Производные камптотецина, способы их получения, фармацевтические композиции

Производные камптотецина, способы их получения, фармацевтические композиции

Реферат

 

Описываются новые производные камптотецина, обладающие повышенной противоопухолевой активностью, общей формулы I, где R¹ представляет замещенную или незамещенную низшую алкильную группу; Х¹ представляет группу формулы -NHR² (R² является атомом водорода или низшей алкильной группой) или группу формулы -ОН; Alk представляет прямую или разветвленную алкиленовую группу, необязательно содержащую в цепи атом кислорода, присоединенную к полисахариду, имеющему карбоксильные группы, посредством аминокислоты или пептида, или его фармацевтически приемлемая соль. Указанные производные камптотецина проявляют повышенную противоопухолевую активность, обладая незначительными побочными эффектами по сравнению с обычными противораковыми агентами, а следовательно, эти соединения являются крайне ценными в качестве медикаментов. 15 с. и 29 з.п. ф-лы, 14 табл.

Предпосылки изобретения Изобретение относится к новым производным камптотецина, обладающим повышенной противоопухолевой активностью, и промежуточным продуктам для их получения. Более конкретно, настоящее изобретение относится к новым производным камптотецина, которые получают связыванием производного аминоалкокси- или гидроксиалкокси камптотецина с полисахаридом, имеющим карбоксильные группы, посредством аминокислоты или пептида, к их промежуточным продуктам и способам их получения. Производные камптотецина по настоящему изобретению могут быть избирательно и в больших количествах доставлены в мишеневую область пациента, то есть они могут проявлять желаемую фармакологическую активность в желаемых частях тела пациента. Таким образом, противоопухолевая активность производных камптотецина может быть значительно повышена, а их побочные эффекты могут быть уменьшены, и, следовательно, эти соединения становятся весьма ценными в качестве лекарственного препарата.

Уровень техники Камптотецин является одним из растительных алкалоидов и имеет следующую формулу: и известен как проявляющий противолейкемическую и противоопухолевую активность, а одно из производных камптотецина - гидрохлорид иринотекана { СРТ-11, 7-этил-10-[4-(пиперидино)-1- пиперидино]карбонилоксикамптотецин} уже выпущен в продажу. Однако СРТ-11, проявляя значительную противоопухолевую активность при клиническом применении, как и другие притивоопухолевые агенты, также проявляет сильную токсичность, поэтому СРТ-11 был запрещен к терапевтическому применению [см. Cancer and Chemotherapy, vol. 21, p. 709 (1994)].

С другой стороны, с целью повышения противоопухолевой активности, а также для уменьшения их побочных эффектов, эти соединения, обладающие такими сильными побочными эффектами, исследовали в отношении вида системы доставки, по которой необходимое количество лекарства избирательно доставлялось в целевую ткань. Незначительное различие их чувствительности в отношении к противораковым агентам между раковыми клетками и нормальными клетками является серьезной проблемой, особенно в химиотерапии рака, поэтому были проведены многочисленные исследования доставляющих лекарственных систем мишеневого типа для противораковых агентов с целью избирательной доставки противоракового агента в пораженную раком область, например, комплекса доксорубицин-полисахарида (WO94/19376), липосомы с включенным доксорубицином (Enhancement of effects of anticancer agents and targeting therapy, p.227 (1987), опубл. Science Forum Ltd.), декстрансвязанного митомицина (Enhancement of effects of anticancer agents and targeting therapy, p. 228 (1987), опубл. Science Forum Ltd.).

Как показано выше, соединения камптотецина обладают превосходной противоопухолевой активностью и очень полезны в качестве лекарственных препаратов, но они строго запрещены для клинического применения из-за их сильных побочных эффектов. Таким образом, желательно создать новое производное камптотецина, в котором превосходная фармакологическая активность была бы сохранена нужным образом, но нежелательные побочные эффекты были бы подавлены.

Исходя из вышеуказанного, заявители провели интенсивные исследования с целью получения наилучшего производного камптотецина, лишенного недостатков обычных производных камптотецина, при использовании методов для вышеуказанных систем доставки лекарств и, наконец, установили, что новое производное камптотецина, обладающее желательным фармакологическим действием, может быть получено путем связывания производного камптотецина, имеющего реакционноспособную группу, с полисахаридом, имеющим карбоксильные группы, посредством аминокислоты или пептида, и создали настоящее изобретение.

Краткое описание изобретения Объектом настоящего изобретения является новое производное камптотецина, включающее производное камптотецина [I] , присоединенное к полисахариду, имеющему карбоксильные группы, посредством аминокислоты или пептида.

Другим объектом настоящего изобретения является новый промежуточный продукт, который выбран из производного камптотецина [I] и производного камптотецина, включающего производное камптотецина [I], присоединенное к аминокислоте или пептиду.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ получения указанных производного камптотецина и промежуточного продукта.

Подробное описание изобретения Соединение по настоящему изобретению является производным камптотецина, включающим производное камптотецина, имеющее аминоалкоксигруппу или гидроксиалкоксигруппу, представленное формулой [I] где R¹ обозначает замещенную или незамещенную низшую алкильную группу, X¹ является группой формулы: -NHR² (R² обозначает водород или низшую алкильную группу) или группой формулы: -ОН, и Alk обозначает алкиленовую группу с прямой или разветвленной цепью, имеющую, необязательно, атом кислорода в его цепи и присоединенную к полисахариду, имеющему карбоксильные группы, посредством аминокислоты или пептида.

В результате исследований заявители обнаружили, что новое производное камптотецина вышеуказанной формулы [I] и соединение, которое получено связыванием соединения [I] с аминокислотой или пептидом, оба могут использоваться в качестве промежуточных продуктов для получения желаемого производного камптотецина по настоящему изобретению, и, кроме того, сами по себе обладают превосходной противоопухолевой активностью.

Производное камптотецина по настоящему изобретению включает соединения, которые получены связыванием производного камптотецина [I] с полисахаридом, имеющим карбоксильные группы посредством аминокислоты или пептида, например, которое получено связыванием части или всех карбоксильных групп аминокислоты или пептида с X¹ соединения [I] посредством амидокислотных или сложноэфирных связей с последующим связыванием части или всех карбоксильных групп полисахарида с аминогруппой указанной аминокислоты или указанного пептида посредством амидокислотных связей. Более конкретно, производное камптотецина по настоящему изобретению включает соединения, которые получены связыванием C-концевой карбоксильной группы аминокислоты или пептида с Х¹ соединения [I] посредством амидокислотных или сложноэфирных связей с последующим связыванием части или всех карбоксильных групп полисахарида с N-концевой аминогруппой указанной аминокислоты или указанного пептида посредством амидокислотных связей.

Каждый заместитель соединения формулы [I] по настоящему изобретению описан ниже.

Низшая алкильная группа у R¹ и R², когда Х¹ представляет собой группу формулы -NHR², представляет алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода, например, метил, этил, пропил, изо-пропил, бутил, изо-бутил, втор-бутил, трет-бутил. Заместителем у низшей алкильной группы R¹ является, например, защищенной или незащищенной гидрокси-, меркапто- или аминогруппой, причем защитой могут служить алкильные или ацильные группы и т.п.

Прямые или разветвленные алкиленовые группы Alk, необязательно имеющие в цепи атом кислорода, включают прямые или разветвленные алкиленовые группы, содержащие от 1 до 6 углеродных атомов, например, метилен, этилен, триметилен, пропилен, тетраметилен, пентаметилен, гексаметилен, 1-метилэтилен, 1-метилпропилен, 2- метилпропилен и т.д., и прямые или разветвленные алкиленовые группы, имеющие от 2 до 6 углеродных атомов и обладающие одним или несколькими атомами кислорода в своей цепи, такие как -CH₂CH₂-O- CH₂CH₂-, -CH₂CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-, -CH₂CH(CH₃)-O-CH₂CH₂-, -CH₂CH₂-O- CH₂CH₂-O-CH₂CH₂- и т.д.

Из соединений [I] по настоящему изобретению предпочтительными являются соединение формулы [I], где Х¹ является группой формулы - NHR², т.е. соединение формулы [I']: где R¹, R² и Alk определены выше и более предпочтительным, из соединений формулы [I] , является соединение формулы [I'], где R¹ обозначает незамещенную низшую алкильную группу, R² обозначает атом водорода, Alk обозначает прямую или разветвленную алкиленовую группу, имеющую от 2 до 4 углеродных атомов и не содержащую в своей цепи атомов кислорода.

Из соединений [I] наиболее предпочтительными являются соединения формулы [I], где R¹ обозначает этильную группу, Х¹-Alk-O- представляет собой 3-аминопропилоксигруппу, которая присоединена по положению 10 к камптотециновому ядру.

Полисахарид, имеющий карбоксильные группы, включает те же, что описаны в вышеупомянутом WO 94/19376, и включает полисахариды, изначально имеющие в своей структуре карбоксильные группы (например, гиалуроновая кислота, пектиновая кислота, альгининовая кислота, хондроитин, гепарин и т.п.), и полисахариды, изначально не содержащие карбоксильные группы (например, пуллулан, декстран, маннан, хитин, манноглюкан, хитозан и т.п.), но в которые эти группы могут быть введены. Из этих полисахаридов наиболее предпочтителен декстран, особенно декстран, имеющий среднюю молекулярную массу от 20000 до 400000, и наиболее предпочтителен декстран, имеющий среднюю молекулярную массу от 50000 до 150000 (эта средняя молекулярная масса определяется методом гель-мембранной хроматографии, Shinseikagaku Jikken Koza, vol. 20, p. 7). Полисахариды, изначально не содержащие карбоксильную группу, но в которые карбоксильная группа введена, означают такие полисахариды, которые могут быть получены замещением части или всех атомов водорода гидроксигрупп полисахаридов, изначально не содержащих карбоксильную группу с C_1-4 алкильной группой.

"Полисахариды, имеющие карбоксильные группы" по настоящему изобретению включают такие полисахариды, полученные обработкой полисахарида, изначально не содержащего карбоксильную группу, восстанавливающим агентом с последующим замещением атомов водорода части или всех гидроксильных групп продукта с карбокси- C_1-4алкильной группой.

Алкильный радикал карбокси-C_1-4алкильной группы может быть либо прямой, либо разветвленной алкильной группой. Предпочтительной карбокси-C_1-4алкильной группой является, например, карбоксиметильная группа, 1-карбоксиэтильная группа, 3-карбоксипропильная группа, 1-метил-3-карбоксипропильная группа, 2-метил-3-карбоксипропильная группа, 4-карбоксибутильная группа и т.д., а наиболее предпочтительными являются карбоксиметильная группа и 1-карбоксиэтильная группа. По настоящему изобретению предпочтительным полисахаридом, имеющим карбоксильную группу, является карбоксиметилированный декстран или пуллулан.

При введении карбоксиалкильной группы в полисахариды степень их введения выражается "степенью замещения", определяемой как число карбоксиалкильных групп, приходящееся на остаток сахара, например, выражаемой следующим уравнением.

Если карбоксиалкильной группой является карбоксиметильная группа, то степень замещения выражают степенью карбоксиметилирования (степень КМ).

Если полисахаридом является пуллулан, декстран или манноглюкан и все их гидроксигруппы замещены, то степень их замещения равна 3, и предпочтительная степень замещения изменяется в области от 0,3 до 0,8.

Если полисахаридом является хитин и все его гидроксигруппы замещены, то степень его замещения равна 2, и предпочтительная степень замещения изменяется в области от 0,3 до 0,8.

Кроме того, важно, что полисахариды по настоящему изобретению должны иметь в молекуле, по меньшей мере, одну карбоксиалкильную группу, кроме полисахаридов, изначально имеющих карбоксильные группы. Таким образом, полисахариды со степенью замещения, равной нулю, по настоящему изобретению должны быть исключены из рассмотрения.

Полисахариды, имеющие карбоксильные группы, могут быть получены способом, описанным в WO 94/19376.

Аминокислота, которая внедрена между соединением камптотецина [I] и полисахаридом, имеющая карбоксильные группы, включает как природные аминокислоты, так и синтетические аминокислоты (включая, D-аминокислоту, L-аминокислоту и их смесь), а также включает или нейтральные аминокислоты, основные аминокислоты или кислые аминокислоты. Более того, аминокислота по настоящему изобретению может быть не только - аминокислотами, но и - аминокислотами, - аминокислотами, - аминокислотами и т.д., и включают, например, глицин, - аланин, - аланин, валин, лейцин, изолейцин, серин, треонин, цистеин, метионин, аспаргин, глутамин, лизин, аргинин, фенилаланин, тирозин, гистидин, триптофан, пролин, гидроксипролин, - аминобутановую кислоту, - аминокапроновую кислоту и т.д.

Пептиды по настоящему изобретению включают пептиды, производные вышеуказанных аминокислот, или пептиды, имеющие в части своей цепи соединения, отличные от аминокислот. Например, в середине или на концах пептидной цепи могут быть дикарбоновая кислота, такая как янтарная, диамин, такой как этилендиамин, или диол, такой как этиленгликоль. Кроме того, сайт связывания пептидной цепи к карбоксильным группам полисахарида обычно начинается от N-конца пептидной цепи через амидокислотные связи. Если в пептидной цепи имеется основная аминокислота (например, лизин), то сайт связывания пептидной цепи может быть обращен путем соединения - аминогруппы основной аминокислоты с карбоксильными группами полисахарида, и соединение -/ аминогруппы с C-концом пептидной цепи.

Такие пептиды могут быть пептидами, состоящими более, чем из одной аминокислоты, то есть пептидами, имеющими более чем одну аминокислоту, более предпочтительно пептидами, имеющими от 2 до 5 пептидных цепей. Подходящими примерами пептидной цепи являются -Gly-Gly-L- или D-Phe-Gly-, -L или D-Phe-Gly-, -L или D-Tyr-Gly-, -L или D-Leu-Gly-, -Gly-Gly-, -Gly-Gly-Gly-, -Gly-Gly- Gly-Gly- или -Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-, и пептидные цепи, содержащие данные последовательности (N-концы этих пептидов, или пептидных цепей, содержащие эти последовательности, введены в карбоксильные группы полисахарида). Из этих пептидов наиболее предпочтительны - Gly-Gly-L или D-Phe-Gly-, -Gly-Gly-, -Gly-Gly-Gly-, -Gly-Gly-Gly- Gly-, -Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-, -L или D-Phe-Gly-, -L или D-Leu-Gly-.

Из них -Gly-Gly-L-Phe-Gly, -Gly-Gly-, -Gly-Gly-Gly-, -Gly-Gly-Gly-Gly-, -L или D-Phe-Gly- являются наиболее предпочтительными.

Производные камптотецина по настоящему изобретению обычно могут быть получены путем присоединения соединения [I] к аминокислоте или пептиду с последующим взаимодействием продукта с полисахаридом, имеющим карбоксильные группы.

Когда X¹ в формуле [I] представляет собой группу формулы: -NHR², то соединение [I] присоединяют к C-концевой карбоксильной группе аминокислоты или пептида посредством амидокислотных связей. Когда X¹ в формуле [I] представляет собой группу формулы: -ОН, то соединение [I] присоединяют к C-концевой карбоксильной группе аминокислоты или пептида посредством эфирных связей. В этом случае предпочтительно защищать функциональные группы аминокислоты или пептида, не принимающие участия в образовании указанных амидокислотных связей или сложноэфирных связей, например, N-концевую аминогруппу или карбоксильную группу соответствующим образом защищают обычным образом перед взаимодействием соединения [I] и аминокислоты или пептида. Защитной группой могут быть любые защитные группы, используемые обычно для защиты аминокислот, и защитной группой для аминогруппы является, например, трет-бутоксикарбонильная группа, п-метоксибензилоксикарбонильная группа и т.д., и защитной группой для карбоксильной группы является, например, низшая алкильная группа (например, трет-бутильная группа), бензильная группа и т.д.

Образование вышеуказанных амидокислотных связей или эфирных связей между X¹ соединения [I] и аминокислотой или пептидом проводят с использованием обычных способов, например, путем взаимодействия в присутствии конденсирующего агента в подходящем растворителе. Растворитель включает, например, диметилформамид, ацетонитрил, хлороформ, метиленхлорид и т.д., а конденсирующий агент включает ди(циклогексил)карбодиимид, гидрохлорид 1-(3- диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида и т.д.

Соединение камптотецина, которое было получено присоединением соединения [I] к аминокислоте или пептиду после удаления защитных групп на аминогруппе, если аминогруппа была защищена, подвергают взаимодействию с полисахаридом, имеющим карбоксильные группы, с получением желаемых производных камптотецина по настоящему изобретению. В данной реакции часть или все карбоксильные группы полисахарида связываются с N-концевой аминогруппой аминокислотой или же пептида, которые предварительно были присоединены к соединению камптотецина [I] посредством амидокислотных связей.

Взаимодействие соединения камптотецина, приводящее к присоединению соединения [I] к аминокислоте или пептиду, и полисахарида, имеющего карбоксильные группы, осуществляют обычными способами, например, в присутствии конденсирующего агента в подходящем растворителе. Растворитель включает, например, воду, этанол, диметилформамид, или их смесь, а конденсирующий агент включает, например, гидрохлорид 1-(3-диметиламинопропил)-3- этилкарбодиимида, 2-этилокси-1-этокси-карбонил-1,2-дигидрохинолин и т.д.

В производных камптотецина по настоящему изобретению соотношение полисахарида и соединения камптотецина [I], являющегося активным ингредиентом, может быть выбрано в соответствии с видами используемых полисахаридов, но содержание соединения камптотецина [I] в производном камптотецина, предпочтительно находится в области от 0,1 до 20 мас.%, наиболее предпочтительно - от 2 до 10 мас.%, когда полисахаридом является пуллулан, декстран, хитин или манноглюкан.

Когда по настоящему изобретению используется декстран, то средняя молекулярная масса производного камптотецина по настоящему изобретению предпочтительно находится в области от 30000 до 500000, наиболее предпочтительно от 60000 до 200000, как определено по данным ГМХ-анализа.

Полученные таким образом производные камптотецина по настоящему изобретению, при необходимости, могут быть преобразованы в их фармацевтически приемлемые соли. Фармацевтически приемлемые соли включают, например, соли щелочных металлов или щелочноземельных металлов (например, соль натрия, соль калия, соль кальция и т.д.) или соли аминокислот (например, соль агринина, соль лизина и т.д.).

Соединения камптотецина формулы [I] может быть получено по следующей схеме 1.

где X² обозначает защитную группу -N(R²)- или защитную группу -О- и R¹, X¹ и Alk определены выше.

Таким образом, аминокарбонильное соединение (I) конденсируют с известным пираноиндолином (2) (см. ЕР-0220601-А) способом, известным как конденсация по Фридлендеру (см. Organic Reactions, 28, pp. 37-202, John Wiley & Sons, Inc., New York (1982)), с последующим удалением защитных групп из продукта с получением желаемого соединения камптотецина [I].

В вышеприведенной реакционной схеме R¹ может быть введен после указанной конденсации по Фридлендеру.

Вместо соединения (I), соединение формулы (I), где R¹ является атомом водорода, подвергают конденсации по Фридлендеру с соединением (2) и полученный продукт конденсации подвергают радикальной реакции, описанной в Chem. Pharm. Bull. , 39, 2574-2581 (1991) с производным формулы R¹-CO-X (X обозначает атом водорода или реакционноспособную группу) с получением желаемого соединения [1].

Далее, если вместо аминокарбонильного соединения (I) в вышеприведенной реакционной схеме 1 используют соединение формулы [II] где X представляет собой R³-N(R²)- или R³-O-, R³ обозначает группу, которая получена путем удаления гидроксигруппы из карбоксильной группы аминокислоты или пептида, имеющего защищенную аминогруппу, и R¹, R² и Alk определены выше, то можно получить соединение камптотецина, где соединение камптотецина формулы [I] соединено с аминокислотой или пептидом.

Исходное аминокарбонильное соединение (I), где X² обозначает защитную группу -N(R²)-, может быть получено по следующей реакционной схеме 2.

где R¹ и Alk определены выше, R³ обозначает замещенную или незамещенную низшую алкенильную или алкильную группу, R⁴ обозначает защищенную аминоалкильную группу, Prot обозначает защитную группу и Т обозначает группу тозил или группу мезил.

Защитную группу вводят в аминоспирт H(R²)N-Alk-OH с получением защищенного аминоспирта (а), который тозилируют или мезилируют с получением соединения (b), где гидроксигруппа активирована. С другой стороны, реактив Гриньяра (R³MgBr) подвергают взаимодействию с гидроксизамещенным о-нитробензальдегидом, и полученное соединение (с) подвергают взаимодействию с предварительно полученным соединением (b), с получением соединения (d), где фенольная гидроксигруппа алкилирована. Соединение (d) обрабатывают окислителем, например, активированным диоксидом марганца, с получением кетосоединения (е) с последующим каталитическим восстановлением соединения (с) в присутствии подходящего катализатора, такого как Pd-C, с получением соединения (1¹). Соединение можно выделить из реакционной смеси, но его можно использовать в реакции конденсации с соединением (2) без выделения и очистки.

В вышеприведенной реакционной схеме 2 защитную группу у аминогруппы в R⁴ кетосоединения (е) удаляют обычным способом, b полученный продукт подвергают взаимодействию с аминокислотой или пептидом, имеющим защищенную аминогруппу. Полученный продукт подвергают каталитическому восстановлению тем же способом, что и восстановления кетосоединения (е) с получением аминокарбонильного соединения (1), где защитная группа в X² замещена группой, полученной удалением гидроксигруппы из карбоксильной группы аминокислоты или пептида, имеющего защищенную аминогруппу.

Из исходных аминокарбонильных соединений (1) в вышеприведенной реакционной схеме (1), где X² обозначает защитную группу -О-, получают по следующей реакционной схеме 3.

где Alk, R¹ и R³ определены выше, R⁵ обозначает низший алкил, X³ обозначает атом галогена, R⁶ обозначает гидроксиалкильную группу, R⁷ обозначает защищенную гидроксиалкильную группу.

Гидроксизамещенный диалкилацеталь о-нитробензальдегида подвергают взаимодействию с гидроксиалкилгалогенидом для гидроксиалкилирования фенольной группы. Гидроксигруппа указанной гидроксиалкильной группы защищена, например, (трет- бутил)диметилсилильной группой и т.п., и полученный таким образом ацеталь подвергают гидролизу с получением алкоксизамещенного производного о-нитробензальдегида, которое подвергают взаимодействию с реактивом Гриньяра таким же образом, как на реакционной схеме 2, полученное соединение (eⁱ) далее подвергают каталитическому восстановлению с получением соединения (1ⁱⁱ).

Кроме того, на вышеприведенной реакционной схеме 3 защитную группу с гидроксигруппы соединения (eⁱ) удаляют обычным способом и полученный таким образом продукт подвергают взаимодействию и соединяют посредством эфирной связи с аминокислотой или пептидом, имеющему защищенную аминогруппу, аналогично получению соединения [I] и затем полученный продукт подвергают каталитическому восстановлению таким же образом, как восстановление соединения (eⁱ) с получением соединения [II].

Производные камптотецина по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли показывают превосходную противоопухолевую активность в отношении различных опухолей, особенно они показывают превосходный терапевтический эффект на твердых опухолях, таких как рак легкого, рак матки, рак яичников, рак молочной железы, рак желудочно-кишечного тракта (рак толстой кишки, рак желудка и т.д.).

Производные камптотецина по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемые соли предпочтительно вводятся парентерально (например, внутрисосудистая инъекция) и обычно используются в виде жидкого препарата (например, раствор, суспензия, эмульсия и т.д.).

Дозировка желаемого соединения по настоящему изобретению изменяется в зависимости от способа введения, возраста, веса или состояния пациентов, но обычно находится в области от 0,02 до 50/мг/кг/день, более предпочтительно от 0,1 до 10 мг/кг/день (приведена к дозе соединения камптотецина [I] или гидрохлорида соединения камптотецина [I], где X¹ представляет собой группу формулы: -NHR².

Более детально соединения по настоящему изобретению и способы их получения проиллюстрированы нижеследующими примерами, которые ни в коей мере не ограничивают рамки изобретения.

Пример 1 Получение гидрохлорида 10-(3'-аминопропилокси)-7-этил-(20S)- камптотецина: (1) Получение 3-трет-бутоксикарбониламинопропанола 3-Аминопропанол (6,0 г) растворяют в метиленхлориде (50 мл) и в раствор по каплям, при перемешивании и охлаждении льдом, прибавляют ди(трет-бутил)дикарбонат (18,3 г). Смесь 2 часа перемешивают при комнатной температуре, концентрируют и остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением 3-трет-бутоксикарбониламинопропанола (13,98 г) в виде бесцветного масла.

Выход 99,9%.

ИК-спектр (чистый): _max см^-1 = 3380, 1790 Масс-спектр: m/z=176 (М+H⁺) ЯМР (300 МГц, CDCl₃): ^TMC = 1,45 (9H, с), 1,62-1,72 (2H, м), 3,0 (1H, ушир. с.), 3,29 (2H, дд, J=12 Гц, 6 Гц), 3,66 (2H, дд, J=12 Гц, 6 Гц), 4,80 (1H, ушир. с.).

(2) Получение 3-трет-бутоксикарбониламинопропил тозилата 3-трет-Бутоксикарбониламинопропанол (10,0 г) растворяют в метиленхлориде (100 мл) и в раствор по каплям, при перемешивании и охлаждении льдом, прибавляют триэтиламин (8,66 г) и тозилхлорид (16,3 г), и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют и остаток растворяют в смеси воды и этилацетата. Органический слой отделяют, промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением тозилата 3-трет-бутоксикарбониламино- пропил (15,37 г) в виде бледно-желтого масла.

Выход 82%.

ИК-спектр (чистый): _max см^-1 = 3400, 3340, 1700, 1600 Масс-спектр: m/z=352 (M+Na⁺) ЯМР (300 МГц, CDCl₃): = 1,42 (9H, с), 1,78-1,90 (2H, м), 2,45 (3H, с), 3,11-3,22 (2H, м), 4,09 (2H, т, J=6 Гц), 4,5-4,65 (1H, м), 7,36 (2H, д, J= 8Гц), 7,77-7,83 (2H, м).

(3) Получение 1-(5'-гидрокси-2'-нитрофенил)-2-пропен-1-ола 5-Гидрокси-2-нитробензальдегид (6,0 г) растворяют в сухом тетрагидрофуране (90 мл) и по каплям при -78^oC прибавляют при перемешивании винилмагнийбромид (2,3 эквивалента). Смесь ступенчато нагревают, и после завершения реакции к реакционной смеси прибавляют 1н. соляную кислоту. Смесь экстрагируют этилацетатом и органический слой отделяют, промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением 1-(5'-гидрокси-2'-нитрофенил)-2-пропен-1- ола (5,09 г) в виде желто-коричневого порошка.

Выход 73%.

Т.пл.126-130^oC.

ИК-спектр (Нуйол): _max см^-1 = 3440, 1600 Масс-спектр: m/z=195 (М⁺) ЯМР (300 МГц, CDCl₃): ^TMC = 2,4 (1H, ушир. с), 5,19 (1H, дд, J=10,5 Гц, 1,5 Гц), 5,38 (1H, дд, J=17 Гц, 1,5 Гц), 5,89 (1H, м), 6,08 (1H, ддд, J=17 Гц, 10,5 Гц, 5 Гц), 6,80 (1H, дд, J=9 Гц, 3 Гц), 7,22 (1H, д, J=3 Гц), 7,97 (1H, д, J=9 Гц), 9,90 (1H, ушир. с).

(4) Получение 1-[5'-(3''-(трет- бутоксикарбониламинопропилокси)-2'-нитрофенил]-2-пропен-1-ола 1-(5'-Гидрокси-2'-нитрофенил)-2-пропен-1-ол (2,0 г) растворяют в сухом ДМФА (100 мл), прибавляют иодида натрия (1 эквивалент), карбоната калия и 3-трет-бутоксикарбониламино- пропилтозилата (1,5 эквивалента). Смесь перемешивают 6 часов при 50^oC, после чего добавляют этилацетат. Смесь промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом натрия. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением 1-[5'-(3''-(трет-бутоксикарбониламино-пропилокси)- 2'-нитрофенил] -2-пропен-1-ола (3,53 г) в виде бледно-коричневого стеклообразного продукта.

Выход 98%.

ИК-спектр (чистый): _max см^-1= 3400, 1690, 1680 Масс-спектр: m/z=375 (M+Na⁺) ЯМР (300 МГц, CDCl₃): ^TMC 1,44 (9H, с), 1,96-2,06 (2H, м), 2,80 (1H, ушир. с), 3,33 (2H, кв, J=6,5 Гц), 4,11 (2H, т, J=6 Гц), 4,8 (1H, ушир. с), 5,24 (1H, дд, J=10,5 Гц, 1,5 Гц), 5,42 (1H, дд, J=17 Гц, 1,5 Гц), 5,92 (1H, д, J=5 Гц), 6,08 (1H, ддд, J=17 Гц, 10,5 Гц, 5 Гц), 6,86 (1H, дд, J=9 Гц, 3 Гц), 7,25 (1H, д, J=3 Гц), 8,04 (1H, д, J=9 Гц).

(5) Получение 1-[5'-(3''-(трет- бутоксикарбониламинопропилокси)-2'-нитрофенил]-2-пропен-1-она 1-[5'-(3''-(трет-Бутоксикарбониламинопропилокси)-2'- нитрофенил]-2-пропен-1-ол (9,66 г) растворяют в хлороформе (300 мл), добавляют активного диоксида марганца (72 г) и смесь кипятят с обратным холодильником. После завершения реакции неорганические продукты удаляют фильтрацией через пад из целита и фильтрат концентрируют, перемешивают 6 часов при 50^oC, и прибавляют этилацетат. Смесь промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом натрия. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением 1-[5'-(3''-трет- бутоксикарбониламинопропилокси)-2'-нитрофенил]-2-пропен-1-она (6,01 г) в виде желтого продукта.

Т.пл. 65-71^oC.

Выход 63%.

ИК-спектр (чистый): _max см^-1 = 3350, 1700 Масс-спектр: m/z=351 (M+Na⁺) ЯМР (300 МГц, CDCl₃): ^TMC 1,44 (9H, с), 1,98-2,18 (2H, м), 3,28-3,37 (2H, кв, J=6,5 Гц), 4,08-4,16 (2H, м), 4,67 (1H, ушир. с), 5,85 (1H, д, J= 17,5 Гц), 6,02 (1H, д, J=10,5 Гц), 6,62 (1H, дд, J=17,5 Гц, 10,5 Гц), 6,82 (1H, д, J=3 Гц), 7,03 (1H, дд, J=9 Гц, 3 Гц), 8,17 (1H, д, J=9 Гц).

(6) Получение 1-[5'-(3''-трет- бутоксикарбониламинопропилокси)-2 '-нитрофенил]-2-пропан-1-она 1-[5'-(3''-трет-Бутоксикарбониламинопропилокси)-2'- нитрофенил] -2-пропен-1-он (325 мг) растворяют в этаноле (15 мл) и прибавляют 10%-ный Pd-C (40 мг) и смесь перемешивают 1,5 часа в атмосфере водорода. Катализатор удаляют фильтрацией и фильтрат концентрируют, остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением 1-[5'-(3''-трет-бутоксикарбонил- аминопропилилокси)-2'-нитрофенил] -2-пропан-1-она (248 мг) в виде желтого порошка.

Т.пл. 112-115^oC.

Выход 83%.

ИК-спектр (Нуйол): _max см^-1 = 3450, 3400, 3340, 1700, 1650 Масс-спектр: m/z=323 (M+H⁺) ЯМР (300 МГц, CDCl₃): ^TMC = 1,21 (3H, т, J=7 Гц), 1,45 (9H, с), 1,90-2,01 (2H, м), 2,95 (2H, кв, J=7,5 Гц), 3,33 (2H, KB, J=6,5 Гц), 3,97 (2H, т, J= 6,5 Гц), 4,48 (1H, ушир. с), 5,96 (1H, ушир. с), 6,62 (1H, д, J=9 Гц), 6,95 (1H, дд, J=9 Гц, 3 Гц), 7,24 (1H, д, J=3 Гц).

(7-1) Получение 10-(3'-трет-бутоксикарбониламинопропилокси)- 7-этил-(20S)-камптотецина 1-[5'-(3''-трет-бутоксикарбониламинопропилокси)-2'- нитрофенил] -2-пропан-1-он (4,54 г) растворяют в этаноле (200 мл) и прибавляют (4S)-7,8-дигидро-4-этил-4-гидрокси-1Н-пирано[3,4-f] -индолидин-3,6,10(4H)-трион (1,85 г) и п-толуолсульфокислоту (134 мг). Смесь кипятят с обратным холодильником. После завершения реакции реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением 10-(3'-трет-бутоксикарбониламинопропилокси)-7-этил- (20S)-камптотецина (2,47 г) в виде бледно-желтого порошка.

Т.пл. 196-201^oC (разложение).

Выход 64%.

ИК-спектр (Нуйол): _max см^-1 = 3450, 3385, 1740, 1715, 1685, 1665, 1620 Масс-спектр: m/z=550 (M+H⁺) ЯМР (300 МГц, CDCl₃): ^TMC = 1,03 (3H, т, J=7,5 Гц), 1,39 (3H, т, J=7,5 Гц), 1,46 (9H, с), 1,82-1,98 (2H, м), 2,04-2,16 (2H, м), 3,12 (2H, кв, J=7,5 Гц), 3,41 (2H, кв, J=6 Гц), 3,93 (1H, с), 4,20 (2H, т, J=6 Гц), 4,84 (1H, ушир. с), 5,21 (2H, с), 5,29 (1H, д, J=16 Гц), 5,74 (1H,д, J=16 Гц), 7,28 (1H, д, J=3 Гц), 7,43 (1H, дд, J=9 Гц, 3 Гц), 7,60 (1H, с), 8,12 (1H, д, J=9 Гц).

(7-2) Получение 10-(3'-ацетиламинопропилокси)-7-этил-(20S)- камптотецина Соответствующие исходные продукты обрабатывают таким же способом, как выше в разделах с (1) по (7-1) с получением 10-(3'- ацетиламинопропилокси)-7-этил-(20S)-камптотецин.

Т.пл. 240-245^oC (разложение).

ИК-спектр (Нуйол): _max см^-1= 3405, 3330, 1730, 1680, 1655 Масс-спектр: m/z=492 (M+H⁺) ЯМР (300 МГц, CDCl₃): ^TMC = 0,88 (3H, т, J=7,5 Гц), 1,31 (3H, т, J=7,5 Гц), 1,82 (3H, с), 1,80-2,00 (4H, м), 3,1-3,2 (2H, м), 3,26 (2H, дт, J=13 Гц, 6 Гц), 4,21 (2H, т, J=6 Гц), 5,26 (2H, с), 5,42 (2H, с), 6,51 (1H, с), 7,25 (1H, с), 7,45 (1H, д, J=3 Гц), 7,49 (1H, дд, J=9 Гц, 3 Гц), 7,98 (1H, т, J=5 Гц), 8,05 (1H, д, J=9 Гц).

(8-1) Получение гидрохлорида 10-(3'-аминопропилокси)-7- этил-(20S)-камптотецина 10-(3'-трет-бутоксикарбониламинопропилокси)-7-этил-(20S)- камптотецин (641 мг) растворяют в диоксане (10 мл) и в раствор по каплям, при перемешивании и охлаждении на ледяной бане, прибавляют 18%-ный раствор хлористого водорода в диоксане (11 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре и после завершения реакции в реакционную смесь добавляют изопропиловый эфир (15 мл). Смесь перемешивают, образующийся осадок отфильтровывают, промывают эфиром, высушивают при пониженном давлении. Полученный порошок растворяют в воде и лиофилизируют, получая гидрохлорид 10-(3'- аминопропилокси)-7-этил-(20S)-камптотецина (563 мг) в виде желтого порошка.

Т.пл. выше 218^oC (разложение).

Выход 99%.

ИК-спектр (Нуйол): _max см^-1 = 3370, 1745, 1655 Масс-спектр: m/z=450 [(M-Cl^-)⁺] ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): ^TMC = 0,88 (3H, т, J=7 Гц), 1,32 (3H, т, J=8 Гц), 1,78-1,95 (2H, м), 2,08-2,19 (2H, м), 3,0-3,1 (2H, м), 3,13-3,25 (2H, м), 4,32 (2H, т, J=6 Гц), 5,32 (2H, с), 5,43 (2H, с), 7,28 (1H, с), 7,5-7,56 (2H, м), 7,99 (3H, ушир. с), 8,11 (1H, д, J=10 Гц).

(8-2) Получение гидрохлорида 10-(3'-аминопропилокси)-7-этил- (20S)-камптотецина Продукт, полученный в (7-2), обрабатывают раствором хлористого водорода в метаноле с получением гидрохлорида 10-(3'- аминопропилокси)-7-этил-(20S)-камптотецина. Физические свойства продукта идентичны описанным для соединения из раздела (8-1).

Пример 2 Получение гидрохлорида 10-(2'-аминоэтилокси)-7-этил-(20S)- камптотецина: Гидрохлорид 10-(2'-аминоэтокси)-7-этил-(20S)- камптотецина в виде желтого порошка получают таким же способом, как в Примере 1.

Т.пл. выше 249^oC (разложение).

Выход: 97% ИК-спектр (Нуйол): _max см^-1 = 3400, 1745, 1655, 1620 Масс-спектр: m/z=436 [(M-Cl^-)⁺] ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): ^TMC = 0,88 (3H, т, J=7,5 Гц), 1,32 (3H, т, J= 7,5 Гц), 1,80-1,94 (2H, м), 3,21 (2H, кв, J=7 Гц), 3,27- 3,37 (2H, м), 4,45 (2H, т, J= 5 Гц), 5,31 (2H, с), 5,43 (2H, с), 7,28 (1H, с), 7,54-7,58 (2H, м), 8,13 (1H, д, J=10 Гц), 8,31 (3H, ушир. с).

Пример 3 Получение гидрохлорида 10-(5'-аминопентилокси)-7-этил- (20S)-камптотецина: Гидрохлорид 10-(5'-аминопентилокси)-7-этил-(20S)- камптотецина в виде желтого порошка получают таким же способом, как в Примере 1.

Т.пл. выше 179^oC (разложение).

Выход 98%.

ИК-спектр (KBr): _max см^-1 = 3420, 1745, 1660, 1615 Масс-спектр: m/z=478 [(M-Cl^-)⁺] ЯМР (300 МГц, ДMCO-d₆): ^TMC = 0,88 (3H, т, J=7,5 Гц), 1,31- (3H, т, J= 7,5 Гц), 1,49-1,59 (2H, м), 1,63-1,73 (2H, м), 1,80- 1,91 (4H, м), 2,77-2,88 (2H, м), 3,19 (2H, кв, J=8 Гц), 4,21 (2H, т, J=6 Гц), 5,29 (2H, с), 5,43 (2H, с), 7,28 (1H, с), 7,48- 7,98 (2H, м), 7,98 (3H, ушир. с), 8,08 (3H, д, J=9 Гц).

Пример 4 Получение гидрохлорида 9-(3'-аминопропилокси)-7-этил- (20S)-камптотецина: Гидрохлорид 9-(3'-аминопропилокси)-7-этил-(20S)- камптотецина получают таки