Производные n-фенил-2-пиримидинамина, способ их получения, фармацевтическая композиция на их основе и способ ингибирования (лечения) опухоли

Производные n-фенил-2-пиримидинамина, способ их получения, фармацевтическая композиция на их основе и способ ингибирования (лечения) опухоли

Реферат

 

Производные N-фенил-2-пиримидинамина формулы I, где R₀ - водород, галоген, низший алкокси или низший алкил; R₁ -N-аминоалкилкарбамоил, N- гидроксиалкилкарбамоил, гидразино, циклогексиламино, возможно замещенный амино, пиперазинил, морфолинил или алкиламино (другие обозначения см. в п. 1 формулы изобретения), ингибируют протеинкиназу с высокой степенью избирательности. 5 с. и 10 з.п. ф-лы, 1 табл.

Настоящее изобретение относится к производным N-фенил-2- пиримидинамина, к способам их получения, к фармацевтической композиции, содержащей эти соединения, и к их использованию при получении фармацевтических композиций для терапевтического лечения теплокровных животных, а также к способу ингибирования (лечения) опухоли теплокровных животных, включая человека.

Настоящее изобретение относится к производным N-фенил-2- пиримидинамина формулы I где R₀ обозначает водород, галоген, низший алкокси или низший алкил; R₁ обозначает а) N-aминo(низший)aлкилкapбaмoил, б) N-гидрокси(низший)алкилкарбамоил, в) гидразино, г) циклогексиламино, который не замещен или замещен амино, д) пиперазинил, который не замещен или замещен амино(низшим)алкилом, е) морфолинил, или ж) низший алкиламино, который замещен морфолинилом, гидрокси (низшим) алкиламино, имидазолилом, гуанидилом, амино, низшим алканоиламино, низшим алкиламинокарбониламино, амидино, карбокси, низшим алкоксикарбонилом, карбамоилом, N-гидроксикарбамоилом, гидрокси, низшим алкокси, дигидроксифосфорилокси, пиперазинилом, низшим алканоилпиперазинилом, пролиламидо или радикалом формулы H₂N-CH(R)-C(=O)-NH-, где R означает водород, C₁-C₄-алкил, бензил, гидроксиметил или 1-гидроксиэтил; и R₂ означает C₁-C₆-алкил, C₁-C₃-алкокси, хлор, бром, иод, трифторметил, гидрокси, карбокси, карбоксиметокси или радикал одной из формул: -CO₂R₃, -C(= O)-NH-(CH₂)_n-R₄^a и C(= O)-NH-(CH₂)_n-N(R₃)-R₄, где R₃ и R₄ каждый независимо от другого обозначает C₁-C₃-алкил, R₄^a обозначает гидрокси, амино или имидазолил; n равно 2 или 3; или их солям.

Когда R₁ обозначает ж) низший алкиламино, то он в качестве заместителя также может содержать ди(низший) алкиламиноциклогексил, циано, формилпиперазинил.

Кроме вышеуказанных значений для R в радикале формулы H₂N-CH(R)-C(=O)NH, R дополнительно может означать меркаптометил, 2-метилтиоэтил, индол-3-ил-метил, фенилметил, 4-гидроксифенилметил, карбамоилметил, 2-карбамоилэтил, карбоксиметил, 2-карбоксиэтил, 4-аминобутил, 3-гуанидилпропил или 1Н-имидазол-4-ил-метил.

R₂ дополнительно может означать фенил, амино, моно(C₁-C₃-алкил)амино, ди(C₁-C₃-алкил)амино, C₂-C₄-алканоил, пропенилокси, этоксикарбонилметокси, сульфаниламидо, N,N-ди-C₁-C₃-алкил)-сульфаниламидо, N-метилпиперазинил, пиперидинил, 1Н-имидазол-1-ил, 1Н-триазол-1-ил, 1Н-бензимидазол-2-ил, 1-нафтил, циклопентил, 3,4- диметилбензил или радикал одной из формул: -NH-С(= O)-R₃, -N(R₃)-C(= O)-R₄, -O-(CH₂)_n-N(R₃)-R₄, -CH(CH₃)-NH-CHO, -C(CH₃)= N-OH, -C(CH₃)=N-O-CH₃, -С(CH₃)-NH₂ -NH-CH₂-C(=O)-N(R₃)-R₄, где R₃ и R₄ каждый независимо от другого обозначает C₁-C₃-алкил, R₄^a обозначает гидрокси, амино или имидазолил, X обозначает водород или серу, m равно 1, 2 или 3, n равно 2 или 3, R₅ обозначает водород, C₁-C₃-алкил, C₁-C₃-алкокси, хлор, бром, иод или трифторметил, R₆ обозначает 1Н-имидазол-1-ил или морфолинил и R₇ обозначает C₁-C₃-алкил или обозначает фенил, который не замещен или моно-замещен C₁-C₃-алкилом, галогеном или трифторметилом.

Галоген R₀ означает фтор, бром, иод или предпочтительно хлор.

Низший алкокси R₀ означает предпочтительно метокси.

Низший алкил R₀ означает предпочтительно метил.

Амино(низший)алкил в радикале R₁ означает предпочтительно - амино-C₂-C₃-алкил.

Гидрокси (низший) алкил в радикале R₁ означает предпочтительно -гидрокси -C₂-C₃-алкил.

Циклогексиламино R₁, замещенный амино, означает предпочтительно 4-аминоциклогексиламино. Ди(низший) алкиламиноциклогексил как часть замещенного низшего алкила радикала R₁ означает предпочтительно 4-ди(низший)алкиламиноциклогексил, предпочтительно 4-диметиламиноциклогексил.

Пиперазинил R₁ означает предпочтительно 1-пиперазинил. Пиперазинил R₁, замещенный амино(низшим)алкилом, означает предпочтительно 4-(2-аминоэтил)-пиперазин-1-ил.

Морфолинил R₁ и морфолинил в радикале R₁ означает предпочтительно 4-морфолинил, где свободная валентность простирается от азота. Низший алкиламино R₁, замещенный морфолинилом, означает предпочтительно 2-морфолин-4-ил-этиламино.

Гидрокси(низший)алкиламино в радикале R₁ означает предпочтительно 2-гидроксиэтиламино. Низший алкиламино, замещенный гидрокси(низшим)алкиламино, означает предпочтительно 3-(2-гидроксиэтиламино)-проп-1-иламино.

Имидазолил R₄^a в радикале R₂ означает предпочтительно 1Н-имидазол-4-ил.

Низший алканоиламино в радикале R₁ означает предпочтительно ацетиламино.

Низший алкиламинокарбониламино в радикале R₁ означает предпочтительно метиламинокарбониламино.

Ди(низший) алкиламино в радикале R₁ означает предпочтительно диметиламино.

Формилпиперазинил в радикале R₁ означает предпочтительно 4-формилпиперазинил.

Низший алкиламино R₁, замещенный циано, имидазолилом, гуанидилом, амино, низшим алканоиламино, низшим алкиламинокарбониламино, амидино, ди(низшим)алкиламиноциклогексилом, карбокси, низшим алкоксикарбонилом, карбамоилом, N-гидроксикарбамоилом, гидрокси, низшим алкокси, дигидроксифосфорилокси, пиперазинилом, низшим алканоилпиперазинилом, формилпиперазинилом, пролиламидо или радикалом формулы H₂N-CH(R)-C(=O)-NH-, означает предпочтительно ди- или триметиламино, замещенный этими заместителями, причем заместители предпочтительно находятся в - положении. Низший алкил R₁, замещенный гидрокси, также может быть предпочтительно 2-гидроксипропилом.

Радикал формулы H₂N-CH(R)-C(=O), где R имеет вышеприведенные значения, предпочтительно означает ацильный радикал, любой из числа следующих аминокислот, которые регулярно встречаются в белках: глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, фенилаланин, серин, треонин, цистеин, метионин, триптофан, тирозин, аспарагин, глутамин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, лизин, аргинин и гистидин, особенно в их встречающейся в природе конфигурации, предпочтительно (L)-конфигурации.

В пределах объема настоящего текста термин "низшие" означает радикалы, имеющие и включающие до 7, предпочтительно до 4 атомов углерода.

Если не указано что-либо иное, то низший алкил означает предпочтительно метил или этил.

Соединения формулы I могут образовывать кислые аддитивные соли, например, с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, серная кислота или фосфорная кислота, или с пригодными органическими карбоновыми или сульфоновыми кислотами, например, алифатическими моно- и дикарбоновыми кислотами, такими как трифторуксусная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, янтарная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, гидроксималеиновая кислота, яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота, щавелевая кислота, или аминокислотами, такими, как аргинин или лизин, ароматическими карбоновыми кислотами, такими, как бензойная кислота, 2-феноксибензойная кислота, 2-ацетоксибензойная кислота, салициловая кислота, 4-аминосалициловая кислота, ароматическо-алифатическими карбоновыми кислотами, такими как миндальная кислота или коричная кислота, гетероароматическими карбоновыми кислотами, такими как никотиновая кислота или изоникотиновая кислота, алифатическими сульфокислотами, такими как метан-, этан- или 2-гидроксиэтансульфокислота, либо ароматическими сульфокислотами, например, бензол-, п-толуол- или нафталин-2-сульфокислота. Могут быть образованы моно-, ди- или (если присутствуют в радикале R₁ другие основные группы, такие как амино- или гуанидиногруппы) поликислотные аддитивные соли.

Соединения формулы I, имеющие кислотные группы, например, свободную карбоксигруппу в радикале R₁ могут образовывать соли металлов или аммония, такие как соли щелочных металлов или щелочноземельных металлов, например, соли натрия, калия, магния или кальция, либо соли аммония с аммиаком или пригодными органическими аминами, такими как третичные моноамины, например, триэтиламином или три(2-гидроксиэтил)амином, либо гетероциклическими основаниями, например, N-этилпиперидином или N,N'-диметилпиперазином.

Соединения формулы I, которые обладают как кислотными, так и основными группами, могут образовывать внутренние соли.

С целью выделения или очистки, а также в случае использования соединений формулы I в качестве промежуточных также можно использовать фармацевтически неприемлемые соли. Терапевтически используются только фармацевтически приемлемые нетоксичные соли, и они поэтому являются предпочтительными.

В свете тесного отношения между новыми соединениями в свободной форме и в форме их солей, включая также соли, которые могут быть использованы в качестве промежуточных, например, при очистке новых соединений или с целью идентификации этих соединений, выше и ниже в тексте любую отсылку на свободные соединения следует понимать как включающую и соответствующие соли, где это подходит и целесообразно.

Соединения формулы I проявляют ценные фармакологические свойства: например, они ингибируют протеинкиназу С с высокой степенью избирательности. Фосфолипид- и кальций-зависимая протеинкиназа С встречаются в клетках в целом ряде форм и участвуют в различных фундаментальных процессах, таких как передача, пролиферация и дифференциация сигналов, а также высвобождение гормонов и нейропереносчиков. Активация этого фермента осуществляется либо рецептор-опосредованным гидролизом фосфолипидов клеточной мембраны, либо прямым взаимодействием с определенными опухольпромотирующими активными веществами. Чувствительность клетки к рецептор-опосредованной передаче сигналов может подвергаться существенному влиянию путем модификации активности протеинкиназы С (в качестве переносчика сигналов). Соединения, которые способны влиять на активность протеинкиназы С, могут быть использованы в качестве ингибирующих опухоли, противовоспалительных, иммуномодулирующих и антибактериальных активных компонентов и могут даже иметь ценность в качестве агентов против атеросклероза и нарушений сердечно-сосудистой системы и центральной нервной системы.

Ранее протеинкиназу С свиного мозга, очищенную в соответствии с методикой, описанной T.Uchida и C.R.Filburn в J. Biol. Chem. 259, 12311-4 (1984), использовали с целью определения ингибирующего действия в отношении протеинкиназы С, а ингибирующее действие относительно протеинкиназы С определяли в соответствии с методикой D.Fabbro и др., Arch. Biochem. Biophys. 239, 102-111 (1985).

Ранее используемая протеинкиназа С свиного мозга представляла собой смесь различных субтипов (изотипов) протеинкиназы С. Если чистые рекомбинантные изотипы используют вместо протеинкиназы С свиного мозга в вышеупомянутом исследовании, то обнаруживается, что соединения формулы I ингибируют "традиционный" изотип , тогда как другие "традиционные" изотипы -1, -2 и , а особенно "нетрадиционные" изотипы , и , a также "атипичная" изоформа в основном ингибируются в меньшей степени, а в ряде случаев вообще с трудом.

Изотипы рекомбинантной протеинкиназы (РКС) клонируют, экспрессируют и очищают следующим образом.

Получение различных белков с помощью бакуловируса и их клонирование и выделение из клеток насекомых Sf9 осуществляют, как описано в работе M.D. Summers и G.E.Smith "A manual method for baculovirus vectors and insect cell culture procedure", Texas Agricul. Exptl. Station Bull. (1987), 1555. Конструирование и выделение рекомбинантных вирусов для экспрессии РКС- (бычьей), PKC- 1 (человеческой), РКС 2 (человеческой) и РКС- (человеческого/бычьего гибрида) в клетках Sf9 осуществляют способом, описанным Stable и др. [S.Stable, M.Liyanage и D.Frith, "Expression of protein kinase С isozymes in insect cells and isolation of recombinant proteins", Meth. Neurosc. (1993)]. Получение изотипов РКС в клетках Sf9 осуществляют в соответствии с методом, описанным Stable и др. (см. выше), а очистку ферментов проводят в соответствии с методом, который описан в публикации McGlynn и др. [E.McGlynn, J.Liebetanz, S.Reutener, J.Wood, N.B.Lydon, H.Hofstetter, M. Vanek, T.Meyer и D.Fabbro "Expression and partial characterization of rat protein kinase C- and protein kinase C- in insect cells using recombinant baculovirus", J.Cell. Biochem. 49, 239-250 (1992)]. Для получения рекомбинантной РКС- (крысиной), РКС (крысиной), РКС- (крысиной) и РКС- (мышиной), а также для ее экспрессии и чистки используют методику, которая описана Liyanage и др. ["Protein kinase С group В members РКС- ,-,- and РКС- : Comparison of properties of recombinant proteins in vitro and in vivo", Biochem. J. 283, 781-787 (1992)] и McGlynn и др., соответственно (см. выше), при этом используют дополнительный признак, который состоит в том, что вектор переноса рАс360 используют для экспрессии PKC- [см. V.Luckow и M.D.Summers, "Trends in the development of baculovirus expression", Biotechnology 6, 47-55 (1988)].

Измерение активности изотипов рекомбинантных РКС, полученных вышеприведенным способом, осуществляют в отсутствие липида и кальция (софакторов). Протаминсульфат, фосфорилированный в отсутствие софакторов, используют в качестве субстрата. Активность ферментов отражает перенос ³²P из -[³²P]-АТР к протаминсульфату. Протаминсульфат представляет собой смесь полипептидов, каждый из которых содержит четыре С-концевых остатка аргинина. Инкорпорацию фосфата измеряют при следующих условиях: 100 мкл реакционной смеси содержат в конечной концентрации 20 мМ TRIS-HCl, pH 7,4, 10 мМ Mg[NO₃]₂, 0,5 мг/мл протаминсульфата, 10 мкМ АТР (0,1 мккуб.дюйм -[³²P]-АТР; 10 куб.дюйм/моль; Amersham, Little Chalfont, United Kingdom), различные концентрации ингибирующих соединений и 0,5-2,5 единицы (единица представляет собой количество фермента, которое за 1 минуту и на миллиграмм белка переносит 1 наномоль ³²P из вышеупомянутой -[³²P] -АТР к гистону H1 [Sigma, тип V-S] ферментов. Реакцию начинают путем прибавления ферментов и переноса при температуре 32^oC. Время реакции составляет 20 минут. Затем реакцию останавливают капанием аликвот 50 мкл на хроматографическую бумагу Р81 (Whatman, Maidstone, United Kingdom). После удаления несвязанного фермента -[³²P]-АТР и нуклеотидных фрагментов с помощью методик промывки в соответствии с методом, описанным J. J. Witt и R.Roskoski, "Rapid protein kinase assay using phosphocellulose-paper absorption", Anal. Biochem. 66, 253-258 (1975), фосфорилирование субстрата определяют сцинцилляционным измерением. В данном испытании соединения формулы I ингибируют -изотип протеинкиназы С (РКС) при IC₅₀, равной всего от 0,1 до 5,0 мкмоль/-литр, в основном приблизительно от 0,1 до 1,0 мкмоль/литр. Напротив, другие изотипы РКС в основном ингибируются только при значительно более высоких концентрациях (то есть при концентрациях, более чем в 300 раз выше данных).

Как можно ожидать только на основании вышеприведенного ингибирующего действия по протеинкиназе С, соединения формулы I проявляют антипролиферативные свойства, которые могут быть продемонстрированы непосредственно в другом испытании, описываемом ниже, при котором определяют ингибирующее действие соединений формулы I на рост человеческих клеток Т24 карциномы мочевого пузыря. Эти клетки инкубируют в минимальной питательной среде Игла, в которую добавляют 5% (в отношении объемов) фетальной телячьей сыворотки, в увлажненном инкубаторе при температуре 37^oC и с 5% по объему CO₂ в воздухе. Клетки карциномы (1000-15000) сажают в 96- луночные титрационные микропланшеты и инкубируют в течение ночи при вышеописанных условиях. Испытуемое соединение добавляют при серийных разведениях на первый день. Планшеты инкубируют в течение 5 дней при вышеописанных условиях. В течение этого периода контрольные культуры подвергаются по меньшей мере четырем делениям клеток. После инкубации клетки фиксируют с помощью 3,3% (в отношении массы к объему) водного раствора глутаральдегида, промывают водой и окрашивают с помощью 0,05% (в отношении массы к объему) водного раствора метиленовой синьки. После промывки краситель элюируют с помощью 3% (в отношении массы к объему) водного раствора хлористоводородной кислоты. Оптическую кислотность (OD) на каждую лунку, которая прямо пропорциональна количеству клеток, затем измеряют при 665 нм с использованием фотометра (Titertek multiscan). Значения IC₅₀ вычисляют с помощью системы ЭВМ с использованием формулы Значения IC₅₀ определяют как концентрацию активного компонента, при которой количество клеток на лунку к концу периода инкубации составляет только 50% от количества клеток в контрольных культурах. В случае использования соединений формулы I значения IC₅₀ составляют приблизительно от 0,01 до 10 мкмоль/литр, в основном приблизительно от 0,01 до 1 мкмоль/литр.

Противоопухолевую активность соединений формулы I также можно определить in vivo.

Безволосых мышей женского пола Balb/c с подкожно трансплантированными опухолями Т24 человеческого мочевого пузыря используют для определения противоопухолевой активности. На 0 день животным под пероральным наркозом вводят приблизительно 25 мг твердой опухоли под кожу в левый бок и маленькую иссеченную рану закрывают при помощи хирургических зажимов. На 6 день после трансплантации мышей разделяют хаотически на группы из 6 животных и начинают лечение. Лечение осуществляют в течение 15 дней с использованием перорального или внутрибрюшинного введения 1 раз в день соединения формулы I в растворе диметилсульфоксида/Tween 80/хлорида натрия при различных дозах. Опухоли измеряют дважды в неделю с помощью скользящего измерителя и вычисляют объем опухолей. В данном испытании пероральное или внутрибрюшинное введение соединения формулы I приводит к заметному уменьшению среднего объема опухолей по сравнению с необработанными контрольными животными.

На основании описанных свойств соединения формулы I могут быть использованы особенно в качестве ингибирующих опухоль активных компонентов, например, при лечении опухолей мочевого пузыря и кожи. Когда соединения формулы I используются при лечении рака в сочетании с другими химиотерапевтическими средствами, они препятствуют развитию резистентности (мультилекарственной резистентности) или устраняют уже существующую резистентность к другим химиотерапевтическим препаратам. Они также пригодны для других применений, упомянутых выше в отношении модуляторов протеинкиназы С, и могут быть особенно пригодны при лечении, связанном с ингибированием протеинкиназы С.

Некоторые из соединений формулы I также ингибируют активность тирозинкиназы рецептора фактора роста эпидермиса (EGF). Эта рецептор-специфическая ферментная активность играет ключевую роль в трансмиссии сигналов у целого ряда клеток млекопитающих, включая человеческие клетки, особенно эпителиальные клетки, клетки иммунной системы и клетки центральной и периферической нервной системы. В случае различных типов клеток EGF-индуцированная активация рецептор-ассоциированной тирозин-протеинкиназы (EGF-R-TPK) является предпосылкой для деления клеток и, следовательно, для пролиферации клеточной популяции. Прибавление EGF-рецептор-специфических ингибиторов тирозинкиназы, таким образом, ингибирует репликацию этих клеток.

Ингибирование EGF-рецептор-специфической тирозинпротеинкиназы (EGF-R-TPK) можно продемонстрировать, например, с использованием метода E.McGlynn и др. , Europ. J. Biochem. 207, 265-275 (1992). Соединения в соответствии с изобретением ингибируют ферментную активность на 50% (IC₅₀), например, при концентрации от 0,1 до 10 мкМ.

Соединения формулы I, которые ингибируют активность тирозинкиназы рецептора фактора роста эпидермиса (EGF), могут быть использованы, например, при лечении доброкачественных или злокачественных опухолей. Они способны вызывать регрессию опухоли и препятствовать метастазированию и росту микрометастазов. Они могут быть использованы особенно в случае эпидермальной гиперпролиферации (псориаза), при лечении неоплазии эпителиального характера, например, мастокарциномы, и в случае лейкемии. Соединения также могут быть использованы при лечении нарушений иммунной системы и воспаления, если в данном случае вовлечены протеинкиназы. Кроме того, соединения формулы I могут быть использованы при лечении нарушений центральной и периферической нервной системы, если вовлечена сигнальная трансмиссия посредством протеинкиназ.

Соединения формулы I и их соли также ингибируют фермент р34^cdc2/циклин В^cdc13 киназу. Эта киназа регулирует, кроме других cdc2-родственных киназ, специфические фазы деления клеток, особенно переход G₁-фазы к S-фазе и, более предпочтительно, переход от G₂-фазы к М-фазе.

В хронологическом порядке цикл эукариотной клетки состоит из интерфазы и М-фазы. Интерфаза сопровождается повышением в размере клетки. В хронологическом порядке интерфаза состоит из G₁-фазы, S-фазы и G₂-фазы. В G₁-фазе (G = промежуток) в клетке происходят биосинтетические процессы. В S-фазе (синтетической фазе) ДНК удваивается. Затем клетка вступает в G₂-фазу, которая заканчивается с началом митоза.

В хронологическом порядке М-фаза частично состоит из деления клеточного ядра (митоза) и деления цитоплазмы (цитокинеза).

Вышеупомянутое ингибирование фермента 34^cdc2/циклин-В^cdc13 киназы может быть продемонстрировано при помощи следующего теста: 10 мкМ 1-метиладенина используют для индуцирования ооцитов морской звезды для вхождения в М-фазу. Ооциты затем замораживают в жидком азоте и хранят при температуре -80^oC. При необходимости ооциты гомогенизируют и центрифугируют, как описано в работе D.Arion и др., Cell 55, 371- 378 (1988) V. Railet и L. Meijer, Anticancer Res. II, 1581-1590 (1991). Для очистки р34^cdc2/циклин B^cdc13 киназы супернатант ооцитов добавляют к р9^CKShs-гранулам Сефарозы, полученным из рекомбинантного человеческого белка р9^CKShs, как это описано в работе L.Azzi и др., Eur. J. Biochem. 203, 353-360 (1992). Через 30 минут при температуре 4^oC с постоянным вращением гранулы тщательно промывают, после чего активную р34^cdc2 /циклин B^cdc13 киназу элюируют свободным белком p9^CKShs (3 мг/мл). Элюированную киназу исследуют с использованием гистона H1 в качестве субстрата, как описано в работе L.Meijer и др. , EMBO J. 8, 2275-2282 (1989) и EMBO J. 10, 1545-1554 (1991). В данном испытании соединения формулы 1 и их соли проявляют ингибирующую концентрацию IC₅₀ [мкмоль/литр], которая составляет приблизительно от 0,0005 до 2, а в большинстве случаев приблизительно от 0,001 до 0,4.

Это открытие также могло бы привести к предположению, что соединения формулы I и их соли могут быть использованы при лечении гиперпролиферативных нарушений, таких как опухоли и псориаз.

Соединения формулы I также ингибируют производство вирусов ВИЧ, как показано в нижеприведенном тесте, и могут быть использованы в качестве агентов против болезни иммунного дефицита (СПИД). Первоначальные симптомы, наблюдаемые после заражения ВИЧ у людей, сопровождаются клинически латентным периодом, который может длиться несколько лет. По истечении этого периода наступает стадия, известная как СПИД, которая обычно приводит к смерти. Латентный период обусловлен несколькими факторами: иммунным ответом, окклузией вирусов в лимфатических узлах, в которых зараженные клетки не совершают цикл вирусных клеток, и вот почему инфекционные вирусы не могут быть получены, а заражение не может распространяться. Эта стадия молекулярной латентности исследована с использованием клеточных моделей, таких как линия клеток АСН-2 [K. CIouse и др., J. Immunol. 142, 431 (1989] и линия клеток UI [Т.Folks и др., J.lmmunol. 140, 117 (1988)]. Эти клетки заражают вирусами ВИЧ-1, однако они имеют лишь малое содержание инфекционных вирусов. Если, однако, эти клетки стимулированы физиологически релевантными факторами, которые, как известно, изобилуют у пациентов со СПИДом, такими как фактор некроза опухоли, интерлейкин-6 и т.д., или химическими индукторами, такими как сложные форболовые диэфиры, например, 13-O-ацетил-12-O-н- тетрадеканоилфорболом, тогда происходит массовое производство вируса. Клетки АСН-2 и U1 являются характерными представителями двух разных семейств клеток, которые представляют собой мишени для заражения ВИЧ, а именно лимфоцитов и макрофагов.

До настоящего времени эффективное предотвращение прогрессии заражения ВИЧ к массовому появлению СПИДа не было возможно. Многие попытки предпринимались с целью предотвращения вирусной репликации после появления СПИД, то есть на стадии, когда вирусы продуцируются в массовом количестве. Напротив, соединения формулы I препятствуют клеточным процессам, которые приводят к активации латентно зараженных клеток ВИЧ, не мешая нормальным клеточным процессам, таким как деление клеток.

Если вышеупомянутые клетки U1 или АСН-2 использовать в качестве модели вирусной латентности, то можно показать, что производство вируса ВИЧ, индуцируемое 13-O-ацетил-12-n- тетрадеканоилфорболом или фактором-альфа некроза опухоли, эффективно ингибируется соединениями формулы I при концентрации приблизительно от 0,001 до 1 мкмоль/литр, например, при концентрации 0,03 мкмоль/литр.

Предпочтительными являются соединения формулы Ia где R₁ обозначает а) N-амино(низший)алкилкарбамоил, б) N-гидрокси(низший)алкилкарбамоил, в) гидразино, г) циклогексиламино, который не замещен или замещен амино, д) низший алкиламино, который замещен имидазолилом, гуанидином, амино, низшим алканоиламино, низшим алкиламинокарбониламино, амидино, карбокси, низшим алкоксикарбонилом, карбамоилом, N-гидроксикарбамоилом, гидрокси, низшим алкокси, дигидроксифосфорилокси, пиперазинилом, низшим алканоилпиперазинилом, пролиламидо или радикалом формулы H₂N-CH(R)-C(= O)-NH-, где R означает водород, C₁-C₄-алкил, бензил, гидроксиметил и 1-гидроксиэтил; и R₂ означает C₁-C₆-алкил, C₁-C₃-алкокси, хлор, бром, иод, трифторметил, гидрокси, карбокси, карбоксиметокси или радикал одной из формул: -CO₂R₃, -C(= O)-NH-(CH₂)_n-N(R₃)-R₄, где R₃ и R₄ каждый независимо от другого обозначает C₁-C₃-алкил; или их соли.

Предпочтительно группу составляют соединения формулы I, где R₀ обозначает водород, галоген, низший алкокси или низший алкил; R₁ обозначает а) N-амино (низший) алкилкарбамоил, б) N-гидрокси (низший)алкилкарбамоил, в) гидразино, г) пиперазинил, который не замещен или замещен амино(низшим)алкилом, д) морфолинил, или е) низший алкиламино, который замещен морфолинилом, гидрокси(низшим)алкиламино, имидазолилом, гуанидилом, амино, низшим алканоиламино, низшим алкиламино-карбониламино, амидино, карбокси, низшим алкоксикарбонилом, карбамоилом, N-гидроксикарбамоилом, гидрокси, дигидроксифосфорилокси, или радикалом формулы H₂N-CH(R)-C(=O)-NH-, где R означает водород, и R₂ означает хлор, трифторметил, карбокси, радикал формулы: -CO₂R₃, где R₃ обозначает C₁-C₃алкил, или радикал формулы -C(=O)-NH-(CH₂)_n-R₄^a, где n равно 2 или 3, и R₄^a обозначает гидрокси, амино или имидазолил, или их соли.

Другую предпочтительную группу составляют соединения формулы 1, где R₀ обозначает водород, R₁ обозначает а) N-амино(низший)алкилкарбамоил, б) N-гидрокси(низший)алкилкарбамоил, в) гидразино или г) низший алкиламино, который замещен имидазолилом, гуанидилом, амино, низшим алканоиламино, низшим алкиламинокарбониламино, амидино, карбокси, низшим алкоксикарбонилом, карбамоилом, N-гидроксикарбамоилом, гидрокси, дигидроксифосфорилокси, или радикалом формулы H₂N-CH(R)-C(=O)-NH-, где R означает водород, и R₂ означает хлор или трифторметил, или его соль.

Предпочтительны соединения формулы I, где R₀ означает водород, хлор, низший алкил или низший алкокси, R₁ означает N- - амино-C₂-C₃-алкил)-карбамоил, N- ( -гидрокси-C₂-C₃-алкил)-карбамоил, гидразино, 2-гидроксипропиламино или линейный C₂-C₃-алкиламино, который замещен в -положении морфолинилом, -гидрокси(низшим)алкиламино, имидазолилом, гуанидилом, амино, низшим алканоиламино, амидино, карбокси, низшим алкоксикарбонилом, карбамоилом, N-гидроксикарбамоилом, гидрокси или дигидроксифосфорилокси и R₂ означает хлор, трифторметил, карбокси, радикал формулы: -CO₂R₃, где R₃ обозначает C₁-C₃-алкил, или радикал формулы -C(=O)-NH-(CH₂)_n-R₄^a, где n равно 2 или 3, и R₄^a обозначает гидрокси, амино или имидазолил, или их соли.

Особенно предпочтительны соединения формулы I, где R₀ обозначает водород, R₁ обозначает N- aминo-C₂-C₃- aлкил)-каpбaмoил, N- -гидрокси-C₂-C₃-алкил)-карбамоил, гидразино, 2-гидроксипропиламино или линейный C₂-C₃-алкиламино, который замещен в -положении имидазолилом, гуанидилом, амино, низшим алканоиламино, амидино, карбокси, низшим алкоксикарбонилом, карбамоилом, N-гидроксикарбамоилом, гидрокси или дигидроксифосфорилокси и R₂ означает хлор или трифторметил, или их соли.

Особенно предпочтительную группу составляют соединения формулы 1, где R₀ обозначает водород, хлор, метил или метокси, R₁ обозначает N- -амино-C₂-C₃-алкил)-карбамоил, N- -гидрокси-C₂-C₃-алкил)-карбамоил, гидразино, 2-гидроксипропиламино или линейный C₂-C₃-алкиламино, который замещен в -положении 4-морфолинилом, -гидроксиэтиламино, 1H-имидазол-1-илом, 1H-имидазол-4-илом, гуанидилом, амино, ацетиламино, амидино, карбокси, этоксикарбонилом, карбамоилом, N-гидроксикарбамоилом, гидрокси или дигидроксифосфорилокси и R₂ означает хлор, трифторметил, карбокси, радикал формулы -CO₂R₃, где R₃ обозначает C₁-C₃-алкил, или радикал формулы -C(=O)-NH-(CH₂)_n-R₄^a, где n равно 2 или 3, и R₄^a обозначает гидрокси, амино или 1Н-имидазол-4-ил, или его соль.

Наиболее предпочтительно соединение, представляющее собой N-(3-хлорофенил)-4-[2-(3-гидроксипропиламино)-4-пиридил] -2- пиримидинамин или его фармацевтически приемлемую соль.

Предпочтительно также соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из N-(3-трифторметилфенил)-4-[2-(3-гидроксипропиламино)-4- пиридил] -2-пиримидинамина, N-(3-хлорофенил)-4-[2-(2-аминоэтиламино)-4-пиридил]-2- пиримидинамина, N-(3-трифторметилфенил)-4-[2-(2-аминоэтиламино)- 4-пиридил] -2-пиримидинамина, N-(3-хлорофенил)-4-[2-{ N-(2-аминоэтил)-аминокарбонил}-4- пиридил]-2-пиримидинамина, N-(3-хлорофенил)-4-[2-{ N-(2-гидроксиэтил)-аминокарбонил} - 4-пиридил]-2-пиримидинамина, N-(3-хлорофенил)-4-[2-(N-{ 3-гидроксипропил} -аминокарбонил)- 4-пиридил] -2-пиримидинамина, N-(3-хлорофенил)-4-[2-(N-{ 3-аминопроп-1-ил} - аминокарбонил)-4-пиридил] -2-пиримидинамина, N-(3-хлорофенил)-4-[2-(2-гидроксиэтиламино)-4-пиридил] -2- пиримидинамина, N-(3-карбоксифенил)-4-[2-(3-гидроксипропиламино)-4- пиридил]-2-пиримидинамина, N-(3-метоксикарбонилфенил)-4-[2-(3-гидроксипропиламино)- 4-пиридил]-2-пиримидинамина, N-(3-хлорофенил)-4-[2-(4-гидроксибутиламино)-4-пиридил] - 2-пиримидинамина, N-(3-хлорофенил)-4-{2-[2-(имидазол-4-ил)-этиламино]-4- пиридил}-2-пиримидинамина, N-(3-метилфенил)-4-[2-(3-гидроксипропиламино)-4-пиридил] -2-пиримидинамина, N-(3-хлорофенил)-4-[2-(5-гидроксипентиламино)-4-пиридил] -2-пиримидинамина, N-[3-{ N-(3-гидроксипропил)аминокарбонил} -фенил] -4-[2-(3- гидроксипропиламино)-4-пиридил]-2-пиримидинамина, N-[3-{ N-(3-аминопропил)аминокарбонил} -фенил]-4-[2-(3- гидроксипропиламино)-4-пиридил]-2-пиримидинамина, N-[3-{ N-(2-имидазол-4-ил-этил)аминокарбонил}-фенил]-4-[2-(3- гидроксипропиламино)-4-пиридил]-2-пиримидинамина, N-(3-хлоро-6-метилфенил)-4-[2-(3- гидроксипропиламино)-4-пиридил]-2-пиримидинамина, N-(3,6-дихлорофенил)-4-[2-(3-гидроксипропиламино)-4- пиридил]-2-пиримидинамина, N-(3-хлоро-6-метоксифенил)-4-[2-(3-гидроксипропиламино)- 4-пиридил]-2-пиримидинамина, N-(3-хлорофенил)-4-[2-(1-пиперазинил)-4-пиридил]-2-пиримидинамина, N-(3-хлорофенил)-4-(2-[2-{ 4-морфолинил} -этиламино]-4- пиридил)-2-пиримидинамина, N-(3-xлopoфeнил)-4-{ 2-[4-(2- аминоэтил)-пиперазин-1-ил)]-4-пиридил}-2-пиримидинамина, N-(3-xлopoфeнил)-4-{ 2-[3-(2-гидроксиэтиламино)-пропиламино] -4-пиридил} -2-пиримидинамина, и N-(3-хлорофенил)-4-[2-(4-морфолинил)-4-пиридил]-2- пиримидинамина, а также из их фармацевтически приемлемых солей.

Соединения формулы I и их соли получают в соответствии с методами, известными per se.

Способ в соответствии с настоящим изобретением для получения производного N-фенил-2-пиримидинамина формулы I заключается в том, что а) соединение формулы II где R₈ и R₉ независимо один от другого обозначают низший алкил и R₁ имеет вышеприведенное значение, причем функциональные группы, присутствующие в соединении формулы II, за исключением групп, участвующих в реакции, находятся при необходимости в защищенной форме, либо соль такого соединения подвергают взаимодействию с соединением формулы III где R₀ и R₂ имеют вышеприведенные значения, причем функциональные группы, присутствующие в соединении формулы III, за исключением группы гуанидино, участвующей в реакции, находятся при необходимости в защищенной форме, либо с солью такого соединения, и отщепляют любые защитные группы, и при желании полученное соединение формулы I превращают в его соль, либо полученную соль соединения формулы I превращают в свободное соединение.

б) для получения соединения формулы I, где R₁ имеет вышеприведенное значение в), г) или ж) и R₀ и R₂ каждый имеет любое одно из вышеприведенных значений, соединение формулы IV где Y обозначает уходящую группу и R₀ и R₂ имеют вышеприведенные значения, причем функциональные группы, присутствующие в соединении формулы IV, за исключением уходящей группы, участвующей в реакции, находятся при необходимости в защищенной форме, либо соль такого соединения подвергают взаимодействию с амином формулы H₂N-R₁₂ (V) где R₁₂ обозначает амино, либо незамещенный или замещенный аминогруппой циклогексил, либо низший алкил, который замещен морфолинилом, гидрокси(низшим)алкиламино, циано, имидазолилом, гуанидилом, амино, низшим алканоиламино, низшим алкиламинокарбониламино, амидино, ди(низшим)алкиламиноциклогексилом, карбокси, низшим алкоксикарбонилом, карбамоилом, N-гидроксикарбамоилом, гидрокси, низшим алкокси, дигидроксифосфорилокси, пиперазинилом, низшим алканоилпиперазинилом, формилпиперазинилом, пролиламидо или радикалом формулы H₂N-CH(R)-C(=O)-NH-, где R означает водород, C₁-C₄-алкил, бензил, гидроксиметил, 1-гидроксиэтил, меркаптометил, 2-метилтиоэтил, индол-3-ил-метил, фенилметил, 4-гидроксифенилметил, карбамоилметил, 2-ка