Способ лечения состояния, в котором показан 5нтi-подобный агонист, производное тетрагидрокарбазола, способ его получения, фармацевтическая композиция, проявляющая активность агониста 5нтi-подобных рецепторов

Способ лечения состояния, в котором показан 5нтi-подобный агонист, производное тетрагидрокарбазола, способ его получения, фармацевтическая композиция, проявляющая активность агониста 5нтi-подобных рецепторов

Реферат

 

Использование соединений общей формулы I в которой R¹ представляет водород, галоген, трифторметил, нитро, гидрокси, C_1-6-алкокси, арил-C_1-6-алкокси, -CO₂R⁴, -(CH₂)_nCN, (CH₂)_nCONR⁵R⁶, (CH₂)_nSO₂NR⁵R⁶, C_1-6-алканоиламино(CH₂)_n или C_1-6-алкилсульфониламино(CH₂)_n; R⁴ представляет водород, C_1-6-алкил или арил C_1-6; R⁵ и R⁶ каждый независимо представляют водород или C_1-6-алкил или R⁵ и R⁶ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют кольцо; n представляет 0,1 или 2; R² и R³ каждый независимо представляют водород, C_1-6-алкил или бензил или вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют кольцо пирролидино, пиперидино или гексагидроазепино, или его физиологически приемлемой соли для лечения состояния, в котором показан 5-HT₁-подобный агонист, например мигрени. Описываются также новые соединения формулы I, способы их получения и фармацевтические композиции, содержащие их. 4 с. и 15 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к некоторым производным тетрагидрокарбазола для применения в лечении расстройств, характеризуемых избыточным расширением просвета сосудов, в частности лечения мигрени.

Мигрень - несмертельное заболевание, которым страдает один из десяти человек; основной симптом - головная боль, другие симптомы включают рвоту, светобоязнь. В настоящее время наиболее широко используемым лечением является назначение эрготамина, дигидроэрготамина или метисергида, которые также используются как профилактические средства. Эти лекарства, между прочим, являются агонистами 5-HT₁-подобного рецептора, но обладают и другим действием; лечение ими связано с рядом неблагоприятных побочных эффектов. Кроме того, некоторые пациенты испытывают "головные боли при снятии лекарств", которые появляются после прекращения лечения продуктом спорыньи, таким как эрготамин, заставляя их повторять лечение, и приводит к привыканию. Совсем недавно для потенциального использования в лечении мигрени были предложены различные производные триптамина.

Ввиду вышесказанного существует необходимость получить эффективные и безопасные медикаменты для лечения мигрени.

В патентах США N 4257952, 4172834, 4062864 и 3059309 раскрыт большой класс тетрагидрокарбазолов с формулой: в которой N = B является, помимо прочего, -NHR' или -NR'R'', где R' и R'' - низший алкил, арил - низший алкил или вместе образуют гетероциклическое кольцо; R - помимо прочего, водород; Q₁ - помимо прочего, водород, галоген, низший алкокси, циано, -CO₂R¹ или -CONR²R³, где R¹ может быть водородом, низшим алкилом или -CH₂Ar, и R² и R³ - водород, низший алкил или вместе образуют гетероциклическое кольцо; Q₂ - помимо прочего, водород, арил-(низший алкокси), гидрокси, тригалометил, нитро или алканоиламино; и Q₃ и Q₄ могут каждый быть, помимо прочего, водородом.

Эти соединения известны как обладающие обезболивающим, психотропным и антигистаминным действием.

Неожиданно было выявлено, что некоторые тетрагидрокарбазолы противодействуют и частично противодействуют 5-окситриптамин-подобным рецепторам и могут найти применение в лечении состояний, в которых показан 5-HT₁-подобный агонист или частичный агонист, в особенности состояний, связанных с головной болью, таких как мигрень, общая головная боль и боль, связанная с изменениями в сосудах. В этом описании термин "5-HT₁-подобный агонист" включает также и частичные агонисты этого рецептора.

Поэтому настоящее изобретение предусматривает испольование соединений общей формулы I: в которой R¹ представляет водород, галоген, трифторметил, нитро, гидрокси, C_1-6-алкил, C_1-6-алкокси, арил С_1-6-алкокси, -CO₂R⁴, -/CH₂/_nCN, -/CH₂/_nCONR⁵R⁶, -/CH₂/_nSO₂NR⁵R⁶, C_1-6-алканоиламино /CH₂/_n, или C_1-6-алкилсульфониламино /CH₂/; R⁴ представляет водород, C_1-6-алкил или арил C_1-6-алкил; R⁵ и R⁶ каждый независимо представляет водород или C_1-6-алкил, или R⁵ и R⁶ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют кольцо; n представляет 0, 1 или 2; и R² и R³ каждый независимо представляет водород, C_1-6-алкил или бензил или вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют кольцо пирролидино, пиперидино или гексагидроазепино; и их физиологически приемлемых солей в производстве лекарства для лечения состояния, где показан 5-HT₁-подобный антагонист, в частности, мигрени, а также ее профилактики.

Изобретение также предусматривает способ лечения состояния, в котором показан 5-HT₁-подобный агонист, в частности мигрени, который включает назначение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения формулы (I) или его физиологически приемлемой соли.

R¹ представляет водород, галоген, циано, гидрокси, C_1-6-алкокси, арил C_1-6-алкокси, -CO₂R⁴, -/CH₂/_nCONR⁵R⁶ или -/CH₂/_nSO₂NR⁵R⁶, и R² и R³ каждый независимо представляют водород или C_1-6-алкил.

Следует сказать, что соединения формулы I могут содержать один или несколько асимметричных центров, и такие соединения существуют как оптические изомеры /энантиомеры/. Итак, изобретение включает все такие энантиомеры и смеси, включая их рацемические смеси.

В соединениях формулы I атомом галогена может быть фтор, хлор, бром или йод. Алкильная группа или половина может иметь прямую или разветвленную цепь. Подходящие ариловые группы включают, например, ненасыщенные моноциклические или бициклические кольца и частично насыщенные бициклические кольца с 1 до 12 атомами углерода, такие, как фенил, нафтил и тетрагидронафтил. Если R⁵ и R⁶ вместе с атомом азота образуют кольцо, это предпочтительно 5 - 7-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, которое может содержать другой гетероатом, выбранный из кислорода, серы или азота. Подходящие кольца включают пирролидино, пиперидино, пиперазино и морфолино.

В вышеуказанных соединениях R¹ предпочтительно представляет галоген /напр. бром/, CF₃, C_1-6-алкокси /напр. метокси/, /CH₂/_nCN, -/CH₂/_nCONR⁵R⁶, -/CH₂/_nSO₂NR⁵R⁶ или C_1-6-алканоиламино. Наиболее предпочтительно R¹ представляет группу -/CH₂/_nCONR⁵R⁶, в которой n представляет 0, и R⁵ и R⁶ каждый независимо представляют водород, метил, этил или пропил. Желательно, чтобы R⁵ и R⁶ независимо представляли водород или метил.

Если R¹ представляет -CO₂R⁴, R⁴ предпочтительно представляет C_1-6-алкил.

R² и R³ каждый предпочтительно представляет водород, метил или этил. Наиболее предпочтительно NR²R³- -NH₂.

Для использования в соответствии с настоящим изобретением соединение формулы I является предпочтительно частичным антагонистом.

Подходящие физиологически приемлемые соли очевидны для специалистов данной области и включают, например, соли кислотного присоединения, такие, как те, которые образованы с неорганическими кислотами, например, хлористоводородной, серной или фосфорной кислотами и органическими кислотами, например, янтарной, малеиновой, уксусной или фумаровой кислотами. Другие неприемлемые физиологически соли, например, оксалаты, могут использоваться, например, в изоляции соединений формулы I, и включены в объем этого изобретения.

В объем изобретения также включены сольваты и гидраты соединений формулы IA.

в которой R¹ - как определено выше, с оговоркой, что R¹ - не водород, гидрокси, метокси или бензилокси, и их соли.

Настоящее соединение далее предусматривает следующие специфические соединения, которые также считаются новыми: 3-амино-6-циано-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид, /+/-3-амино-6-карбоксамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид, /-/-3-амино-6-карбоксамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид, 3-амино-6-бромо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид, 3-амино-6-метил-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-этоксикарбнил-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-/N-метил карбоксамидо/-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол полуоксалат, 3-амино-6-цианометил-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-/N-метилсульфонамидометил/-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-хлоро-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-трифторметил-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-н-бутилокси-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-сульфонамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-нитро-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-/N, N-диметилкарбоксамидо/ -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол полуоксалат, 3-амино-6-нитро-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-/N, N-диметилкарбоксамидо/ -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол полуоксалат, 3-амино-6-/пиперидин-1-илкарбонил/ -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид, 3-амино-6-/пирролидин-1-илкарбонил/ -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид, 3-амино-6-/N, N-диэтилкарбоксамидо/ -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид, 3-амино-6-/ацетамидо/-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-метансульфонамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-карбоксамидометил -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид, 3-метиламино-6-карбоксамидо -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-этиламино-6-карбоксамидо -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-н-пропиламино-6-карбоксамидо -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-i-пропиламино-6-карбоксамидо -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-диметиламино-6-карбоксамидо -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-бензиламино-6-карбоксамидо -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-пирролидинил-6-карбоксамидо -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, и 3-/N-/метил/этиламино/-6-карбоксамидо -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат, 3-амино-6-/2-карбоксамидоэтил/ -1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает новое соединение формулы I, т.е. соединение IA или какое-либо из упомянутых соединений /в виде свободного основания или физиологически приемлемой соли/ для использования в качестве терапевтического агента, в частности, как 5-HT₁ агониста или частичного агониста, например, в лечении мигрени.

Изобретение также предусматривает способ получения новых соединений формулы I.

Соединения формулы I можно получить методами, известными в области техники для получения тетрагидрокарбазолов, например: A) Реакцией соединения формулы II: в которой R¹ - как определен выше /или его соли кислотного присоединения с соединением формулы III: /в которой R² и R³ - как определены выше/ или его N-защищенным производным; или B) Реакцией соединения формулы IV: /в которой R¹ имеет то же значение, как определено для формулы I и Z - уходящая группа/, с соединением формулы HNR²R³; C) Реакцией соединения формулы V: с ацилирующим или сульфонилирующим агентом; D) Преобразованием одного соединения формулы I в другое соединение формулы I, например /i/ чтобы получить соединение формулы I, в котором R¹ представляет -/CH₂/_nCONH₂ или CO₂R⁴, проводят гидролиз соединения формулы I, в котором R¹ представляет -/CH₂/_nCN, или его N-защищенного производного; /ii/ чтобы получить соединение формулы I, в котором R¹ представляет -CONR⁵R⁶, аминируют соединение формулы I, в котором R¹ представляет -CO₂H, или его N-защищенного производного; или /iii/ чтобы получить соединение формулы I, в котором один из R² и R³ - водород, а другой - C_1-6-алкил, алкилируют соединение I, в котором R² и R³ - оба водороды; /iv/ чтобы получить соединение формулы I, в котором R¹ представляет гидрокси, расщепляют соединение, в котором R¹ представляет алкокси или аралкокси; при необходимости с последующим освобождением от защиты любых защитных атомов азота и образованием соли при желании.

Способ (A), который является формой синтеза индола Фишера, может проводиться с использованием методов, хорошо известных в химии. Так, реакцию можно провести в растворителе, например в спирте, таком как этанол или бутанол; или уксусной кислоте, и при температуре в пределах 0 - 150^oC.

Гидразины формулы II, которые обычно используются в качестве соли гидрохлорида, - соединения известные и их можно получить известными способами.

Циклогексанон формулы III можно получить окислением соответствующего циклического спирта с использованием окисляющего агента, такого, как пиридин хлорхромат, пиридин дихромат, дипиридин Cr /VI/ оксид, гипохлорит натрия, гипохлорит кальция или диоксид марганца.

Уходящей группой Z в соединениях формулы /IV/ может быть, например, атом галогена или сульфонилокси группа, например, п-толуолсульфонилокси или метансульфонилокси. Процесс (B) можно провести в инертном органическом растворителе, таком, как спирт, например, метанол или эфир, например, тетрагидрофуран, и при температуре в пределах 0 - 150^oC. Соединения формулы IV можно получить реакцией гидразина формулы II с соответствующе замещенным соединением циклогексанона. Если Z - ацилокси или сульфонилокси, его можно получить из соединения IV, в котором Z - гидрокси, с использованием стандартных процедур. Подходящие ацилирующие и сульфонилирующие агенты, которые могут использоваться в способе (C), включают хлориды карбоновой и сульфокислоты /например, ацетилхлорид или метансульфонилхлорид/, алкилэстеры, активированные эстеры и симметричные и смешанные ангидриды. Реакцию можно проводить в органическом растворителе, таком, как галоалкан /например, дихлорметане/, амиде /например, N,N-диметилформамиде/; эфире /например, тетрагидрофуране/ или третичном амине, таком, как пиридин. В общем также используется основание, например, триэтиламин, диметиламинопиридин или карбонат или бикарбонат щелочного металла. Реакция проводится при температуре в пределах от -10 до 100^oC.

Соединения формулы V можно получить способами, аналогичными процессам (A) и (B), описанным выше.

Еще соединение V можно получить восстановлением соединения формулы I, в котором R¹ - нитро, например, каталитическим гидрированием.

В химии хорошо известно, что гидролиз нитрила первоначально дает амид, который затем можно гидролизовать в кислоту. Поэтому точный продукт способа (Di) будет зависеть от условий реакции, выбранных для гидролиза. Чтобы получить соединение, в котором R¹ представляет H₂NCO-, гидролиз предпочтительно проводится с использованием перекиси водорода в присутствии гидроксида щелочного металла, например, гидроксида натрия, в растворителе, таком, как спирт, метаноле. Другие подходящие средства гидролиза включают уксусную кислоты и BF₃; или муравьиную кислоту и бромистоводородную или хлористоводородную кислоты. Чтобы получить соединение, в котором R¹ представляет -COOH кислоту или основание, можно использовать каталитический гидролиз.

Способ (Dii) можно осуществить реакцией соединения формулы I, в котором R¹ - -CO₂H, с амидом HNR⁵R⁶, в присутствии связующего агента, например, дициклогексилкарбодиимида или N, N-карбонилдиимидазола. В другом варианте исходный материал карбоновой кислоты можно вначале подвергнуть реакции для получения активированного производного карбоксильной группы, например, кислотного хлорида, кислотного ангидрида или активированного эстера, которое затем непосредственно реагирует с амином HNR⁵R⁶. Карбоновую кислоту можно также активировать на месте обработкой гексаметилфосфоротриамидом.

Алкилирование в соответствии со способом (Diii) можно осуществить реакцией амина формулы I с ацилирующим агентом, например, ангидридом, таким, как уксусный или пропионовый ангидрид, чтобы получить промежуточное соединение, в котором один из R² или R³ является -C/O/C_1-6-алкилом, с последующим восстановлением данного промежуточного соединения для получения нужного продукта. Специалистам также известны другие реагенты и условия.

Расщепление по способу (Div) можно провести восстановлением с использованием хорошо известных методов.

Во многих из указанных реакций необходимо защитить группу - R²R³, когда одна или обе из групп представляют водород. Подходящие N-защитные группы хорошо известны в области техники и включают, например, ацильные группы, такие как ацетил, трифтороацетил, бензоил, метоксикарбонил, т-бутоксикарбонил, бензилоксикарбонил или фталоил; и аралкильные группы, такие как бензил, дифенилметил или трифенилметил. Если R² и R³ оба представляют водород, атом азота предпочтительно защищен как фталимид. Защитные группы должны легко удаляться в конце последовательности реакции. N-защиту можно снять обычными способами, например фталоиловую группу можно убрать реакцией с гидразином; ацильную группу, такую как бензоил, можно расщепить гидролизом, и аралкильную группу, такую как бензил, можно расщепить гидрогенолизом.

Если соединение формулы I получается в виде смеси энантиомеров, их можно разделить обычными методами, например, реакцией смеси с подходящей оптически активной кислотой, такой как д-винно-каменная кислота, л-яблочная кислота, л-миндальная, л-гулоновая или 2,3,4,6-ди-О-изопропилиден-кетогулоновая кислоты, чтобы получить две стереоизомерные соли, которые можно разделить, например кристаллизацией.

Иначе смеси энантиомеров можно разделить хроматографией, например на хиральной ВЭЖХ колонне.

Как было выявлено, соединения формулы I являются агонистами и частичными агонистами на рецепторах, подобных 5-HT₁, и найдут применение в лечении и/или профилактике мигрени и других состояний, связанных с головными болями.

Для использования в медицине соединения настоящего изобретения обычно назначаются как стандартные фармацевтические композиции. Поэтому далее настоящее изобретение предусматривает фармацевтические композиции, включающие новое соединение формулы I или его физиологически приемлемую соль и физиологически приемлемый носитель.

Соединения настоящего изобретения формулы I могут назначаться орально, парентерально и приемом за щеку, под язык, в нос, через прямую кишку, через кожу в виде соответствующих фармацевтических композиций.

Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли, которые активны при оральном приеме, могут быть в форме жидкостей, например, сиропов, суспензий или эмульсий, или таблеток, капсул и лепешек.

Жидкая лекарственная форма может обычно состоять из суспензии или раствора соединения или его физиологически приемлемой соли в подходящем жидком носителе, например, водном растворителе /вода, этанол, глицерин/, или неводном растворителе, таком, как полиэтиленгликоль или масло. Форма может также содержать суспендирующий агент, консервант, вкусовой или цветовой агент.

Композицию в форме таблетки можно приготовить с использованием любого подходящего фармацевтического носителя, применяемого в приготовлении твердых форм. Примеры таких носителей включают стеарат магния, крахмал, лактозу, сахарозу и целлюлозу.

Композицию в форме капсулы можно получить с использованием традиционных процедур капсулирования. Например, гранулы, содержащие активный ингредиент, можно приготовить с использованием стандартных носителей и затем заполнением в твердую желатиновую капсулу; дисперсию или суспензию можно приготовить с применением подходящих фармацевтических носителей, например, водных смол, целлюлоз, силикатов или масел и заполнением дисперсии или суспензии в мягкую желатиновую капсулу.

Обычные парентеральные композиции состоят из раствора или суспензии соединения или физиологически приемлемой соли в стерильном водном носителе или парентерально приемлемом масле, например, полиэтиленгликоле, поливинил пирролидоне, лецитине, арахисовом масле или кунжутном масле. В другом случае раствор может быть лиофилизирован и затем восстановлен подходящим растворителем перед приемом.

Композиции для носового применения могут иметь форму аэрозолей, капель, гелей и порошков. Форма аэрозоли обычно включает раствор или мелкую суспензию активного вещества в физиологически приемлемом водном или неводном растворителе и предназначена для одноразового или многоразового использования в стерильной форме и герметичном контейнере, который может иметь форму патрона или заполняться в емкость с распылителем. Герметичный контейнер может быть универсальным дозатором в виде одноразового ингалятора или в виде аэрозольного дозатора с измерительным клапаном, который используется, пока не закончится лекарство, а потом выбрасывается. Если дозирующая форма включает аэрозольный дозатор, она содержит пропеллант, который может быть сжатым газом, воздухом, или органический пропеллант, такой как фторохлороуглеводород. Аэрозольная дозирующая форма может также быть насосом-распылителем.

Композиции, предназначенные для применения за щеку или под язык, включают таблетки, лепешки и пастилки, в которых активный ингредиент формуется с носителем, таким, как сахар и аравийская камедь, трагакант или желатин и глицерин.

Композиции для ректального применения обычно в форме шариков, содержащих обычную суппозитарную основу - масло какао.

Композиции, приемлемые для трансдермального применения, включают жидкие мази, гели и пластыри.

Предпочтительна форма дозировки - единичная доза /таблетка, капсула или ампула/.

Каждая единица дозировки содержит для орального применения от 1 до 250 мг /а для парентерального - от 0,1 до 25 мг/ соединения формулы I или его физиологически приемлемой соли, рассчитанного как свободное основание.

Физиологически приемлемые соединения изобретения обычно назначаются в ежедневном режиме /для взрослого пациента/ с оральной дозой между 1 и 500 мг, предпочтительно между 10 и 400 мг, при внутривенном, подкожном применении - 10 - 250 мг, внутримышечная доза составляет 0,1 - 100 мг, предпочтительно 0,1 - 50 мг соединения формулы I или ее физиологически приемлемой соли, рассчитанной как свободное основание, причем соединение назначается от 1 до 4 раз в день на период продолжительной терапии, например, в течение недели или больше.

Биологические данные.

Тестирование 5-HT₁-подобного рецептора.

Подкожная вена собаки.

Геликоиды подкожной вены собаки помещались при 37^oC в модифицированный раствор Кребса с силой покоя 10 мN. Раствор также содержал 1 мкмоль/л каждого из кетанзерин празозина, атропина и мепирамина, 6 мкмоль/л кокаина и 200 мкмоль/л аскорбата. На полиграфе с датчиками силы измерялись почти изомерные сокращения. Ткани дважды подвергались действию 5-окситриптамина /5-HT/ в количестве 2 мкмоль/л с последующим промыванием. Определялась кривая эффекта кумулятивной концентрации, а затем кривая на 5-HT в присутствии наивысшей используемой концентрации испытуемого соединения. Сокращения, вызванные испытуемым соединением, сравнивались с сокращениями, вызванными 5-HT. Рассчитывалась активность испытуемого соединения как коэффициент максимального действия, вызванного соединением, над действием, вызванным 2 мкмоль/л 5-HT. Из соответствующей кривой действия был вычислен EC₅₀ испытуемого соединения. Затем методом Марано и Кауманна /1976, J.Pharmacol. Exp. Ther. 198, 518-525/ были определены константы Кр соответствующей диссоциации равновесия.

В этом тестировании соединения примеров 2, 4, 5, 6, 9, 10, 11, 13, 17, 18, 21 и 24 имели EC₅₀ в пределах от 0,1 до 15 мкмоль.

Основная артерия кролика.

Методы.

Эксперименты проводились на внутричерепных артериях кролика, на изолированной базилярной артерии таким же методом, как описан выше /Парзон и Уэлли, 1989, Eur. J. Pharmacol. 174, 189-196/.

Вкратце, кролики умерщвлялись большой дозой анeстеризующего вещества /пентобарбитон натрия/.

Весь мозг быстро удалялся и погружался в холодный модифицированный раствор Кребса, и базилярная артерия удалялась с помощью препаровальной лупы. Раствор Кребса имел следующий состав /мМ /Na⁺ /120/; K⁺/5/; Ca²⁺ /2.25/; Mg²⁺ /0.5/; Cl^- /98.5/; SO₄^2- /1/; ЭДТК /0.04/, уравновешенный 95% O₂ /5%/ CO₂. Эндотелий удалялся мягким прикосновением к полости тонкой металлической проволоки. Артерии нарезались в кольцевые сегменты /шириной 4 - 5 мм/ и погружались для записи изометрического напряжения в 50-мл ванночки для тканей с модифицированным раствором Кребса и добавлением /мМ/ Na²⁺ /20/; фумарата /10/; пирувата /5/; L-глютамата /5/ и глюкозы /10/. Затем артерии помещались в силу покоя 3-4 мN при 37^oC и через раствор пузырьками пропускался 95% O₂ /5%/ CO₂.

После тестов на первоначальную реактивность деполяризующим раствором KCl /90 мМ/ и на отсутствие расслабления, вызванного ацетилхолином, из-за предшествующего сокращения от 5-HT /10 мМ/, в присутствии аскорбата 200 мМ, кокаина 6 мМ, индометацина 2.8 мМ, кетанзерина 1 мМ и празозина 1 мМ были построены кумулятивные кривые концентрации - воздействия /2 нМ - 60 мМ/ на 5-HT.

В этом тестировании соединения примеров 2, 5, 6, 15, 17, 24, 25, 26, 28 и 29 имели EC₅₀ в пределах 0,04 - 15.

Пример 1.

3-Амино-6-циано-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид.

Раствор 4-аминоциклогексанол гидрохлоридa /6.08 г, 0.04 М/ в воде /60 мл/ доводился до pH 8 водным раствором бикарбоната натрия. Добавлялся N-карбэтокси-фталимид /0.76 г, 0.04 М/, а затем тетрагидрофуран /до получения гомогенного раствора/. Чистый раствор перемешивался при комнатной температуре всю ночь. Во время этого выпадало в осадок вещество белого цвета. Тетрагидрофуран удалялся под вакуумом, и оставшийся водный раствор экстрагировался этилацетатом до полного очищения раствора. Экстракты этилацетата соединялись, промывались водой, высушивались /MgSO₄/ и концентрировались до получения 4-фталимидо циклогексанола в виде белого вещества /7,1 г/.

Раствор 4-фталимидо циклогексанола /7,1 г, 0,029 М/ в дихлорметане /250 мл/ обрабатывался пиридиний хлорохроматом /8,6 г, 0,04 М/, и полученная темная смесь перемешивалась при комнатной температуре всю ночь. Был добавлен диэтиловый эфир /50 мл/, и смесь фильтровалась через кизельгур. Фильтрат концентрировался в вакууме, и остаток очищался колонной хроматографией /SiO₂; CHCl₃ /EtOAc/ для получения 4-фталимидо циклогексанона в виде твердого вещества белого цвета /6,4 г/.

4-Цианофенил гидразин гидрохлорид /4,41 г, 0,026 М/ растворялся в уксусной кислоте /100 мл/ и добавлялся ацетат натрия /2 г/. Добавлялся 4-фталимидо циклогексанон /6,4 г, 0.026 М/, и смесь нагревалась с флегмацией всю ночь. Растворитель удалялся в вакууме, и остаток растирался с метанолом для получения 3-фталимидо-6-циано-1,2,3,4-тетрагидрокарбазола в виде твердого вещества бежевого цвета /5,3 г/.

Суспензия указанного продукта /1 г/ в этаноле /40 мл/ обрабатывалась гидразином в воде /10 мл/. Реакционная смесь перемешивалась при комнатной температуре всю ночь, в течение которой реактанты растворялись. Растворитель удалялся в вакууме, и остаток разделялся между водным карбонатом калия и этилацетатом. Раствор этилацетата промывался водой, высушивался и концентрировался в вакууме для получения 3-амино-6-циано-1,2,3,4-тетрагидрокарбазола в виде твердого вещества бежевого цвета /500 мг/. Этот продукт был преобразован в соль гидрохлорида для получения искомого соединения, т. пл. 289^oC /разл./.

¹H ЯМР [250 МГц, CD₃OD] 1,98 - 2,18 /1H, м/, 2,25 - 2,40 /1H, м/, 2,77 /1H, дд/, 2,98 /2H, м/, 3,22 /1H, дд/, 3,68 /1H, м/, 7,34 /1H, д/, 7,43 /1H, д/, 7,82 /1H, с/.

Пример 2.

3-Амино-карбоксамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид.

Продукт примера 1 /400 мг/ растворялся в тетрагидрофуране, и добавлялся ди-т-бутил дикарбонат /500 мг/. Смесь перемешивалась при комнатной температуре всю ночь. Растворитель удалялся в вакууме и остаток очищался колонной хроматографией /SiO₂; CHCl₃/EtOAc/ для получения 3-т-бутилоксикарбониламино-6-циано- 1,2,3,4-тетрагидрокарбазола /40 мг/.

Смесь нитрила вышеуказанного продукта /440 мг/, водной перекиси водорода /30%, 0,5 мл/ и гидроксида натрия /вод./ /20%, 0,5 мл/, в метаноле /25 мл/ перемешивались при комнатной температуре всю ночь. Добавлялся метабисульфит натрия /100 мг/, и растворитель удалялся в вакууме. Остаток растворялся в этилацетате, и слой этилацетата отделялся, высушивался и концентрировался в вакууме для получения тягучего твердого вещества, которое очищалось колонной хроматографией /SiO₂; CHCl₃/EtOAc/ для получения 3-т-бутилоксикарбониламино- 6-карбоксиамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазола в виде вещества белого цвета /400 мг, т.пл. 270^oC /разл./.

Вышеуказанный продукт /400 мг, 0,0012 М/ растворялся в диоксане /100 мл/, и через раствор в течение 20 мин пропускался газ HCl. В течение этого времени осаждалось белое вещество. Избыток хлороводорода удалялся из раствора пропусканием через него N₂, и твердый продукт, 3-амино-6-карбоксамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид собирался фильтрацией, промывался диэтиловым эфиром и высушивался для получения искомого соединения в виде твердого вещества белого цвета /300 мг/. т.пл. 270^oC /разл./.

¹H ЯМР [250 МГц, ДМСО-д⁶] 1,96 /1H, м/, 2,16 - 2,30 /1H, м/, 2,74 /1H, дд/, 2,85 /2H, м/, 3,12 /1H, дд/, один сигнал затемнен H₂O на 3.6, 7,08 /1H, шир. с/, 7,27 /1H, д/, 7,61 /1H, д/, 7,87 /1H, шир.с/, 7,99 /1H, с/, 8,39 /3H, шир.с/.

Пример 3.

3-Амино-6-метокси-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид.

Реакция 4-метоксифенил гидразин гидрохлорида /0,87 г, 5,0 мМ/ с 4-фталимидо-циклогексаноном /1,22 г, 5,0 мМ/ в этаноле /20 мл/ нагревалась с флегмацией 2 ч с последующим охлаждением и удалением осажденного вещества фильтрацией, что дало 3-фталимидо-6-метокси-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол /1,62 г/.

Указанный продукт /1,57 г, 4,5 мМ/ суспендировался в метаноле /100 мл/ и обрабатывался гидразин гидратом /23 мл/ с перемешиванием при комнатной температуре. После 30 мин растворитель удалялся в вакууме и остаток делился между K₂CO₃ /вод./ и EtOAc. Последний слой отделялся, промывался водой, высушивался /MgSO₄/ и выпаривался до сухости. Этот остаток растворялся в этаноле и обрабатывался эфирным HCl до помутнения, затем выстаивался всю ночь для получения искомого соединения /0,95 г/, т.пл. > 250^oC.

¹H ЯМР [250 МГц, ДМСО-д⁶] 1,81 - 2,02 /1H, м/, 2,10 - 2,28 /1H, м/, 2,65 /1H, дд/, 2,82 /2H, м/, 3,02 /1H, дд/, 1 сигнал затемнен H₂O на 3,5, 3,74 /3H, с/, 6,66 /1H, д/, 6,84 /1H, д/, 7,14 /1H, д/, 8,16 /3H, шир.с/.

Пример 4.

3-Амино-6-бромо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид.

Реакция 4-бромофенилгидразин гидрохлорида /4,0 г, 18,1 мМ/ с 4-фталимидо циклогексаноном /4,39 г, 18,1 мМ/ в орошающем н-бутаноле в течение 20 мин с последующим охлаждением, фильтрацией и выпариванием фильтрата до сухости дала 3-фталимидо-6-бромо-1,2,3,4- тетрагидрокарбазол в виде твердого вещества оранжевого цвета /7,45 г/.

Этот продукт /0,33 г, 0,83 мМ/ суспендировался в этаноле /13 мл/ и обрабатывался гидратом гидразина /3 мл/, затем перемешивался при комнатной температуре всю ночь. Твердый осадок отфильтровывался и фильтрат выпаривался до сухости и разделялся между K₂CO₃ /вод/ и этилацетатом. После отделения органического слоя, промывания водой, высушивания /MgSO₄/ и выпаривания до сухости остаток растворялся в MeOH и обрабатывался газом HCl. Растворитель удалялся в вакууме и остаток кристаллизовался из этанол/этилацетата для выхода искомого соединения в виде твердого вещества кремового цвета /0,15 г/, т.пл. 308 - 310^oC.

¹H ЯМР [250 МГц, ДМСО-д⁶] 1,91 /1H, м/, 2,10 - 2,26 /1H, м/, 2,63 1H, дд/, 2,84 /2H, м/, 3,04 /1H, дд/, 3,50 /1H, м/, 7,12 /1H, д/, 7,24 /1H, д/, 7,55 /1H, с/, 8,15 /2H, шир.с/, 11,12 /1H, с/.

Пример 5.

3-Амино-6-карбоксамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол.

4-Карбоксамидофенилгидразин гидрохлорид /2,87 г/ и 4-фталимидоциклогексанон /3,00 г/ смешивались в уксусной кислоте, и смесь нагревалась с флегмацией 2 ч. После охлаждения смесь нейтрализовалась с использованием водного раствора карбоната калия, и полученное желтое твердое вещество фильтровалось, промывалось водой и высушивалось. Очистка колонной хроматографией дала 3-фталимидо-6-карбоксамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол /2,8 г/. (SiO₂, CHCl₃/CH₃OH).

Указанный продукт /1,0 г/ суспендировался в этаноле /10 мл/ и добавлялся гидрат гидразина /5 мл/. Получался чистый раствор, и смесь оставлялась перемешиваться всю ночь до получения осадка. Вся смесь выпаривалась до сухости, промывалась водным раствором K₂CO₃ и водой. Получалось в виде моногидрата искомое соединение 3-амино-6-карбоксамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол, т.пл. 146 - 148^oC.

¹H ЯМР [250 МГц, ДМСО-д⁶] 1,49 - 1,77 /1H, м/, 1,83 - 2,03 /1H, м/, 2,17 - 2,40 /1H, м/, 2,62 - 2,80 /1H, м/, 2,90 /1H, дд/, 1 сигнал невидим из-за воды на 3.1, 7,03 /1H, шир.с/, 7,18 /1H, д/, 7,58 /1H, д/, 7,83 /1H, шир.с/, 7,98 /1H, с/.

Пример 6.

/+/- и /-/-3-Амино-6-карбоксамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид.

Способ 1.

//-3-т-Бутилоксикарбониламино-6-карбоксамидо-1,2,3,4- тетрагидрокарбазол разделялся на свои энантиомеры с использованием хиральной ВЭЖХ: /chiracel OD 4,6 мм колонна с промыванием гексаном/этанолом 85:15/. /+/-Энантиомер собирался первым и имел т. пл. 150 - 152^oC и []²_D⁵ = +70,1 /в метаноле, 0,41% вес/об. /. /-/-Энантиомер имел т. пл. 150 - 152^oC и []²_D⁵ = -79,4 /в метаноле, 0,40% вес/об./. /+/-Энантиомер был преобразован в родственный амингидрохлорид обработкой HCl газом в диоксане, чтобы получить /+/-энантиомер 3-амино-6-карбоксамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорида, т. пл. 248 - 251^oC, []²_D⁵ = +26,2 /в метаноле, 0,50% вес/об./. /-/-Энантиомер 3-т-бутилоксикарбониламино-6-карбоксамидо- 1,2,3,4-тетрагидрокарбазола также был преобразован в /-/-энантиомер 3-амино-6-карбоксамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид, т. пл. 248 - 251^oC, []²_D⁵ = -28,6 /в метаноле, 0,50% вес/об./.

Способ 2.

//-6-Карбоксамидо-3-амино-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол обрабатывался одним эквивалентом 2,3,4,6-ди-O-изопропилен-2-кето-L-гулоновой кислоты в метаноле, чтобы получить соль /+/-энантиомера в 38% выходе /относительно рацемата/ и 34% энантиомерного избытка /эи/. Этот материал рекристаллизовался дважды из метанола для получения соли /+/-энантиомера в 25% общем выходе /относительно рацемата/, и >98% эи. Этот продукт преобразовывался в соль гидрохлорида сначала обработкой водным р-ром щелочного металла, и осажденное свободное основание обрабатывалось 2 М вод. HCl в этаноле, чтобы получить /+/-энантиомер-3-амино-6-карбоксамидо-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол гидрохлорид.

Пример 7.

3-Амино-6-метил-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат.

Реакция 4-фталимидоциклогексанона /2,16 г/ с 4-толуoлгидразин гидрохлоридом /1,41 г/ и последующее снятие защиты продукта способом, описанном в примере 3, дало свободное основание искомого соединения, которое было преобразовано в соль оксалата /0,23 г/, т. пл. 272 - 5^oC.

Пример 8.

3-Амино-6-этоксикарбонил-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол оксалат.

Pеакция 4-фталимидоциклогексанона /0,37 г/ с 4-этоксикарбонилфенилгидразин гидрохлоридом /0,33 г/, и последующее снятие защиты способом, описанным в примере 3, дало свободное основание искомого соединения. Оно было преобразовано в соль оксалата /0,11 г/, т. пл. 230 - 240^oC, разл.

Пример 9.

3-Амино-6-/N-метил-карбоксамидо/-1,2,3,4-тетрагидрокарбазол полуоксалат.

Реакция 4-фталимидоцикогексанона /1,20 г/ с 4-/N-метилкарбоксамидо/-фенилгидразин гидрохлоридом /1,00 г/, и последующее снятие защиты способом, описанным в примере 3, дало свободное основание искомого соединения. Оно было преобразовано в соль полуоксалата /0,22 г/, т. пл. 227^oC, разл.

Пример 10.

3-Амино-6-цианометил-1,263,4-тетрагидрокарбазол оксалат.

Реакция 4-фталимидоциклогексанона /1,05 г/ с 4-цианометилфенилгидразин гидрохлоридом /0,79 г/, и последующее снятие защиты способом, описанным в примере 3, дало свободное основание искомого соединения, которое обрабатывалось щавелевой кислотой для получения соли оксалата /0,49 г/, т. пл. 219 - 224^oC, разл.

Пример 11.

3-Амино-6-/N-метилсульфонамидометил/-1,26364-тетрагидрокарбазол оксалат.

Реакция 4-фталимидоциклогексанона /0,42 г/ с 4-/N-метилсульфонамидометил/ фенил гидразин гидрохлоридом /0,44 г/, и последующее сн