Способ получения трансплантата "био-матрикс имплант i" для стоматологии

Способ получения трансплантата "био-матрикс имплант i" для стоматологии

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к стоматологии. Способ получения трансплантата для стоматологии, включающей предварительное распиливание кости на блоки размером 3 х 2 х 1 см, получение сквозных отверстий размером от 0,1 мм до 10 мм в каждой плоскости блока, не менее одного отверстия на 1 см², блоки отмывают, обрабатывают смесью ферментов, состоящей от 0,1 - 1% раствора трипсина и 0,125 - 0,3% раствора папаина, взятых в соотношении 1 : 1, затем в смеси 1% раствора перекиси водорода и 1% раствора этанола, взятых в соотношении 1 : 1, отмывают и заполняют каждое отверстие блока материалом, состоящим из солей двух и/или трехвалентных металлов, коллагена, алкилпроизводных, или карбоксилалкилпроизводных, или гидроксиалкилпроизводных целлюлозы, сульфатированных гликозаминогликанов и воды, после чего костный блок замораживают, лиофилизируют и стерилизуют облучением дозой 2,5 Мград. Техническим результатом является повышение степени очистки кости от фибриллярного белка коллагена гликопротеинов и гликолипидов, определяющих антигенность ткани.

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к стоматологии, и может быть использовано в хирургической стоматологии при дентальной имплантации, в челюстно-лицевой хирургии, в ортопедии и травматологии.

Известен способ получения костного трансплантата путем обработки кости ферментом и растворами (Новое в стоматологии. N6, 97 (56) стр. 125 Заявка N1724206.).

Недостатком указанного способа является то, что он не приводит к очищению кости от белков, гликопротеинов и коллагенов.

Техническим результатом является повышение степени очистки кости от фибриллярного белка-коллагена и гликопротеинов и гликолипидов, определяющих антигенность ткани.

Технический результат достигается тем, что в способе получения трансплантата для стоматологии, включающем обработку кости ферментами, согласно изобретению предварительно кость распиливают на блоки размером 3х2х1 см, делают сквозные отверстия размером от 0,1 мм до 10 мм в каждой плоскости блока, не менее одного отверстия на см², блоки отмывают в 0,9% растворе натрия хлорида в течение 5-10 часов, обрабатывают сначала смесью ферментов, состоящей из 0,1 - 1% раствора трипсина и 0,125 - 0,3% раствора папаина, взятых в соотношении 1:1 в течение 10 - 12 часов при температуре 65^oC и pH 6,5, а затем в смеси 1% раствора перекиси водорода и 1% раствора этанола, взятых в соотношении 1:1 в течение 10 - 12 часов, отмывают дистиллированной водой в течение 10 - 12 часов и заполняют каждое отверстие блока материалом, состоящим из солей двух и/или трехвалентных металлов, коллагена, алкилпроизводных или карбоксилалкил-производных или гидроксиалкилпроизводных целлюлозы, сульфатированных гликозаминогликанов и воды при следующем соотношении компонентов, мас. %: соли двух и/или трехвалентных металлов - 0,5 - 95 коллаген - 0,5-95 алкилпроизводные или карбоксилалкилпроизводные или гидроксиалкил-производные целлюлозы - 0,5 - 15 сульфатированные гликозаминогликаны - 0,05-2 вода очищенная - остальное, после чего костный блок замораживают, лиофилизируют и стерилизуют облучением дозой 2,5 Мград.

Введение в обработку кости смеси ферментов трипсина и папаина в указанных концентрациях позволяет провести полный гидролиз белков кости. (Трипсин, папаин-протеолитические ферменты гидролизируют белки животного происхождения. Диксон. М. Уэбб. Э. Ферменты. Т.1М. Мир. 1982.). При этом концентрация трипсина находится в пределах 0,1 -1%, поскольку при концентрации менее 0,1% он работает неэффективно (гидролизует менее 30% белков, входящих в состав костной ткани), а при концентрации выше 1%, распад белка не увеличивается. Для полноты гидролитического распада в способ введен папаин, при этом концентрация папаина лежит в пределах от 0,125 до 0,3%. При концентрации папаина ниже 0,125% гидролизуются не все структурные белки, а при концентрации папаина выше 0,3% гидролиз не изменяется. Ферменты взяты в соотношении 1:1, что установлено экспериментально. Гидролиз идет при температуре 65^oC и pH 6,5, в течение 10-12 часов, поскольку эти условия являются оптимальными для действия ферментов.

Затем обработку костных блоков проводят в 1% растворе перекиси водорода и 1% растворе этанола, взятых в соотношении 1:1 в течение 10-12 часов, поскольку это позволяет максимально освободить ткань от липопротеинов и протеогликанов. При этом оптимальным соотношением является 1:1, так как выход указанных веществ является максимальным.

Далее костные блоки отмывают дистиллированной водой, для освобождения ткани от реагентов, как правило, время отмывки равно времени обработки в смеси перекиси и этанола.

После этого заполняют каждое отверстие блока материалом, состоящим из солей двух и/или трехвалентных металлов, коллагена, алкилпроизводных или карбоксилалкилпроизводных или гидроксиалкилпроизводных целлюлозы, сульфатированных гликозаминогликанов и воды при следующем соотношении компонентов, мас.%: соли двух и/или трехвалентных металлов - 0,5 - 95 коллаген - 0,5 - 95 алкилпроизводные или карбоксилалкилпроизводные или гидроксиалкилпроизводные целлюлозы - 0,5-15 сульфатированные гликозаминогликаны - 0,05 - 2 вода очищенная - остальное, после чего костный блок замораживают, лиофилизируют и стерилизуют облучением дозой 2,5 Мград.

Материал для заполнения костных блоков приготовлен по способу, указанному в з-ке N 98106088 "Биосовместимый материал для стоматологии "Биоимплант".

Пример 1. Кость быка отмывают проточной водой и распиливают на блоки размером 3х2х1 и делают сквозные отверстия в каждой плоскости блока не менее одного отверстия на 1 см². Затем блоки помещают в физиологический раствор и выдерживают в нем 10 часов.

После промывки блоков их заливают 1 литром раствора смеси ферментов 0,1% раствор трипсина и 0,125% раствор папаина, с pH 6,5 в соотношении 1:1 и инкубируют их в этом растворе в течение 12 часов. По окончании гидролиза блоки помещают в 1% раствор перекиси водорода и 1% раствор этанола (1:1) на 10 часов и после этого отмывают блоки дистиллированной водой 10 часов.

Приготовление материала для заполнения отверстий: 95 г сухого порошка гидроксиапатита смешивают с 0,20 г сухого коллагена и 0,2 г метилцеллюлозы и 0,1 г порошка сульфатированных гликозаминогликанов, остальное вода, перемешивают.

Полученным материалом заполняют отверстия в блоках. Блоки помещают в морозильную камеру с -20^oC и после замораживания лиофильно высушивают. Каждый блок герметично упаковывают и стерилизуют гамма-облучением дозой 2,5 Мград.

Формула изобретения

Способ получения трансплантата для стоматологии, включающий обработку кости ферментами, отличающийся тем, что предварительно кость распиливают на блоки размером 321 см, делают сквозные отверстия размером от 0,1 до 10 мм в каждой плоскости блока, не менее одного отверстия на 1 см² блоки отмывают в 0,9%-ном растворе натрия хлорида в течение 5 - 10 ч, обрабатывают сначала смесью ферментов, состоящей из 0,1 -1%-ного раствора трипсина и 0,125-0,3%-ного раствора папаина, взятых в соотношении 1:1 в течение 10 - 12 ч при температуре 65^oC и рН 6,5, а затем в смеси 1%-ного раствора перекиси водорода и 1%-ного раствора этанола, взятых в соотношении 1:1 в течение 10-12 ч, отмывают дистиллированной водой в течение 10-12 ч и заполняют каждое отверстие блока материалом, состоящим из солей двух и/или трехвалентных металлов, коллагена, алкилпроизводных или карбоксилалкилпроизводных или гидроксиалкилпроизводных целлюлозы, сульфатированных гликозаминогликанов и воды, при следующем соотношении компонентов, мас.%: Соли двух и/или трехвалентных металлов - 0,5 - 95 Коллаген - 0,5 - 95 Алкилпроизводные, или карбоксилалкилпроизводные, или гидроксиалкилпроизводные целлюлозы - 0,5 - 15 Сульфатированные гликозаминогликаны - 0,05 - 2 Вода очищенная - Остальное после чего костный блок замораживают, лиофилизируют и стерилизуют облучением дозой 2,5 Мград.