионил, бутирил, пентаноил, гексаноил и тому подобное.

С₁₀-С₂₄ алканоил (-C(O)C₉-C₂₃ алкил) включает алканоильные группы с от 9 до 23 атомов углерода либо прямой, либо разветвленной цепи. Примеры таких C₁₀-C₁₄ алканоильных групп включают деканоил [- С(O)(CH₂)₉CH₃], лаурил [-C(O)(CH₂)₁₀CH₃] , тридеканоил [-С(O)(CH₂)₁₁CH₃], миристоил [-С(O)(CH₂)₁₂CH₃] , пентадеканоил [-С(O)(CH₂)₁₃CH₃] , пальмитоил [-С(O)(CH₂)₁₄CH₃], магароил [-С(O)(CH₂)₁₅CH₃] , стеароил [-C(O)(CH₂)₁₆CH₃], арахидоил [-С(O)(CH₂)₁₈CH₃] , генеикоизаноил [-С(O)(CH₂)₁₉CH₃], бегеноил [-С(O)(CH₂)₂₀CH₃], трикозаноил [-С(O)(CH₂)₂₁CH₃], тетракозаноил [-C(O)-(CH₂)₂₂CH₃] и тому подобное.

C₁₀-C₂₄ алкеноил (-C(O)C₉-C₂₃ алкенил) включает ненасыщенные группы с от 10 до 24 атомов углерода либо прямой, либо разветвленной цепи. Примеры таких C₁₀-C₂₄ алкеноильных групп включают ундециленоил [-C(O)(CH₂)₇CH:CHCH₃], олеоил [-С(O)(CH₂)₇CH: CH(CH₂)₇CH₃] , линолил [-С(O)(CH₂)₇CH: CHCH₂CH: CH(CH₂)₄CH₃], и тому подобное.

Термин "C₂-C₈ алкоксиалкил" включает алкоксизамещенные низшие алкильные группы, содержащие от 2 до 8 атомов углерода и от 1 до 3 атомов кислорода либо прямой, либо разветвленной цепи. Примеры таких C₂-C₈ алкоксиалкильных групп включают метоксиметил, метоксиэтоксиметил, этоксиэтил и тому подобное. Примеры C₁-C₈ алкоксиметилов являются метоксиметил, этоксиметил, пропоксиметил, бутоксиметил, пентоксиметил, гексоксиметил и гептоксиметил и их изомерные формы.

Термин "алканоилоксиметилен" включает алканоилокси-замещенные метилены, содержащие от 2 до 8 атомов углерода в прямой или разветвленной цепи. Примеры таких C₂-C₈ алканоилоксиметиленовых групп включают ацетоксиметил, трет-бутоксиметил, н-пропоксиметил, валероксиметил и тому подобное.

Термин "замещенный бензоилоксиметилен" включает такие бензоилоксиметильные группы, в которых бензольное кольцо имеет от 0 до 3 заместителей, выбранных из низшего алкила, трифторметила, C₁-C₇ алкокси, нитро или цианогрупп и атомов галогена.

Термин "замещенный бензолсульфонил" включает такие бензолсульфонилгруппы, в которых бензольное кольцо замещено от 0 до 3 заместителями, выбранными из низшего алкила, трифторметила, C₁-C₇ алкокси, нитро или цианогрупп и атомов галогена.

Термин "галоген" включает атомы галогенов: фтора, хлора, брома и иода.

Термин "галоген C₁-C₇ алкил" включает галогензамещенные C₁-C₇ алкильные группы, содержащие от 1 до 7 атомов углерода в прямой или разветвленной цепи и от 1 до 3 атомов галогена. Примеры галоген C₁-C₇ алкилов включают фторметил, 2-бромэтил, 3-хлорпропил, 5-иодпентил, трифторметил и тому подобное.

Термин "C₂-C₈ алкенил" включает низшие алкильные группы, содержащие от 2 до 8 атомов углерода либо прямой, либо или разветвленной цепи, которые содержат от 1 до 2 двойных углерод-углеродных связей. Примеры таких C₂-C₈ алкенильных групп включают аллил, 3-бутенил, 2,4-пентадиенил, гексенил и тому подобное.

Термин "C₂-C₈ алкинил" включает алкинильные группы, содержащие от 1 до 8 атомов углерода либо прямой, либо разветвленной цепи, которые содержат от 1 до 2 тройных углерод-углеродных связей. Примеры таких C₂-C₈ алкинильных групп включают пропаргил, 2-бутинил, 2,4-пентадиинил, 5-гексинил и им подобные.

Примеры "алкоксикарбонилов" (-C(= O)O-(CH₂)_p-C₁-C₇ алкокси) включают этоксикарбонил, изопропоксикарбонил, метоксикарбонил, бутоксикарбонил, гексоксикарбонил и тому подобное. С₁-C₇ алканоил включает алкильные группы с от 1 до 7 углеродных атомов либо прямой, либо разветвленной цепи. Примеры C₁-С₇ алканоилов включают ацетил, пропионил, изобутирил, валерил, 5-метилгексаноил и тому подобное.

Примеры аминокарбонилов (-C(= O)-NR₄R₅) включают диметиламинокарбонил, пропилметиламинокарбонил, дибутиламинокарбонил, изо-пропиламинокарбонил, гексиламинокарбонил и тому подобное.

Примеры аминотиокарбонилов (-C(=S)-NR₄R₅) включают диметиламинотиокарбонил, пропилметиламинотиокарбонил, дибутиламинотиокарбонил, изопентиламинотиокарбонил, гексиламинотиокарбонил и тому подобное.

Примеры группы -P(=X)(R₂)(R₃) включают диэтилтиофосфорил, фенил-метоксифосфонил, 2-тиоксо-1,2,3-диоксафосфоринанил, N,N-диметилметоксифосфорамидил, дифенилфосфинил и тому подобное.

Примеры -SR₆ включают 2,4-динитробензолсульфенил, диметиламиносульфенил, этоксикарбонилсульфенил, трихлорметилсульфенил, 4-морфолиносульфенил, этоксикарбонилсульфенил и тому подобное.

Примеры -SO₂NR₄R₅ включают диметилсульфамоил, фенилметилсульфамоил, 4-морфолиносульфамоил, пиперидинилсульфамоил и тому подобное.

Термин "P-содержащее гетероциклическое кольцо" включает 1,3-диокса-2-фосфоринан, 1-аза-3-окса-2-фосфолан, 1,3-диаза-2-фосфолан, 1-тиа-3-окса-2-фосфолан и тому подобное.

Примеры гетероциклических аминовых колец, соответствующих, согласно -NR₄R₅, -NR'₄R'₅ и -NR₇R₈, являются: 4-морфолин, 4-фенил-1-пиперазин, 4-(2-пиридинил)-1-пиперазин, 2,6-диметил-4-морфолин, 1-пирролидин, 4-метил-1-пиперазин, 1-пиперидин, 4-фенил-1-пиперидин, тиазолидин, 4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин, 4-фенилпиперидин, этилпролинат, тетрагидрофуриламин, 3-пирролин, тиазолидин-4-карбоновая кислота, тиоморфолин, нипекотамид, 2-метилпиперидин, 3-метилпиперидин, 4-метилпиперидин, N-метилпиперазин, 1-метилгомопиперазин, 1-ацетилпиперазин, N-карбоэтоксипиперазин.

Фармацевтически приемлемые соли обозначают соли, используемые для введения соединений по данному изобретению и включают: мезилат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, сульфат, фосфат, ацетат, пропионат, лактат, малеат, малат, сукцинат, тартрат и тому подобное. Эти соли могут быть в гидратированной форме.

Предпочтительными соединениями по данному изобретению являются соединения формулы IA и IB, где R_14a обозначает гидроксил и водород, R_14b обозначает водород, метил и этил; R₂₄ и R₂₅ обозначают водород; R_18a обозначает водород, C₁-C₄ алкил, C₂-C₄ алкоксиалкил, С₄-С₄ алкенил или бензил; и пунктирная линия между атомами углерода 24 и 25 обозначает двойную связь.

Примеры предпочтительных соединений по данному изобретению приведены в конце описания.

Общие способы получения гетероатомных N-оксидов можно найти в гл. 2 "Chemistry of the Heterocyclic N-oxides", A.R. Katritzky and J.M. Lagowsky, опублик. 1971 Academic Press (Vol. 19 of ORGANIC CHEMISTRY - A Series of Monographs). Обычно, N-оксид образуется при взаимодействии с пероксикарбоновой кислотой в подходящем растворителе. Более всего для этого подходит ароматическая надкислота в неполярном растворителе, тогда как реакцию можно обычно проводить при комнатной температуре. Подходящими ароматическими надкислотами являются надбензойная кислота, хлорнадбензойная кислота и надфталевая кислота.

Получение исходного продукта N-18a-замещенные маркфортины В и С и С24-С25-модифицированные маркфортины легко получаются способами, описанными в патенте США 4 923 867, описание которого включено здесь в качестве ссылки.

Маркфортины А, В и С выделяются, вместе с ранее описанными рокфортинами, в качестве грибковых метаболитов Penicillium roqueforti, с использованием стандартных методов ферментации и выделения. Выделение, а также аналитические и структурные характеристики маркфортина А подробно описаны Polonsky et al. (Journal of the Chemical Society Chemical Communications 1980, 601-602). Выделение, а также аналитические и структурные характеристики маркфортинов В и С детально описаны Polonsky et al. (Tetrahedron Lettyкы , 1981, 22, 1977-1980).

Альтернативно и более предпочтительно, маркфортины А, С и D могут быть выделены из Penicillium sp. UC 7780 (номер штамма в Upjohn Culture Collection, UC 7780, The Upjohn Company, Kalamazoo, MI). Этот штамм выделен из грязного образца, хранящегося в Иллинойсе, депонированном в собрании патентных культур Министерства сельского хозяйства США (U.S. Department of Agriculture, patent cultire collection in Peoria, IL) и ей присвоен номер NRRL 18887. Для последующей характеристики грибка было проведено таксономическое исследование согласно способам и материалам, описанных в I. John Pitt, The Genus Penicillium, Academic Press, London, (1979). Споры и покровные поверхности были изучены методом сканирующей электронной микроскопии по методу, (A. Dietz, J. Matthews, J. Appl. Microbiology 18:694-696 (1969). Интактные конидиофоры визуализировались методом световой микроскопии [A.H.S. Onions et al. , "Smith's Introduction to Industrial Mycology, John. Willey and Sons, New York, pp. 301-302, (1979)] после приготовления предметного стекла с культурой(ами): стеклянную чашку Петри, содержащую предметное стекло, образец и покровное стекло, стерилизуют. На предметное стекло помешают небольшой прямоугольный кусок агара картофельной декстрозы и инокулируют с четырех сторон культурой плесени. Покровное стекло помещают на инокулированный прямоугольный кусок агара и добавляют стерильной воды для поддержания влажности. Камеру подвергают инкубации в течение шести дней при 24^oC. Микроскопические препарат(ы) готовят, снимая покровное стекло и помещая его на каплю лактофенольного хлопкового голубого красителя.

Характеристики Penicillium sp. UC 7780 (NRRL 18887) следующие: Морфология - бивертициллатный пенициллус (два разветвления между конидиумом и ножкой). Эти разветвления (метулы) поддерживают фиалиды, или структуры, несущие конидии. Конидиофоры (примерно 35 мкм) ограничены мутовками из 2-5 (10-14 мкм) митул. Фиалиды имеют форму амфор (т.е. похожи на древнегреческие сосуды для вина) в мутовках 2-5 (7 мкм). Конидии - гладкие и сфероидальные (2 мкм), обычно образующие длинные колонны. Стенки ножки гладкие.

Культуру инокулируют на трех чашках Петри диаметром 6 см, одна - с дрожжевым агаром Чапека (Czapek yeast agar, CYA), две другие - с агаром из солодового экстракта (malt extract agar, МЕА) и 25%-ым агаром нитроглицерина (G25N). Инсоляция проводится из полужидкой суспензии (0,5 мл 0,2%-го агара с 0,05%-ым Tween 80). Инокулируемую порцию конидии добавляют в пробирку и перемешивают. Порцию суспензии инокулируют на образец в трех местах чашки. Для точечной инокуляции на 6 см-ую чашку используют иглу. Режим инкубации: одна чашка CYA, чашки МЕА и G25N при 24^oC, одна чашка CYA при 37^oC и 6 см чашка CYA при 5^oC. Через 7 дней записывают диаметры колоний, цвета и другие характеристики (приведены в Таблице 1). На агаре картофельной декстрозы (PDA, Difco) образуется глубокое красное окрашивание на дне или обратной стороне колонии.

Никакой половой стадии отмечено не было. Результаты по культуре (NRRL 18887) классифицировали по определителю Penicillium для нахождения подвида. Внутри определителя самого вида Penicillium определяется подвид, к которому относятся образцы. Эти образцы имеют некоторые характеристики, отличающие их от подвида Biverticillium, даже если пенициллиус является бивертицилатным. Образцы главным образом образуют колонии с диаметром более 10 мм в течение 7 дней в G25N. Метулы являются более длинными, чем фиалиды и находятся на мутовках 25. Эти характеристики относят данный образец Penicillium (NRRL 18887) к подвиду Furcatum.

Приведенное описание иллюстрирует вытяжку из образца Penicillium UC 7780 (NRRL 18887), которая может использоваться для получения маркфортина и его производных. Однако, настоящее изобретение охватывает также и мутантов описанного выше вида микроорганизмов. Например, такие мутанты получены естественным отбором или под воздействием мутагенов, включая ионизирующие излучения, такие как УФ-излучение, или химические мутагены. такие как нитрозогуанидин, или им подобных воздействий. Эти мутанты также входят в предмет данного изобретения.

Настоящее описание включает интер- и интраспецифические рекомбинанты, полученные генетическими методами, хорошо известными специалистам, такими как, например, конъюгация, транзульция и генная инженерия.

Penicillium. sp. UC 7780 (NRRL 18887) может быть выращен в аэробных условиях способом, аналогичным обычно используемому для выращивания известных культур рода Penicillium.

В качестве компонентов сред могут использоваться любые из хорошо известных питательных для Penicillium материалов. Например, в качестве источников усваиваемого углерода могут использоваться глюкоза, глицерин, мальтоза, декстрин, крахмал, лактоза, сахароза, меласса, соевое масло, масло семян хлопка и т.п., предпочтительно - глюкоза и глицерин. Источником усваиваемого азота могут служить: соевая мука, мука земляных орехов, мука семян хлопка, рыбная мука, кукурузная патока, пептон, рис, отруби, мясной экстракт, дрожжи, дрожжевой экстракт, нитрат натрия, нитрат аммония, сульфат аммония и т.п. Такие неорганические соли, как хлорид натрия, фосфаты, карбонат кальция и т.п. могут добавляться в культивационную среду. Незначительное количество соли металла добавляется, если это необходимо. Кроме того, незначительное количество тяжелого металла может добавляться при необходимости.

Для культивирования образцов Penicillium (NRRL 18887), особенно в анаэробных условиях, могут с успехом использоваться обычные аэробные методы выращивания, такие как твердая культура, культура при аэрации и взбалтывании, перемешиваемая культура и т.п.

При культивировании с аэрацией и взбалтыванием могут должным образом использоваться пеногасители, например, силиконовое масло, растительные масла, ПАВ и т.п.

Значение pH среды обычно находится в пределах от 3 до 9, предпочтительно, вблизи нейтральной реакции, а температура обычно поддерживается порядка 20-З0^oC, в частности предпочтительна температура 21^oC.

Культивирование продолжается до тех пор, пока маркфортин А накапливается в среде, обычно в течение от 20 до 240 часов, предпочтительно - от 48 до 168 часов; после культивирования маркфортин А может быть извлечен и выделен из культивационного бульона подходящим сочетанием различных методов. Например, это может быть экстракция органическим растворителем, например, эфиром, этилацетатом или хлороформом, растворение в более полярном растворителе, например, ацетоне или спирте, удаление примесей менее полярным растворителем, например, петролейным эфиром или гексаном, адсорбционная хроматография на активированном угле или силикагеле, гель-фильтрация через колонку Sephadex (получаемую от Pharmacia Co., Ltd, U.S.A.) и т.д.

Указанные соединения по настоящему изобретению являются неожиданно сильными парагерквамидапаразитными агентами против эндо- и эктопаразитов, в частности паразитических червей и членистоногих, вызывающих многочисленные паразитические заболевания у людей, животных и растений.

Паразитические заболевания могут вызываться как эндопаразитами, так и эктопаразитами. Эндопаразиты - это паразиты, которые живут внутри тела хозяина, как внутри органа (такого как желудок, легкое, сердце, кишка и т.п.), так и просто под кожей. Эктопаразиты - это паразиты, которые живут на внешней поверхности хозяина, но поглощают питательные вещества из него.

Эндопаразитические заболевания, обычно называемые гельмитозом, возникают вследствие заражения хозяина паразитическими червями, известными как гельмиты. Гельмитоз - это преобладающая и серьезная мировая экономическая проблема, поскольку инфицированию подвергаются домашние животные, такие как свиньи, овцы, лошади, крупный рогатый скот, козы, собаки, кошки и домашняя птица. Многие из этих инфекций вызваны группой червей, описанных как нематоды, которые вызывают заболевания у многих видов животных во всем мире. Эти заболевания часто являются серьезными и могут привести к смерти инфицированного животного. Наиболее распространенные подвиды нематод, заражающих животных, о которых говорилось выше, это Haemonchus, Trichostrongylus, Ostertagia, Nematodirus, Cooperia, Ascaris, Bunostomum, Oesophagostomum, Chabertia, Trichuris, Strongylus Trichonema, Dictyocaulus, Capillaria, Heterakis, Toxocara, Ascaridia, Oxyuris, Ancylastoma, Uncinaria, Toxascaris и Parascaris. Многие паразиты-видоспецифичны (инфицируют только одного хозяина) и многие также имеют предпочтительное место, поражаемое внутри животного. Так, Haemonchus и Ostertagia первично инфицируют желудок, тогда как Nematodirus и Cooperia атакуют главным образом кишечник. Другие паразиты предпочтительно поселяются в сердце, глазах, легких, кровеносных сосудах и т.п., в то время, как остальные являются подкожными паразитами. Гельмитоз приводит к слабости, потере веса, анемии, повреждению кишечника, потере аппетита и поражению других органов. В отсутствие лечения, эти заболевания могут привести к смерти животного.

Инфекции эктопаразитными членистоногими, такими как клещи, чесоточные клещи, вши, слепни, шершни, мясные мухи, блохи и им подобные, являются серьезной проблемой. Инфекции этими паразитами приводят к потере крови, поражениям кожи и могут вмешиваться в нормальные привычки в еде, вызывая таким образом потерю веса. Эти инфекции могут также привести к переносу серьезных заболеваний, таких как энцефалит, анаплазмоз, сыпь у свиней и им подобных, которые могут быть смертельными.

Животные могут быть одновременно инфицированы несколькими видами паразитов, поскольку заражение одним паразитом может ослабить животное и сделать его восприимчивым к заражению следующим видом паразита. Таким образом, соединение с широким спектром действия имеет особые преимущества при лечении таких заболеваний. Соединения по данному изобретению имеют неожиданно высокую активность против паразитов и, кроме того, активны против Dirofilaria у собак, Nematorspiroides Syphacia у грызунов, сосущих насекомых и мигрирующих диптероидных личинок нематод, таких как виды Hypoderma у крупного рогатого скота и Gastrophilus у лошадей.

Указанные соединения также используются против эндо- и эктопаразитов, которые вызывают паразитические заболевания у человека. Примеры таких эндопаразитов, инфицирующих человека, являются желудочно-кишечные паразиты вида Ancylostma, Necator, Ascaris, Strongyloides, Ttichinella, Capillaria, Trichuris, Enterobius и тому подобное. Другие эндопаразиты, которые инфицируют человека, обнаруживаются в крови или других органах. Примерами таких паразитов являются ленточные черви Wucheria, Brugia, Onchocerca и им подобные, равно как и черви Strongylides и Trichinella на внекишечных стадиях. Эктопаразиты, паразитирующие на человеке, включают клещей, блох, чесоточных клещей, вшей и им подобных, и, как и в случае домашних животных, инфекции этими паразитами могут приводить к переносу серьезных и даже смертельных заболеваний. Настоящие соединения активны против этих эндо- и эктопаразитов, и, кроме того, эффективны против сосущих насекомых и других диптероидных паразитов, раздражающих человека. Настоящие соединения при введении перорально или парентерально вводятся дозами от 0,05 до 20 мг/кг веса тела животного.

Настоящие соединения также применяются против обычных паразитов жилищ, таких как Btatella sp. (тараканы), Tineola sp. (платяная моль), Attagenus sp. (клопы), Musca domestica (домовые мухи) и против Solenopsis Invicta (неаборигенные рыжие муравьи).

Кроме этого, соединения используются против сельскохозяйственных вредителей, таких как тля Acyrthiosiphon sp, (тли), саранча и долгоносики, а также против вредных насекомых, которые паразитируют на хранящемся зерне, таких как Tribolium sp., и против насекомых на незрелых стадиях, живущих в тканях растений. Соединения также используются как наматоциды для борьбы с почвенными нематодами, что важно для сельского хозяйства.

При использовании в качестве парагерквамидапаразитных агентов для животных, настоящие соединения могут вводиться внутрь как перорально или путем инъекций, так и в виде жидких обтираний или шампуней.

При пероральном введении соединения могут вводиться в виде капсул, таблеток, в форме пропитанных шариков, или, альтернативно, могут смешиваться с пищей животных. Капсулы, таблетки и пропитанные шарики включают активный ингредиент в сочетании с подходящим носителем, таким как крахмал, тальк, стеарат магния или дикальций фосфат. Эти дозированные формы готовятся путем тонкого смешивания активного ингредиента с подходящими хорошо измельченными инертными ингредиентами, включающими разбавители, наполнители, диспергаторы, суспендирующие агенты и/или связующие так, чтобы образовывались однородная смесь, раствор или суспензия. Инертным является ингредиент, который не реагирует с настоящими соединениями и нетоксичен для животного, подвергаемого лечению. Подходящие инертные ингредиенты включают крахмал, лактозу, тальк, стеарат магния, растительные смолы и масла и тому подобное. Такие составы могут содержать большое многообразие количеств активных и неактивных ингредиентов, зависящее от многочисленных факторов, таких как размер и тип животною вида, подвергаемого лечению, типа и разновидности инфекции. Активный ингредиент также может вводиться в качестве пищевой добавки путем простого смешивания с пищей или нанесения на ее поверхность. Альтернативно, активный ингредиент может смешиваться с инертным носителем, и порченная композиция может смешиваться с пищей или непосредственно скармливаться животному. Подходящими инертными носителями являются кукурузная мука, цитрусовая мука, ферментационные осадки, соя грубого помола, высушенное зерно и тому подобное. Активные ингредиенты тонко смешиваются с этими инертными носителями путем размола, перемешивания и толчения, так, чтобы конечная композиция содержала от 0,001 до 5,0% (масс.) активного ингредиента.

Соединения альтернативно могут вводиться парентерально путем инъекции состава, состоящего из активного ингредиента, растворенного в инертном жидком носителе. Инъекция может быть внутримышечной, внутриягодичной или подкожной. Вводимый состав состоит из активного ингредиента, смешанного и подходящим инертным жидким носителем. Приемлемые жидкие носители включают растительные масла, такие как арахисовое масло, масло семян хлопка, кунжутное масло и тому подобное, также, как и органические растворители, такие как монокеталь, формилглицерин и тому подобное. Как альтернатива могут использоваться водные парентеральные составы. Растительные масла являются предпочтительными жидкими носителями. Составы готовят растворением или суспендированием активного ингредиента в жидком носителе так, чтобы конечный состав содержал от 0,005 до 20% (масс.) активного ингредиента.

Наружное применение настоящих соединений является возможным при использовании жидких обтираний или шампуней, содержащих настоящие соединения в виде водных растворов или суспензий. Эти составы, в общем случае, содержат суспендирующий агент, такой как бентонит и, как правило, также содержат пеногаситеяь. Допускаются составы, содержащие от 0,5 до 5% (масс.) настоящих соединений.

Настоящие соединения в первую очередь используются как противопаразитические агенты для лечения и/или профилактики гельминтоза у домашних животных, таких как крупный рогатый скот, овцы, лошади, собаки, кошки, козы, свиньи и у домашней птицы. Они также применяются для профилактики и лечения у этих животных паразитных инфекций эктопаразитами, такими как клещи, чесоточные клещи, вши, блохи и им подобные. Соединения также эффективны при лечении паразитических инфекций у человека. При лечении таких инфекций соединения по данному изобретению могут использоваться индивидуально или в комбинации друг с другом или с другими неродственными противопаразитическими агентами. Дозировка настоящих соединений, требуемая для достижения наилучших результатов, зависит от различных факторов, таких как вид и размер животного, тип и разновидность инфекции, метода введения и используемого соединения. Пероральное введение настоящих соединений в дозах на уровне от 0,005 до 50 мг/кг веса тела животного в виде разовой дозы или нескольких доз в течение нескольких дней обычно дает хорошие результаты. Разовая доза настоящих соединений обычно дает превосходный результат, однако многократные дозы назначаются для борьбы с повторным заражением или для борьбы с необычно устойчивыми паразитами. Методики введения этих соединений животным хорошо известны специалистам в области ветеринарии.

Соединения по данному изобретению также могут использоваться для борьбы с вредителями сельского хозяйства, поражающими урожай как на поле, так и при хранении. В этих целях соединения применяются в виде аэрозолей, порошков, эмульсий и им подобных как к произрастающим растениям, так и к убранному урожаю. Методики применения этих соединений в данном случае хорошо известны специалистам по сельскому хозяйству.

Следующие примеры приводятся для лучшего понимания данного изобретения; они не являются ограничениями изобретения.

Процесс N 1: Получение и выделение маркфортина А Ферментативный процесс: Высеваемые ферментаты инокулируют затравками агара индивидуального образца Penicillium UC 7780 (NRRL 18887), хранившегося в жидком азоте. Три затравки размораживают и используют как инокуляты.

GS-7 состоит из глюкозы и муки семян хлопка (продается Traders Protein, Procter & Gamble Oilseed Products Co., Memphis, TN, U.S.A. под торговой маркой "Pharmamedia"). Вода, стоявшая в незакрытой таре, используется для гидратации компонентов среды; pH среды доводится NH₄OH до 7,2. Среду разливают порциями по 300 мл в неперегороженные колбы закрытой системы вместимостью 1000 мл и стерилизуют 30 минут в автоклаве при 121^oC. Каждую колбу закрытой системы, содержащую 300 мл среды GS-7, инокулируют тремя затравками агара Penicillium ps. UC 7780 (NRRL 18887) и перемешивают на роторном смесителе при 250 об/мин в течение 36 часов при 22^oC.

Вторичный ферментативный процесс: Выращенные культуры используют в качестве инокулята для вторичной среды при посевном соотношении 0,3%. Вторичная среда состоит из 25 г моногидрата глюкозы (продаваемого С.Р.С. International под торговой маркой Cerelosc), 25 г муки семян хлопка (продается под торговой маркой "Pharmamedia"), 329,8 мг MgCl₂ 6H₂), 11,4 мг MnSO₄ H₂O, 3,2 мг FeSO₄ 7H₂O, 1,8 мг Na₂MoO₄ 2H₂), 367,6 мг CaCl₂ 2H₂O, 84,2 мг NaCl, 5,8 мг KCl, 0,1 мг ZnSO₄ 7H₂O, 0,1 мг CoCl₂ 6H₂O, 3,1 мг CuSO₄ 5H₂O и 0,5 мл силиконового пеногасителя (продается под торговой маркой SAG-471 Antifoam) на литр воды квалификации "прошедшая обратный осмос". Компоненты среды, в количестве для приготовления 200 л вторичной среды, гидратируют водой квалификации "прошедшая обратный осмос", до объема 190 л в 250-литровом ферментере. После составления среды pH доводят до 7,2 и затем среду стерилизуют 30 минут при 121^oC. Две колбы закрытой системы созревшей первичной культуры используют в качестве инокулята при посевном соотношении 0,3%. Вторичную культуру инкубируют при 22^oC и аэрации 125 slm и давлении 5 psig при 250 об/мин в течение 36 часов.

Производственный ферментативный процесс: Производственная среда состоит из 50 г свекольной мелиссы, 16 г рыбной муки (продается под торговой маркой Menhaden Select Fish Meal), 10 г дрожжевого экстракта (продается под торговой маркой Fidco), 329,8 мг MgCl₂ 6H₂), 11,4 мг MnSO₄ H₂O, 3,2 мг FeSO₄ 7H₂O, 1,8 мг Na₂MoO₄ 2H₂O, 367,6 мг CaCl₂ 2H₂O, 84,2 мг NaCl, 5,8 мг KCl, 0,1 м