Производное индола

Производное индола

Реферат

 

Производное индола формулы I гдe R₁ - низший алкил, возможно замещенный гидроксилом, моно- или ди-(низший алкил) аминосульфонилом, -X-R_a, -[O(CH₂)_m-chr_b]_nR_bb, -O(CH₂)_p-R_c, R_a - низший алкил, X - О, R_b - Н, низший алкил, R_bb - алкоксикарбонил или карбоксильная группа, m=0, n=0 или 1, R_c - низший алканоил или фенил, р=1, R₂, R₃-Н, галоген, низший алкил, W - группа формулы II, которая соединяется с кольцом индола в положении 2 или 3, R₄ - галоген, R₅ - низший алкил, или его соль имеют сильную активность, стимулирующую ₃-адренергический рецептор, с превосходной адренорецепторной селективностью. 6 с. и 9 з.п. ф-лы, 9 табл.

Данное изобретение относится к новому производному индола, имеющему сильную активность, стимулирующую ₃-адренергический рецептор, с превосходной адренорецепторной селективностью.

Предпосылки создания изобретения Было известно, что -рецептор симпатического нерва имеет два подтипа, т. е. ₁-рецептор и ₂-рецептор. В настоящее время средства, стимулирующие ₁-адренергический рецептор, клинически используют в качестве стимулятора сердечной деятельности или сосудосуживающего средства, а средства, стимулирующие ₂-адренергический рецептор, используют в качестве бронхолитического средства соответственно.

Недавно был найден и выделен в качестве третьего подтипа -адренергического рецептора ₃-адренергический рецептор, который отличается от вышеуказанных двух подтипов [Emorine, L.J. et al; Science, 245, 1118-1121 (1989)] . ₃-Адренергический рецептор существует у коричневых жировых клеток и, как было установлено, проявляет термогенетическую активность путем разложения липидов белых жировых клеток, прилипающих к подкожным тканям или внутренним органам, и поэтому было предположено, что ₃-адренергический рецептор связан с одним из случаев ожирения. Кроме того, сообщалось, что кризис инсулин-независимого сахарного диабета может также быть связан с ₃-адренергическим рецептором.

Когда средство, стимулирующее ₃-адренергический рецептор, действует на подтипы, ₁-адренергический рецептор и ₂-адренергический рецептор. Могут быть некоторые побочные действия, например гиперфункция сердца, дрожание рук и ног и т. д. Таким образом, было желательно разработать лекарственное средство, имеющее сильную активность, стимулирующую ₃-адренергический рецептор, и не имеющее активность, стимулирующую ₁-адренергический рецептор и ₂-адренергический рецептор, или имеющее слабую активность, стимулирующую ₁- и ₂-адренергические рецепторы. В данном описании и формуле изобретения соединение, имеющее такие свойства, иногда называют как "соединение, имеющее превосходную адренорецепторную селективность".

В качестве средства, стимулирующего ₃-адренергический рецептор, были описаныBRL35135гидробромидметиловогоэфира{(R^*,R^*)-()-[4-[2-[2-(3-хлорфенил)- 2-гидроксиэтиламино] -пропил] фенокси] уксусной кислоты; вторая публикация патента Японии (kokoku) N 26744/1988 и публикация Европейского патента N 23385}, SR-58611A {гидрохлорид (R,S)-N-(7-этоксикарбонилметокси- 1,2,3,4-тетрагидронафт- 2-ил)-2-(3-фторфенил)- 2-гидроксиэтанамина; первая публикация патента Японии (kokai) N 66152/1989 и публикация Европейского патента N 255415} и т.д. Однако эти соединения BRL35135 и SR-58611A полностью отличаются от соединений данного изобретения, указываемых ниже, тем, что эти соединения не являются производными индола.

Соединения индола, перечисляемые в табл. 1, также известны.

Однако эти соединения по химической структуре отличаются от соединений данного изобретения в том, что имеют два заместителя на бензольном кольце и не имеют заместителей на ядре индола. Кроме того, эти литературные источники ни разу не предполагали, что эти соединения имеют активность, стимулирующую ₃-адренергический рецептор.

Известно, что следующие соединения имеют химическую структуру, более близкую к соединениям данного изобретения, чем соединения, перечисленные в табл. 1.

Например, в J.Pharm.Pharmacol., 17, 742-746 (1965), описывается следующее соединение A Acta Polon.Pharm., 38, 407-410 (1981) (Chem. Abstr., 96, 142543k (1982)) описывается следующее соединение B Указанные выше соединения A и B отличаются по химической структуре от соединений данного изобретения тем, что не имеют заместитель на ядре бензола и не имеют заместитель, соответствующий заместителю R₅ указываемых ниже соединений данного изобретения. Кроме того, в этих литературных источниках никогда не сообщали или даже не предполагали о фармакологической активности соединений A и B.

Далее в Chem.Abstr., 109, 128763n (1988) описывается производное N-индолилалкиламино-1-арилзамещенного алканола следующей формулы [VIII]: где R представляет фенильную группу, m- или n-нитрофенильную группу и т. д. и R¹ представляет атом водорода или метильную группу.

Указанное выше соединение имеет химическую структуру, отличающуюся от соединений данного изобретения тем, что заместителем на бензольном кольце является нитрогруппа, и тем, что он не имеет заместитель на ядре индола. Соединения указанной выше формулы [VIII] особенно включают следующее соединение C Соединение данного изобретения превосходит в качестве средства, стимулирующего ₃-адренергический рецептор, соединения A, B и C, как показано в фармакологических экспериментах, упоминаемых ниже.

Таким образом, целью данного изобретения является представление нового производного индола, имеющего сильную активность, стимулирующую _3/ -адренергический рецептор, с превосходной адренорецепторной селективностью, или соли его.

Описание изобретения Данное изобретение относится к производному индола следующей формулы [I] : где R₁ представляет низшую алкильную группу, необязательно замещенную гидроксигруппой, фенилсульфониламиногруппу, низшую алкилсульфониламиногруппу, моно- или ди-(низший алкил)аминосульфонильную группу или группу, выбранную из последующих групп (а) - (d), или R₁ в комбинации с R₂ образует метилендиоксигруппу, причем эта метилендиоксигруппа необязательно замещена карбоксигруппой или низшей алкоксикарбонильной группой; (а) группа формулы -X-Ra (где X представляет О, S или NH, Ra представляет атом водорода или низшую алкильную группу, при условии, что, когда X представляет S, тогда Ra представляет низшую алкильную группу); (b) группа формулы (где Rb представляет атом водорода, низшую алкильную группу, низшую алкоксикарбонильную группу или карбоксигруппу, Rbb представляет низшую алкоксикарбонильную группу или карбоксигруппу, m представляет целое число от 0 до 3 и n представляет 0 или 1); (с) группа формулы -O(CH₂)_p-Rc (где Rc представляет низшую алканоильную группу, гидроксигруппу, цианогруппу, фенильную группу, моно- или ди-(низший алкил)аминокарбонильную группу или группу формулы (где R_A представляет атом водорода или низшую алкильную группу) и p представляет целое число от 1 до 4); d) группа формулы -Y-(CH₂)_q-Rd (где Y представляет NH или S, Rd представляет карбоксильную группу или низшую алкоксикарбонильную группу, q представляет целое число от 1 до 4); R₂ представляет атом водорода, атом галогена, низшую алкильную группу, необязательно замещенную гидроксигруппой, гидроксигруппу, низшую алкоксигруппу или указанную выше группу (b) или (с) или R₂, в комбинации с R₁ образуют метилендиоксигруппу, причем эта метилендиоксигруппа необязательно замещена карбоксильной группой или низшей алкоксикарбонильной группой; R₃ представляет атом водорода или низшую алкильную группу; W представляет группу формулы [II], которая соединяется с положением 2 или 3 ядра индола: где R₄ представляет атом галогена или трифторметильную группу и R₅ представляет низшую алкильную группу, или соли его.

Структурными характерными признаками соединений [I] данного изобретения являются: (1) наличие определенного атома или определенной группы в положении 3 ядра бензола в заместителе W; (2) заместитель R₅, представляющий низшую алкильную группу; (3) наличие определенных заместителей R₁ и R₂ в положениях 4-7 ядра индола; (4) наличие заместителя W в положении 2 или 3 ядра индола.

Сильная активность, стимулирующая ₃-адренергический рецептор, и превосходная адренорецепторная селективность соединений данного изобретения основываются на указанных выше структурных характерных признаках данных соединений или их комбинациях.

Термины, используемые в данном описании и формуле изобретения, объясняются ниже.

Группа, к которой прилагается определение "низший", означает группы, имеющие 1-4 атомов углерода. "Низшая алкильная группа" включает, например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил и т. д. , но метил, этил, пропил и изопропил более предпочтительны. "Низшая алкильная группа, замещенная гидроксигруппой" включает, например, гидроксиметил, 2-гидроксиэтил и т.д. "Низшая алкилсульфониламиногруппа" включает, например, метилсульфониламино, этилсульфониламино и т.д. "Моно- или ди-низший алкиламиносульфонильная группа" включает, например, монометиламиносульфонил, диметиламиносульфонил, моноэтиламиносульфонил, диэтиламиносульфонил и т.д. "Низшая алкоксикарбонильная группа" включает, например, метоксикарбонил, этоксикарбонил, пропоксикарбонил, бутоксикарбонил и т.д. "Низшая алканоильная группа" включает, например, ацетил, пропионил и т.д. "Моно- или ди-низший алкиламинокарбонильная группа" включает, например, метиламинокарбонил, диметиламинокарбонил, метилэтиламинокарбонил и т.д. "Атом галогена" обозначает фтор, хлор, бром, йод, предпочтительным галогеном является фтор, хлор, бром и наиболее предпочтительным галогеном является фтор и хлор. "Низшая алкоксигруппа" включает, например, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, втор-бутокси, трет-бутокси и т.д. "Низший алкоксикарбонил-низшая алкоксигруппа" включает, например, метоксикарбонилметокси, 1-метоксикарбонилэтокси, 2-метоксикарбонилэтокси, 1-метоксикарбонилпропокси, 3-метоксикарбонилпропокси и т.д. "Карбокси-низшая алкоксигруппа" включает, например, карбоксиметокси, 1-карбоксиэтокси, 2-карбоксиэтокси, 1-карбоксипропокси, 3-карбоксипропокси и т.д. "Фенил-низшая алкоксигруппа" включает, например, бензилокси, фенетилокси и т.д.

Соль настоящих соединений формулы [I] является, например, кислотно-аддитивной солью, особенно предпочтительна фармацевтически приемлемая кислотно-аддитивная соль. Кислотно-аддитивная соль включает, например, соли с неорганической кислотой, такой как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, и соли с органической кислотой, такой как щавелевая кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, молочная кислота, яблочная кислота, лимонная кислота, винная кислота, бензойная кислота, метансульфокислота и т.д. Кроме того, соединения данного изобретения, имеющие карбоксильную группу в определении для заместителя R₁ или R₂, могут существовать в форме соли щелочного металла или соли с органическим основанием, например соли со щелочным металлом, таким как натрий, калий и т.д., или соли с органическим основанием, таким как триэтиламин, трибутиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, дициклогексиламин и т.д.

Эти кислотно-аддитивные соли, соли щелочных металлов или соли с органическим основанием могут существовать в форме ее гидрата или сольвата, данное изобретение включает также, кроме того, эти гидраты и сольваты.

Соединение данного изобретения формулы [I] имеют два асимметричных атома углерода. То есть в формуле [II] атом углерода, с которым соединяется гидроксигруппа, и атом углерода, к которому присоединяется R₅, являются асимметричными атомами углерода. Таким образом, соединение данного изобретения имеет четыре стереоизомера и данное изобретение включает также эти оптически активные соединения, рацемические соединения и их смеси.

Предпочтительным соединением данного изобретения является соединение формулы [I] , у в которой заместитель W присоединен к ядру индола в положении 3, т.е. соединение формулы [I-а] в которой R₁, R₂, R₃, R₄ и R₅ такие, как определено выше, или соль его. Среди других более предпочтительным соединением данного изобретения является соединение формулы [I-а] , где R₁ присоединен в положении 5, 6 или 7 индольного кольца и R₂ представляет атом водорода, или его соль или соединение формулы [I-а], где R₂ представляет группы, другие, чем атом водорода, и один из R₁ и R₂ присоединяется к индольному кольцу в положении 6, а другой - в положении 7, или его соль.

Другим предпочтительным соединением данного изобретения является производное индола формулы [I-а], в которой R₁ представляет низшую алкильную группу, замещенную гидроксигруппой, фенилсульфониламиногруппу, низший алкилсульфониламиногруппу, ди-низший алкиламиносульфонильную группу или группу из следующих групп (а), (b-1), (с-1) или (d); (а) группа формулы -X-Ra (где X и Ra такие же, как определено выше); (b-1) группа формулы (где Rb-1 представляет атом водорода или низшую алкильную группу, Rbb, m и n такие же, как определено выше); (с-1) группа формулы -O(CH₂)_p-Rc-1 (где Rc-1 представляет низшую алканоильную группу, фенильную группу, моно-низший алкиламинокарбонильную группу и p такой же, как определено выше); (d) группа формулы -Y-(CH₂)_q-Rd (где Y, Rd и q такие же, как определено выше); R₂ представляет атом водорода, атом галогена, низшую алкильную группу, необязательно замещенную гидроксигруппой, гидроксигруппу, низшую алкоксигруппу или группу из указанной выше группы (b-1) или (с-1), или соль его. Среди указанных выше соединений следующим предпочтительным соединением является производное индола формулы [I-а], где R₁ представляет низшую алкоксигруппу, низшую алкильную группу, низшую алкоксикарбонильную группу, низшую алкоксикарбонил-низшую алкоксигруппу, карбокси-низшую алкоксигруппу, фенил-низшую алкоксигруппу или ди-низший алкиламиносульфонильную группу, R₂ представляет атом водорода, атом галогена, низшую алкоксигруппу, низшую алкильную группу, низшую алкоксикарбонильную группу, низший алкоксикарбонил-низшую алкоксигруппу, карбокси-низшую алкоксигруппу или фенил-низшую алкоксигруппу, R₃ представляет атом водорода, R₄ представляет атом галогена и R₅ представляет метильную группу, или соль его.

Особенно предпочтительным соединением является производное индола формулы [I-а], где R₁ представляет собой метоксигруппу, этоксигруппу, пропоксигруппу, изопропоксигруппу, метильную группу, метоксикарбонильную группу, метоксикарбонилметоксигруппу, карбоксиметоксигруппу, бензилоксигруппу или диметиламиносульфонильную группу, R₂ представляет атом водорода или метоксигруппу, R₃ представляет атом водорода, R₄ представляет собой атом хлора, R₅ представляет метильную группу, или соль его.

Наиболее предпочтительным соединением данного изобретения является производное индола формулы [I-а], где R₁ представляет метоксигруппу, этоксигруппу, метоксикарбонильную группу, метоксикарбонилметоксигруппу или карбоксилметоксигруппу, которая присоединяется в положении 6 или 7 к индольному кольцу, R₂ и R₃ представляют атом водорода, R₄ представляет атом хлора, R₅ представляет метильную группу, или соль его.

Представителями наиболее предпочтительных соединений являются: (1) 2-[3-(7-Метоксииндол-3-ил)-2-пропиламино]-1-(3- хлорфенил)этанол, (2) 2-[3-(7-Этоксииндол-3-ил)-2-пропиламино]-1-(3- хлорфенил)этанол, (3) 2-[3-(7-Метоксикарбонилметоксииндол-3-ил)-2- пропиламино] -1-(3-хлорфенил)этанол, (4) 2-[3-(7-Карбоксиметоксииндол-3-ил)-2-пропиламино] -1- (3-хлорфенил)этанол и их оптические изомеры или их соли.

Представители, включенные в данное изобретение, являются соединениями, перечисленными в табл. 2, 3 и 4, и их солями.

Соединение данного изобретения можно получить следующими способами.

Способ (а): Соединение формулы [I] данного изобретения можно получить реакцией соединения формулы [III] где R₄ такой же, как определено выше, с соединением формулы [IV] где R₁, R₂, R₄ и R₅ такие же, как определено выше, или с солью его.

Реакцию проводят в подходящем растворителе или без растворителя. Растворитель следует выбирать в соответствии с типами используемых исходных соединений, они включают, например спирты (например, метанол, этанол, изопропанол и т.д.), кетоны (например, ацетон, метилэтилкетон и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлористый метилен, хлороформ и т.д.), простые эфиры (например, диэтиловый эфир, тетрагидрофуран, диоксан и т.д.), ароматические углеводороды (например, бензол, толуол и т.д.), этилацетат, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид и тому подобные, эти растворители можно использовать по отдельности или комбинацию двух или более их. Кроме того, когда соединение [IV] находится в форме кислотно-аддитивной соли, например соли с неорганической кислотой, такой как гидрохлорид, гидробромид и т.д., или соли с органической кислотой, например, оксалата, малеата, фумарата и т. д. , реакцию проводят в присутствии основания. Основание включает, например, бикарбонат щелочного металла, такой как бикарбонат натрия, бикарбонат калия и т.д., карбонат щелочного металла, такой как карбонат натрия, карбонат калия и т.д., или органическое основание, например триэтиламин, трибутиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин и т.д. Кроме того, когда в заместитель R₁ или R₂ включена карбоксильная группа, реакцию проводят в присутствии основания, упоминаемого выше.

Температура реакции варьируется в соответствии с типом используемых исходных соединений, но обычно она находится в диапазоне от комнатной температуры до около 150^oC, предпочтительно в диапазоне от около 25^oC до около 100^oC.

В способе (а) оба исходных соединения [III] и [IV] имеют асимметричный атом углерода и реакция проходит с сохранением стереоконфигурации асимметричного атома углерода, давая целевое соединение [I], имеющее такую же стереоконфигурацию. То есть, например, целевое соединение [I], имеющее (R,R)-конфигурацию, получают из исходного соединения [III], имеющего R-конфигурацию, и исходного соединения [IV], имеющего R -конфигурацию.

Оптически активное соединение формулы [III] можно получить, например, способом, сходным со способом, описанным в Bloom, J.D. et.al., J. Med. Chem. 35, 3081-3084 (1992) или в Eliel E.L. and Delmonte, D.W.J.Orq.Chem., 21, 596-697 (1956). Оптически активное соединение формулы [IV] можно получить, например, способом, сходным со способом, описанным в Repke, D.B. and Ferquson, W.J., J.Heterocycl., Chem., 13, 775-778 (1976).

Исходное соединение формулы [IV] можно получить, например, способом, описанным в J.Orq.Chem., 25, 1548-1558 (1960).

Среди соединений формулы [IV] соединение формулы [IV], у которого остаток следующей структуры: где R₅ такой же, как определено выше, соединяется с положением 3 ядра индола, можно получить в соответствии со способом, описанным в J.Orq.Chem., 51, 4294- 4295 (1986).

Способ (b): Соединение формулы [I] данного изобретения, где заместитель R₁ представляет более ограниченную группу R'₁, т.е. соединение формулы [I-b]: где R'₁ представляет низший алкил, необязательно замещенный гидроксигруппой, фенилсульфониламиногруппу, низший алкилсульфониламиногруппу, моно- или ди-низший алкиламиносульфонильную группу или группу, выбранную из следующих групп (а)', (b), (с) и (d)', или R'₁, в комбинации с R₂ образует метилендиоксигруппу, причем эта метилендиоксигруппа необязательно замещена карбоксильной группой или низшей алкоксикарбонильной группой, (а)' группа формулы -X'-Ra (где X' представляет О или S, Ra такой же, как определено выше, при условии, что, когда X' представляет S, тогда Ra представляет низшую алкильную группу); (b) группа формулы (где Rb, Rbb, m и n такие же, как определено выше); (с) группа формулы -O(CH₂)_p-Rc (где Rc и p такие же, как определено выше); d)' группа формулы -Y'-(CH₂)_q-Rd (где Y' представляет S, Rd и q такие же, как определено выше); можно получить реакцией соединения формулы [V] где R₄ такой же, как определено выше, с соединением формулы [VI] где R'₁, R₂, R₄ и R₅ такие же, как определено выше, в условиях восстановления.

"Реакция в условиях восстановления" в данном изобретении означает реакцию соединения [V] и соединения [VI] в присутствии восстановителя или катализатора, который может восстанавливать только иминогруппу, образованную в процессе реакции, но совсем не затрагивает карбонильную группу.

Восстановитель включает, например, цианоборогидрид натрия и катализатор включает, например, палладий, оксид платины и т.д.

Реакцию проводят в присутствии восстановителя или катализатора в подходящем растворителе. Растворитель предпочтительно представляет спирты, например метанол, этанол и т.д. Реакцию обычно проводят при температуре от около 20^oC до около 80^oC, когда используют восстановитель и когда используют катализатор, ее обычно проводят при температуре от около 10^oC до около 25^oC.

Способ (c) Соединение формулы [I], где в заместитель R₁ или R₂ не включена карбонильная группа или цианогруппа, т.е. соединение формулы [I-c] где R''₁ представляет низший алкил, необязательно замещенный гидроксигруппой, фенилсульфониламиногруппу, низший алкилсульфониламиногруппу, моно- или ди-низший алкиламиносульфонильную группу или группу, выбранную из следующей группы (а) или (с)'', или R''₁ вместе с R''₂ образуют метилендиоксигруппу, (а) группа формулы -X-Ra (где X и Ra такие же, как определено выше); (с)'' группа формулы -O(CH₂)_p-Rc'' (где Rc'' представляет гидроксигруппу, фенильную группу или группу формулы (где R_A представляет атом водорода или низшую алкильную группу и p такой же, как определено выше), R''₂ представляет атом водорода, атом галогена, низшую алкильную группу, которая необязательно замещена гидроксигруппой, гидроксигруппу, низшую алкоксигруппу или определенную выше группу (с)'' или R''₂ вместе с R''₁ образуют метилендиоксигруппу и R₃, R₄ и R₅ такие же, как определено выше, можно получить восстановлением соединения формулы [VII] где R''₁, R''₂, R₃, R₄ и R₅ такие же, как указано выше.

Реакцию проводят в присутствии восстановителя в подходящем растворителе. Восстановитель включает, например, диборан, литийалюминийгидрид или его алкоксикомплекс, его соль переходного металла, борогидрид натрия, в который добавлен хлорид алюминия, трехфтористый бор, оксихлорид фосфора или карбоновая кислота (например, уксусная кислота, трифторуксусная кислота) и т.д. Растворитель включает, например, простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, тетрагидрофуран, диметоксиэтан, диоксан, диглим и т.д. Температура реакции варьируется в соответствии с типом используемого восстановителя, но обычно она находится в интервале от около 0^oC до около 160^oC.

В указанном выше способе стереоконфигурация асимметричного атома углерода исходного соединения [VII] остается в конечном продукте.

Исходное соединение [VII] является новым соединением, его получают, например, реакцией соединения формулы [IX] где R₄ такой же, как определен выше, с соединением формулы [X] где R''₁, R''₂, R₃ и R₅ такие же, как указано выше, или с его солью.

Реакцию соединения [IX] и соединения [X] проводят в присутствии конденсирующего средства, например N,N'-дициклогексилкарбодиимида, гидрохлорида 1-этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимида, N,N'-кapбoнилдиимидaзoлa, N, N'-карбонилдисукцинимида, 1-этоксикарбонил-2-этокси- 1,2-дигидрохинолина, дифенилфосфорилазида, пропанфосфонового ангидрида (ангидрид пропанфосфоновой кислоты) и т.д. Когда в качестве конденсирующего средства используют N,N'-дициклогексилкарбодиимид или гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимида, реакцию можно проводить с добавлением в нее N-гидроксисукцинимида, 1-гидроксибензотриазола и т.д.

Реакцию обычно проводят в подходящем растворителе. Растворитель включает, например, те же растворители, которые упомянуты для способа (а). Кроме того, соединение [X] можно использовать в форме его кислотно-аддитивной соли, как упоминается в способе (а), и, когда используют кислотно-аддитивную соль соединения [X], реакцию проводят в присутствии органического основания, например триэтиламина, трибутиламина, диизопропилэтиламина, N-метилморфолина и т.д. Реакцию обычно проводят при температуре от около 20^oC до около 50^oC.

Стереоконфигурация соединения [IX] и соединения [X] остается в целевом соединении [VII].

Оптически активное соединение [IX] получают, например, способом, похожим на способ, описанный в Collet, A. and Jacques. J., Bull.Soc.Chim.France, 3330-3334 (1973).

Оптически активное соединение [X] получают, например, способом, похожим на способ, описанный в первой публикации патента Японии (Kokai) - 22559/1988.

Продукты, полученные в указанных выше способах, можно выделить и очистить обычным способом, например хроматографией, перекристаллизацией, переосаждением и т.д.

Продукты, полученные указанными выше способами, можно получить в форме кислотно-аддитивной соли или свободного основания согласно используемым условиям реакции. Эти продукты можно превратить в кислотно-аддитивную соль или свободное основание обычным способом.

В каждом из указанных выше способов, когда заместитель R₁ или R₂ представляет аминогруппу или низшую алкоксигруппу, замещенную группой формулы или когда заместитель R₁ или R₂ содержит карбоксильную группу или гидроксигруппу, целевое соединение можно эффективно получить реакцией исходных соединений, у которых этот заместитель защищен обычной защитной группой, и затем с последующим удалением защитных групп у продукта.

Когда соединения данного изобретения, полученные указанными выше способами, или исходные соединения являются рацемическим соединением или находятся в форме смеси диастереомеров, каждый стереоизомер отделяют обычным способом, например способом, описанным в публикации N 455006 Европейского патента.

Лучший способ осуществления изобретения Фармакологические эксперименты: Следующие эксперименты были выполнены для того, чтобы оценить активность представительных соединений данного изобретения в виде: (1) Активностей, стимулирующих ₃- и ₂- адренергические рецепторы человека; (2) Активности, снижающей содержание глюкозы в крови; (3) Активности против ожирения.

Сначала объясняется создание клеточных линий, сильно экспрессирующих ₃- и ₂- адренергические рецепторы человека, и затем приводятся примеры экспериментов с их использованием.

Создание клеточной линии, сильно экспрессирующей ₃-адренергический рецептор человека: (1) Конструирование экспрессирующего вектора: Экспрессирующий вектор животных клеток, pKCRH2 [Mishina et al. Nature 307: 604-608 (1984)], расщепляли рестрикционной эндонуклеазой SalI и затупляли с использованием набора для затупления ДНК (Takara Shuzo Co., Ltd). Отдельно другой экспрессирующий вектор для животных клеток pSV2-neo [Southern and Berq, J. Mol. Appl.Genet. 1:327-341 (1982)] расщепляли рестрикционными эндонуклеазами AccI и AatII и затупляли при помощи набора для затупления ДНК. Эти ДНК лигировали при помощи набора для лигирования ДНК (Takara Shuzo Co. , Ltd) и вставляли в E.Coli HB 101 общепринятым способом, получая трансформанты. Плазмидные ДНК получали из трансформантов и расщепляли рестрикционной эндонуклеазой PstI. Был выбран клон, который продуцировал фрагменты, имеющие приблизительно 3,8 т.п.н. (тысяч пар нуклеотидов), 2,2 т.п.н., 1,4 т. п.н и 0,9 т.п.н, чтобы получить плазмиду, названную pKCNO. Плазмиду pKCNO расщепляли рестрикционной эндонуклеазой HindIII и лигировали следующим синтетическим адаптером 1, представленным SEQ ID N:1, при помощи набора лигирования ДНК.

5'-AGCTCCTGCAGGCGCGCCGATA TCTCGAGCGGCCGCGGTACCA-3' 3'-GACGTCCGCGCGGCTATAGAG CTCGCCGGCGCCATGGTTCGA-5' Реакционную смесь использовали для трансформации E.coli HB101 и из выбранных трансформантов получали плазмидную ДНК. Плазмидную ДНК расщепляли рестрикционными эндонуклеазами DraI и HindIII и выбирали клон, который продуцировал фрагмент, имеющий приблизительно 430 п.н., чтобы получить плазмиду, названную pKCNl, в качестве экспрессирующего вектора.

(2) Конструирование экспрессионной плазмиды: Общую ДНК экстрагировали из клеточной линии нейробластом человека SK-N-MC (АТСС НТВ 10) и кДНК синтезировали с использованием SuperScript-системы (Life Technologies), кДНК амплифицировали набором для полимеразной реакции синтеза цепи GeneAmp (Perkin-Elmer) с использованием в качестве праймеров следующих олигонуклеотидов 1 и 2, представленных SeQ ID N 2 и N 3 соответственно. В реакционную смесь полимеразной реакции синтеза цепи добавляли 10% диметилсульфоксид.

5'-CCACCTGCAGGTGATTTGGGAGACCCC-3' --- олигонуклеотид 1 5'-TTCTCGAGCCGGGGAATCCCATGGGAC-3' --- олигонуклеотид 2 После расщепления реакционной смеси рестрикционными эндонуклеазами Sse 83871 и StuI электрофорезом был выделен фрагмент, имеющий приблизительно 1,3 т. п.н. Этот фрагмент лигировали экспрессирующим вектором pKCNl, который был расщеплен рестрикционными эндонуклеазами Sse83871 и EcoRV, и продукт лигирования вставляли в E.coli HB101 общепринятым способом. Плазмидную ДНК получали из выбранного трансформанта и определяли нуклеотидную последовательность фрагмента, имеющего приблизительно 1,3 т.п.н., полученного расщеплением плазмидной ДНК рестрикционными эндонуклеазами Sse83871 и XhoI. Последовательность была идентична последовательности кДНК ₃-адренергического рецептора человека, сообщенной Leilas et al. [FEBS Lett. 324:127-130 (1994)]. Эта плазмида для экспрессии ₃-адренергического рецептора человека, была названа pKREX10.

(3) Создание сильно экспрессирующей клеточной линии: Клеточную линию яичников китайских хомяков CHO-K1 (АТСС CCL 61) трансформировали плазмидой, экспрессирующей ₃-адренергический рецептор человека, способом фосфата кальция и трансформанты выбирали с применением 600 мкг/мл G-418 (Life Technologies) в минимальной поддерживающей среде Дульбекко (ICN Biochemicals), дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой и 11,5 мкг/мл пролина. В культурах 69 G-418-устойчивых клонов эти клетки отделяли инкубированием с забуференным фосфатом в солевом растворе, содержащем 0,5 мМ этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), при 37^o в течение 10 минут после удаления среды. Клетки собирали центрифугированием и суспендировали в 10 мМ Трис-HCl-буфера (pH 7,5), содержащего 1 мМ ЭДТА, при концентрации 510⁶ клеток/мл. Эту суспензию (20 мкл) и (-)-3-[¹²⁵I] йодцианопиндолол (1,5 нМ) (Амстердам) смешивали в среде RPMI-1640 (200 мкл) (ICN Biomedicals), содержащей 1% бычий сывороточный альбумин, 0,1% NaN₃ и 20 мМ HEPES-буфера (pH 7,4), и смесь инкубировали при 4^oC в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтровали через стеклянный фильтр GF/C (Whatman), предварительно пропитанный 0,3% полиэтиленимином и промытый, с использованием устройства BIO-DOT (Bio-Rad Laboratories) и радиоактивность на фильтре подсчитывали счетчиком гамма-лучей. Один клон, названный CHO/pKREX10-36, который показал наивысшую радиоактивность, использовали в качестве клеточной линии, экспрессирующей _3/ -адренергический рецептор человека.

Создание клеточной линии, сильно экспрессирующей ₃-адренергический рецептор человека.

кДНК была синтезирована при помощи Поли (A)⁺ -РНК, полученной из головного мозга человека (Clontech: торговый номер; CL6516-1), с использованием SuperScrip -систем (Life Technologies). Эту кДНК амплифицировали набором для полимеразной реакции синтеза цели GeneAmp (Perkin-Elmer) с использованием в качестве праймеров следующих олигонуклеотидов, представленных SEQ ID N 4 и N 5 соответственно 5'-ACACCTGCAGGTGAGGCTTCCAGGCGTCC-3' --- олигонуклеотид 3 5'-TGTAAGCTTCTGCTTTACAGCAGTGAGTC-3' --- олигонуклеотид 4 После расщепления реакционной смеси рестрикционными эндонуклеазами Sse83871 и HindIII электрофорезом выделяли фрагмент, имеющий приблизительно 1,4 т.п.н. Этот фрагмент лигировали экспрессионным вектором pKCNl, расщепленным рестрикционными эндонуклеазами Sse83871 и HindIII, и вставляли в E.coli HB101 общепринятым способом. Плазмидную ДНК получали из выбранного трансформанта и определяли нуклеотидную последовательность фрагмента, имеющего приблизительно 1,4 т. п. н. , полученного расщеплением этой плазмидной ДНК рестрикционными эндонуклеазами Sse83871 и HindIII. Последовательность была идентична последовательности кДНК ₂-адренергического рецептора человека, сообщенной Kobilka B.K. et al. [Proc.Natl.Acad. Sci USA 84: 46-50 (1987)]. Эта плазмида была названа как pKREX21 для сильно экспрессирующего ₂-адренергический рецептор человека, ее вводили в CHO-K1 таким же образом, как в способе создания клеточной линии, экспрессирующей ₃-адренергический рецептор человека. Один клон, названный CHO/pKREX21-8, который показывал наивысшую радиоактивность, использовали для клеточной линии, экспрессирующей ₂-адренергический рецептор человека.

Эксперимент 1: Активность, стимулирующая -адренергический рецептор человека: Клеточную линию CHO/pKREX10-36, сильно экспрессирующую ₃-адренергический рецептор человека, культивировали в течение 3 дней с минимальной поддерживающей средой Дульбекко, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой, 11,5 мкг/мл пролина и 200 мкг/мл G-418. Клетки отделяли инкубированием с забуференным фосфатом солевым раствором, содержащим 0,5 мМ ЭДТА, при 37^oC в течение 10 минут после удаления указанной выше среды. Клетки CHO/pKREX10-36 собирали центрифугированием и суспендировали в сбалансированных солях Ханка (ICN Biomedicals), содержащих 1 мМ L-аскорбиновой кислоты и 1 мМ 3-изобутил-1-метилксантина, до концентрации 210⁶ клеток/мл. Эту суспензию (100 мкл) и испытуемое соединение смешивали в той же сбалансированной соли (500 мкл) и инкубировали при 37^oC в течение 30 минут с последующим кипячением в течение 5 минут для окончания реакции. После центрифугирования реакционной смеси количество цАМФ в супернатанте измеряли с использованием системы цАМФ ElA (Амстердам).

Аналогично количество цАМФ измеряли с использованием CHO/pKREX21-8 в качестве сильно экспрессирующего ₂-адренерги