Хлорпиримидиновые промежуточные соединения

Хлорпиримидиновые промежуточные соединения

Реферат

 

Описываются новые хдорпиримидиновые промежуточные соединения общей формулы где R¹ и R² - могут быть одинаковыми или различными и выбраны из C_1-8-алкила, и их соли, способы их получения и способы их превращения в замещенные по 9-му положению 2-аминопурины, которые пригодны для фармакотерапии. Новые соединения могут быть применены для лечения и профилактики вирусных инфекций. 11 с. и 4 з.п.ф-лы.

Изобретение касается некоторых новых пиримидиновых промежуточных соединений, способов их получения и превращения в замещенные по 9-му положению 2-аминопурины типа карбоциклических, гетероциклических и нециклических аналогов пуриновых нуклеозидов, их солей, эфиров и фармацевтически приемлемых производных.

Известно, что ряд аналогов 2-аминопуриновых нуклеозидов может быть применен для лечения и профилактики вирусных инфекций, например описано, что соединение формулы (А) обладает сильной активностью против вируса иммунодефицита человека (HIV) и вируса гепатита В (HBV) [ЕР 0434450].

Способы, предложенные для получения замещенных по 9-му положению 2-аминопуринов, обычно начинаются с присоединения к пиримидиновому соединению остатка аналога сахара, циклизации с образованием имидазольного кольца и введения какого-либо подходящего заместителя в 6-е положение.

Пиримидиновые соединения, пригодные для получения замещенных по 9-му положению 2-аминопуринов, включают 2,5-диамино-4,6-дихлорпиримидин, N,N'-(4,6-дихлор-2,5- пиримидиндиил)бисформамимид, а также N-2-ацилированные производные пиримидинов, такие как 2-ацетамидные и 2-изобутирамидные производные [Патент США 5087697].

Способы синтеза данных промежуточных соединений обычно состоят из ряда стадий, некоторые из которых трудны для выполнения и дают низкие выходы продукта, что ограничивает любое крупномасштабное их воплощение в количествах, превышающих несколько граммов, и делает их экономически невыгодными.

Способы синтеза промежуточного 2,5-диамино-4,6-дихлорпиримидина включают прямое хлорирование легко доступного 2,5-диамино-4,6-дигидроксипиримидина с использованием оксихлорида фосфора. Впервые исследование этой реакции было проведено Temple и др. [J.Org.Chem., 1975, 40:3141-3142]. Эти исследователи пришли к выводу, что реакция была неуспешной возможно ввиду разложения пиримидинового цикла. Впоследствии Hanson описал способ прямого хлорирования 2,5-диамино-4,6-дигидроксипиримидина путем кипячения с обратным холодильником с оксихлоридом фосфора в присутствии большого молярного избытка четвертичных хлоридов аммония или амингидрохлоридов [Hanson, SmithKline Beecham, WO 91/01310, патент США 5216161]. Мы провели изучение этого способа и обнаружили повторяющийся значительно более низкий выход (<10%) неочищенного 2,5-диамино-4,6-дихлорпиримидина по сравнению с указанным в [WO 91/01310; патент США 5216161]. Обширное разложение 2,5-диамино-4,6-дигидроксипиримидина с образованием смол, покрывающих поверхность оборудования, в сочетании с проблемой наличия обильного нерастворимого осадка, обусловленного использованием нерастворимых солей аминов, составляют значительные препятствия и делают крупномасштабное применение подобного способа невыгодным. Модификации Legraverend и др. [Synthesis 1990: 587-589] , состоящие в использовании ацетонитрила в качестве растворителя и добавлении пентахлорида фосфора к оксихлориду фосфора и четвертичному хлориду аммония, приводят, по результатам наших экспериментов, к выделению с приблизительно 30% выходом (после хроматографической очистки) 2,5-диамино-4,6-дихлорпиримидина в количествах от 2 до 5 грамм. Увеличение масштабов свыше нескольких грамм опять является невыгодным ввиду образования осмоленных осадков.

В недавней публикации [Lonza AG, ЕР 0552758] говорится, что более высокие выходы (35-65%) могут быть достигнуты с использованием оксихлорида фосфора в том случае, когда 5-аминогруппа 2,5-диамино-4,6-дигидроксипиримидина защищена алкоксикарбонил-защитной группой. Утверждается, что в результате такой модификации упрощается стадия хлорирования, для которой в данном случае не требуется применения аминов и пентахлорида фосфора. Это создает новую проблему, состоящую в необходимости удаления алкоксикарбонил-защитной группы для превращения пиримидиновых промежуточных соединений в пурины. По существу, в данной публикации не показано, что подобные защищенные по 5-му положению 2,5-диамино-4,6-дихлорпиримидины могут быть благоприятным образом превращены в пурины.

Способ синтеза N,N'-(4,6-дихлор-2,5-пиримидиндиил)бисформамимида представляет собой реакцию 2,5-диамино-4,6-дихлорпиримидина с муравьиной кислотой и уксусным ангидридом [Harnden et al. J. Med.Chem. 1990, 33:187-196] и [патент США 5159076].

Пятистадийный синтез N-2-ацилированных производных, а также 2,5- диамино-4,6-дихлорпиримидина, необходимого для синтеза N,N'-(4,6-дихлор-2,5-пиримидиндиил)бисформамимида [Temple et al. J.Org.Chem. 1975, 40:3141-3142], начинается с 2-амино-6-хлорпиринидин-4-она и содержит стадии введения 5- нитрогруппы с последующим получением и восстановлением очень реакционноспособнных 5-нитро-4,6-дихлорпиримидиновых промежуточных соединений, что делает масштабирование процесса невыгодным. Выход ряда промежуточных соединений на стадиях синтеза низок [Legraverend et al. Synthesis 1990:587-589].

Нами открыты некоторые новые пиримидиновые промежуточные соединения, которые могут быть полезны в новых путях синтеза упомянутых выше замещенных по 9-му положению 2-аминопуринов и, кроме того, могут быть применены для синтеза известных описанных ранее промежуточных соединений.

В качестве первого аспекта настоящего изобретения мы предусматриваем следующие новые промежуточные соединения, которые могут быть применены в синтезах 2-аминопуринов, а именно соединения формул (I), (II) и (III): где R¹ и R², которые могут быть одинаковыми или различными, выбраны из C_1-8алкила. В предпочтительном варианте данного изобретения R¹ и R² оба представляют собой метильные группы.

Эти новые промежуточные соединения без труда могут быть получены с хорошим выходом и пригодны для получения широкого круга различных типов 2-аминопуринов, включая аналог нуклеозида формулы (А), фамцикловир [ЕР 0182024] , пенцикловир [ЕР 0141927] , H2G [0343133], (1'S,3'S,4'S)-2-амино-1,9-дигидро-9-[3,4-дигидрокси-3- гидроксиметил-1-циклопентил] -6H-пурин-6-он [ЕР 0420518] и другие замещенные по 9-му положению 2-аминопурины, при условии что заместитель в 9-м положении не присоединен с помощью гликозидной связи.

В качестве следующего аспекта настоящего изобретения мы предусматриваем способы синтеза новых промежуточных соединений формул (I), (II) и (III) и известного промежуточного соединения 2,5-диамино-4,6-дихлорпиримидина (IV). Эти способы проиллюстрированы на приведенной ниже упрощенной диаграмме, которая предназначена только для демонстрации возможных путей синтеза этих промежуточных соединений: Настоящее изобретение также предусматривает способ получения соединений формулы (I), включающий хлорирование 2,5-диамино-4,6-дигидроксипиримидина галометиленимминиевой солью (реагент Вильсмайера) формулы (V) где R¹ и R¹ определены как и ранее.

Соединения формулы (V) могут быть получены из ряда формамидов вторичных аминов в реакции с рядом галогенангидридов, таких, например, как оксихлорид фосфора, пентахлорид фосфора, тионилхлорид, фосген и оксалилхлорид, что подробно описано в обзоре [Marson С.М. Tetrahedron 1992, 48:3660-3720] и в приведенных в нем ссылках.

Преимущество в защите диаминопиримидина от обширного разложения во время хлорирования достигается за счет защиты in situ аминогрупп с помощью двукратного молярного эквивалента реагента Вильсмайера (V) с получением бисформамидинового промежуточного соединения (фиксируется с помощью тонкослойной хроматографии), которое вслед за этим хлорируется до соединения формулы (I) по мере прохождения реакции с дополнительными эквивалентами реагента Вильсмайера. Улучшенная растворимость подобных бисформамидиновых производных является дополнительным преимуществом описываемого процесса, облегчающим последующее хлорирование до соединений формулы (I), их выделение и упрощающим очистку.

Неудобство применения 5-алкоксикарбонил-защитных групп [Lonza AG, ЕР 0552758], в данном случае устраняется, поскольку формамидиновые группы в соединениях формулы (I) легко гидролизуются в мягких условиях с постадийным образованием промежуточных соединений (II) и (III); или, альтернативно, соединение формулы (I) может напрямую быть гидролизовано до соединения формулы (III).

2,5-Диамино-4,6-дихлорпиримидин (IV) может быть получен в результате: А) гидролиза соединения формулы (I); Б) гидролиза соединения формулы (II) или В) гидролиза соединения формулы (III).

Гидролиз (I), (II) или (III) до 2,5- диамино-4,6-дихлорпиримидина удобно осуществляется при значениях pH 3,0+/-0,5 посредством добавления смешивающегося с водой сорастворителя типа этанола. Гидролиз более эффективен при значениях pH 1-2, при которых для его проведения требуются меньшие затраты времени по сравнению с более высокими значениями pH. Однако при pH 1-2 целесообразно защищать 2,5-диамино-4,6-дихлорпиримидин от гидролиза до гидроксипиримидинов путем его экстракции, по мере образования, в органический слой, не смешивающийся с водным кислотным слоем. Когда значение pH водного слоя ниже 1, экстракция продукта в органический слой неэффективна (pK^a соединения формулы (IV) составляет около 0,5, и пиримидиновое кольцо, поэтому, находится при pH ниже 1 большей частью в протонированной форме). Предпочтительно, чтобы используемая для проведения гидролиза кислота не обладала бы существенной растворимостью в органическом слое, примером являются фосфорная или серная кислоты. Органический растворитель должен быть из числа устойчивых к водному раствору кислоты и таким, в котором было бы растворимо соединение формулы (IV). Растворителями, удовлетворяющими этим требованиям, являются толуол и галоуглеродные растворители типа метиленхлорида, хлороформа и 1,2-дихлорэтана. По окончании процесса органический слой просто промывают, например с помощью насыщенного водного бикарбоната, высушивают и концентрируют с получением соединения формулы (IV), не требующего дополнительной очистки.

Соединения формулы (III) могут быть получены в результате: А) селективного гидролиза соединения формулы (I) или Б) селективного гидролиза соединения формулы (II).

Гидролиз соединений формулы (I) или (II) до (III) наиболее эффективен в разбавленном водном растворе кислоты, предпочтительно минеральной, такой как серная, соляная или фосфорная. Продолжительного выдерживания при pH ниже 1 следует избегать, поскольку хлорпиримидиновое кольцо находится при pH ниже 1 большей частью в протонированной форме и может вследствие этого атаковаться молекулами воды с образованием нежелательных гидроксипиримидиновых побочных продуктов. Для эффективного образования соединения формулы (III) предпочтительно поддерживать значение pH выше 2 и оптимально - 3,0+/- 0,5. В этой оптимальной области значений pH формамидные группы соединений (I) и (II) селективно гидролизуются, давая соединения (III) с выходом приблизительно 70%. По мере гидролиза формамидных групп соединений (I) и (II) высвобождается вторичный амин (HNR¹R²), из которого был образован реагент Вильсмайера (V), и вызывает повышение значения pH раствора, замедляя тем самым гидролиз. Кроме этого, для некоторых реакционноспособных алифатических аминов HNR¹R², таких как N,N'-диметиламин, необходимо поддерживать достаточно низкое значение pH, предохраняя остатки хлора пиримидинового кольца от замещения вторичным амином. Мы обнаружили, что поддержание значения pH реакционной смеси ниже 4 позволяет избежать значительного замещения остатков хлора вторичным амином даже в случае такого реакционноспособного амина, как N,N'-диметиламин. Таким образом, было установлено оптимальным забуферивание смеси, в которой происходит гидролиз соединений (I) и (II) до соединения (III), при значении pH 3,0 +/- 0,5 или добавление порциями кислоты в течение гидролиза для поддержание значения pH на этом уровне.

Оптимальным является проведение гидролиза соединений формулы (I) и (II) до соединения (III) в минимальном количестве воды со значением pH, контролируемым как описано выше. В этих условиях соединение (III) выпадает в осадок по мере образования и просто отфильтровывается и промывается водой. Гидролиз осуществляется при мягком кипячении с обратным холодильником в течение 4 часов или при более низких температурах на протяжение более длительного периода времени.

Соединения формулы (II) могут быть получены селективным гидролизом соединений формулы (I). Предпочтительным является проведение селективного гидролиза в присутствии немного большего, чем двухмолярный эквивалента минеральной кислоты в воде или этаноле и с нагреванием в течение 15-30 минут.

Соединения формулы (I) могут быть получены в реакции 2,5-диамино-4,6-дигидроксипиримидина с реагентом Вильсмайера формулы (V).

2,5-Диамино-4,6-дигидроксипиримидин является коммерчески доступным соединением (Sigma, Maybridge BTB, Pfaltz and Bauer, Polyorganix).

Новые бисформамидины формулы (I) образуются и удобно с высоким выходом выделяются в случае, когда 2,5-диамино- 4,6-дигидроксипиримидин (или его соль, такая как гидрохлорид или гемисульфат) обрабатывают по меньшей мере 4-мя молярными эквивалентами реагента Вильсмайера (V). Подобные реакции хлорирования проходят в очень мягких условиях, без образования обильных смолянистых осадков, характерных, как отмечалось выше, для прямого хлорирования с помощью оксихлорида фосфора или оксихлорида фосфора с четвертичными галогенидами аммония. Хлорирование по Вильсмайеру 2,5-диамино-4,6-дигидроксипиримидина может быть осуществлено в инертном растворителе типа толуола, хлоралкенов или хлоралканов (таких как метиленхлорид, хлороформ или 1,2- дихлорэтан). Предпочтительными растворителями являются 1,2-дихлорэтан, хлороформ или метиленхлорид. Хлорирование может осуществляться в температурном интервале от 0 до 110^oC, предпочтительно - от 40 до 100^oC, обычно при температуре кипения используемого растворителя. Типичное время реакции - от 12 до 48 часов. Выделение соединений формулы (I) является простым, может быть легко осуществлено в крупных масштабах и состоит в простом промывании реакционного раствора водным раствором, содержащим подходящее основание, типа бикарбоната натрия, с целью нейтрализации всего образовавшегося хлористого водорода, с последующим концентрированием и высушиванием органического слоя, в результате чего получаются новые хлорированные пиримидины формулы (I). Соединения формулы (I) в общем случае стабильны и могут быть переосаждены из разнообразных растворителей типа этилацетата, их хранят или используют без дальнейшей очистки.

Особенно предпочтительными примерами соединений формул (I), (II) и (III) являются: а) 4,6-дихлор-2,5-бис-[(диметиламино)метиленамино]пиримидин, б) 2-амино-4,6-дихлор-5-[(диметиламино)метиленамино]пиримидин, в) N-(2-амино-4,6-дихлор-5-пиримидинил)формамид.

В соответствии со следующим аспектом настоящего изобретения, новое промежуточное соединение формулы (III) может быть использовано в синтезе 2-амино-6-хлорпуринов. Кроме этого, соединения формулы (I) или (II) также могут быть применены в синтезе 2-амино-6-хлорпуриннуклеозидов, за счет того, что амин HNR¹R² (где R¹ и R² определены ранее), высвобождающийся в процессе превращения пиримидинового производного в пурин, является существенно нереакционноспособным по отношению к замещению остатка хлора в образованных 2-амино-6-хлорпуринах.

Соединения формулы (III) обладают, как и описанные ранее N-2-ацилированные производные, повышенной реакционной способностью, по сравнению с 2,5-диамино-4,6-дихлорпиримидином, в отношении замещения остатка хлора на подходящий первичный амин или защищенный гидроксиламин. Однако подобная конденсация с соединением формулы (III) (описанная более детально ниже) может быть осуществлена в более мягких условиях, при более низких температурах и за более короткий период времени реакции по сравнению с соединением формулы (IV), результатом чего является меньшее разложение аминов. Продукты конденсации (VI) выделяются с более высоким выходом и чистотой, чем соответствующие продукты формулы (VIII), образованные в результате конденсации с 2,5-диамино-4,6-дихлорпиримидином (IV). Другим преимуществом использования промежуточного соединения (III) над описанными ранее N-2-ацилированными производными в дополнение к большей легкости синтеза является то, что пурины, образованные из (III), не требуют снятия защиты, т.е. гидролиза N-2-ацильной группы (этот более длительный способ описан в [патент США 5087697] и [патент США 5159076]).

где R³ определен далее.

Соединение формулы (III) может быть применено для получения новых промежуточных соединений формулы (VI), представляющих собой дополнительную особенность изобретения: где R³ представляет собой H или C_3-7карбоциклическую группу, которая может быть возможно замещена гидроксилом, при условии что такая группа не присоединена посредством гликозидной связи.

Предпочтительными R³ группами являются: б H; Наиболее предпочтительной R³ группой является: Подходящие группы R³ выбирают из а, б и в, которые определены выше.

В качестве дополнительной особенности настоящего изобретения мы предусматриваем способ получения соединений формулы (VI), который заключается во взаимодействии соединения формулы (III) с амином формулы R³NH₂, где R³ определен выше. Подобная конденсация предпочтительно проводится при температуре дефлегмации в растворителе типа этанола, бутанола, воды или ацетонитрила в присутствии по меньшей мере одного эквивалента основания, такого как триалкиламин или карбонат калия или натрия.

Последующие сноски на соединения формулы (VIa, б или в) означают соединение формулы (VI), в котором R³ является группой а, б, или в, определенные ранее.

Особенно предпочтительным соединением формулы (VI) является (1S,4R)-4-[(2-амино-6-хлор-5-формамидо-4-пиримидинил)амино] -2-циклопентен-1-метанол (VIa).

Новые промежуточные соединения формулы (VI) могут быть превращены посредством реакции циклизации в соответствующие соединения формулы VII где R³ определен ранее.

Циклизация соединения формулы (VI) с образованием соединения формулы (VII) удобно осуществляется в триалкилортоформиатах (например триэтилортоформиате или триметилортоформиате) с концентрированной водной кислотой (например 2-4 молярными эквивалентами соляной, серной или метансульфоновой кислот). Например, гидрохлорид соединения формулы (VIIa), т.е. соединение, в котором остаток R³ представлен группой а, начинает выпадать в осадок из подобных ортоформиатных растворов соединения формулы (VIa) в течение минут и выход продукта свыше 90% может быть достигнут с помощью отделения осадка фильтрованием, в оптимальном случае по истечении нескольких часов при температуре окружающей среды.

Подобный способ синтеза замещенных по 9-му положению 2-амино-6-хлорпуринов, таких как соединения формулы (VII), обладает значительным преимуществом по сравнению с опубликованным [патент США 4916224] ранее способом, использующим триаминопиримидиновые промежуточные соединения типа соединения формулы VIII Описанный ранее путь синтеза промежуточных соединений типа (VIII) является более длинным и, что более важно, содержит большее число стадий, необходимых для получения пурина после присоединения группы R³. Кроме этого, триаминопиримидиновые промежуточные соединения типа (VIII) чувствительны к действию воздуха и света и чрезвычайно трудны для очистки ввиду их полярности и способности хелатировать металлы (выделение после восстановления цинком диазопроизводных является особенно проблематичным). Новые 5-формамидные промежуточные соединения формулы (VI) легко и напрямую получаются из соединений формулы (III) в одну стадию и обычно представляют собой твердые вещества, которые стабильны и легко могут быть очищены путем осаждения из подходящего растворителя.

(1'S, 3'S,4'S)-2-Амино-1,9-дигидро-9-[3,4-дигидрокси-3-гидроксиметил-1-циклопентил]-6H-пурин-6-он (IXз) [ЕР 0420518] может быть получен в результате конденсации соединения формулы (III) с 4-амино-3-циклопентен-1-метанолом [патент США 5049671] с образованием соединения формулы (VIв) и последующего замыкания цикла в (VIв) с получением соединения формулы (VIIв), которое может быть гидроксилировано с помощью тетроксида осмия/N-метилморфолин-N-оксида с получением соединения формулы (VIIз). Это соединение гидролизуют с образованием соединения формулы (IXз).

2-Амино-6-хлорпурин (VIIб) может быть получен путем циклизации нового 2,4-диамино-6-хлор-5-формамидопиримидина (VIб), удобно синтезируемого в результате конденсации соединения формулы (III) с аммиаком. Соединение формулы (VIIб) представляет собой промежуточное соединение, пригодное для синтеза ациклических антивирусных нуклеозидов, таких как фамцикловир, где 2-амино-6-хлорпуриновое промежуточное соединение (VIIб) удобно с помощью гидрогенолиза переводится в 2-аминопуриновый нуклеозид.

Нуклеозиды, содержащие углеводородный цикл, также могут быть синтезированы из соединения формулы (VIIб), например, с помощью катализируемой Pd реакции сочетания с подходящим промежуточным соединением, содержащим углеводородный цикл, как описано в работе [MacKeith et al. J.Chem.Soc. Perkin Trans. 1. 1993:313-314] и цитируемой в ней литературе.

Соединения формулы (VIIa) и (VIIa) удобно гидролизуются до соответствующего гуанинового соединения путем кипячения с обратным холодильником с водным основанием или кислотой.

Дополнительной особенностью настоящего изобретения является обнаруженный нами альтернативный способ синтеза 2,6-диаминопуринов (где 6 - аминогруппа замещена остатками R⁴ и R⁵, которые могут быть одинаковыми или различными и выбраны из H и C_3-6циклоалкила (в частности R⁴ представляет собой H, а R⁵ представляет собой циклопропил), непосредственно из соединения формулы (VI), в котором выгодно исключается одна из стадий. Такие 2-аминопуриновые соединения могут прямо быть синтезированы из промежуточных соединений формулы (VI) кипячением с обратным холодильником соединения формулы (VI) с избытком амина (HNR⁴R⁵) в растворителе типа этанола, изопропанола, н-пропанола, т-бутанола или н-бутанола.

В особых случаях может быть более полезным использование 2,5-диамино-4,6-дихлорпиримидина (IV) для получения соединений формулы (VIII), пригодных для синтеза модифицированных по 8-му положению аналогов 2-аминопуриновых нуклеозидов, таких как 8-аза-2-аминопурины (которые обладают широким спектром противогерпесной активности, как описано в [Storer et al. Spec.Publ. Roy. Soc. Chem. (Rec. Adv.Chem. Anti-Infect. Agents) 1993, 119:251-265]); в этих случаях для получения соединения формулы (IV) могут быть применены промежуточные соединения формул (I), (II) и (III).

Фармацевтически приемлемые эфиры соединений, предусмотренных изобретением, могут быть получены путем этерификации с использованием традиционных, известных специалистам способов. Подобные способы включают, например, применение подходящего галогенгидрида или ангидрида.

Соединения по изобретению, включая их эфиры, могут быть традиционным образом превращены в фармацевтически приемлемые соли в результате обработки кислотой или основанием. Эфир или соль соединения по изобретению могут быть возвращены к исходному соединению, например, с помощью гидролиза.

Последующие примеры предназначены только для иллюстрации и никоим образом не ограничивают сферу изобретения.

Пример 1 4,6-Дихлор-2,5-бис-{[(диметиламино)метилен]амино}пиримидин 2,5-Диамино-4,6-дигидроксипиримидин гемисульфат (Sigma, 25,0 г, 0,131 мол) перемешивали в хлороформе (AR Mallinckrodt, 400 мл) в трехгорлой круглодонной колбе вместимостью 2 л, снабженной обратным холодильником (с источником азота, присоединенным к выходу холодильника) и выходом для газообразного HCl, соединяющим другое горло колбы с NaOH ловушкой. В колбу в дополнительном количестве хлороформа (400 мл) вливали хлорид (хлорметилен)диметиламмония (реагент Вильсмайера, Aldrich, 88,0 г, 0,651 мол (95%)). Реакционную смесь осторожно доводили до дефлегмации, вытесняя с помощью азота выделяющийся HCl в ловушку. Когда выделение HCl замедлялось после приблизительно 1 часа кипячения с обратным холодильником, вытеснение прекращали и реакционную смесь выдерживали в таком состоянии под небольшим давлением азота. По истечении 24 часов к реакционной смеси дополнительно добавляли реагент Вильсмайера (50,0 г, 0,370 мол), после чего кипячение с обратным холодильником продолжали еще в течение 20 часов. Реакционную смесь (раствор желтого цвета с темно-желтым осадком) при перемешивании охлаждали (ледяная баня) и разбавляли водой (в количестве, достаточном для растворения твердого осадка, примерно 300 мл). Значение pH водного слоя подводили до 7 с помощью гидроксида натрия или твердого карбоната натрия. Хлороформенный слой отделяли, промывали водой (3 х 400 мл), высушивали (сульфат натрия) и концентрировали в вакууме до твердого вещества (36 г) темно-желтой окраски. Полученное вещество растворяли в этилацетате (300 мл), перемешивали с углем (1 г) и фильтровали через набивку силикагеля (3 х 3 дюйма, в этилацетате). Набивку промывали дополнительным количеством этилацетата и элюент концентрировали в вакууме, получая поименованное в заголовке соединение в виде твердого вещества светлой рыжевато-коричневой окраски (30,75 г, 81%); т.п. 116-119^oC; Спектр ¹H-ЯМР идентичен спектру перекристаллизованных образцов.

Анализ. Расчет для C₁₀H₁₄N₆Cl₂ 0,10 EtOAc: C, 41,92; H, 5,01; N, 28,02; Cl, 23,80. Обнаружено: C, 42,23; H, 4,95; N, 28,46; Cl, 24,11.

Перекристаллизация такого образца из этилацетата дала поименованное в заголовке соединение в виде гранул белого цвета; т.п. 123-12^oC; масс-спектр (Cl/CH₄): 291, 289 (М+1); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) : 8,49 и 8,69 (оба s, 1 каждый, 2CH), 3,16 (s, 3, CH₃), 3,03 (s, 6, 2CH₃), 2,97 (s, 3, CH₃); УФ (pH 7, фосфатный буферный раствор) _max 296 нм ( 33300), _min/ 248 (5200).

Анализ. Расчет для C₁₀H₁₄N₆Cl₂: C, 41,54; H, 4,88; N, 29,06; Cl, 24,52. Обнаружено: C, 41,59; H, 4,91; N, 29,01; Cl, 24,47.

Пример 2 2-Амино-4,6-дихлор-5-{[(диметиламино)метилен]амино}пиримидин 4,6-Дихлор-2,5-бис-{ [(диметиламино)метилен] амино)пиримидин (Пример 1, 5,87 г, 20,3 ммол) растворяли в 95% этаноле (200 мл) и к раствору добавляли 6 н водную соляную кислоту (13,5 мл). Раствор нагревали в масляной бане при температуре 55^oC в течение 30 минут в атмосфере азота, в результате чего по данным ТСХ (силикагель, 5% метанол-хлороформ) исходный материал полностью превращался в продукт с более низким значением Rf. pH охлажденного (ледяная баня) раствора подводили приблизительно до 8 с помощью концентрированного раствора гидроксида аммония и полученную смесь (образовывался белый осадок) концентрировали на роторном испарителе до объема приблизительно 5 мл, удаляя этанол. После этого добавляли 20 мл воды и охлажденную смесь фильтровали. Осадок белого цвета промывали дополнительными порциями воды (2х20 мл) и высушивали, получая поименованное в заголовке соединение в виде порошка белого цвета (4,50 г, 95%), т.п. > 250^oC (с разл.); масс-спектр (Cl/CH₄): 236, 234 (М+1); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) : 7,59 (s, 1, CH), 6,90 (s, 2, NH₂), 3,00 и 2,94 (оба s, 3 каждый, 2CH₃); УФ (pH 7, фосфатный буферный раствор) _max 328 нм ( 4500), 255 (15800).

Анализ. Расчет для C₇H₉N₅Cl₂: C, 35,92; H, 3,88; N, 29,92; Cl, 30,29. Обнаружено: C, 35,66; H, 3,86; N, 29,74; Cl, 30,54.

В другом эксперименте, также как и в Примере 1, проводили реакцию 2,5-диамино-4,6-дигидроксипиримидина гемисульфата (Sigma, 48,0 г, 0,250 мол) с меньшим количеством реагента Вильсмайера (7,2 молярного эквивалента) и образованный 4,6-дихлор-2,5-бис-{[(диметиламино)метилен]амино}пиримидин (92%) без перекристаллизации гидролизовали в 95% этаноле (1 л) и 6 н водной соляной кислоте (110 мл), получая поименованное в заголовке соединение той же степени чистоты (элементный анализ и ¹H-ЯМР) как и для образца, охарактеризованного выше (44,2 г, общий выход, начиная с 2,5-диамино-4,6-дигидроксипиримидина гемисульфата - 76%).

Пример 3 N-(2-Амино-4,6-дихлор-5-пиримидинил)формамид (III) Суспензию 2-амино-4,6-дихлор-5-{[(диметиламино)метилен]- амино}пиримидина (Пример 2, 1,50 г, 6,41 ммол) и 1,5 М калий-фосфатного буферного раствора (35 мл, приготовленного путем подведения pH 1,5 М раствора KH₂PO₄ до 3,2 добавлением 85% фосфорной кислоты) подвергали мягкому кипячению с обратным холодильником (в масляной бане при температуре 125^oC). По истечении 4 часов pH смеси подводили до значения 3-4 добавлением 4 капель 85% фосфорной кислоты. Через 6 часов после начала кипячения по данным ТСХ (силикагелиевые пластинки, элюируемые системой 5% метанол-хлороформ), большая часть исходного материала превратилась в продукт с более низким значением Rf. Твердое вещество отфильтровывали, промывали водой (5 мл), метанолом (5 мл) и высушивали, получая поименованное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета (0,900 г, 68%), т.п. >250^oC (с разл.); масс-спектр (Cl/CH₄): 209, 207 (M+1); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) : 9,81 и 9,46 (s и d, J= 11 Гц, общий 1, NH), 8,25 и 8,00 (s и d, J=11 Гц, общий 1, CHO), 7,69 и 7,63 (оба s, общий 2, NH₂).

Анализ. Расчет для C₅H₄N₄OCl₂: C, 29,01; H, 1,95; N, 27,07; Cl, 34,25. Обнаружено: C, 29,12; H, 1,96; N, 27,13; Cl, 34,34.

Пример 4 2,5-Диамино-4,6-дихлорпиримидин (IV) 4,6-Дихлор-2,5-бис-{ [(диметиламино)метилен] амино} пиримидин (Пример 1, 1,00 г, 3,36 ммол) в этаноле (25 мл) и водном калий-фосфатном буферном растворе pH 3,2 (1,5 М, 10 мл, приготовлен как описано в Примере 3) кипятили с обратным холодильником в течение 24 часов. В процессе кипячения значение pH поддерживали около 3, добавляя по мере необходимости 85% фосфорную кислоту. Раствор экстрагировали хлороформом (3 х 25 мл). Объединенные хлороформенные слои высушивали (сульфат натрия) и хлороформ упаривали, получая твердое вещество (0,40 г). Кристаллизация полученного продукта из смеси этанол/вода в отношении 4:1 дала поименованное в заголовке соединение формулы (IV) в виде игл беловатой окраски (0,324 г, 52%); темнеет и сморщивается до твердого вещества черного цвета при температуре выше 185^oC, не превращается в жидкость при температуре до 300^oC; [Литературные данные - 198^oC [5] и 188-191^oC [3] ; масс-спектр (Cl/CH₄); 181, 179 (M+1); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) : 6,50 (br s, 2, NH₂), 4,73 (br s, 2, NH₂).

Анализ. Расчет для C₄H₄N₄Cl₂0,12 EtOH: C, 27,60; H, 2,58; N, 30,36; Cl, 38,42. Обнаружено: C, 27,99; H, 2,39; N, 30,42; Cl, 38,74.

Пример 5 2,5-Диамино-4,6-дихлорпиримидин (IV) Смесь 2-амино-4,6-дихлор-2,5-бис-{[(диметиламино) метилен]амино}пиримидина (Пример 2, 500 мг, 2,14 ммол), водного калий-фосфатного буферного раствора pH 3,2 (1,5 М, 6 мл, приготовлен как описано в Примере 3), воды (1 мл) и этанола (5 мл) подвергали мягкому кипячению с обратным холодильником в течение 28 часов. В процессе кипячения значение pH поддерживали около 3, добавляя 85% фосфорную кислоту. Летучие соединения упаривали под вакуумом и оставшееся твердое вещество распределяли между водой (30 мл, pH подведен с помощью гидроксида аммония до 8) и хлороформом (75 мл). Хлороформенный слой высушивали (сульфат натрия) и хлороформ упаривали, получая твердое вещество беловатой окраски (0,30 г). Кристаллизация полученного продукта из смеси этанол/вода в отношении 4:1 дала поименованное в заголовке соединение формулы (IV) в виде игл светло-розовой окраски (332 мг, 61%); темнеет и сморщивается до твердого вещества черного цвета при температуре выше 185^oC, не превращается в жидкость при температуре до 300^oC; ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) и масс-спектр идентичны описанным в Примере 4.

Анализ. Расчет для C₄H₄N₄Cl₂: C, 26,83; H, 2,25; N, 31,30; Cl, 39,61. Обнаружено: C, 26,93; H, 2,25; N, 31,24; Cl, 39,52.

Пример 6 2,5-Диамино-4,6-дихлорпиримидин (IV) N-(2-Амино-4,6-дихлор-5-пиримидинил)формамид (Пример 3, 500 мг, 2,42 ммол) растворяли при температуре дефлегмации в 0,1 н соляной кислоте (5 мл, 2,5 мэкв) и этаноле (7 мл). Раствор кипятили с обратным холодильником в течение 5 часов. Летучие соединения удаляли под вакуумом. Остаток распределяли между водой (30 мл) с pH, подведенным до 8 с помощью разбавленного гидроксида аммония, и этилацетатом (75 мл). Этилацетатный слой высушивали (сульфат натрия). После упаривания растворителя получали твердое вещество розового цвета (0,40 г). Перекристаллизация полученного продукта из 95% этанола дала поименованное в заголовке соединение формулы (IV) в виде игл светло-розовой окраски (280 мг, 65%); темнеет и сморщивается до твердого вещества черного цвета при температуре выше 185^oC, не превращается в жидкость при температуре до 300^oC; ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) и масс-спектр идентичны описанным в Примере 4.

Анализ. Расчет для C₄H₄N₄Cl₂: C, 26,83; H, 2,25; N, 31,30; Cl, 39,61. Обнаружено: C, 26,95; H, 2,24; N, 31,19; Cl, 39,53.

Пример 7 (1S, 4R)-4-[(2-Амино-6-хлор-5-формамидо-4-пиримидинил) амино] -2-циклопентен-1-метанол (VIa) N-(2-Амино-4,6-дихлор-5-пиримидинил)формамид (Пример 3, 2,07 г, 10,0 ммол) перемешивали в абсолютном этаноле (40 мл) при температуре дефлегмации в атмосфере азота до достижения состояния частичного растворения. К этому перемешиваемому раствору добавляли раствор свежеприготовленного (1S,4R)-4-амино-2-циклопентен-1- метанола (PCT Application 9204015.3, 1,57 г, 12,5 ммол (90%)) в этаноле (15 мл) с последующим добавлением триэтиламина (3,5 мл, 25 ммол, свежеперегнанный над гидридом кальция). После кипячения с обратным холодильником в течение 14 часов полученный темный раствор охлаждали и к нему добавляли 1 н гидроксид натрия (10 мл). Летучие соединения упаривали под вакуумом. Оставшуюся твердую пену рыжевато-коричневой окраски растворяли в смеси 5% метанол-этилацетат и раствор пропускали через набивку с силикагелем, получая после упаривания растворителей поименованное в заголовке соединение в виде твердого вещества беловатой окраски (2,50 г, 88%). Перекристаллизация продукта из смеси этилацетат-метанол (20: 1) дала поименованное в заголовке соединение (IVa) в виде мелких криcталлов белого цвета (2,29 г, 81%), т.п. 177-178^oC; масс- спектр (Cl/CH₄): 286, 284 (M+1), 190, 188 (В+H); ¹H-ЯМР (DMSO-d₆) 8,99 и 8,58 (s и d, J= 11,1 Гц, общий 1, амид NH), 8,11 и 7,80 (s и d, J=11,1 Гц, общий 1, амид CH), 6,77 и 6,61 (два d, J= 8,0 Гц) перекрывающийся 6,60 и 6,48 (два br s, общий 3, NH и NH₂), 5,85 и 5,70 (два m, 1 каждый, CH=CH), 5,15-5,00 (m, 1, NCH), 4,71 (t, J=5,1, 1, OH), 3,45-3,30 (m перекрывающийся H₂O, OCH₂), 2,80-2,65 (m, 1, CH), 2,45-2,25 и 1,45-1,30 (оба m, 1 каждый, CH₂); []²⁰₅₈₉ +21,2^o, []²⁰₅₇₈ +22,2^o, []²⁰₅₄₆ +25,2^o, []²⁰₄₃₆ +41,4^o, []²⁰₃₆₅ +48,3^o (с 1,50, метанол).

Анализ. Расчет для C₁₁H₁₄N₅O₂Cl: C, 46,57; H, 4,97; N, 24,69; Cl, 12,50. Обнаружено: C, 46,63; H, 4,99; N, 24,58; Cl, 12,59.

Пример 8 (1S, 4R)-4-(2-Амино-6-хлор-9-H-пурин-9-ил)-2-циклопентен-1-метанол гидрохлорид (VIIa) К смеси (1S,4R)-4-[(2-амино-6-хлор-5-формамидо-4-пиримидинил) амино]-2-циклопентен-1-метанола (Пример 7, 1,00 г, 3,50 ммол) и триэтилортоформиата (Aldrich, Sure Seal, 18 мл) при перемешивании добавляли одной порцией концентрированную соляную кислоту (37%, 1,25 мл). Получившийся прозрачный бесцветный раствор перемешивали в атмосфере азота. Через 15 минут начиналось образование белого осадка. По истечении 4 часов, ТСХ капли реакционной смеси, растворенной в метаноле и нейтрализованной гидроксидом натрия (силикагелиевые пластинки, элюируемые системой 10% метанол-хлороформ, визуализация в УФ свете) показала, что соединение формулы (VIa) почти полностью превратилось в продукт с более высоким значением Rf. Осадок отфильтровывали, промывали т- бутилметиловым эфиром (15 мл) и высушивали при давлении 0,2 мм Hg, температуре 25^oC в течение 18 часов, получая поименованное в заголовке соединение в виде порошка белого цвета (975 мг, 92%), т.п. &gt