Вакцина для профилактики или лечения опосредованной т- клетками патологии или нерегулируемой репликации клонами т- клеток, способ выделения вакцины, способ диагностирования или прогнозирования восприимчивости к ревматоидному артриту или рассеянному склерозу, способ профилактики или лечения ревматоидного артрита или рассеянного склероза и содержащий последовательность sgdqggne пептид, являющийся агентом для обнаружения, профилактики или лечения рассеянного склероза

Патент 2138512

Авторы

Классы МПК

Реферат

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии. Предложенная вакцина для профилактики или лечения опосредованной Т-клетками патологии или нерегулируемой репликации клонами Т-клеток в млекопитающих содержит активное вещество и фармацевтически переносимую среду, при этом в качестве активного вещества она содержит рецептор Т-клеток или его фрагмент, соответствующий рецептору Т-клеток, находящемуся на поверхности опосредующих данную патологию Т-клеток, или антиидиотипические антитела, являющиеся внутренним изображением данного рецептора или его упомянутого фрагмента, причем активное вещество взято в иммуногенно эффективном количестве. Ее готовят путем получения клонов Т-клеток, вызывающих опосредованную Т-клетками патологию, определения последовательности аминокислот рецепторов Т-клеток клонов Т-клеток, связанных с данной патологией, отбора сегментов данных рецепторов Т-клеток, характерных для упомянутых рецепторов Т-клеток, а не для рецепторов Т-клеток, не связанных с данной патологией, и отбора из упомянутых последовательностей тех последовательностей, которые способны к индукции иммуногенной реакции относительно упомянутого рецептора Т-клеток, таким образом отбирая вакцину. Также предложены способ диагностирования или прогнозирования восприимчивости индивидуума к ревматоидному артриту, который заключается в том, что он включает обнаружение Т-клеток, содержащих вариабельный участок -нити MSNQVLCCVVLCFLGANTVDGGITQSPKYLFRKEGQNVTLSCEQNLNHDAMYWYRQDPGQGLRLIYYSQIVNDFQKGDIAEGYSVSREKKESFPLTVTSAQKNPTAFYLCASS или его фрагмент в пробе индивидуума, причем анормальная экспрессия Т-клеток, содержащих такой участок, указывает на ревматоидный артрит или восприимчивость к ревматоидному артриту, а также способ профилактики или лечения ревматоидного артрита, который заключается в том, что он включает предотвращение связывания рецептора Т-клеток, содержащего последовательность MSNQVLCCVVLCFLGANTVDGGITQSPKYLFRKEGQNVTLSCEQNLNHDAMYWYRQDPGQGLRLIYYSQIVNDFQKGDIAEGYSVSREKKESFPLTVTSAQKNPTAFYLCASS, или рецептора Т-клеток, содержащего в основном последовательность SGDQGGNE, с его партнером, и способ профилактики или лечения ревматоидного артрита в индивидууме, который заключается в том, что он включает цитотоксическую или цитостатическую обработку Т-клеток, MSNQVLCCVVLCFLGANTVDGGITQSPKYLFRKEGQNVTLSCEQNLNHDAMYWYRQDPGQGLRLIYYSQIVNDFQKGDIAEGYSVSREKKESFPLTVTSAQKNPTAFYLCASS, или Т-клеток, содержащих в основном последовательность SGDQGGNE в индивидууме. 5 с. и 16 з.п.ф-лы, 10 табл.

Изобретение относится к иммунной системе, в частности к вакцине для профилактики или лечения опосредованной Т-клетками патологии или нерегулируемой репликации клонами Т-клеток, способу выделения вакцины, способу диагностирования или прогнозирования восприимчивости к ревматоидному артриту или рассеянному склерозу, способу профилактики или лечения ревматоидного артрита или рассеянного склероза и содержащему последовательность SGDQGGNE пептиду, являющемуся агентом для обнаружения, профилактики или лечения рассеянного склероза.

Высшие организмы отличаются иммунной системой, защищающей их от инвазии возможно вредных веществ или микроорганизмов. Если вещество, обозначаемое как антиген, проникает в тело и если оно узнавается как чужое, то иммунная система вызывает и опосредованную антителами реакцию, и клеточно-опосредованную реакцию. Клетки иммунной системы, обозначаемые как Б-лимфоциты, или Б-клетки, производят антитела, специфически узнающие чужое вещество и связывающиеся с ними. Другие лимфоциты, обозначаемые как Т-лимфоциты, или Т-клетки, и вызывают, и регулируют клеточно-опосредованную реакцию, в конечном счете приводящую к уничтожению антигена.

В клеточно-опосредованной реакции участвуют разные виды Т-клеток. Некоторые из них индуцируют определенные клоны Б-клеток к пролиферации и производству антител, специфических для соответствующего антигена. Другие узнают и уничтожают клетки, представляющие собой чужие антигены на своей поверхности. Определенные Т-клетки регулируют реакцию или путем стимуляции, или путем супрессии других клеток.

Нормальная иммунная система точно регулируется, однако отклонения не редки. В некоторых случаях иммунная система работает неправильно и реагирует на компонент хозяина, как будто он являлся чужим. Такая реакция приводит к аутоиммунной болезни, которая выражается в том, что иммунная система организма атакует ткань хозяина. Т-клетки, являясь основными регуляторами иммунной системы, непосредственно или косвенно вызывают такие аутоиммунные патологии.

Предполагают, что многочисленные болезни являются результатом аутоиммунных механизмов. Самые известные из этих болезней - ревматоидный артрит, системная красная волчанка, рассеянный склероз, диабет типа I, миастения gravis и обыкновенная пузырчатка. Миллионы людей во всем мире страдают от аутоиммунных болезней, и связанные с этими болезнями расходы, включающие и само лечение, побочные расходы и потери трудовой производительности составляют миллиарды долларов каждый год. В настоящее время нет средств для эффективного лечения таких аутоиммунных патологий. Обычно можно лечить лишь симптомы, причем сама болезнь прогрессирует, часто приводя к серьезному ослаблению больного или его смерти.

В других случаях лимфоциты умножаются чрезмерно и неконтролируемым образом. Такое умножение приводит к раковому состоянию, т.н. лимфоме. В том случае, если нерегулируемые лимфоциты являются Т-клетками, то данные опухоли обозначают как лимфомы Т-клеток. Также как и другие злокачественные опухоли и лимфомы Т-клеток эффективно лечить трудно.

Таким образом, уже давно нуждаются в эффективном средстве для лечения или уменьшения интенсивности патологий, опосредованных Т-клетками. В идеальном случае такое лечение включало бы скорее контроль неподходящей реакции Т-клеток чем лишь уменьшение интенсивности симптомов. Настоящее изобретение удовлетворяет это требование и одновременно имеет побочные преимущества.

Первым объектом настоящего изобретения является вакцина для профилактики или лечения опосредованной Т-клетками патологии или нерегулируемой репликации клонами Т-клеток в млекопитающих, содержащая фармацевтически переносимую среду и активное вещество, представляющее собой рецептор Т-клеток или его фрагмент, соответствующий рецептору опосредующих данную патологию Т-клеток, находящемуся на их поверхности, или антиидиотипические антитела, являющиеся внутренним изображением данного рецептора Т-клеток или его упомянутого фрагмента, причем активное вещество взято в иммуногенно эффективном количестве.

Под понятием "опосредованная Т-клетками патология" в данном тексте понимается любое состояние, в котором неуместная реакция Т-клеток является компонентом патологии. Данное понятие здесь охватывает и болезни, непосредственно опосредованные Т-клетками, и болезни, напр. миастению gravis, которые прежде всего проявляются в нарушении, вызываемом связыванием антител, а также болезни, вызванные неуместной реакцией Т-клеток, приводящей к производству таких антител. Т.е., данное понятие охватывает и аутоиммунные болезни, опосредованные Т-клетками, и нерегулируемую репликацию клонами Т-клеток.

В нижеследующем обороте "в основном последовательность" в связи с последовательностью аминокислот следует понимать в смысле или описываемой последовательности, или другой последовательности, в которой добавлены, пропущены или заменены отдельные звенья, причем данные изменения не существенно влияют на способность последовательности вызывать иммунную реакцию против желаемой последовательности рецептора Т-клеток. Таким образом, участок описываемой иммунизирующей последовательности можно использовать всегда тогда, когда он в достаточной степени является характерным для желаемого рецептора Т-клеток с тем, чтобы вызывать эффективную иммунную реакцию против желаемых рецепторов Т-клеток, а не против нежелаемых рецепторов Т-клеток. Таких вариаций последовательности можно достичь простыми методами, напр., путем синтеза другой последовательности, и их эффективность можно проверять, напр., путем иммунизации млекопитающих.

Понятие "фрагмент" в нижеследующем охватывает фрагменты в сочетании с дополнительными последовательностями или частями, в которых, напр., пептид связан с другими последовательностями аминокислот или с носителем, или фрагменты, связанные с ними. Понятия "фрагмент" и "пептид" поэтому могут быть использованы в данном тексте как взаимозаменимые понятия, т.к. пептид будет являться самым распространенным фрагментом рецептора Т-клеток. Каждый фрагмент согласно изобретению может иметь измененную последовательность, как описано выше в разделе "в основном последовательность".

Когда в нижеследующем речь идет о "фрагменте или участке рецептора Т-клеток", тогда это не означает, что они должны быть производными неповрежденных рецепторов Т-клеток. Такие "фрагменты или участки" можно производить с помощью разных известных методов, напр., путем ручного или автоматического синтеза пептида или путем клонирования.

В нижеследующем в связи с отношением между фрагментом предлагаемого пептида и последовательностями рецепторов Т-клеток слово "соответствующий" означает, что фрагмент пептида имеет последовательность аминокислот, которая в достаточной степени гомологична последовательности рецептора Т-клеток с тем, чтобы возбуждать регулирующую реакцию в индивидууме. Однако последовательности не обязательно тождественны с последовательностью рецептора Т-клеток, как видно в примерах II и III.

Под словами "иммуногенно эффективный" здесь понимается количество рецептора Т-клеток или его фрагмента, которое эффективно вызывает иммунную реакцию для профилактики или лечения опосредованной Т-клетками патологии или нерегулируемой репликации клонами Т-клеток в индивидууме. Само собой разумеется, что такое количество может колебаться в зависимости от существа и индивидуума и многих других факторов. Например, в общем у человека для эффективной иммунной реакции необходима большая доза, чем у мыши.

В качестве наличия вакцины в жидком состоянии концентрация активного вещества составляет примерно 1 мкг - 100 мг на мл. В случае использования предлагаемой вакцины в твердом состоянии активное вещество берут с соответствующей концентрацией.

В нижеследующем под "V17" понимается определенный вариабельный участок -цепи рецептора Т-клеток. V17 имеет следующую последовательность аминокислот: MSNQVLCCVVLCFLGANTVDGGITQSPKYLFRKEGQNVTLSCEQNLNHD AMYWYRQDPGQGLRLIYYSQIVNDFQKGDIAEGYSVSREKKESFPLTVTSAQK NPTAFYLCASS. Гипервариабельные и связывающие участки являются наиболее полезными для вакцин. Один из гипервариабельных участков V17, а именно участок CDR2, имеющий последовательность аминокислот SQIVNDFQK, является особенно полезным. Модификации данной последовательности, не затрагивающие способность рецептора к действию в качестве иммуногена, вызывая желаемую иммунную реакцию, также охватываются данным термином. Вариабельный участок может быть сявзан с любым D- или J-сегментом рецептора Т-клеток. Кроме того, иммуногенно действующие фрагменты V17 также охватываются определением "V17".

В нижеследующем под "партнером (для связывания)" понимается состав, способный к взаимодействию с рецептором Т-клеток. В общем данный состав представляет собой главный антиген тканевой совместимости (МНС), но он может быть любым составом, при обычном связывании рецептора Т-клеток приводящим к активации или пролиферации Т-клеток.

Под понятием "лиганд" в нижеследующем понимается любая молекула, которая реагирует с другой молекулой с образованием комплекса.

Слова "избирательно связывается с" в нижеследующем следует понимать так, что молекула связывается с одним видом молекул, но в основном не с другими. В отношении V17 "избирательно связывается с" включает связывание с рецепторами Т-клеток, содержащими V17 , но в основном не с рецепторами Т-клеток, не содержащими V17.

Иммунная система является главной биологической защитой хозяина (собственного организма) от возможно вредных (чужих) агентов. Такими вредными агентами могут быть, напр., патогенные факторы, напр., бактерии или вирусы, а также модифицированные собственные клетки, включая инфицированные вирусами клетки, опухолевые клетки и другие анормальные клетки хозяина. Все эти цели иммунной системы обобщенно называют антигенами. При узнавании антигена иммунной системой сразу же включается иммунный механизм для уничтожения антигена, защищая таким образом здоровье хозяина.

Главными типами специфической для определенного антигена иммунной реакции являются гуморальный (опосредованный антителами) и клеточный (клеточно-опосредованный) иммунитет. Каждый из этих иммуннологических механизмов пускается активацией вспомогательными (CD4+) Т-клетками. Данные CD4+ Т-клетки стимулируют Б-клетки, способные к синтезу антител путем связывания антигенов, в результате чего они пролиферируют и секретируют антитела. Секретированные антитела связываются с антигенами и облегчают их уничтожение путем других иммунных механизмов. Подобным образом CD4+ Т-клетки отдают стимулирующие сигналы цитотоксическим (CD8+) Т-клеткам, которые узнают и уничтожают соответствующие клетки (напр., инфицированные вирусами клетки хозяина). Таким образом, активация CD4+ Т-клеток является решающим фактором при стимуляции иммунной реакции. Поэтому ознакомление с механизмами, приводящими к специфической для определенного антигена активации CD4+ Т-клеток, важно при любой попытке избирательной модификации иммунологического действия.

Специфичность Т-клеток относительно определенных антигенов обеспечивается рецептором Т-клеток, выраженным на поверхности клетки. Рецептор Т-клеток является гетеродимерным гликопротеином, состоящим из двух полипептидных нитей, каждая из которых имеет молекулярный вес примерно 45 пар оснований (п.о.). Известны две формы рецепторов Т-клеток. Одна состоит из альфа-нити и бета-нити, а другая - из гамма-нити и дельта-нити. Каждая из данных полипептидных нитей рецепторов Т-клеток кодирована определенным генетическим локусом, содержащим сложные прерывистые сегменты генов, представляющее собой, напр., вариабельные (В), связывающие (J) или неменяющиеся (С) участки. Бета- и дельта-нити содержат дополнительный элемент, обозначаемый как диверзиционный (D) сегмент. (Т.к. диверзиционные сегменты (D) и элементы содержатся лишь в некоторых генетических локусах рецепторов Т-клеток и полипептидах, в нижеследующем они приведены в скобках с тем, чтобы показать, что данные участки имеются лишь в соответствующих нитях рецепторов Т-клеток. Таким образом, V(D)J относится или к последовательности VDJ нитей, имеющих D-участок, или к последовательности VJ, в которых не имеется D-участка.) Во время мейозы лимфоцитов отдельные V-, (D-) и J-сегменты перегруппируются и формируют функциональный ген, определяющий последовательность аминокислот рецептора Т-клеток, выраженного данной клеткой. Т.к. запас V-, (D-) и J-генов, который может перегруппироваться, содержит много членов и благодаря тому, что отдельные элементы данного запаса могут перегруппироваться с любой комбинацией, общий запас рецепторов Т-клеток является в высокой степени диверзиционным и способным к связыванию бесчисленных партнеров, которые могут наступать на организм. Однако каждая отдельная Т-клетка имеет лишь одну молекулу Т-рецептора, которая в основном, если не полностью, предопределяет специфичность данной Т-клетки относительно его партнера.

Модели на животных значительно способствовали пониманию иммунологических механизмов аутоиммунных болезней. Одной моделей является экспериментальный аллергический энцефаломиелит (ЕАЕ), представляющий собой аутоиммунную болезнь центральной нервной системы, которую можно вызывать в мышах и крысах путем иммунизации с основным протеином миелина (МБР). Характеристика упомянутой болезни следующая: клинически - паралич и легкая гипотрофия, а гистологически - периваскулярная мононуклеарная инфильтрация клеток паренхимы центральной нервной системы. Патогенез болезни опосредуется Т-клетками, специфическими в отношении основного протеина миелина. Разнообразные клоны специфических в отношении основного протеина миелина Т-клеток выделяли из животных, страдающих от экспериментального аллергического энцефаломиелита, и их амплифицировали путем последовательной культивации. После стимуляции in vitro основным протеином миелина данные Т-клетки сражу же вызывают экспериментальный аллергический энцефаломиелит, когда их адаптивно переносят в здорового хозяина. Важно при этом, что данные вызывающие экспериментальный аллергический энцефаломиелит Т-клетки специфические не только в отношении именно этого антигена (основного протеина миелина), но обычно в отношении одного единственного эпитопа на данном антигене. Все это означает, что малые количества аутоагрессивных Т-клеток ответственны за патогенез экспериментального аллергического энцефаломиелита.

В результате анализа рецепторов Т-клеток, вызывающих экспериментальный аллергический энцефаломиелит, выявилось, что структура данных связанных с болезнью рецепторов имеет уменьшенную разнородность. В ходе анализа, в котором исследовали 33 взаимодействующие с основным протеином миелина Т-клетки, обнаружили лишь два содержащих вариабельные участки сегмента альфа-нитей и один единственный сегмент альфа-нити, содержащий связывающий участок. В этой совокупности Т-клеток также обнаружили одинаково ограниченное использование генов рецепторов Т-клеток в бета-нитях. Имелись лишь два содержащих вариабельные участки сегмента бета-нитей и два сегмента, содержащих связывающие участки. Еще важнее, примерно 80% клонов Т-клеток на V-D-J-участках бета-нити имели идентичные последовательности аминокислот. Эти результаты подтверждают, что рецепторы Т-клеток с похожей специфичностью относительно антигенов также имеют одинаковую структуру, и показывают, что рецептор Т-клеток является подходящей целью для иммунотерапевтичесих стратегий при борьбе с патогенезом экспериментального аллергического энцефаломиелита.

Разнообразными методами пытались использовать специфичность аутоагрессивных Т-клеток относительно антигенов для выработки стратегий для лечения экспериментального аллергического энцефаломиелита. Например, использовали пассивную дачу моноклональных антител, специфических для рецепторов, имеющихся на поверхности вызывающих экспериментальный аллергический энцефаломиелит Т-клеток. В случае мышиной модели экспериментального аллергического энцефаломиелита в результате инфузии моноклонального антитела, специфического для V,8, представляющего собой больший вариабельный участок бета-нити, использованный в специфических относительно основного протеина миелина Т-клетках, восприимчивость мышей к последующей индукции экспериментального аллергического энцефаломиелита снизилась (см. Аха-Орбеа и др., Cell, N 54, стр. 263 - 273, 1988 г., и Урбан и др., Cell, N 54, стр. 577 - 592, 1988 г.). Подобная защита достигалась в случае экспериментального аллергического энцефаломиелита у крыс с помощью моноклонального антитела, способного к взаимодействию с неидентифицированной идиотипической детерминантой рецептора Т-клеток на специфических относительно основного протеина миелина Т-клетках (см. Бэрнс и др., J. Exp. Med., N 169, стр. 27 - 39, 1989 г. ). Хотя терапия пассивными антителами по всей видимости положительно сказывается на восприимчивость к экспериментальному аллергическому энцефаломиелиту, она связана с потенциальными проблемами. Достигаемая защита исчезает, в связи с чем требуется повторная дача антитела. При многократной инфузии антител, однако, повышается вероятность того, что хозяин развивает иммунную реакцию против подаваемых антител, в частности тогда, если их получили в ксеногенном животном. Кроме того, реакция антител на патогенный клон Т-клеток представляет собой лишь одно звено всей иммунной реакции и пренебрежает возможную роль клеточного иммунитета при преодолении аутореактивности.

Роль клеточного иммунитета при снижении активности аутоагрессивных Т-клеток при экспериментальном аллергическом энцефаломиелите явилась предметом исследований, и предложены возможные терапии. Подобно методу пассивных антител ex vivo получили регулирующие Т-клетки, которые затем вновь дали хозяину в рамках иммунотерапии. Напр., недавно выделили клон CD8+ Т-клеток из выздоравливающих крыс, в которых путем адоптивного переноса специфической относительно основного протеина миелина линии CD4+ Т-клетки вызвали экспериментальный аллергический энцефаломиелит (см. Сан и др., Nature, N 332, стр. 843 - 845, 1988 г.). Данный клон CD8+ Т-клетки in vitro проявил цитолитическую активность в отношении содержащей CD4+ Т-клетки, использованной для индукции болезни. Кроме того, адоптивный перенос данного клона CTL снизил восприимчивость соответствующих крыс при последующей подаче основного протеина миелина. Лидер и др. (см. Science, N 239, стр. 181 -183, 1988 г.) также выделили клоны CD8+ Т-клеток, обладающие супрессивной активностью относительно вызывающих экспериментальный аллергический энцефаломиелит Т-клеток. Данный клон CD8+ Т-клеток выделили из крыс, вакцинированных аттенуированными клонами Т-клеток, вызывающими болезнь, и, хотя он не проявлял ситолитической активности in vitro, он был способен к супрессии зависимой от основного протеина миелина пролиферации Т-клеток, вызывающих экспериментальный аллергический энцефаломиелит. Хотя данные анализы показывают, что содержащие CD8+ Т-клетки способны к сдерживанию экспериментального аллергического энцефаломиелита, все-таки невероятно, что данные определенные CD8+ CTL будут играть важную роль для долгосрочной резистентности выздоровевших крыс, т.к. Седжвик и др. (Eur. J. Immunol., N 18, стр. 495 - 502) ясно показали, что удаление содержащих CD8+ клеток с моноклональными антителами не влияет на протекание болезни или выздоровление.

В вышеописанных опытах Сана и др. и Лидера и др. дача регулирующих Т-клеток приводит к преодолению важной проблемы пассивной терапии антителами, т.к. она позволяет достичь долгосрочной регулирующей реакции in vivo. Однако она требует культивации in vitro с использованием аттенуированных Т-клеток, вызывающих болезнь, с тем, чтобы развивать клоны таких регулирующих Т-клеток, что представляет собой дорогостоящий и трудоемкий процесс. Кроме того, в случае человека из-за неидентичности главного антигена тканевой совместимости это требует в высокой степени индивидуализованную терапевтическую стратегию, т.к. для каждого отдельного больного необходимо получение регулирующих клонов, которые затем дают исключительно этому больному с тем, чтобы исключить возможную реакцию "трансплантат против хозяина".

Непосредственную вакцинацию аттенуированными клонами Т-клеток, вызывающих болезнь, использовали для терапии экспериментального аллергического энцефаломиелита. Т-клетки, специфические относительно основного протеина миелина и способные к передаче болезни, аттенуировали путем облучения гамма-лучами или химической фиксации и затем их использовали для вакцинации неинфицированных крыс. В некоторых случаях вакцинированные животные развивали резистентность относительно последующих попыток вызвать у них экспериментальный аллергический энцефаломиелит (Лидер и др., см. выше, а также у Кохена и Вайнера, Immunol. Today, N 9, стр. 332 - 335, 1988 г.). Однако эффективность такой вакцинации изменчивая, и степень защиты также значительно колеблется. Т-клетки содержат много разнообразных антигенов, которые вызывают иммунную реакцию, когда целую Т-клетку применяют в качестве вакцины. Это показали Оффнер и др. (J. NeuroimmunoL, N 21, стр. 13 - 22, 1989 г.), кто доказали, что иммунизация применением целой Т-клетки способствует аллергической реакции замедленного типа, определяемой на набухании уха, на данные Т-клетки, которая возрастает с увеличением числа вакцинаций. Однако четкие аллергические реакции замедленного типа устанавливали и в защищенных, и в незащищенных животных. Крысы показывали похожую реакцию при вакцинации и вызывающих энцефалит Т-клеток, и контрольных Т-клеток. И наоборот, вакцинация специфическими относительно очищенного деривата протеина Т-клетками из специфической относительно очищенного деривата протеина линии вызвала аллергическую реакцию замедленного типа и на клетки вакцины, и на вызывающий энцефалит клон, хотя не обнаруживалось никакой защиты. Похожая реакция вакцинированных крыс на вызывающие болезнь клетки и на контрольные клетки, определяемая на аллергической реакции замедленного типа (которая является мерой для клеточно-опосредованного иммунитета), указывает на то, что многочисленные антигены данных Т-клеток вызывают иммунную реакцию. Таким образом, недостатками вакцинации аттенуированными Т-клетками, вызывающими болезнь, являются недостаточная специфичность относительно защитного антигена на поверхности данной Т-клетки, а также непостоянные результаты относительно иммунитета против данного антигена. Что касается применения данного метода для лечения людей, то он является таким же трудоемким, как и вышеописанная инфузия CD8+ клеток, и также как и последняя данный метод требует индивидуализованной терапии.

Настоящее изобретение предлагает эффективный способ иммунотерапии патологий, опосредованных Т-клетками, включая аутоиммунных болезней, не связанный с теми проблемами, с которыми связаны вышеописанные известные методы лечения. Путем вакцинации, а не путем пассивной дачи гетерологических антител мобилизуется собственная иммунная система хозяина к супрессии аутоагрессивных Т-клеток. Таким образом, супрессия является постоянной и может охватывать любые и все иммунологические механизмы, приводящие к этой супрессии. Такая многосторонняя реакция является более эффективной, чем односторонняя супрессия, достигаемая путем пассивного применения моноклональных антител или клонов регулирующих Т-клеток.

Т. к. предлагаемые вакцины служат для борьбы с аутоиммунными болезнями, они содержат рецепторы Т-клеток, опосредующих аутоиммунные болезни. Вакцины могут являться или целыми рецепторами Т-клеток, в основном очищенными от клонов Т-клеток, или отдельными нитями рецепторов Т-клеток (напр., альфа- бета-, гамма-нитями), или частями таких нитей, или отдельно или в сочетании друг с другом. Вакцина может быть или гомогенной, напр., включать лишь один пептид, или содержать более одного типа пептида, причем каждый пептид относится к разной части рецептора. Кроме того, данные пептиды могут происходить от разных рецепторов, когда оба рецептора способствуют опосредованной Т-клетками патологии.

Согласно особенной форме выполнения изобретения иммунизирующий пептид может иметь последовательность аминокислот SGDQGGNE, если он призван служить для лечения рассеянного склероза. Любая иммуногенная часть данного пептида может быть эффективной. Таким образом, возможна замена аминокислот без потери иммуногенности пептида. Кроме того, данный пептид может быть связанным с носителем с тем, чтобы дальше повышать его иммуногенность.

Согласно дальнейшему развитию изобретения для иммунизации человека, страдающего от ревматоидного артрита, можно использовать рецепторы Т-клеток или фрагменты рецепторов, содержащие V17 , для лечения или профилактики данной болезни. Вызываемая в человеке иммунная реакция может обезвреживать или уничтожать Т-клетки, имеющие V17, и таким образом предотвращать или лечить их вредное действие. Кроме того, в той степени, в которой V17 имеется также в рецепторах на патогенных Т-клетках, опосредующих аутоиммунные болезни в общем, предлагаемые вакцины можно использовать и для борьбы с такими другими аутоиммунными болезнями.

Слова "в основном чистый" означают, что рецептор Т-клеток в основном свободен от других биохимических компонентов, с которыми он обычно связан в природе. Альтернативно вакцины содержат пептиды разной длины, соответствующей рецептору Т-клеток или его частям. Пептиды можно получать или путем синтеза, или путем рекомбинации с помощью известных для специалиста методов. Предпочтительно пептидные вакцины соответствуют участкам рецепторов Т-клеток, которыми данный рецептор отличается от других, непатогенных рецепторов. Такие специфические участки могут находиться на отдельных(ом) участках(е) соответствующих полипептидных нитей рецептора, в частности на небольшой последовательности, включающей V(D)J-участок, ограничивая таким образом иммунную реакцию на Т-клетки, содержащие данную детерминанту.

Вакцины дают в том случае, если хозяин показывает аутоиммунную реакцию или находится в такой опасности. Точный клинический диагноз определенной аутоиммунной болезни оправдывает дачу необходимых специфических для данной болезни вакцин, содержащих рецепторы Т-клеток. Профилактическая дача оправдана там, где аутоиммунные механизмы предшествуют началу открытой клинической болезни (напр., диабета типа I). Таким образом, данные вакцины можно до начала болезни профилактически применять у людей, у которых в семейном анамнезе имеется соответствующая болезнь и которые, судя по надежным показателям, находятся в опасности заболевания.

Содержащие рецепторы Т-клеток вакцины можно применять с многими возможными составами, с фармацевтически переносимой средой. В случае короткого пептида последний может быть связан с носителем, напр., выделенным из блюдечка гемоцианином, с тем, чтобы повысить его иммуногенность. Вакцину можно давать в сочетании с адъювантом (имеется несколько известных адъювантов). После начальной иммунизации вакциной можно подавать усилитель. Вакцины апплицируют известными методами в дозах, которые достаточны для индукции иммунной реакции и легко могут быть определены любым специалистом.

Пригодные для иммунизации пептиды можно находить следующим образом. Клоны вызывающих болезнь Т-клеток, взаимодействующие с антигенами, с которыми хотят бороться, выделяют из зараженных индивидуумов. Такие Т-клетки получают предпочтительно в месте, где проявляется сильная аутоагрессивная активность, т. е. в месте патологического изменения в случае обыкновенной пузырчатки, из центральной нервной системы в случае рассеянного склероза, из синовиальной жидкости или ткани в случае ревматоидного артрита или же из крови соответствующего зараженного индивидуума. Затем определяют последовательность аминокислот генов рецепторов аутоагрессивных Т-клеток. После этого для вакцинов, используемых вышеописанным образом, можно выбирать полипептиды, соответствующие рецепторам Т-клеток или частям рецепторов, имеющимся, в частности, в вызывающих болезнь Т-клетках (по сравнению с непатогенными Т-клетками).

Вместо этого вакцина может содержать антиидиотипические антитела, являющиеся внутренними изображениями вышеописанных пептидов. Методы получения, отбора и применения таких антиидиотипических вакцин известны (см., напр., Айхманн и др., CRC Critical Reviews в Immunology, N 7, стр. 193 - 227, 1987 г.).

Опосредованные Т-клетками патологии со злокачественной этиологией Полезность вакцинации рецепторами Т-клеток выше пояснилась на примере аутоиммунных болезней. Кроме того, и вызванная Т-клетками лимфома является патологией, поддающейся такому лечению. Применение данной технологии при лечении Т-лимфомы можно осуществлять в основном идентичным методом. Однако данная технология применяется скорее при Т-клеточной пролиферативной болезни, т. к. легче осуществлять выделение патогенных Т-клеток. После выделения клонов технологию осуществляют нижеописанным образом. В частности, определяют последовательность аминокислот генов рецепторов Т-клеток Т-лимфомов и определяют подходящие участки данных рецепторов, которые используют в качестве вакцин. Вакцины могут содержать или простые, или сложные пептиды, и их можно применять известным образом в фармакологически переносимом составе с адъювантом или без него.

Рассеянный склероз Вызывающие рассеянный склероз Т-клетки до сих пор еще не идентифицировали, хотя из-за клинических и гистологических сходств рассеянного склероза и экспериментального аллергического энцефаломиелита предполагали, что Т-клетки, взаимодействующие с основным протеином миелина, при этом играют некоторую роль. При экспериментальном аллергическом энцефаломиелите на крысах и мышах энцефалогенные Т-клетки, взаимодействующие с основным протеином миелина, показывают поразительное сохранение последовательности аминокислот на VDJ-участке -нити, несмотря на известные различия по рестрикции главного антигена тканевой совместимости и антигенной специфичности основного протеина миелина. Настоящее изобретение основывается на обнаружении того, что линия Т-клетки человека, взаимодействующая с основным протеином миелина и полученная из больного рассеянным склерозом, имеет -нить рецептора Т-клеток с VDJ-последовательностью аминокислот, соответствующей последовательности на -нитях Т-клеток, взаимодействующих с основным протеином миелина и вызывающих патогенез у экспериментального аллергического энцефаломиелита, представляющего собой модель рассеянного склероза у животных. Данная линия является специфической для другого эпитопа основного протеина миелина. Это открытие показывает, что взаимодействующие с основным протеином миелина Т-клетки участвуют в патогенезе рассеянного склероза и что рецепторные пептиды, подобные описанным для профилактики экспериментального аллергического энцефаломиелита, можно использовать для лечения рассеянного склероза.

Ревматоидный артрит Ревматоидный артрит является аутоиммунной болезнью, опосредованной Т-клетками. Изобретение описывает олигоклональные инфильтраты активированных Т-клеток, содержащих V17, в синовиальный слой больных ревматоидным артритом. Наличие данных Т-клеток в больной ткани всех осмотренных больных, их олигоклональность и цитотоксическая активность одной из этих Т-клеток для синовиальных присоединенных клеток показывают центральную роль содержащих V17 T-клеток в патогенезе ревматоидного артрита.

Активированные популяции Т-клеток в синовиальной ткани больных ревматоидным артритом исследовали путем анализа мРНК рецепторов Т-клеток, выделенных из синовиальных Т-клеток, положительных относительно рецептора IL-2 (IL-2R+). мРНК рецепторов Т-клеток амплифицировали известным образом путем цепной реакции с помощью полимеразы (PCR). В этом анализе выявилось, что олигоклональные V17 перегруппировки обогащены в популяции IL2-R+, что указывает на вероятность участия содержащих V17 Т-клеток в патогенезе ревматоидного артрита. Из пробы синовиальной ткани выделяли клон Т-клетки, содержащий CD4+, V17 и тот факт, что он обладает цитотоксичностью in vitro относительно синовиальных присоединенных клеток, подтверждает непосредственное участие содержащих V17 Т-клеток в ревматоидном артрите.

Как уже указывалось, настоящее изобретение содержит чрезвычайно важное открытие, заключающееся в том, что специфический вариабельный участок -нити рецептора Т-клеток, обозначаемый как V17, тесно связан с ревматоидным артритом у человека. Данное открытие делает возможными обнаружение, профилактику и лечение ревматоидного артрита с использованием описанного в данном изобретении способа. Специалист будет способен применять в отношении ревматоидного артрита терапевтические методы, подобные описанным выше в связ