Производные 3-алкенилпенама и их фармацевтически совместимые соли

Производные 3-алкенилпенама и их фармацевтически совместимые соли

Реферат

 

Изобретение относится к новым производным 3-алкенилпенама общей формулы I где один из R¹ и R² обозначает -СОR⁴, -СN , -СН₂R⁵, галоген, -СН = СНR⁶ либо Q, а другой - водород и либо низший алкил или оба вместе обозначают -лактамовое кольцо; R³ - водород, низший алкил, арилалкил, аллил либо отщепляемый in vivo радикал; R⁴ - водород, низший алкил, низший алкокси, бензилокси, амино, низший алкиламино либо низший алкил-низший алкоксиамино, R⁵ - гидроксильная группа, -ОСОNНR⁷, -ОСОNН₂ или пяти- либо шестизвенное, содержащее N, S и/или O гетероароматическое, связанное через атом азота кольцо; R⁶- -СN либо -СНО; R⁷ - -СОСН₂ Сl; Q - пяти- либо шестизвенное, содержащее N, S и/или O гетероароматическое кольцо, и n = 0, 1 либо 2, а также к фармацевтически совместимым солям этих соединений. Эти соединения обладают подавляющим -лактамазу действием. При определенных условиях они могут применяться вместе с -лактамовым антибиотиком для профилактики и борьбы с образующими -лактамазу возбудителями болезней. 14 з.п.ф-лы, 3 табл.

Изобретение относится к производным пенама, в частности оно относится к производным алкенилпенама общей формулы - где один из R¹ и R² обозначает -COR⁴ -CN, -CH₂R⁵, галоген, -CH=chr⁶ либо Q, а другой обозначает водород либо низший алкил или оба вместе обозначают - лактамовое кольцо, R³ обозначает водород, низший алкил, арилалкил, аллил либо отщепляемый in vivo радикал, R⁴ обозначает водород, низший алкил, низший алкокси, бензилокси, амино, низший алкиламино либо (низший алкил) (низший алкокси) амино.

R⁵ обозначает гидроксильную группу, -OCONHR⁷, -OCONH₂ или пяти- либо шестизвенное, содержащее N, S и/или О гетероароматическое, связанное через атом азота кольцо, R⁶ обозначает -CN либо -CHO, R⁷ обозначает -COCH₂Cl, Q обозначает пяти- либо шестизвенное, содержащее N, S и/или О гетероароматическое кольцо и n = 0, 1 либо 2, а также к фармацевтически совместимым солям этих соединений.

Указанные соединения являются новыми и отличаются ценными в терапевтическом отношении свойствами. Прежде всего они обладают ярко выраженным подавляющим - лактамазу действием и являются тем самым полезным средством для профилактики и борьбы против образующих - лактамазу возбудителей болезней, применяемым в сочетании с лактамовыми антибиотиками, как пенициллины и цефалоспорины.

Кроме того, названные соединения обладают собственной антибактериальной активностью по отношению к отдельным штаммам бактерий, как, например, Acinetobacter spp.

Выражение "низший алкил", употребленное само по себе или в каком-либо другом сочетании, как "низший алкокси" или "низший алкиламино", обозначает линейные либо разветвленные насыщенные углеводородные радикалы с числом атомов углерода максимум 7, предпочтительно 1-4, как метил, этил, изопропил или трет-бутил.

Понятие "арилалкил" включает в себя бензил, бензгидрил, п-метоксибензил или п-нитробензил.

Понятие "галоген" включает в себя фтор, хлор, бром или иод.

Понятие "пяти- либо шестизвенное, содержащее N, S и/или О гетероароматическое кольцо" обозначает предпочтительно 2-пиридил, 1- метилпиридин-2-илио, 1,3- тиазол-2-ил, 1,2,4-оксадиазол-3-ил и т.п.

Отщепляемый in vivo радикал представляет собой предназначенный для орального введения радикал, содержащий предпочтительно сложноэфирную группу, как, например, -CH₂OOCC(CH₃)₃, или CH(CH₃)OCO-CH₃.

Объектом настоящего изобретения являются производные 3-алкенилпенама приведенной выше общей формулы I и их фармацевтически совместимые соли как таковые и в качестве фармацевтически активных веществ, получение этих соединений, далее, лекарственные средства, содержащие одно из соединений общей формулы I или его фармацевтически совместимую соль и при определенных условиях дополнительно -лактамовый антибиотик, получение указанных лекарственных средств, а также применение соединений общей формулы I и их фармацевтически совместимых солей для борьбы и предупреждения болезней, прежде всего бактериальных инфекций, и для изготовления соответствующих лекарственных средств.

Соединения общей формулы где R³ имеет указанное выше значение, представляют собой важные промежуточные продукты, используемые для получения соединений общей формулы I.

Предпочтительными являются соединения формулы I, где один из R¹ и R² обозначает -COR⁴, -CN либо -CH₂R⁵, а другой обозначает водород либо низший алкил, R³ обозначает водород, низший алкил, арилалкил, аллил либо отщепляемый in vivo радикал, R⁴ обозначает водород, низший алкил, низший алкокси, бензилокси, амино либо низший алкиламино, R⁵ обозначает гидроксильную группу либо -OCONH₂ и n = 0, 1 либо 2.

Особенно предпочтительны соединения общей формулы I, где R¹ обозначает -CN, галоген либо -COR⁴, R⁵ обозначает водород и R⁴ обозначает метил, низший алкокси, бензилокси либо амино.

Предпочтительны соединения, где n обозначает 0 либо 2.

Предпочтительны также соединения формулы I, в которой R³ обозначает водород либо бензгидрил.

К предпочтительным соединениям относятся, например, следующие: бензгидриловый эфир (E/Z)-(2S, 3S,5R)-3-(2-цианоэтенил)-3-метил-7- оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2- карбоновой кислоты, бензгидриловый эфир (E)-(2S, 3S, 5R)-3-(2- цианоэтенил)-3-метил-4,4,7- триоксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, бензгидриловый эфир (Z)-(2S, 3S, 5R)-3-(2-цианоэтенил)-3-метил-4,4,7- триоксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, натриевая соль (Е)- (2S,3S,5R)-3-(2-цианоэтенил)-3-метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, натриевая соль (Z)- (2S,3S,5R)-3-(2-цианоэтенил)-3-метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, натриевая соль (Z)- (2S,3S,5R)-3-(2-хлорвинил)-3-метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, натриевая соль (E)-(2S, 3S,5R)-3-метил-3-(3-оксобут-1-енил)-4,4,7-триоксо-4-тиа- 1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты.

К особенно предпочтительным соединениям относятся далее: бензгидриловый эфир (E/Z)-(2S, 3S,5R)-3-(2-карбамоилвинил)-3-метил-7-оксо-4-тиа- 1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, бензгидриловый эфир (Е)-(2S,3S,5R)-3-(2-карбамоилвинил)-3-метил-4,4,7-триоксо-4- тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, бензгидриловый эфир (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-карбамоилвинил)-3-метил-4,4,7- триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, натриевая соль (Е)-(2S,3S,5R)-3-(2-карбамоилвинил)-3-метил- 4,4,7-триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, натриевая соль (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-карбамоилвинил)- 3-метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2- карбоновой кислоты, бензгидриловый эфир (E)-(2S,3S,5R)-3-(2- этоксикарбонилвинил)-3-метил-7-оксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, бензгидриловый эфир (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-этоксикарбонилвинил)-3-метил-4,4,7- триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, натриевая соль (E)-(2S, 3S, 5R)-3-(2-этоксикарбонилвинил)-3-метил- 4,4,7-триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, бензгидриловый эфир (Е)-(2S, 3S,5R)-3-(2- бензилоксикарбонилвинил)-3-метил-7-оксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, бензгидриловый эфир (Е)-(2S,3S,5R)-3-(2-бензилоксикарбонилвинил)-3-метил-4,4,7- триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты, натриевая соль (Е)-(2S,3S,5R)-3-(2-бензилоксикарбонилвинил)-3- метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты.

Производные 3-алкенилпенама общей формулы I и их фармацевтически совместимые соли могут быть получены согласно изобретению следующим путем: а) соединение общей формулы где R³ имеет указанное выше значение, подвергают обменной реакции с соединением общей формулы P где R¹ и R² имеют указанные выше значения, а R⁸ обозначает (арил)₃, PO(Oалкил)₂, Si(алкил)₃ либо галоген, в присутствии активирующего агента или б) соединение общей формулы I, где n обозначает 0, окисляют или в) соединение общей формулы I, где R³ имеет значения, отличные от водорода, переводят в соответствующую свободную кислоту и г) при необходимости кислое соединение формулы I переводят в фармацевтически приемлемую соль.

Два известных метода, с помощью которых осуществляют вариант а) способа, представлены на схеме 1 (реакция Виттига, соответственно реакция Хорнера).

Схема 1 P Заместители R¹, R² и R³ соответствуют указанным выше значениям.

Альдегид формулы II путем прямой обменной реакции с алкилиден- трифенилфосфораном (III; Y обозначает (арил)₃, реакция Виттига), соответственно с алкилфосфонатом (III; Y обозначает (алкилО)₂PO, реакция Хорнера) в присутствии активирующего агента, например основания, такого, как триэтиламин, метилат натрия, литийдиизопропиламин или DBU (1,5- диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен), превращают в алкенилзамещенные пенамы формулы Ia. В качестве растворителей пригодны, например, тетрагидрофуран, толуол, дихлорметан, ацетонитрил либо бензол. Температуру реакции в зависимости от применяемого растворителя можно варьировать в пределах от -30^oC до 80^oC.

В некоторых случаях соединения формулы I могут быть получены путем реакции между соответственно замещенными галогенидами трифенилфосфония в присутствии окиси 1,2-бутилена в качестве основания и растворителя. Предпочтительная температура реакции лежит при этом в диапазоне от 50 до 70^oC. Таким путем получают соединения формулы I, где n = 0.

Другими возможностями для осуществления варианта а) способа являются олефинирование по методу Петерсона, а также синтез с помощью реакции Реформатского. При олефинировании по методу Петерсона литиевые соли тетраалкилсиланов взаимодействуют с соединениями формулы II. На схеме 2 представлено взаимодействие с соответственно замещенным производным литийтриметилсилилметила формулы IV, причем R¹ и R³ имеют указанные выше значения.

Схема 2 3- Производные -алкенилпенама формулы Ib образуются из соединений формулы V в результате спонтанной дегидратации. Таким путем получают соединения формулы I, где n = 0 и R² представляет собой водород. При осуществлении синтеза с помощью реакции Реформатского соединения формулы II конденсируют, как это представлено на схеме 3, с цинкорганическими производными сложных -галогенэфиров с получением соответствующих сложных гидроксиэфиров формулы VI. Путем отщепления воды образуются соединения формулы I, где n = 0, R¹ обозначает COR⁴, где R⁴ обозначает низший алкил и R² представляет собой водород.

Схема 3 R³ имеет указанное выше значение.

Окисление сульфидной группы до сульфоксидной либо сульфоновой группы осуществляют с помощью известных методов. Особенно пригодной для такой цели является проводимая в двухфазной системе реакция между соединениями общей формулы I, где n = 0, и четырехокисью рутения либо водным раствором перманганата калия, а также раствором перекиси водорода.

Для получения сульфонов пенама могут использоваться также другие окислительные реагенты, как Na₂WO₄, или надкислота. В качестве растворителя особенно пригоден дихлорметан.

Соединение общей формулы I, где n = 0, целесообразно растворять в дихлорметане и добавлять в водную суспензию из метапериодата натрия, карбоната натрия и четырехокиси рутения. После окончания реакции органическую фазу отделяют, очищают и сушат.

Образование при окислении сульфоксида или же сульфона зависит от характера и/или количества окислителя.

Перевод соединения формулы I, где R³ имеет значения, отличные от водорода, в свободную кислоту и перевод свободной кислоты в фармацевтически приемлемую соль может осуществляться с помощью известных методов, при определенных условиях в течение одного единственного цикла.

Сложноэфирные группы, например, бензил, п-нитробензил, бензгидрил, п- метоксибензил или аллил, могут отщепляться следующим образом: Бензил и п-нитробензил путем гидрирования с помощью палладия на угле при температуре в диапазоне от 0^oC до 80^oC в органическом растворителе, таком, как этилацетат, метанол либо вода, или путем гидролиза в присутствии сульфида натрия в диапазоне от 0^oC до комнатной температуры в растворителе, таком, как, например, диметилформамид (ДМФ). Аллил - путем катализированного палладием (О) трансаллилирования в присутствии натриевой либо калиевой соли 2- этилкапроновой кислоты; бензгидрил - с помощью м-крезола при температуре порядка 50^oC в течение 4-5 часов.

Применяемые в качестве исходных веществ соединения общей формулы II можно получать аналогично одному из описанных в Tetrahedron 43, N 5, стр. 1003-1012 (1987) способов из соответствующих спиртов.

Схема 4 - При этом R³ имеет указанное выше значение.

Большое преимущество дает проведение обменной реакции с оксалил-хлоридом в дихлорметане, причем целесообразно реакцию проводить следующим образом: дихлорметан и окислитель охлаждают до приблизительно - 60^oC, обрабатывают диметилсульфоксидом (ДМСО) и соединением формулы VIII и после примерно 3-часовой реакции и добавки триэтиламина охлаждающую баню удаляют. Полученный таким путем альдегид формулы II может очищаться по обычной методике.

Аналогичным образом получают соединения общей формулы II окислением пиридинхлорхроматом (ПХХ), реагентом Десса-Мартина, MnO₂ и др.

Как уже упоминалось выше, предлагаемые согласно изобретению соединения общей формулы I и их фармацевтически совместимые соли с основаниями обладают ярко выраженной подавляющей - лактамазу активностью по отношению к - лактамазам из различных штаммов бактерий. Эти ценные с терапевтической точки зрения свойства могут, как поясняется ниже, определяться in vitro на выделенных - лактамазах.

А. Выделение - лактамаз Различные - лактамазы могут быть выделены из пенициллино-, соответственно цефалоспориноустойчивых штаммов бактерий, таких как Klebsiella pneumoniae NCTC 418, Proteus vulgaris 1028, Bacillus licheniformis 749/C, Escherichia coli SN01 и Citrobacter freundii 1203. Для этого соответствующие штаммы культивируют в Tryptic Soy Broth (Difco) (питательный отвар на основе продуктов распада сои) и затем собирают путем центрифугирования в последующей экспоненциальной фазе роста (в случае необходимости в питательную среду к концу экспоненциальной фазы добавляют 50-100 мг/л ампициллина для индуцирования - лактамазы). Полученную таким путем бактериальную массу обрабатывают 20 мМ трис-HCl-буфером (pH 7,0); в условиях охлаждения клетки вскрывают с помощью French Press. Затем центрифугируют (20000 об./мин) в течение 20-30 мин и получают прозрачный сырой экстракт. Очистку протеинов проводят по методу Cartwright, S. J. & Walley, S.G. [Biochem. J. 221, 505-512 (1980)] и, для В. licheniformis, по методу Ellerby, L.M. et al. [Biochemistry 29, 5797-5806 (1990)].

Б. Определение активности - лактамазы Определение активности выделенных - лактамаз может проводиться по методу O'- Callaghan, C.H. et al. [Antimicr. Ag. Chemother 1, 283-288 (1972)] с помощью хромогенного цефалоспорина Nitrocefin (87/312 Glaxo). Требуемый опытный состав содержит на 1 мл воды: 50 мМ фосфатного буфера (pH 7,0), 0,1 мМ Nitrocefin и достаточное количество фермента лактамазы) для получения - А/мин порядка 0,1. Расщепление субстрата, сопровождаемое с изменением цвета, осуществляют при 37^oC и его количество определяют при 482 нм с помощью спектрофотометра.

В. Определение подавляющего - лактамазу действия соединений общей формулы I Описанное выше расщепление хромогенного субстрата с помощью - лактамаз (опыт Б) может подавляться добавками соединений общей формулы I (ингибиторы). Так как было выявлено, что ингибиторы необратимо инактивируют - лактамазу в ходе реакции, зависящей от времени, по мере надобности эту реакцию (расщепление субстрата) начинают после прединкубационного периода - лактамазы, осуществляемого с помощью ингибитора в течение 15 мин, путем добавления субстрата. Величиной измерения сродства испытуемого ингибитора с - лактамазой, представляющей собой величину измерения эффективности ингибитора, служит такая концентрация, при которой расщепление субстрата (Nitrocefin), происходящее в описанных выше условиях проведения эксперимента (опыт Б) при отсутствии ингибитора, подавляется на 50% (IC₅₀ в нМ). Для определения IC₅₀ были проведены 4-6 опытов, в которых применяли различные концентрации ингибитора. Определение IC₅₀ осуществляли графическим путем.

Полученные в описанном выше эксперименте (опыт В) результаты представлены в нижеследующих таблицах 1-3.

Испытания соединения из примера 5в (натриевой соли (Z)- (2S,3S,5R)-3-(2-цианоэтенил)-3-метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты) на крысах (2 раза в день, 300 мг/кг, в/в) показало, что оно хорошо переносится и не затрагивает такие важные органы, как печень и почки.

Соединения по изобретению могут находить применение в качестве лекарственных средств, например, в виде фармацевтических препаратов, содержащих эти продукты либо их соли в смеси с пригодным для парэнтерального или энтерального введения фармацевтическим, органическим либо неорганическим инертным наполнителем, таким как, например, вода, желатин, гумми-арабик, молочный сахар, крахмал, стеарат магния, тальк, растительные масла, полиалкиленгликоли, вазелины и т.д. Фармацевтические препараты могут изготавливаться в твердом виде, например, в виде таблеток, драже, суппозиториев, капсул, либо в жидком виде, например, в виде растворов, суспензий или эмульсий. При необходимости их стерилизуют и/или они содержат вспомогательные вещества, такие как консерванты, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, соли для изменения осмотического давления, анестезирующие средства или буферы. Соединения формулы I и их соли предназначены предпочтительно для парэнтерального введения и изготавливаются для этой цели преимущественно в виде лиофилизатов либо сухих порошков, пригодных для растворения с помощью обычных агентов, как вода или изотонический раствор хлорида натрия.

Как уже упоминалось выше, соединения общей формулы I и их фармацевтически совместимые соли могут применяться согласно изобретению для борьбы, соответственно предупреждения болезней, прежде всего для борьбы с образующими - лактамазу возбудителями болезней, в сочетании с - лактамовыми антибиотиками, т.е. с такими антибиотиками, которые содержат - лактамовое кольцо, например, пенициллины, такие как пиперациллин, мезлоциллин, азлоциллин, апалциллин, бензилпенициллин, феноксиметилпенициллин, карбенициллин, метициллин, пропициллин, тикарциллин, ампициллин, амоксициллин либо мециллинам, и цефалоспорины, такие как цефтриаксон, цефтазидим, цефетамет, цефетамет-пивоксил, цефотаксим, цефменоксим, цефтизоксим, цефуроксим, цефалоридин, цефалотин, цефазолин, цефалексин, цефокситин, цефацетрил, цефамандол, цефапирин, цефрадин, цефалоглицин, цефпиром либо цефепим, а также пенемы и карбапенемы, такие как имипенем или меропенем. При этом соединения общей формулы I или их фармацевтически совместимые соли с основаниями могут назначаться до, одновременно или же после приема - лактамовых антибиотиков. Если соединения по изобретению назначают одновременно с каким- либо - лактамовым антибиотиком, то это может осуществляться в виде используемой в тех же целях комбинации обоих ингредиентов или же в виде комбинированного фармацевтического препарата, содержащего соединение общей формулы I либо его фармацевтически совместимую соль с основанием и - лактамовый антибиотик. Комбинированные фармацевтические препараты такого типа также являются предметом настоящего изобретения.

Дозировку соединений общей формулы I и их фармацевтически совместимых солей с основаниями можно варьировать в широких пределах, естественно, с учетом в каждом отдельном случае индивидуальных особенностей пациента, равно как и особенностей образующих - лактамазу возбудителей болезни, с которыми ведется борьба. В принципе суточную дозу можно выбирать в пределах от приблизительно 0,1 до приблизительно 2,0 г. Соотношение ингибитора - лактамазы (соединение формулы I либо его фармацевтически совместимая соль с основанием) и - лактамового антибиотика также может варьироваться в широких пределах, но в каждом отдельном случае должны учитываться индивидуальные особенности пациента. Как правило, это соотношение выбирают в пределах от приблизительно 1:20 до приблизительно 1:1.

Способ получения лекарственных средств на основе соединений формулы I или их фармацевтически совместимых солей состоит в том, что из одного или нескольких соединений общей формулы I либо их фармацевтически совместимых солей и при определенных условиях одного или нескольких ценных в терапевтическом отношении веществ изготавливают препараты в галеновой форме. Необходимо еще раз назвать упоминавшиеся выше комбинированные фармацевтические препараты, на основе соединений изобретения. Это относится прежде всего к комбинированным фармацевтическим препаратам, содержащим соединение общей формулы I либо его фармацевтически совместимую соль и - лактамовый антибиотик, например, пенициллин, такой как пиперациллин, мезлоциллин, азлоциллин, апалциллин, бензилпенициллин, феноксиметилпенициллин, карбенициллин, метициллин, пропициллин, тикарциллин, ампициллин, амоксициллин либо мециллинам, или же цефалоспорин, такой как цефтриаксон, цефтазидим, цефетамет, цефетамет-пивоксил, цефотаксим, цефметоксим, цефтизоксим, цефуроксим, цефалоридин, цефалотин, цефазолин, цефалексин, цефокситин, цефацетрил, цефамандол, цефапирин, цефрадин, цефалоглицин, цефпиром, цефепим, а также пенемы и карбапенемы, такие как имипенем либо меропенем. Комбинированные препараты такого типа предназначены для борьбы с вырабатывающими - лактамазу возбудителями болезней.

Ниже изобретение подробнее поясняется на примерах, которые никоим образом не ограничивают его объем.

Пример 1 Бензгидриловый эфир (2S,3R,5R)-3-фopмил-3-метил-7-оксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты 100 мл дихлорметана обрабатывают в атмосфере аргона 0,84 мл (9,60 ммолей) оксалилхлорида и охлаждают до -60^oC. Затем по каплям добавляют сначала 0,73 мл (10,25 ммолей) ДМСО, а потом 2,50 г (6,52 ммолей) бензгидрилового эфира (2S, 3S,5R)-3-гидроксиметил-3-метил-7-оксо-4- тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты, растворенных в 100 мл дихлорметана. Смесь перемешивают при той же температуре в течение 3 ч, после чего добавляют 3,2 мл (23,0 ммоля) триэтиламина. Затем охлаждающую баню удаляют и смеси дают нагреться до комнатной температуры. Оранжевый раствор сливают в 1000 мл 0,2H соляной кислоты и водную фазу еще дважды экстрагируют с помощью дихлорметана. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в ротационном испарителе. Полученный таким путем продукт (2,50 г, 100%) можно без последующей очистки перерабатывать дальше или кристаллизовать из простого диэтилового эфира.

Выход: 2,00 г (80%) белого кристаллического порошка; Т.пл. 111,8-112,8^oC ИК (KBr): 2720, 1788, 1743, 1718 см^-1 МС: (M-CH₂CO) 339 ¹H-ЯМР (250 МГц, CDCl₃): [част./млн] =1,26 (s, 3H), 3,06 (dd, 1H, J= 16,2 Гц, 2 Гц, 6-H), 3,54 (dd, 1H, J=16,2 Гц, 4 Гц, 6-H), 5,34 (s, 1H, 2-H), 5,42 (dd, 1H, J=2 Гц, 4 Гц, 5-H), 6,95 (s, 1H, CHPh₂), 7,30-7,38 (m, 10H, Ph), 9,20 (s, 1H).

Пример 2 а) Бензгидриловый эфир (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-этоксикарбонилвинил)-3-метил-7-оксо-4-тиа- 1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты 500 мг (1,30 ммоля) бензгидрилового эфира (2S,3R,5R)-3-формил-3-метил-7-оксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты растворяют в среде аргона в 20 мл ТГФ и обрабатывают 500 мг (1,40 ммоля) этоксикарбонилметилентрифенилфосфорана. Желтый раствор перемешивают в течение 75 мин при 50^oC, после чего концентрируют. Образовавшийся остаток хроматографируют на силикагеле (размер зерен 0,040-0,063 мм) с помощью этилацетата/гексана 9:16 в качестве элюента.

Выход: 520 мг (88%) смолы желто-оранжевого цвета ИК (пленка): 1783, 1747, 1717, 1650 см^-1 MC: (M-CONH) 406, (M-CHPh₂) 284 ¹H-ЯМР (250 МГц, CDCl₃): [част./млн] =1,31 (t, 3H, J=7 Гц), 1,34 (s, 3H), 3,13 (dd, 1H, J=2 Гц, 16 Гц, 6-H), 3,57 (dd, 1H, J=4 Гц, 16 Гц, 6-H), 4,22 (q, 2H, J=7 Гц), 4,78 (s, 1H, 2-H), 5,30 (dd, 1H, J=4,2 Гц, 5-H), 5,97 (d, 1H, J= 15 Гц, =CH), 6,94 (s, 1H, CHPh₂), 7,07 (d, 1H, J=15 Гц, =CH), 7,30-7,38 (m, 10 H, Ph).

б) бензгидриловый эфир (Е)-(2S,3S,5R)-3-(2-этоксикарбонилвинил)-3- метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты 250 мг (0,55 ммоля) бензгидрилового эфира (Е)-(2S,3S,5R)- 3-(2-этоксикарбонилвинил)-3-метил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло [3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты растворяют в 10 мл дихлорметана и обрабатывают 6,5 мл этилацетата. В желтый раствор по каплям добавляют 260 мг (1,66 ммоля) перманганата калия в 25 мл воды. После добавления перманганата калия перемешивают еще в течение 30 мин, после чего реакционную смесь коричневого цвета обрабатывают 30%-ным раствором перекиси водорода до тех пор, пока не образуется бесцветная двухфазная смесь. Фазы разделяют в делительной воронке и водную фазу экстрагируют еще дважды с помощью дихлорметана. Органическую фазу промывают водой, насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, а также насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют. Оставшееся масло хроматографируют на силикагеле (размер зерен 0,040-0,063 мм) этилацетатом/гексаном 9:16 в качестве элюента.

Выход: 170 мг (60%) бесцветного пенистого вещества ИК (KBr): 1802, 1757, 1721, 1653, 1331, 960 см^-1 MC: (M-H) 482,4 ¹H-ЯМР (250 МГц, CDCl₂: [част./млн] = 1,26 (s, 3H), 1,35 (t, 3H, J=7 Гц), 3,44-3,59 (псевдо-m, 2H, 6-H), 4,29 (q, 2H, J=7 Гц), 4,60 (dd, 1H, J=4 Гц, 2 Гц, 5-H), 4,61 (s, 1H, 2-H), 5,99 (d, 1H, J=16 Гц, =CH), 6,94 (s, 1H, CHPh₂), 7,07 (d, 1H, J=16 Гц, =CH), 7,23-7,40 (m, 10H, Ph).

в) Натриевая соль (E)- (2S,3S,5R)-3-(2-этоксикарбонилвинил)-3-метил-4,4,7-триоксо-4-тиа- 1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты 170 мг (0,35 ммоля) бензгидрилового эфира (E)-(2S,3S,5R)-3-(2- этоксикарбонилвинил)- 3-метил-4,4,7-тиоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2- карбоновой кислоты растворяют в атмосфере аргона в 3 мл м-крезола и перемешивают в течение 4,5 ч при 50^oC. Затем обрабатывают 12,5 мл изобутилметилкетона и желто-оранжевый раствор трижды экстрагируют соответственно 3 мл насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия. Водную фазу дважды промывают соответственно 5 мл изобутилметилкетона, фильтруют через складчатый фильтр и затем с помощью концентрированной соляной кислоты устанавливают pH 1. После этого экстрагируют этилацетатом, органическую фазу промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в ротационном испарителе. Оставшуюся желтую смолу растворяют в 0,5 мл этилацетата и обрабатывают 108 мкл натриевой соли 2- этилкарбоновой кислоты (2H раствор в этилацетате). Затем концентрируют, остаток обрабатывают 1,5 мл воды и экстрагируют один раз с помощью н-гексана. После этого водную фазу хроматографируют через полимерный гидрофобный гель водой в качестве элюента. Содержащие продукт фракции соединяют и лиофилизуют.

Выход: 60 мг (50%) бесцветного лиофилизата ИК (KBr): 1782, 1715, 1627, 1396, 1192 см^-1 MC: (M-Na)^- 316,1 ¹H-ЯМР (250 МГц, D₂O): [част./млн] = 1,31 (t, 3H, 7 Гц), 1,66 (s, 3H), 3,46 (dd, 1H, J=16 Гц, 2 Гц, 6-H), 3,71 (dd, 1H, J=16 Гц, 4 Гц, 6-H), 4,28 (q, 2H, J=7 Гц), 4,62 (s, 1H, 2-H), 5,15 (dd, 1H, J=2 Гц, 4 Гц, 5-H), 6,35 (d, 1H, J=16 Гц, =CH), 7,10 (d, 1H, J=16 Гц, =CH).

Пример 3 а) Бензгидриловый эфир (Е)-(2S,3S,5R)-3-(2-метоксикарбонилвинил)- 3- метил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло [3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты Аналогично примеру 2 200 мг (0,52 ммоля) бензгидрилового эфира (2S,3R, 5R)-3-формил-3-метил-7-оксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты путем обменной реакции с 193 мг (0,58 ммоля) метоксикарбонилметилентрифенилфосфорана переводят в бензгидриловый эфир (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-метоксикарбонилвинил)-3-метил-7-оксо-4- тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты.

Выход: 209 мг (91%) бесцветного пенистого вещества ИК (пленка): 1782, 1745, 1724, 1651 см^-1 MC: (M+NH₄⁺) 455,3 Пример 4 а) Бензгидриловый эфир (E)-(2S,3S,5R)-3-(2-бензилоксикарбонилвинил)-3-метил-7-оксо-4- тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты 763 мг (2,0 ммоля) бензгидрилового эфира (2S,3R,5R)-3-формил-3-метил-7-оксо- 4-тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты растворяют в атмосфере аргона в 15 мл ТГФ, после чего обрабатывают 821 мг (2,0 ммоля) бензилоксикарбонилметилентрифенилфосфорана и оранжевый раствор перемешивают в течение 2 ч при 50^oC. Затем дают раствору остыть до комнатной температуры, удаляют растворитель с помощью ротационного испарителя и полученное красно-коричневое масло хроматографируют на силикагеле (размер зерен 0,040-0,063 мм) этилацетат/гексаном 9:16 в качестве элюента.

Выход: 800 мг (78%) пенистого вещества оранжевого цвета ИК (пленка): 1782, 1746, 1721, 1649, 985 см^-1 МС: (М+H)⁺ 514,3 ¹H-ЯМР (250 МГц, CDCl₃): [част./млн] = 1,33 (s, 3H), 3,11 (dd, 1H, J= 16 Гц, 1,6 Гц, 6-H), 3,56 (dd, 1H, J=16 Гц, 4,2 Гц, 6-H), 4,78 (s, 1H, 2-H), 5,20 (s, 2H), 5,36 (dd, 1H, J=1,6 Гц, 4,2 Гц, 5-H), 6,01 (d, 1H, 15 Гц, = CH), 6,93 (s, 1H, CHPh₂), 7,12 (d, 1H, J=15 Гц, =CH), 7,30-7,43 (m, 15 H, Ph).

6) Бензгидриловый эфир (E)-(2S, 3S,5R)-3-(2-бензилоксикарбонилвинил)- 3-метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2- карбоновой кислоты Аналогично примеру 2 окисляют 800 мг (1,56 ммоля) бензгидрилового эфира (E)-(2S, 3S, 5R)-3-(2- бензилоксикарбонилвинил)-3-метил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло [3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты Выход: 255 мг (30%) бесцветного пенистого вещества ИК (KBr): 1802, 1757, 1723, 1650, 1332 см^-1 MC: (M-H)^- 544,2 ¹H-ЯМР (250 МГц, CDCl₃): [част./млн] = 1,25 (s, 3H), 3,47 (dd, 1H, J= 16 Гц, 2 Гц, 6-H), 3,55 (dd, 1H, J=16 Гц, 4 Гц, 6-H), 4,66 (dd, 1H, J=2 Гц, 4 Гц, 5-H), 4,81 (s, 1H, 2-H), 5,26 (s, 2H), 6,02 (d, 1H, J=16 Гц, =CH), 6,93 (s, 1H, CHPh₂), 7,22 (d, 1H, J=16 Гц, =CH), 7,13-7,14 (m, 15 H, Ph).

в) Натриевая соль (E)-(2S,3S,5R)-3- (2-бензилоксикарбонилвинил)-3-метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1- азабицикло [3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты Аналогично примеру 2в) 250 мг (0,46 ммоля) бензгидрилового эфира (Е)-(2S, 3S, 5R)-3- (2-бензилоксикарбонилвинил)-3-метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты подвергают удалению защитной группы и переводят в натриевую соль.

Выход: 54 мг (30%) лиофилизата бежевого цвета ИК (KBr): 1781, 1719, 1626, 1322, 1189, 979 см^-1 МС: (M-H)^- 378,2 ¹H-ЯМР (250 МГц, D₂O): [част./млн] = 1,65 (s, 3H), 3,45 (dd, 1H, J=17 Гц, 2 Гц, 6-H), 3,71 (dd, 1H, J=17 Гц, 4 Гц, 6-H), 4,63 (s, 1H, 2-H), 5,14 (dd, 1H, J=4 Гц, 2 Гц, 5-H), 5,29 (s, 2H), 6,42 (d, 1H, J=16 Гц, =CH), 7,13 (d, 1H, 16 Гц, =CH), 7,42-7,55 (m, 5H, Ph).

Пример 5 а) Бензгидриловый эфир (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-цианоэтенил)- 3-метил- 7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты Метод А: К 946 мг (3,14 ммоля) цианометилентрифенилфосфорана добавляют в атмосфере аргона 1,0 г (2,62 ммоля) бензгидрилового эфира (2S,3R,5R)-3- формил-3-метил-7- оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты и 30 мл толуола. Коричневую суспензию перемешивают в течение 1 ч, концентрируют и очищают посредством хроматографии на силикагеле (размер зерен 0,040-0,063 мм) с помощью этилацетата/н-гексана 3:1 в качестве элюента.

Выход: 1 г (94%) смеси изомеров, E/Z 3:1 Спектроскопические характеристики смеси: ИК (пленка): 2224, 1781, 1744 см^-1 МС: (M+Na⁺) 427,2 H-ЯМР (250 МГц, CDCl₃) (изомер E): [част./млн] = 1,32 (s, 3H), 3,13 (dd, 1H, J= 16 Гц, 1,6 Гц, 6-H), 3,63 (dd, 1H, J=16 Гц, 4,4 Гц, 6-H), 4,74 (s, 1H, 2-H), 5,41 (dd, 1H, J=4,4 Гц, 1,6 Гц, 5-H), 5,54 (d, 1H, J=15 Гц, = CH), 6,82 (d, 1H, J=15 Гц, =CH), 6,95 (s, 1H, CHPh₂), 7,30-7,44 (m, 10 H, Ph).

¹H-ЯМР (250 МГц, CdCl₃) (изомер Z): [част./млн] = 1,61 (s, 3H), 3,18 (dd, 1H, J= 16 Гц, 1,5 Гц, 6-H), 3,64 (dd, 1H, J=16 Гц, 4,6 Гц, 6-H), 4,86 (s, 1H, 2-H), 5,41 (d, 1H, J=12 Гц, =CH), 5,44 (dd, 1H, J=l,5 Гц, 4,6 Гц, 5-H).

Метод Б: Суспензию 2,88 г (9,56 ммолей) цианометилентрифенилфосфорана в 24 мл раствора перхлората лития (0,4 М в ацетонитриле) охлаждают в атмосфере аргона до -20^oC. Затем по каплям добавляют раствор 3,32 г (8,70 ммолей) бензгидрилового эфира (2S, 3R, 5R)-3- формил-3-метил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2- карбоновой кислоты в 30 мл ацетонитрила, продолжают перемешивать в течение 4 ч при той же температуре, после чего удаляют растворитель с помощью ротационного испарителя. Остаток растворяют в 100 мл этилацетата, экстрагируют путем встряхивания трижды с помощью воды и один раз с помощью насыщенного раствора хлорида натрия, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют. Оставшееся масло очищают на силикагеле (размер зерен 0,040-0,063 мм) метиленхлоридом в качестве элюента.

Выход: 3,34 г (94%) смеси изомеров, E/Z 1:4 б) Бензгидриловый эфир (E, Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-цианоэтенил)-3- метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2- карбоновой кислоты Бензгидриловый эфир (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-цианоэтенил)-3- метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты получают аналогично тому, как это описано в примере 2, а именно, путем окисления 1,02 г (2,51 ммоля) бензгидрилового эфира (E/Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-цианоэтенил)-3-метил-7-оксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты. Оба изомера при этом могут разделяться посредством хроматографии на силикагеле (размер зерен 0,040-0,063 мм) с помощью этилацетата/н-гексана 9:16 в качестве элюента.

В качестве первого компонента элюируют изомер Z.

Выход: Z: 76 мг (7%) бесцветного масла Е: 253 мг (23%) бесцветного пенистого вещества Спектроскопические характеристики изомера Е: МС: (M+NH₄)⁺ 454,2 ИК (KBr): 2228, 1802, 1758, 1334, 1192, 990 см^{-1 1}H-ЯМР (250 МГц, CDCl₃): [част./млн] = 1,24 (s, 3H), 3,50 (dd, 1H, J= 16 Гц, 2,2 Гц, 6-H), 3,60 (dd, 1H, J=16 Гц, 4 Гц, 6-H), 4,65 (dd, 1H, J=2 Гц, 4 Гц, 5-H), 4,75 (s, 1H, 2-H), 5,37 (d, 1H, J=16 Гц, =CH), 6,85 (d, 1H, J=16 Гц, =CH), 6,98 (s, 1H, CHPh₂), 7,25-7,45 (m, 10H, Ph).

Спектроскопические характеристики изомера Z: МС: (M-H)^- 435,3 ИК (KBr): 2220, 1801, 1757, 1333, 1190 см^{-1 1}H-ЯМР (250 МГц, CDCl₃): [част./млн] = 1,67 (s, 3H), 3,48 (dd, 1H, J= 16 Гц, 2,4 Гц, 6-H), 3,64 (dd, 1H, J=16 Гц, 4,6 Гц, 6-H), 4,72 (dd, 1H, J= 2,4 Гц, 4,6 Гц, 5-H), 4,85 (s, 1H, 3-H), 5,90 (d, 1H, J=12 Гц, =CH), 6,41 (d, 1H, J=12 Гц, =CH), 6,97 (s, 1H, CHPh₂), 7,26-7,44 (m, 10 H, Ph).

в) Натриевая соль (E)-(2S,3S,5R)-3-(2- цианоэтенил)-3-метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты Аналогично примеру 2в) 215 мг (0,5 ммоля) бензгидрилового эфира (E)-(2S, 3S, 5R)-3-(2-цианоэтенил)-3-метил-4,4,7-триоксо-4- тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты подвергают удалению защитной группы и переводят в натриевую соль.

Выход: 110 мг (82%) белого лиофилизата ИК (KBr): 2240, 1782, 1629, 1397, 1141 см^-1 MC: (M-Na)^- 269,0 ¹H-ЯМР (250 МГц, CDCl₃): [част./млн] = 1,64 (s, 3H), 3,47 (dd, 1H, J= 16 Гц, 2 Гц, 6-H), 3,72 (dd, 1H, J=16 Гц, 4 Гц, 6-H), 4,62 (s, 1H, 2-H), 5,15 10 (dd, 1H, J=2 Гц, 4 Гц, 5-H), 6,07 (d, 1H, J=16 Гц, =CH), 7,08 (d, 1H, J=16 Гц, =CH).

Натриевая соль (Z)- (2S,3S,5R)-3-(2-цианоэтенил)-3-метил-4,4,7-триоксо-4-тиа-1- азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновой кислоты 95 мг (0,2 ммоля) бензгидрилового эфира (Z)-(2S,3S,5R)-3-(2-цианоэтенил)-3-метил- 4,4,7-триоксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты растворяют в 3 мл м-крезола и перемешивают в течение 45 мин при 50^oC. Реакционную смесь обрабатывают 10 мл изобутилметилкетона и 120 мкл натриевой соли 2-этилкапроновой кислоты (2H в этилацетате, 1,1 экв.). Затем эк