Способ прогнозирования развития синовита

Способ прогнозирования развития синовита

Реферат

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим способам прогнозирования развития посттравматического синовита. Способ основан на иммунологическом исследовании крови. При указанном исследовании определяют в лимфоцитах крови HLA -антигены I класса. При наличии гаплотипа B₃₅CW₄ прогнозируют развитие синовита с относительным риском RR, равным 7,56. Способ позволяет повысить точность прогнозирования развития заболевания.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологическим способом прогнозирования развития заболевания, в частности синовита.

Известен способ диагностики ревматизма путем определения ассоциаций антигенов I класса HLA комплекса, который позволяет выявлять ранние доклинические стадии ревматизма (см. А.С. СССР N 1380441, 1986 г.).

Наиболее близким и принятым нами за прототип является способ определения развития синовита, по которому проводят иммунологическое исследование крови и осуществляют постановку реакции задержки миграции лейкоцитов крови, при ее положительной реакции определяют вспомогательные изменения в синовиальной жидкости (см. Долгополов В.В. Клинико-морфологическая характеристика реактивных изменений синовиальной оболочки при внутренних повреждениях коленного сустава - Автореф. канд. дисс., Л., 1980 г.). Данными реакциями мы можем подтвердить наличие синовита и по изменениям в синовиальной среде говорить о давности заболевания.

Недостатком способа является невозможность прогнозирования развития посттравматического (постоперационного) синовита путем постановки реакции задержки миграции лейкоцитов крови.

Технические результатом предлагаемого способа является повышение точности способа прогнозирования развития заболевания за счет исследования иммунологического статуса.

Технический результат достигается путем исследования крови.

Новым в достижении поставленного результата является то, что в лимфоцитах определяют HLA антиген I класса и при наличии гаплотипа B₃₅C_w4 прогнозируют развитие синовита с силой ассоциации RR = 7,56.

Авторы опытным путем установили, что наличие именно сочетания антигенов B₃₅C_w4 и относительного риска RR = 7,56 наиболее достоверно подтверждает развитие синовита.

Сопоставительный анализ заявленного способа и прототипа показывает, что заявляемый способ отличается от известного тем, что в лимфоцитах определяют HLA антиген I класса и при наличии гаплотипа B₃₅C_w4 прогнозирует развитие синовита с риском RR = 7,56, что соответствует критерию "новизна". Новая совокупность обеспечивает повышение точности способа прогнозирования развития заболевания за счет исследования иммунологического статуса, а также выявление наследственной предрасположенности к развитию синовита, следовательно, предлагаемый способ обладает "промышленной применимостью".

Проведенный поиск известных в медицине решений показывает, что выявленные признаки не обнаружены в известных решениях и не повторяют того, что содержится в уровне техники, следовательно, предлагаемый способ обладает "изобретательским уровнем".

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. До операции выполняют забор крови для иммунологического исследования.

Идентификацию тканевых антигенов локусов A, B и C осуществляют серологически в стандартном двухступенчатом микролимфоцитотоксическом тесте с использованием набора из 92 тестовых анти-HLA-сывороток против 25 антигенов I класса HLA комплекса.

В работе используют гистотипирующие сыворотки, производства Ленинградского института гематологии и переливания крови (панель N 28, 29) и А/О "Гисанс", Санкт-Петербург (панель N 33).

Используемые HLA-сыворотки соответствуют международным сывороточным стандартам.

Планшеты с предварительно раскапанными анти-HLA-сыворотками хранят при температуре -20^oC в морозильной камере и перед постановкой реакции размораживают.

Для определения HLA-фенотипа обследованных лиц используют лимфоциты периферической крови. Кровь в объеме 6 мл наслаивают на 3 мл смеси фиколла и верографина плотностью 1,077 (10 частей 32,8% раствора верографина и 24 части 9% раствора фикола). Лимфоциты выделяют центрифугированием в течение 30 минут со скоростью 1500 оборотов в минуту. Образовавшееся при этом "облачко" лимфоцитов отсасывают пастеровской пипеткой и трижды отмывают в 5-7 мл среды 199. После последнего промывания концентрацию клеток доводят до 2000-4000 в 1 мкл.

Клеточную взвесь раскапывают микрошприцом типа Гамильтон в камеры Терасаки по 1 мкл в лунку под слой вазелинового масла. Инкубацию проводят при температуре +18-22^oC. После этого в лунки добавляют 5 мкл свежего кроличьего комплемента и повторно инкубируют 60 минут при той же температуре.

Для оценки результатов реакции в каждую лунку вносят по 3 мкл 5% раствора эозина. Цветную реакцию фиксируют через 5 минут 3-5 мкл раствором формальдегида. После этого поверхность камер Терасаки закрывают покровными стеклами и микроскопируют при 200-кратном увеличении с помощью светового микроскопа. Отрицательным контролем служат лунки с сывороткой AB (IV), положительным - с антилимфоцитарной сывороткой. Результат реакции оценивают визуально с учетом числа погибших (окрашенных) клеток и выражают в крестах: 10-20% погибших клеток - (отрицательная) 21-30% погибших клеток -+(сомнительная) 31-50% погибших клеток -++ (слабо положительная) 51-75% погибших клеток -+++ (положительная) 76-100% погибших клеток -++++ (резкоположительная) При определении HLA-актигенов применяют "батарейный" метод, заключающийся в типировании каждого антигена 3-5 антисыворотками.

Статистический анализ полученных данных проводят на персональном компьютере IBM/PC/AT-386 "Hynday", используют пакет программ "Мicrostat" Ecosoft, Inc.

При нормальном распределении вариантов вычисляют среднюю арифметическую вариационного ряда (M), среднеквадратичное отклонение, ошибку средней арифметической (m), среднюю геометрическую (X геом., lg), показатель частоты (%) и его ошибку. При определении корреляции между количественными показателями пользуются коэффициентом линейной корреляции для оценки связи между качественными признаками - коэффициентом корреляции рангов Спирмана.

При асимметричном распределении вариантов, в ряде случаев применяют правила обработки показателей, подчиняющихся закону Пуансона. Соответствие каждого вариационного ряда распределению Пуассона проверяют путем сопоставления фактических частот теоретическому распределению при помощи критерия соответствия хи-квадрата.

В связи со значительным отклонением от нормального распределение результат определения О-АГ, антинуклеарных и антиинтерстициальных антител обрабатывают непараметрическим методом с использованием критерия Колмогорова - Смирнова. При оценке достоверности различий полученных значений учитывают, что = 1,36 соответствует степени вероятности P = 0,05; = 1,63 соответствует P = 0,01; = 1,95 соответствует P = 0,001.

Для статистической оценки ассоциаций HLA-антигенов с клинико-лабораторными показателями используют критерий хи-квадрат, рассчитываемый по формуле: хи-квадрат = [ad-bc)-0,5n]n/(a+b)(c+d) (a+c((b+d); где a - число больных позитивных по данному антигену; b - число больных негативных по данному антигену; c - число лиц в контроле позитивных по данному антигену; d - число лиц в контроле негативных по данному антигену; 0,5n - поправка на неправильность для малых выборок.

Во избежание ошибок найденное при помощи метода хи-квадрат значение P корректируют соответственно числу типируемых антигенов, используя метод Бонферони.

Статистическую достоверность ассоциации определяют по таблице факториалов с помощью хи-квадрат, вычисленного по формуле Holdene: хи-квадрат = W Y где, Y = log e RR, W = 1/V, а V = 1/a + 1/b + 1/c + 1/d; Относительный риск (RR - relative risk), т.е. силу ассоциации рассчитывают по формуле: RR = (a + 0,5) (d + 0,5)/(b + 0,5) (c + 0,5) при этом учитывали, что если: RR = 1 - ассоциация отсутствует (одинаковая частота встречаемости HLA-антигена в сравниваемых группах); RR > 1 - положительная ассоциация ассоциации (HLA-антиген встречается чаще, в контрольной группе сравнения); RR < 1 - отрицательная ассоциация (HLA-антиген встречается реже, чем в контрольной группе сравнения).

Проводят HLA-фенотипирование и при наличии гаплотипа B₃₅C_w4 с коэффициентом достоверности P < 0,01 и относительным риском RR=7,56 прогнозируют развитие синовита в послеоперационном периоде.

Предлагаемый способ прогнозирования развития синовита поясняется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Больной А., 19 лет, учащийся. Обратился с жалобой на боли в области правого коленного сустава, невозможностью движения в суставе. Впервые травму получил 1 год назад при занятиях спортом, лечился амбулаторно. Повторная травма 4 недели назад.

Местно: в области правого коленного сустава отек (+5,0 см), положительный симптом "льдинки". Гипотрофия мышц бедра справа 15-20 см. Движения в суставе -/0^o/-5^o/90^o/. Положительный симптом Байкова, Бурхарда, Мак-Марея, Перельмана, Чаклина, положительный симптом наружного "бокового качания" (++).

Среди стандартных общеклинических анализов каких-либо изменений на выявлено.

В дооперационном периоде выполняют забор крови для иммунологического исследования.

Для определения HLA-фенотипа обследованных лиц используют лимфоциты периферической крови. Выявлен гаплотип B₃₅C_w4, коэффициент достоверности P < 0,01. Относительный риск RR = 7,56. Поскольку выявлено данное сочетание с P < 0,01, дан прогноз о возможном развитии синовита в послеоперационном периоде.

Через 2 дня выполнена операция - артроскопия, парциальная медиальная менискэктомия правого коленного сустава. При предварительной пункции на операционном столе получено 32,0 мл синовиальной жидкости.

На операции выявлено: продольный трансхондральный разрыв медиального мениска типа "ручка лейки".

В послеоперационном периоде явления хронического воспаления держатся длительный период времени - на протяжении 4 недель.

Пример 2. Больной Р., 24 года, учащийся высшего учебного заведения. Обратился с жалобами на боли в правом коленном суставе особенно после длительной осевой нагрузки, боль при седении "по-турецки".

Травму получил 4 месяц назад, лечился амбулаторно.

Местно: в области правого коленного сустава припухлость по медиальной поверхности, гипотрофия мышц правого бедра 1,5 см. Положительный симптом Байкова, Бурхарда, Мак-Марея.

Среди стандартных общеклинических анализов каких-либо изменений не выявлено. В дооперационном периоде выполнен забор крови для иммунологического исследования.

Проведено HLA-фенотипирование. Также выявлено сочетание гаплотипа B₃₅C_w4 с коэффициентом достоверности P < 0,01 и относительным риском RR = 7,56.

Через 2 дня выполнена операция - артроскопия, парциальная медиальная менискэктомия правого коленного сустава. При предварительной пункции на операционном столе синовиальной жидкости не получено.

На операции выявлено: продольный трансхондральный разрыв медиального мениска типа "ручка лейки".

В послеоперационном периоде явления хронического синовита держатся длительный период времени - на протяжении 3,5 недель.

Пример 3. Больной У., 26 лет, продавец магазина. Обратился с желобами на боли в правом коленном суставе, особенно после длительной осевой нагрузке, невозможность полностью разогнуть ногу и суставе, отек.

Впервые травму получил занятия спортом 2,5 года назад, повторная травма 2 месяца назад.

Местно: в области правого коленного сустава отек (+3,0 см), положительный симптом "льдинки". Гипотрофия мышц бедра справа 2,5 см. Движения в суставе -/0^o/-5^o/120^o/. Положительный симптом Байкова, Бурхарда, Мак-Марея, Перельмана.

Среди стандартных общеклинических анализов каких-либо изменений не выявлено. В дооперационном периоде выполнен забор крови для иммунологического исследования.

Проведено HLA-фенотипирование. Выявлено сочетание антигенов B_w22C_w3.

Через 2 дня выполнена операция - артроскопия, парциальная медиальная менискэктомия правого коленного сустава. При предварительной пункции на операционном столе получено 15,0 мл вязкой синовиальной жидкости.

На операции выявлено: продольный трансхондральный разрыв медиального мениска типа "ручка лейки".

В послеоперационном периоде наблюдалась реакция сустава на операционное вмешательство в виде синовита I степени (по В.А. Редину) на протяжении 6 дней.

Приступил к труду через 14 дней после операции.

Формула изобретения

Способ прогнозирования развития синовита путем исследования крови, отличающийся тем, что в лимфоцитах крови определяют HLA-антигены I класса и при наличии гаплотипа B₃₅Cw₄ прогнозируют развитие синовита с относительным риском RR = 7,56.