Способ моделирования острого некроза сетчатки глаза герпетической этиологии

Способ моделирования острого некроза сетчатки глаза герпетической этиологии

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболевания в экспериментальной офтальмологии. Сущность способа заключается в том, что в стекловидное тело белых беспородных половозрелых мышей после инстилляции в конъюнктивальную полость 1-2 капель 0,25%-ного раствора дикаина вводят 0,01 мл клеточной суспензии, содержащей вирус простого герпеса штамм L₂. Инфекционный титр вируса составляет 10⁶-10⁷ ТЦД₅₀/0,1 мл. Исследуют сетчатую оболочку глаза на 3-7-е сутки после заражения. Применение способа позволяет создать модель, наиболее приближенную к данному заболеванию у человека, с высокой частотой воспроизведения и степенью тяжести морфологических изменений сетчатой оболочки.

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболевания в экспериментальной офтальмологии.

Одной из разновидностей герпетического хориоретинита, которая часто стала в последние годы наблюдаться, является синдром острого некроза сетчатки (ОНС), впервые описанный в Японии как увеит Кирисава - наиболее серьезное поражение глаза герпес-вирусной природы. По данным Binmenkranz M.S. и соавт. (1986), слепота при ОНС наступает в 64% случаев. Для него характерны острый некротический ретинит, ретинальный артериит, множественные мелкие кровоизлияния, диффузный увеит, витреит.

До сих пор усилия исследователей были направлены на создание экспериментальной модели другой, хорошо известной формы герпетического хориоретинита, который характеризуется как диффузный хориоретинит.

Известен способ моделирования герпетического поражения сетчатки путем заражения вирусом простого герпеса в переднюю камеру глаз экспериментальных животных. При этом преимущественно развивался герпетический кератоувеит (у 70-90% животных), хориоретинит обнаруживали лишь в небольшом количестве случаев, причем характер поражения сетчатки не совпадал с таковым описанием, представленным в клинике герпетического ОНС. В сетчатой оболочке глаз появлялась диффузная инфильтрация лимфоидного характера в слое нервных волокон и ганглиозном слое, а также периваскулярно. Сосуды сетчатой оболочки во внутренних слоях расширены, в просветах имеются форменные элементы типа плазмацитов и сегментоядерных нейтрофилов, вокруг сосудов отмечали периваскулиты. Имелись лишь единичные крупные ретроретинальные кровоизлияния. Участки некроза и многочисленные мелкие кровоизлияния, характерные для ОНС, не наблюдались, не наступала и тракционная отслойка сетчатки, стекловидное тело в воспалительный процесс не вовлекалось (В.Б.Мальханов. Офтальмогерпес: клиника, диагностика, лечение, Уфа, 1994).

Известен также способ моделирования герпетического поражения сетчатки путем внутримозгового введения вируса простого герпеса новорожденным крысам и мышам. Однако частота поражения сетчатой оболочки была низкой, изменения ее выражались в развитой инфильтрации лимфоцитами, также отмечали развитие переднего увеита и задней кортикальной катаракты, не характерных для ОНС. Не наблюдали витреита, кровоизлияний, свойственных для ОНС (Percy D.H., Gabil K. A. et al. Experimental type 2 herpes simplex ophthalmitis in the newborn rat, 1980; Pieffer R. L., Dekker C.D., Siegel F.L. Ocular lesions in mice folowing intracerebral injection of herpes simplex virus type 1, 1983).

Наиболее близким по технической сущности является способ экспериментального моделирования герпетических поражений сетчатки, отдаленно напоминающей ОНС, который воспроизводится путем введения вируса простого герпеса в вену экспериментальных животных (Sery T.W., Foster L. Viremia induction of herpes simplex uveits // Ophtalmic Research. - 1977. - Vol. 9. - N 3. - P. 171-181). Однако авторы наблюдали преимущественно развитие увеита, и лишь у небольшого числа животных имелись фокусы некроза сетчатки, расположенные вокруг кровеносных сосудов, внутриядерные включения в эндотелиальных клетках и единичные участки крупных ретинальных кровоизлияний. Это обусловлено тем, что данный путь введения вируса простого герпеса существенно снижает инфекционную дозу вируса, делает ее минимальной для глаза, создает условия для преимущественного поражения сосудистой оболочки глаза, не вызывая при этом изменений, характерных для ОНС.

Нами была поставлена задача создать модель острого некроза сетчатки герпетической этиологии с высокой частотой его воспроизведения, наиболее приближенной к указанному заболеванию у человека.

Для решения поставленной задачи предложен способ, заключающийся в заражении экспериментальных животных вирусом простого герпеса, для чего в стекловидное тело белых беспородных половозрелых мышей вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей вирус простого герпеса штамм L₂, инфекционный титр которого составляет 10⁶ - 10⁷ ТЦД₅₀/0,1 мл, и исследуют сетчатую оболочку глаза на 3-5-е сутки после заражения.

С помощью эксперимента было установлено, что при введении вируса простого герпеса в стекловидное тело в отличие от других способов у животных возникают изменения, характерные для ОНС герпетической этиологии. Применение доз вируса менее 10⁶ ТЦД₅₀/0,1 мл не вызывает развития герпетического ОНС. В интервале от 3 до 7 суток после заражения вирусом простого герпеса частоту воспроизведения острого некроза сетчатки, а также степень тяжести морфологических изменений, характерных для ОНС, не обнаруживали, а при дальнейшем развитии, далее 7-и суток, большое количество животных гибло от энцефалита.

Способ осуществляется следующим образом. В стекловидное тело белых беспородных половозрелых мышей после инстилляции в конъюнктивальную полость 1-2 капель 0,25%-ного раствора дикаина вводят вирус простого герпеса штамм L₂, инфекционный титр которого составляет 10⁶ - 10⁷ ТЦД₅₀/0,1 мл, и исследуют сетчатую оболочку глаза на 3-7-е сутки после заражения.

Пример 1. В стекловидное тело белых беспородных половозрелых мышей после инстилляции в конъюнктивальную полость 1-2 капель 0,25%-ного раствора дикаина вводят 0,01 мл культуральной жидкости вируса простого герпеса штамм L₂, инфекционный титр которого 10⁶ ТЦД₅₀/0,1 мл. На 3-и сутки развития инфекции степень ее тяжести составила 2,80,3 балла. Поражалось 100% животных. При гистологическом исследовании энуклеированных глаз наблюдали преимущественно развитие витреита и некротического хориоретинита. Так, в стекловидном теле преретинально находили инфильтрат. В сетчатой оболочке отмечали дезорганизацию слоев, выраженные деструктивные изменения, отек в наружном и внутреннем ядерных слоях, очаговые инфильтраты из лимфоцитарных элементов и нейтрофильных лейкоцитов, расположенных периваскулярно, многочисленные мелкие очаговые кровоизлияния во внутреннем ядерном слое. На отдельных участках наблюдали некроз клеточных элементов сетчатки во внутреннем ядерном и ганглиозном слоях. Гибели животных от энцефалита не наблюдали.

Пример 2. В стекловидное тело белых беспородных половозрелых мышей после инстилляции в конъюнктивальную полость 1-2 капель 0,25%-ного раствора дикаина вводят 0,01 мл культуральной жидкости вируса простого герпеса штамм L₂, инфекционный титр которого составляет 10⁷ ТЦД₅₀/0,1 мл. На 7-е сутки развития инфекции степень тяжести ее составила 2,70,2 балла. Сетчатая оболочка поражалась у 94% животных. При гистологических исследованиях энуклеированных глаз в сетчатой оболочке находили морфологические изменения, характерные для ОНС герпетической этиологии. Наблюдали массивную экссудацию в экваториальной зоне, значительную инфильтрацию воспалительных клеток в стекловидном теле. В сетчатой оболочке отмечали дезорганизацию слоев, выраженные деструктивные изменения, отек в наружном и внутреннем ядерных слоях, очаговые инфильтраты из лимфоцитарных элементов и нейтрофильных лейкоцитов, располагающихся периваскулярно, многочисленные мелкие очаговые кровоизлияния во внутреннем ядерном слое. На отдельных участках наблюдали некроз клеточных элементов сетчатки во внутреннем ядерном и ганглиозном слоях. Гибели животных от энцефалита не наблюдали.

Пример 3. В стекловидное тело белых беспородных половозрелых мышей после инстилляции в конъюнктивальную полость 1-2 капель 0,25%-ного раствора дикаина вводят 0,01 мл культуральной жидкости вируса простого герпеса штамм L₂, инфекционный титр которого составляет 10⁶ ТЦД₅₀/0,1 мл. На 8-е сутки развития инфекции поражалось 100% животных. Степень тяжести поражения сетчатки была невысокой и составляла 1,30,3 балла. При гистологических исследованиях энуклеированных глаз находили морфологические изменения, характерные для ОНС герпетической этиологии и описанные в примерах 1 и 2. Однако в эти сроки от энцефалита погибало 75% животных.

Пример 4. В стекловидное тело белых беспородных половозрелых мышей после инстилляции в конъюнктивальную полость 1-2 капель 0,25%-ного раствора дикаина вводят 0,01 мл культуральной жидкости вируса простого герпеса штамм L₂, инфекционный титр которого составляет 10⁴ ТЦД₅₀/0,1 мл. Через 2-е суток после заражения проводят гистологические исследования энуклеированных глаз. Изменений, характерных для ОНС герпетической этиологии, не обнаружили.

Пример 5. В переднюю камеру обоих глаз половозрелых животных - кроликов, птиц (петухи) и морских свинок вводят 0,01 мл культуральной жидкости, содержащей вирус герпеса штамм L₂, инфекционный титр которого составляет 10⁶ ТЦД₅₀/0,1 мл. В динамике развития герпетической инфекции на 1, 2, 3 и 4-й неделях проводят гистологические исследования сетчатой оболочки энуклеированных глаз. У кроликов и морских свинок на 1-й неделе наблюдали поражение сетчатой оболочки у небольшого числа животных (2-6% случаев). Начиная со 2-й недели поражений сетчатки не наблюдали. У птиц сетчатая оболочка вообще не поражалась.

Таким образом, предложенный нами способ моделирования острого некроза сетчатки герпетической этиологии позволяет создать модель, наиболее приближенную к данному заболеванию у человека. Кроме того, в результате применения предложенных доз вируса простого герпеса, способа его введения и сроков герпетической инфекции частота воспроизведения ОНС была максимальной и составила 94-100%, а также степень тяжести морфологических изменений сетчатой оболочки была максимальной и составила в баллах 2,8-2,7, причем гибели животных от энцефалита не наблюдалось.

Формула изобретения

Способ моделирования острого некроза сетчатки глаза герпетической этиологии, заключающийся в заражении экспериментальных животных вирусом простого герпеса, отличающийся тем, что в стекловидное тело белых беспородных половозрелых мышей вводят 0,01 мл клеточной суспензии, содержащей вирус простого герпеса штамм L₂, инфекционный титр которого составляет 10⁶ - 10⁷ ТЦД₅₀/0,1 мл и исследуют сетчатую оболочку на 3 - 7-е сутки после заражения.