Соединения 2-аминокарбоновой кислоты, замещенной 5- арилизоксазол-4-илом, и фармацевтическая композиция на их основе

Соединения 2-аминокарбоновой кислоты, замещенной 5- арилизоксазол-4-илом, и фармацевтическая композиция на их основе

Реферат

 

Описываются новые соединения 2-аминокарбоновой кислоты, замещенной 5-арилизоксазол-4-илом, имеющие общую формулу I где А представляет собой связь или пространственную группу С_1-6 алкилен, В представляет собой -CH(NН₂)-COOH или является группой формулы II; Е представляет собой O, СОО, O(CH₂)_n-COO (где n - целое число от 1 до 6) или 5-тетразолил; D представляет собой O; R₁ представляет собой фенил, нафтил, тиенил, бензотиенил, пиридил, оксазолил, тиазолил, пиразолил, триазолил, тетразолил, хинолинил или фурил, или фенил, тиенил, пиразолил, триазолил, тетразолил, пиридил или фурил, замещенные одним или двумя заместителями, выбранными из группы, содержащей галоген, С_1-6 алкил или трифторметил, при условии, что если А представляет собой метилен, В - группу-CH(NH₂)-COOH, Е представляет собой O; D представляет собой O, а R₁ - фенил или фенил, замещенный галогеном, то указанное соединение находится в форме чистого энантиомера; или фармацевтически приемлемая соль этих соединений. Новые соединения представляют собой сильные лиганды рецепторов ЕАА. 3 с. и 7 з.п.ф-лы, 2 табл.

Изобретение касается новых классов производных (5- арилизоксазол-4-ил) замещенной 2-аминокарбоновой кислоты, которые являются рецепторами лигандов аминокислот (ЕАА), полезных при лечении церебральной ишемии, болезни Хантингтона, эпилептических нарушений, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, шизофрении, боли, депрессии и тревожных состояний.

Предпосылки настоящего изобретения В настоящее время в результате усиленного изучения возбуждающего механизма центральной нервной системы (ЦНС) на протяжении трех последних десятилетий пришли к общему мнению, что (S)-глютамат (Glu) является главным нейромедиатором ЕАА в ЦНС (Lodge D. Excitatory Amino Acids in Health and Disease. J. Wiley & Sons: Chichester, 1988; Wheal H., Thompson A. - Excitory Amino Acids and Synaptic Transmission. Academic Press: London, 1991; Meldrum B.S. Excitatory Amino Acid Antagonists. Blackwell Sci. Pubi.: Oxford, 1991; Krogs-gaard-Larsen P. , Hansen J.J. Excitory Amino Acid Receptors: Design of Agonist and Antagonist. E. Horwood: Chichester, 1992). Glu-управляемая нейротрансмиссия осуществляется большим числом рецепторов, классифицированных по меньшей мере в 5 гетерогенных семей и названных NMDA, АМРА, каиновой кислотой, метаботропным и 1-АР-4 классами рецепторов (Monaghan D.T., et al. Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1989, 29, 365-402; Watkins J.C., Krogsgaard-Larsen P. , Honore T. Trends Pharmacol. Sci. 1990, II. 25-33; Simon P.P., Excitatory Amino Acids. Thieme Med. Publ.: New York, 1992).

Существует весьма убедительное доказательство, подтверждающее точку зрения о том, что избыточное возбуждение, переносимое рецепторами ЕАА ("токсичность возбуждения") представляет собой фактор, имеющий особую важность для церебральной ишемии, вызванной ударом, повреждениями головы, асфиксией, субарахноидальным кровотечением, остановкой сердца и другими ситуациями. (Lodge D., 1988, та же ссылка; Meldrum B.S., 1991, та же ссылка). В модели на животных показано, что эти нарушения, вызванными разными ишемическими условиями, могут быть ослаблены введением Glu-антагонистов. Итак, хотя относительная важность указанных разных классов рецепторов ЕАА в феномене поддержания ишемического инсульта неясна, в целом достигнуто общее мнение, что в таких условиях антагонисты рецепторов ЕАА представляют собой мощные терапевтические средства.

Накопление доказательств, полученных от разных направлений нейрохимического и фармакологического исследования, дает возможность предположить, что нарушение механизмов рецепторов ЕАА, включая, возможно, и "токсичность возбуждения" играет роль при болезни Хантингтона (Young А.В., et al., Science, 1988, 241, 981-983), эпилептических нарушениях (Krogsgaard-Larsen P, Hansen J. J. , 1992, там же), болезни Паркинсона (Klockgether Т. Turski L. Trends Neurosci. 1989, 12, 285-286) и болезни Альцгеймера (Greenamyre J.T., Maragos W.F. Cerebrovasc. brain. Metab. Rev., 1993, 5, 61-94; Francis P.Т. et al. J. Neurochem. 1993, 60, 1589-1604).

Далее, центральные рецепторы ЕАА могут быть вовлечены в синаптический механизм, лежащий в основе шизофрении (Reynolds G.P. Trends. Pharmacol. Sci. , 1992, 13. 116-121), болей и тревожных состояний (Drejer J. In: Excitatory Amino Acid Receptors: Design of Agonists and Antagonists (Eds. Krogsgaard-Larsen P., Hansen J.J.) E. Hornwood: Chichester 1992, pp. 352-375) и депрессии (Trullas R., Skolnick P. Eur. J. Pharmacol. 1990, 185, 1-10; Trullas et al. Eur. J. Pharmacol. 1991, 203, 379-385). Итак, сниженная функция рецепторов ЕАА (гипоактивность ЕАА), как оказалось, играет роль, например, при шизофрении (Deutsch S.I, et al., Clin. Neuropharmacol. 1989, 12, 1-3) и некоторых клинических симптомах, выявляемых в болезни Альцгеймера (Greenamyre J. T. ei al. Prog. Neuro-Psychopharniacol. & Biol. Psychit. 1988, 12, 421-430). Возможно, что "токсичность возбуждения", так же, как гипоактивность ЕАА, включены в сложный механизм, связанный с болезнью Альцгеймера (Greenamyre J. T.; 1988, там же; Greenamyre J.T., Maragos W.F., 1993, там же).

Поэтому считается, что лиганды рецепторов ЕАА полезны для лечения церебральной ишемии, болезни Хантингтона, эпилептических нарушений, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, тревожных состояний, шизофрении, депрессии и болей.

Большинство испытанных таким образом агонистов рецепторов ЕАА в большей или меньшей степени демонстрируют выраженную нейротоксичность в моделируемых системах, а поэтому клиническое использование таких соединений может быть ограниченным (Carlsson М., Carlsson A., Trends. Neurosci., 1990, 13, 272-276; Willetts J., Balster R.L., Leander J.D., Trends Pharmacol. Sci., 1990, II, 423-428).

С другой стороны, частичные агонисты ЕАА, демонстрирующие необходимый баланс между агонизмом и антагонизмом, представляют значительный терапевтический интерес (Greenamyre J.t., 1988, там же; Christensen 1.Т., et al.. Drug Des. Del. 1989, 5, 57-71; Francis P.Т., et al., J. Neurochem. 1993, 60, 1589-1604). Частичные агонисты за счет своего профиля антагонистов ЕАА могут демонстрировать терапевтически полезную нейрозащиту, а в некоторых случаях являются в достаточной степени агонистическими для предотвращения общей блокады нейротрансмиссии, передаваемой особыми рецепторами ЕАА.

Было обнаружено, что АТРА, представляющий собой 5-трет- бутильный аналог АМРА ((RS)-2-амино-3-(3-гидрокси-5- метилизоксазол-4-ил)пропионовой кислоты), обладает системной активностью, в то время как его нейротоксическое воздействие на животных не отмечалось (Ornstein P.L., et al., J. Med. Chem. 1993, 36, 2046-2048; Lauridsen J., Honore Т., Krogsgaard-Larsen P., J. Med. Chem., 1985, 28, 668-672).

Было обнаружено, что подобно самому АМРА, ряд его моно- и бициклических аналогов демонстрируют выборочное агонистическое влияние на рецепторы АМРА (Hansen J.J., Krogsgaard-Larsen P., Med. Res. Rev. 1990, 10, 55-94; Krogsgaard-Larsen P. , Hansen J.J., 1992, там же). Один из этих аналогов, (RS)-2-амино-3- (3-гидрокси-5-фенилизоксазол-4-ил)пропионовая кислота (АРРА), в котором метильная группа АМРА замещена фенильной группой, имеет слабый, но характерный агонистический профиль (Christensen I.T., et а1., 1989, там же).

Как видно из приведенного выше доказательства, не обладающие нейротоксичностью ЦНС-активные лиганды рецепторов ЕАА, хорошо проникающие в ЦНС, крайне желательны для лечения различных указанных выше заболеваний, и поэтому объектом настоящего изобретения является обеспечение таких новых лекарственных средств.

Резюме изобретения В настоящее время установлено, что новый класс производных (5- арилизоксазол-4-ил) замещенных 2-карбоновых кислот представляет собой сильные лиганды рецепторов ЕАА.

Поэтому настоящее изобретение касается нового класса соединений (5-арилизоксазол-4-ил)- или (5 арилизотиазол-4- ил)замещенных 2-карбоновых кислот, имеющих общую формулу I в которой A представляет собой связь или пространственную группу, выбранную из C_1-6 алкилена, C_2-6 алкенилена или C_2-6 алкинилена, или циклоалкилена; В выбирают из группы -CH(NR'R'')-COOH, где R' и R'' независимо друг от друга представляют собой водород или C_1-6 алкил, или группу формулы (II) в которой R₂, R₃ и R₄ независимо выбирают из группы, содержащей а) водород, C_1-6 алкил, C_2-6 алкенил, C_2-6 алкинил, циклоалк(ен)ил, циклоалк(ен)ил-C_1-6 алк(ен/ин)ил, фенил-C_1-6 алкил, тиенил-C_1-6 алкил, и b) C_1-6 алкил, C_2-6 алкенил и C_2-6 алкинил, в которой один или более атомов углерода заменены N, О и/или S; или R₃ и R₄ связаны так, что они образуют C₂-C₆ алкилен, C₂-C₆ алкенилен или C₂-C₆ алкинилен группу; или R₄ и R₂ связаны так, что они образуют C₁-C₃ алкилен, C₂-C₃ алкенилен или C₂-C₃ алкинилен группу, необязательно моно- или бизамещенную гидрокси, или метилом, или CH₂-O-CH₂; E представляет собой О, S, COO, (CH₂)_n-COO, O-(CH₂)_n-COO или S-(CH₂)_n-COO (где n - целое число от 1 до 6, 5-тетразолил, 5-тетразолил-C_1-6 алкил, 3-гидроксиизоксазолил или 3-гидроксиизоксазолил-C_1-6 алкил группу; D представляет собой О или S; и R₁ представляет собой арильную или гетероарильную группу, или арильную или гетероарильную группу, замещенную одним или большим числом заместителей, выбранных из галогена, C_1-6 алкила, C_1-6 алкокси, гидрокси, C_1-6 алкилтио, C_1-6 алкилсульфонила, C_1-6 алкиламино или ди-(C_1-6 алкил)амино, циано, нитро, трифторметила или трифторметилтио; при условии, что если А представляет собой метилен, B представляет собой группу -CH(NH₂)-COOH, E представляет собой О, D представляет собой О, a R₁ - фенил, или фенил, замещенный галогеном, или метокси, то указанное соединение должно находиться в форме чистого энантиомера.

Другой аспект настоящего изобретения относится к методу получения новых соединений формулы I.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к фармацевтическому составу, содержащему новое соединение формулы I вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

Следующий аспект настоящего изобретения касается использования соединения формулы I для лечения церебральной ишемии, болезни Хантингтона, эпилептических нарушений, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, шизофрении, боли, депрессии и тревожных состояний.

Было обнаружено, что некоторые соединения настоящего изобретения являются селективными лигандами рецепторов АМРА in vitro, со сродством при низких микромолекулярных концентрациях, в то время как другие соединения, как было установлено, селективно связаны с рецепторами NMDA in vitro. Другие соединения настоящего изобретения, как было обнаружено, имеют сродство как к рецепторам АМРА, так и к рецепторам NMDA in vitro. Более того, установлено, что некоторые соединения настоящего изобретения являются агонистами, в то время как другие - антагонистами. Таким образом, соединения настоящего изобретения полезны для лечения церебральной ишемии, болезни Хантингтона, эпилептических нарушений, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, шизофрении, боли, депрессии и тревожных состояний.

Детальное описание изобретения Некоторые соединения общей формулы I могут существовать как оптические изомеры, и эти оптические изомеры также охвачены настоящим изобретением.

В общей формуле I термин "C_1-6 алкил" применяют для обозначения разветвленной или неразветвленной алкил группы, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, включая такие группы, как метил, этил, 1-пропил, 2-пропил, 1-бутил, 2-бутил, 2-метил-2- пропил и т.д. Аналогично, терминами "C_2-6 алкенил" и "C_2-6 алкинил" обозначены разветвленные или неразветвленные группы, содержащие от 2 до 6 атомов углерода, а термины "C_1-6 алкилен", "C_2-6 алкенилен" и "C_2-6 алкинилен" обозначают такие разветвленные или неразветвленные бивалентные группы. Термин "циклоалкил" обозначает такую группу с 3-7 атомами углерода.

Термин "алк(ен/ин)ил" обозначает, что указанная группа может быть алкил, алкенил или алкинил группой.

Термин "связь" (используемый для А) обозначает, что B может быть присоединен непосредственно в положение 4 изоксазольного цикла.

"Галоген" обозначает фтор, хлор, бром или иод.

Термин "арил" используют для обозначения карбоциклической ароматической моноциклической или слившейся бициклической группы или бифенильной группы, а термин "гетероарил" используют для обозначения ароматической моноциклической или бициклической группы, содержащей по меньшей мере один гетероатом. Примерами таких групп являются 5-членные ароматические гетероарильные группы (имеющие 1 - 4 гетероатома, выбранных из N, О и S), такие, как тиенил, фурил, пиролил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, пиразолил, имидазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил и тетразолил. Кроме того, примерами их являются бензотиенил, бензофуранил, индолил, фенил, пиридил, пиримидинил, пиридазинил, пиразинил, нафтил, хинолил, хиназолинил, хиноксалинил и циннолинил.

Некоторые соединения общей формулы I могут существовать как фармацевтически приемлемые соли, которые также охватываются настоящим изобретением.

Указанными солями соединений общей формулы I являются соли, образованные нетоксичными органическими солями, например, малеиновой, фумаровой, бензойной, аскорбиновой, щавелевой, винной, молочной и яблочной кислот или неорганических кислот, например, хлористоводородной, бромистоводородной, серной, фосфорной и азотной кислот; или они могут быть солями неорганических оснований, таких, как соли щелочных металлов, например, соли натрия, калия или лития, соли щелочноземельных металлов, соли кальция или магния или соли аммония или соли органических оснований.

В формуле I A предпочтительно представляет собой связь или C_1-3 алкилен.

В предпочтительно представляет собой -CH(NR'R'')-COOH группу, в которой R' и R'' - водород или группа формулы II, где R₂, R₃ и R₄ представляют собой водород или низший алкил, или R₄ и R₂ связаны, образуя C₁-C₃ алкилен группу. Более предпочтительно, чтобы B представлял собой -CH(NH₂)-COOH или группу формулы II, в которой каждый из R₂, R₃ и R₄ - водород.

Предпочтительно, чтобы E представлял собой О, COO, -O(CH₂)_n- COO (n = 1, 2 или 3) или тетразолил, a D - кислород.

Особенно подходящими группами R₁ являются тиенил, замещенный тиенил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, пиразолил, имидазолил, оксадиазолил, замещенный оксазолил, тиадиазолил, тетразолил, триазолил, пиридил, фенил, бифенил и нафтил. Предпочтительны группы 2-тиенил, 3-тиенил, фенил, 2-пиридил, 4-пиридил, 2-тиенил и фенил, замещенные галогеном или метилом.

В предпочтительном воплощении настоящего изобретения А представляет собой связь или C₁-C₃ алкилен, В представляет собой - CH(NH₂)-COOH или группу формулы II, где каждый из R₂, R₃ и R₄ представляет, собой водород, E и D оба представляют собой кислород, а R₁ - 2-пиридил, 4-пиридил, тиенил, фенил, замещенный тиенил или замещенный фенил.

Согласно настоящему изобретению новые соединения формулы I получают методом, включающим: а) для получения соединения формулы I, в которой B представляет собой -CH(NR'R'')-COOH группу, где R' и R''' были определены выше, - снятие защиты с соединения общей формулы III в которой R₁, R', A, D и E были определены выше, R₅, R₇ и R₈ - защитные группы, a R₆ - водород или защитная группа; b) для получения соединения формулы I, в которой B представляет собой -CH(NR'R'')-COOH группу, где R' и R'' оба представляют собой водород, - снятие защиты с соединения общей формулы IV в которой R₁, R₅, А, D и E были определены выше; с) для получения соединения формулы I, в которой B представляет собой группу формулы II, - реакцию присоединения- элиминирования соединения общей формулы V с соединением общей формулы VI в этих формулах R₁-R₄, A, D и E были определены выше, a R'₅ представляет собой водород или защитную группу; d) для получения соединения формулы I, в которой В представляет собой группу формулы II, где R₄ и R₂ связаны между собой, образуя C_1-3 алкилен, C₂-C₃ алкенилен или C₂-C₃ алкинилен группу, необязательно моно- или бизамещенную гидрокси или метилом, - взаимодействие соединения формулы VII в которой R₁, R₃, A, D и E были определены выше, R₄ и R₂ связаны вместе, образуя указанную выше группу, а ВОС представляет собой трет-бутоксикарбонил; с 3,4-диэтокси-3-цикло-бутен-1,2-дионом при последующем замыкании цикла и снятии защиты; е) для получения соединения формулы I, в которой B представляет собой группу формулы II, а один или более из R₂-R₄ отличен от водорода - алкилирование соединения общей формулы VIII в которой R₁, R₂, R₃, R₄, A, D и E были определены выше, притом, что по крайней мере один из R₂-R₄ представляет собой водород, R'₅ - водород или защитную группу.

В методе по настоящему изобретению предпочтительными защитными группами являются R₅ и R'₅ - низший алкил, бензил или бензолсульфонил группа; R₆ - низший алкоксикарбонил, R₇ - низший алкил и R₈ - низший алкилкарбонил.

Одноступенчатое снятие защиты согласно методу а) проводят обработкой соединения формулы III подходящей водной кислотой, удобно использовать водный раствор 48% HBr, насыщенный раствор HBr в уксусной кислоте или 2-12 н. водный раствор HCl. Снятие защиты можно проводить в несколько стадий, последовательно используя водные кислоты и водные основания; удобно его осуществлять последовательно в водной кислоте, такой, как 1-12 н. HCl, водном основании, таком, как 1-8 н. NaOH и в водной кислоте, такой, как 1-12 н. HCl; или последовательно в водном основании, таком, как 1-8 н. NaOH, и в водной кислоте, такой, как 1-12 н. HCl. В случае, когда R₅ представляет собой бензил, снятие защиты с E-группы завершают каталитическим гидрированием, которое удобно проводить или до или после снятия защиты с - аминокислоты, используя в качестве катализатора палладий.

Исходные вещества для соединения общей формулы III удобно получать так, как это описано в работе Christensen I.T., et al.. Drug Design and Delivery, 1989, 5, 57-71 и в работе Christensen S.B., et al., Acta Chem. Scand., 1978, B32 27-30. Исходные вещества для соединения общей формулы III, в которой E представляет собой COO, (CH₂)_n-COO, O-(CH₂)_n-COO, S-(CH₂)_n-COO (при n=1-6), 5- тетразолил-C_1-6 алкил группу или 3-гидроксиизоксазолил-C_1-6 алкил группу, удобно получать так, как это описано в работах: Krogsga-ard-Larsen P., et al. , J. Med. Chem., 1991, 34, 123-130; Madsen U., Bio. Med. Chem. Lett., 1993, 8, 1649-1654; Madsen U., Wong E., J. Med. Chem. 1992, 35, 107-111.

Исходные вещества для соединения общей формулы III, в которой R₁ представляет собой гетероарильную группу, нестойкую в кислых условиях, удобно получать из (3-алкокси-4-метилизоксазол-5-ил) карбоновой кислоты путем образования гетероарила в положении 5 бромированием 4-метилизоксазольной группы с последующим алкилированием предшественником аминокислоты, например диэтилацетамидомалонатом. Алкил, защищенный 3-гидроксиизоксазольной группой, может быть повторно защищен или может не быть защищен повторно подходящей защитной группой, подобной бензолсульфонильной группе, до, во время или после синтеза гетероарила в положении 5 изоксазола (3-алкокси-4- метилизоксазол-5-ил)карбоновую кислоту удобно получить из 3-алкокси-4,5-диметилизоксазола (синтезированного, как это описано в работе Hansen J.J., J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1980, 1, 1826 - 1833) бромированием с последующим окислением 5-метилизоксазольной группы в соответствующее соединение 5-изоксазолкарбоновой кислоты.

В других случаях исходные вещества общей формулы III, в которой R₁ представляет, например, пиридил группу, удобно получать модификацией метода, описанного в работе Tomita К., Ann. Sankyo Res. Lab., 1973, 25, 3-5. Защита 3-гидрокси группы в полученном 3-гидрокси-5-арилизоксазоле с последующим введением гидроксиметильной группы в положение 4 изоксазольного цикла приводит к промежуточным соединениям, которые затем легко превращаются в исходные вещества формулы III.

В случае b) одноступенчатое снятие защиты проводят обработкой соединения формулы IV подходящей водной кислотой или основанием, это удобно осуществлять в 2-8 н. водной соляной кислоте. Снятие защиты можно также провести последовательно по стадиям, используя водные кислоты и водные основания, как это было указано выше для метода а). Цикл гидантоина также можно расщепить с помощью водного раствора Ba(OH)₂, водной 10-70% серной кислоты или использованием энзимов, таких, как гидантоинаса. Указанное расщепление цикла гидантоина может быть осуществлено или до, или после снятия защиты с E-группы.

Циклы гидантоина в соединениях общей формулы IV легко образуются согласно методам, описанным Ware Е., Chem Rev., 1950, 46, 403-470. Расщепление цикла гидантоина удобно проводить по аналогии с методами, описанными Curry К. , et а1., J. med. Chem., 1988, 31, 864-867, Farrington G.K., et al., J. Mod. Chem. , 1987, 30. 2062-2067, Grunewald G.L., et al., J. Med. Chem., 1980, 23, 754-758, Hirol К., et al., Chem. Pharm. Bull., 1968, 16. 444-447, Stark G.R., et al, J. Biol. Chem. 1963, 238, 214-226.

Исходные вещества для получения соединений формулы IV можно получить по аналогии с методами, описанными Madsen U., Eur. J. Med. Chem., 1993, 28, 791-800.

Если R₅ представляет собой бензил, то снятие защиты с E-группы легко осуществить гидрированием, используя в качестве катализатора палладий.

Реакцию присоединения-элиминирования согласно методу с) удобно проводить в протоном органическом растворителе, таком, как спирт, предпочтительно в присутствии подходящего неорганического основания, такого, как NaOH, при комнатной температуре. Промежуточные соединения формулы VI можно получить методами, описанными в работах Cohen S., et al., J. Amer. Chem. Soc., 1966, 88. 1533-1536, EP-A2-0496561 или Kinney W.A. et al., J. Med. Chem., 1992, 35. 4720-4726.

Промежуточное соединение общей формулы V легко получают синтезом первичных аминов по Габриелю, как это описано Sheehan J.C. et al., J. Amer. Chem. Soc. , 1950, 72, 2786-88. Исходные для этого синтеза алкилгалогениды удобно получить, как это описано, используя в качестве исходных веществ, применяемые в методе а).

Снятие защиты удобно проводить, используя водную кислоту или водное основание, предпочтительно 0.5-8 н. HCl или 0.5-8 н. NaOH или при комнатной температуре, или при повышенных температурах. Если R'₅ представляет собой бензил, то снятие защиты может быть осуществлено гидрированием с использованием в качестве катализатора палладия.

В методе d) взаимодействие и последующие замыкание цикла и снятие защиты проводят так, как это описано Kinney et al., EP-A2- 0496561.

Исходные вещества для получения соединения формулы VII могут быть получены взаимодействием, например, 4-бромметилизоксазола, полученного так, как это описано для исходных веществ в методе а), с моно-ВОС-защищенным алкилендиамином (EP-A2-0496561).

Алкилирование соединений общей формулы VIII согласно методу е) удобно осуществлять в инертном органическом растворителе, таком, как подходящий спирт, кетон или диметилформамид, предпочтительно в присутствии подходящего основания, такого, как гидрид натрия, карбонат калия или триэтиламин, как описано Kinney W.A., ЕР-А2-0496561. Исходные вещества формулы VIII получены согласно методу с).

Если - кетоэфиры используют в качестве исходных для получения 3-гидроксиизоксазолов, которые, в свою очередь, применяют как исходные для получения соединений III-V и VII-VIII, то они или доступны в коммерческом отношении, или же их можно получить методами, описанными в работах Cason J., et al., J. Org. Chem., 1953, 18, 1594-1600 и Hannick S.M., et al., J. Org. Chem., 1983, 48. 3833-3835. Соответствующие исходные изотиазолы можно получить согласно методу, описанному в ЕР-А1-0336555.

Повторное растворение соединений общей формулы I удобно проводить при образовании солей диастереизомеров, используя активные кислоты или основания, например 1-фенилэтиламин. В некоторых случаях это повторное растворение удобно проводить при образовании соединений диастереоизомеров с последующим разделением диастереоизомеров тонкослойной хроматографией или кристаллизацией.

Соли соединений настоящего изобретения легко получить методами, хорошо известными в этой области, например взаимодействием указанного соединения или с эквивалентным количеством кислоты или основания в смешиваемом с водой растворителе (таком, как ацетон или этанол) с последующим выделении соли при выпаривании и охлаждении, или с избытком кислоты или основания в растворителе, не смешиваемом с водой (таком, как диэтиловый эфир или хлороформ) при непосредственном выделении требуемой соли. Эти соли можно также получить классическими методом двойного разложения соответствующих солей.

Соединения общей формулы I и их фармацевтически приемлемые кислые дополнительные соли могут быть введены любым подходящим способом, например орально или парентерально, а указанные соединения могут находиться в любой, пригодной для такого введения форме, например в форме таблеток, капсул, порошков, сиропов или растворов или дисперсий для инъекций.

Эффективная дневная доза соединения общей формулы I или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 10 мкг/кг до 50 мг/кг веса тела.

Все значения температуры плавления определяли на оборудовании Buchi SMP-20, и они не являются точными. Спектры ¹H-ЯМР и ¹³C-ЯМР регистрировались на спектрофотометре Bruker 250 МГц (250.13 МГц для первого метода и 62.90 МГц для второго). В качестве внешнего стандарта, если иное не оговорено, применяли тетраметилсилан. Для соединений 13а, 13Ь, 14с и 14d, указанных в заглавиях, спектры ¹H-ЯМР и ¹³C-ЯМР записывали на спектрофотометре Brucker 200 MГц (200.0 МГц для ¹H-ЯМР и 50.3 МГц для ¹³C-ЯМР), при этом в качестве внешнего стандарта, если иное не оговорено, использовали тетраметилсилан.

Масс-спектры получали на системе Quattro MS-MS от VG Biotech, Fisons instruments, Manchester, GB. Эта система MS-MS была присоединена к модулярной системе высокоэффективной жидкостной хроматографии HP 1050. 20-50 мкл образца (0.1-0.05 мг/мл), растворенного в смеси ацетонитрил/вода/ концентрированный водный аммиак (25%) при объемном соотношении компонентов 25:25:1 вводили в электрораспылитель через пробоотборник при скорости тока 30 мкл/мин. Спектры получали при стандартных рабочих условиях для получения информации о молекулярных весах (MH+). Фон вычитали.

Энантиомерный избыток энатиомерных соединений определяли хиральной высокоэффективной жидкостной хроматографией на хиральной краун-эфирной колонке. Хроматографию проводили в 150 х 4 мм колонке Daicel Crownpak CR(-) или Crownpak CR(+) при элюировании при 15-40^oC водной перхлорной кислотой/ метанолом (100-85%/0-15%) со скоростью 0.4-1.0 мл/мин. Использовали один из следующих приборов: 1) Насос Jusco 880-PU, инжектор Rheodyne 7125 и детектор Waters 480 UV, установленный на 210 нм, соединенный с Merck-Hitachi D-2000 Chromato-Integratot, 2) Насос Hitachi-Merch L-6200, автоматический пробоотборник Hitachi-Merch 655А-40 и детектор Hitachi-Merch L-4000 UV, установленный на 210 нм, соединенный с Hitachi-Merch D-2500.

Чистота энантиомеров вычислялась исходя из площади пиков.

Пример 1 (RS)-2-амино-3-[3-гидрокси-5-(2-тиенил)изоксазол-4- ил] пропионовая кислота, 1а Смесь 2-бромтиофена (250.0 г, 1.53 мол) и CuCN (157.5 г, 1.76 мол) кипятили в колбе с обратным холодильником в N-метилпирролидоне (NMP) в течение 90 мин. Полученную смесь охладили до 100^oC и вылили в горячий раствор NaCN в воде (150 г NaCN в 2.5 л воды). Смесь энергично перемешивали в течение 30 мин при 80^oC, а потом отфильтровали в горячем виде. После охлаждения смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (три раза по 2 л), а потом упарили в вакууме до 1.5 л. Органическую фазу промыли водой (750 мл) и водным насыщенным раствором NACl (750 мл). Органическую фазу высушили (MgSO₄) и упаривали в вакууме до получения красно-фиолетового масла. Последнее перегоняли при пониженном давлении (1 мм Hg), в результате чего получили 2-тиофенкарбонитрил (105.3 г, 63%).

Смесь 2-тиофенкарбонитрила (25.0 г), активированного цинка (22.5 г) и CuBr₂ (0.2 г, 0.9 ммол) в бензоле (350 мл) нагревали до температуры расплавления (83^oC). В течение 60 мин при 83^oC добавляли этил-2-бромпропионат (62.2 г) в бензоле (150 мл). Полученную смесь нагревали в течение 2 ч в колбе с обратным холодильником, а потом охладили до 0^oC. В течение 60 мин добавляли 15% водную H₂SO₄ (400 мл) при температуре ниже 10^oC, и полученную смесь перемешивали при 20^oC в течение 20 ч. Смесь затем отфильтровали и полученные фазы разделили. Водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром (два раза по 500 мл), а собранные вместе органические фазы высушили (MgSO₄) и выпарили в вакууме. После колоночной хроматографии (силикагель, элюент: этилацетат/н- гептан/метанол 4:4:1) был получен этил 2-метил-3-(2-тиенил)-3- оксопропионат в виде масла (35.0 г, 72%).

Смесь этил 2-метил-3-(2-тиенил)-3-оксопропионата (25.3 г) и NaOH (5.0 г, 0.12 мол) в смеси метанол/вода (10:1, 200 мл) охладили до - 30^oC. Добавили охлажденный льдом (0^oC) раствор NH₂OH, HCl (16.6 г) и NaOH (10.0 г) в смеси метанол/вода (10: 1, 200 мл); полученный раствор перемешивали в течение 3 ч при - 30^oC. Раствор выдерживали до достижения им температуры 5^oC, а затем добавляли к концентрированной HCl (280 мл) в течение 45 мин при 80^oC. Полученную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 1 ч при 80^oC. Выпарили метанол и добавили воду (250 мл). Полученный раствор охладили до 5^oC, а образовавшиеся кристаллы собрали при фильтровании. Эти кристаллы растворили в CH₂Cl₂ (500 мл). Органическую фазу высушили (MgSO₄) и выпарили в вакууме, при этом получили 4-метил-5-(2-тиенил)изоксазол-3-ол (12.0 г, 55%).

Суспензию 4-метил-5-(2-тиенил)изоксазол-3-ола (12.5 г) и K₂CO₃ (14.4 г) в ацетоне (250 мл) нагревали до температуры расплавления. В течение 25 мин при температуре расплавления добавляли этилбромид (8.0 г) и полученную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 3 ч. Добавили еще одну порцию этилбромида (8.0 г) и полученную смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение следующих 3 ч. После фильтрования и удаления растворителя остаток обработали методом колоночной хроматографии (силикагель, элюент: этилацетат/н-гептан 1:1), в результате выделили 3-этокси-4-метил-5-(2-тиенил)изоксазол в виде масла (7.3 г, 51%).

Смесь 3-этокси-4-метил-5-(2-тиенил)изоксазола (5.1 г) и N-бромсукцинимида (5.1 г) в CCl₄ (400 мл) нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 18 ч. После фильтрования и удаления растворителя получили 4-бромметил-3-этокси-5-(2-тиенил)изоксазол (7.8 г, 100%).

К смеси диэтилацетамидомалоната (4.6 г) и трет-бутоксида калия (2.4 г) в N-метилпирролидоне (NMP) (100 мл) при 22^oC добавили раствор 4-бромметил-3-этокси-5-(2-тиенил)изоксазола (3.0 г) в NMP (25 мл). Полученный раствор в течение 1 ч перемешивали при 22^oC, а потом вылили на смесь льда с водой. Водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром, а собранные вместе органические фазы промыли водным насыщенным раствором NaCl. Органические фазы высушили (MgSO₄) и упарили в вакууме. Полученный остаток обработали колоночной хроматографией (силикагель, элюент: этилацетат/н-гептан/метанол 5:5:1), в результате получили 2-ацетамидо-2-этокси-карбонил-3- [3- этокси-5- (2-тиенил)изоксазол-4-ил]пропионат (3.0 г, 68%).

Смесь 2-ацетамидо-2-этоксикарбонил-3-[3-этокси-5-(2- тиенил)изоксазол-4-ил]пропионата (2.7 г) и 48% HBr (20 мл) нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 1 ч. Смесь упарили в вакууме, а остаток растворили в воде (50 мл) и обработали углем. После фильтрования добавили 4 н. водную NaOH и довели pH до 3. Полученные кристаллы собрали при фильтровании и высушили в вакууме, при этом получили указанное в заглавии соединение 1а (0.5 г, 30%). Температура плавления 237-239^oC; CHN: вычислено: 47.23, 3.97, 11.02; найдено: 47.21, 4.02, 10.92.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 9.90 (b, 1H), 7.82 (dd, 1H), 7.55 (dd, 1H), 7.24 (dd, 1H), 3.70 (dd, 1H), 2.95-2.88 (m, 2H).

¹³C-ЯМР (DMSO-d₆): 171.42, 171.23, 159,62, 129.27, 128.65, 128.22, 127.15, 101.89, 52.59, 24.99.

Аналогичным способом получили соединение: (RS)-2-амино-3-[3- гидрокси-5-(3-тиенил)изоксазол-4-ил]пропионовую кислоту, 1b, температура плавления 239-240^oC ¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 8.03-7.96 (m, 1Н), 7.76-7.70 (m, 1H), 7.48-7.43 (m, 1H), 3.70-3.63 (m, 1H), 3.00-2.76 (m, 2H).

Используя бензолсульфонильную группу как защитную для 3-гидроксиизоксазольной группы, аналогичным образом получили: (RS)-2-амино-3-[3-гидрокси-5-(2-нафтил)изоксазол-4- -ил]пропионовую кислоту, гидрат 1с, температура плавления 235- 237^oC.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 2.89-3.16 (m, 2H), 3.70-3.77 (m, 1H), 7.56-7.63 (m, 2H), 7.74 (dd, 1H), 7.92-8.09 (m, 3H), 8.22 (s, 1H).

¹³C-ЯМР (DMSO-d₆): 25.10; 53.03; 103.03; 124.30; 125.90; 126.89; 126,96; 127.45; 127.79; 128.70(2С); 132.74; 133.18; 164.67; 171.41; 171.54.

MS (MH⁺) m/z: 299.

(RS)-2-амино-3- [3-гидрокси-5-(4-трифторметилфенил) изоксазол-4-ил] пропионовую кислоту. 1d, температура плавления 237-239^oC.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 2.80 (dd, 1H), 2.97 (dd, 1H), 3.71 (dd, 1H), 7.87 (s, 4H).

¹³C-ЯМР (DMSO-d₆, 5% CF₃COOH) 23.35: 50.94; 101.72; 121.94; 126.11; 126.16; 127.77(2С); 130.34 (q, CF₃); 131.74; 164.13; 170.29(2С).

MS (MH⁺) m/z: 317.

(RS)-2-амино-3-[3-гидрокси-5-(3-бензо[b]тиенил)изоксазол-4- ил]пропионовую кислоту, семигидрат, 1е, температура плавления 222-224^oC.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 2.75 (dd, 1H), 2.96 (dd, 1H), 3.70 (dd, 1H), 7.43-7.55 (m, 2H); 7.96-8.03 (m, 1H); 8.05-8.14 (m, 1H); 8.21 (s, 1H).

¹³C-ЯМР (DMSO-d₆): 25.02: 52.96; 104.05; 123.17; 123.34; 123.67; 125.27(2С); 129.49; 136.80; 139.35; 161.49; 171.11; 171.31.

MS (MH⁺) m/z: 305.

Приведенное ниже соединение получили аналогичным способом из 2-ацетамидо-2-этоксикарбонил-3-[3-этокси-5-(2-тиенил)изоксазол-4- ил]пропионата введением оксида лития и метилированием в положение 5 тиенильной группы с последующим снятием защиты с помощью кипящей 47% водной HBr.

(RS)-2-амино-3-[3-гидрокси-5-(5-метил-2-тиенил)изоксазол-4- ил] пропионовая кислота, гидрат 1f, температура плавления 242-244^oC.

¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 2.51 (s, 3H), 2.84-2.93 (m, 2H), 3.63-3.72 (m, 1H), 6.94 (dd, 1H); 7.33 (d, 1H).

¹³C-ЯМР (DMSO-d₆): 14.91; 24.95; 52.62; 101.24; 126.63; 126.88; 127.23; 142.33; 159.71; 171.20; 171.31.

MS (MH⁺) m/z: 269.

Пример 2 (RS)-2-амино-2-(3-гидрокси-5-фенилизоксазол-4-ил)уксусная кислота, 2a Смесь 3-этокси-4-метил-5-фенилизоксазола (3.0 г, 15 ммол), полученного, как это описано в работе Cristensen I.T., 1989, там же, NBS (5.5 г, 31 ммол), и дибензоилпероксида (0.2 г, 0.8 ммол) в CCl₄ (100 мл) в течение 20 ч нагревали в колбе с обратным холодильником. Полученную смесь охладили до температуры окружающей среды, отфильтровали и упарили в вакууме. Остаток растворили в воде (95 мл) и нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 20 ч. После охлаждения водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром (три раза по 100 мл). Собранные вместе органические фазы высушили (Na₂SO₄) и выпарили в вакууме, в результате был получен 4-(3-этокси-5-фенилизоксазол)карбальдегид (2.4 г, 75%).

Смесь 4-(3-этокси-5-фенилизоксазол)карбальдегида (1.9 г, 8.7 ммол), KCN (2.7 г, 40.5 ммол) и (NH₄)₂CO₃ (7.8 г, 81.1 ммол) в 50% водном метаноле (250 мл) нагревали в течение 6 ч в колбе с обратным холодильником. Метанол выпарили в вакууме, а водную фазу экстрагировали этилацетатом (три раза по 150 мл). Собранные вместе органические фазы высушили (Na₂SO₄), а растворитель удалили выпариванием в вакууме. Остаток обрабатывали колоночной хроматографией (силикагель, элюент: этилацетат/н-гептан/метанол 5:5:1), в результате получили 3-этокси-4-[5-(имидазолидин-2,4- дион)] -5-фенилизоксазол (1.0 г, 40%).

Суспензию 3-этокси-4-[5-(имидазолидин-2,4-дион)]-5- фенилизоксазола (800 мг, 2.8 ммол) в 6 н. водной HCl (20 мл, 120 ммол) нагревали в течение 48 ч в колбе с обратным холодильником. Полученную смесь выпарили в вакууме, а остаток растворили в воде (200 мл) и триэтиламине (870 мг, 8.5 ммол). Добавили ди-трет-бутил бикарбонат (930 мг, 4.3 ммол) в тетрагидрофуране (50 мл), и полученный раствор перемешивали в течение 20 ч при 20^oC. Тетрагидрофуран выпарили в вакууме, а pH довели до 6.5 с помощью 0.1 н. водной HCl. Водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром, который потом вылили. pH водной фазы довели до 2 с помощью 0.1 н. водной HCl, а потом эту фазу экстрагировали диэтиловым эфиром (три раза по 100 мл). Собранные вместе органические фазы высушили (Na₂SO₄) и упарили в вакууме. Остаток растворили в диэтиловом эфире (40 мл) и добавили насыщенный раствор HCl в диэтиловом эфире. Полученную в результате смесь перемешивали в течение 20 ч при 20^oC. Осадок собрали при фильтровании и высушили. Полученные кристаллы растворили в воде (5 мл) и pH довели до 3. Осадок собрали при фильтровании и высушили, в результате получили указанное в заглавии соединение 2а (100 мг, 15%). Температура плавления 228-230^oC; CHN: вычислено 56.40, 4.31, 11.96; найдено 56.20, 4.37, 11.74.

Данные ¹H-ЯМР и ¹³C-ЯМР для соединения 2а, HCl: ¹H-ЯМР (DMSO-d₆): 7.83-7.68 (m, 2H), 7.64- 7.40 (m, 3H), 5.12-4.95 (m, 1H), 3.90 (широкий).

¹³C-ЯМР (DMSO-d₆): 169.10, 168.38, 168.31, 131.39, 129.60(2С), 127.73(2С), 126.95, 99.69, 46.06.

Способом, аналогичным методу получения 4-изоксазолкарбальдегидов из соответствующих 4-изоксазолбромметильных соед