Замещенные бензимидазольные соединения, способы получения и фармацевтическая композиция на их основе, обладающая антивирусным действием

Замещенные бензимидазольные соединения, способы получения и фармацевтическая композиция на их основе, обладающая антивирусным действием

Реферат

 

Производные бензимидазола формул I и I', где R¹ - Н, СH₂OH; R² и R³ - H или OH или вместе образуют связь; R⁴ - H, Cl, Br, J, алкил, циклоалкил, NH₂, алкиламино, диалкиламино, циклоалкиламино, алкокси, C_6-10-арил, C_6-10-арилокси, алкил тио и SH; R⁵, R⁶, R⁷ - Н, Сl, при условии что по меньшей мере один из R¹, R², R³ представляет или содержит ОН, или их фармацевтически приемлемые производные обладают антивирусным действием. 2 с. и 5 з.п.ф-лы.

Изобретение относится к аналогам пуринового нуклеозида, содержащим вместо остатка сахара карбоциклическое кольцо, их фармацевтически приемлемым производным, и их применению в медицинской терапии, в особенности для лечения определенных вирусных инфекций.

Вирус гепатита B (ВГВ) представляет собой вирус, содержащий небольшую ДНК, который инфицирует людей. Он является представителем класса близкородственных вирусов, известных как гепа-ДНК-вирусы, каждый из которых селективно инфицирует организмы либо млекопитающих, либо птиц, таких как североамериканские лесные сурки или утки.

В мировом масштабе ВГВ является вирусным возбудителем заболеваний первостепенного значения. Он наиболее распространен в странах Азии и преобладает в субсахарной Африке. Этот вирус этиологически связан с первичным печеночно-клеточным раком и полагают, что он вызывает 80% случаев заболеваний рака печени в мире. В Соединенных Штатах каждый год госпитализируют более десяти тысяч человек с заболеванием, обусловленным ВГВ, в среднем 250 больных умирают от внезапного и быстро развивающегося заболевания.

По оценкам, в Соединенных Штатах в настоящее время содержится пул из 500000 - 1 млн. переносчиков инфекции. У более 25% носителей разовьется хронический активный гепатит, и он часто прогрессирует в цирроз. По оценкам каждый год в США 5000 людей умирают от связанного с ВГВ цирроза, и возможно 1000 человек умирают от связанного с ВГВ рака печени. Даже если имеется универсальная вакцина против ВГВ, будет сохраняться потребность в эффективных соединениях против ВГВ. Большая масса постоянно инфицированных носителей, которая в мире оценивается как 220 млн. человек, не получит никакой пользы от вакцинации и будет продолжать существовать с высоким риском заболеваний печени, индуцированных ВГВ. Эта популяция носителей служит источником инфекции для восприимчивых индивидуумов, навсегда сохраняющих факт заболевания, особенно в эндемических районах или в группах высокого риска, таких как токсикоманы, использующие внутривенное введение и гомосексуалисты. Таким образом, существует большая необходимость в эффективных антивирусных агентах как для контроля хронической инфекции, так и для уменьшения прогрессии к печеночно-клеточному раку.

Клинические эффекты инфекции ВГВ простираются от головной боли, лихорадки, недомогания, тошноты, рвоты, анорексии и болей в животе. Репликация вируса обычно контролируется иммунной реакцией, при этом протекание выздоровления у людей длится неделями или месяцами, однако инфекция может быть более серьезной и приводить к указанному выше устойчивому хроническому заболеванию печени.

В книге "Viral Infections of Humans" (second edition, Ed. Evans, A.S. (1982 Plenum Press Publishing Corporation, New. York) в главе 12 детально описана этиология герпеса является источником многих обычных вирусных заболеваний человека. Эта группа включает вирус цитомегалии (ВЦМ), вирус Эпштейна/Барра (ВЭБ), вирус ветряной оспы (ВВО), вирус герпеса (ВГ) и вирус герпеса человека 6 (ВГЧ6).

Как и в случае других вирусов герпеса, инфекция ВЦМ приводит к связыванию вируса и организма хозяина на всю жизнь и после первичной инфекции вирус может скрываться несколько лет. Клинические эффекты простираются от смерти и серьезных болезней (микроцефалия, гепатоспленомегалия, желтуха, олигофрения), через неблагоприятное состояние организма, восприимчивость к инфекциям в грудной клетке и уже до отсутствия какого-либо явного эффекта заболевания. Для заболевших СПИДом инфекция ВЦМ является доминирующей причиной смертности, в то время как у 40 - 80% взрослого населения она присутствует в скрытой форме и может быть повторно активирована у пациентов с недостатком иммунитета.

ВЭБ вызывает инфекционный мононуклеоз, и также предполагают, что он является возбудителем рака носоглотки, иммунобластической лимфомы, лимфомы Беркитта и лейкоплакии волос.

ВВО вызывает ветряную оспу и опоясывающий герпес. Ветряная оспа является первичным заболеванием, продуцируемым в организме без иммунитета. У малых детей это обычно легкое заболевание, характеризуемое везикулярной сыпью и лихорадкой. Опоясывающий герпес является рецидивирующей формой заболевания взрослых, которые ранее были инфицированы ветряной оспой. Клинические проявления опоясывающего герпеса включают невралгию и везикулярную сыпь на коже с односторонним и дерматомным распределением. Распространение воспаления может приводить к параличу или судорогам, а если будет затронут мозг - к коме. У пациентов с ослабленным иммунитетом ВВО может диссеминировать, вызывая серьезные или даже смертельные заболевания.

ВГ 1 и ВГ 2 являются одними из наиболее распространенных инфицирующих агентов человека. Большинство этих вирусов способно постоянно жить в нервных клетках организма хозяина. Будучи однажды инфицированными индивидуумы имеют риск рецидивного клинического проявления инфекции, что может приводить как к физическому, так и психологическому дистрессу. Инфекция ВГ часто характеризуется обширными патологическими изменениями кожи, рта и/или половых органов. Первичные инфекции могут быть бессимптомными, хотя они имеют склонность быть более серьезными, чем инфекции в индивидуумах, предварительно подвергнувшихся воздействию вируса. Глазные инфекции ВГ могут приводить к кератиту или катарактам. Инфекции у новорожденных, пациентов с ослабленным иммунитетом или проникновение инфекции в центральную нервную систему могут оказаться смертельными. ВГЧ6 является возбудителем болезни roseola infantum (exanthum subitum) у детей, которая характеризуется лихорадкой и появлением сыпи после снижения жара. ВГЧ6 также вовлечен в синдромы лихорадки и/или сыпи, а также пневмонии или гепатита у пациентов с ослабленным иммунитетом.

Обнаружено, что определенные замещенные бензимидазольные соединения, указанные ниже, могут быть использованы для лечения или профилактики определенных вирусных инфекций. Согласно первому аспекту данного изобретения предлагаются новые соединения формул (I) и (I-1): где R¹ - H, CH₃ или CH₂OH; R² - H или OH; R⁴ - H или OH; или R² и R³ вместе образуют связь; R⁴ - H, Cl, Br, I, C_1-4-алкил, C_3-7-циклоалкил, C_3-7-циклоалкил C_1-4-алкил, C_1-4-перфторалкил (например, трифторметил), NH₂, C_1-4-алкиламино-, C_1-4-диалкиламино, C_3-7-циклоалкиламино-, ди-C_3-7-циклоалкиламино-, N-C_1-4-алкил-N-C_3-7-циклоалкиламино-, N-C_1-4-алкил-N-C_3-7-циклоалкил-C_1-4-алкиламино-, ди-C_3-7-циклоалкил-C_1-4-алкиламино-, C_3-7-циклоалкил-C_1-4-алкиламино-, N-C_3-7-циклоалкил-N-C_3-7-циклоалкил-C_1-4- алкиламиногруппы, SH, C_1-4-алкилтио-, C_6-10-арил-C_1-4-алкилтиогруппы, OH, C_1-4-алкокси-, C_6-10-арил-C_1-4-алкокси-группы или C_6-10-арил-C_1-4-алкил; R⁵, R⁶ и R⁷ независимо выбраны из числа H, F, Cl, Br, I, CF₃ и CH₃ при условии, что по меньшей мере один из R¹, R² и R³ является OH или содержит эту группу; а также их фармацевтически приемлемые производные.

Предпочтительные соединения с формулами (I) и (I-1) изображены формулами (IA) и (IA-1).

где R² - H или OH.

Наиболее предпочтительны соединения с формулами (I), (I-1), (IA) и (IA-1), в которых R⁴ - CH₃, Cl или Br; R⁵ - H, а каждый из R⁶ и R⁷ представляет Cl.

Следует понять, что настоящее изобретение охватывает особые энантиомеры, изображенные в формулах (I) и (I-1), включая таутомеры пурина как таковые или в комбинации с их зеркальными энантиомерами. Энантиомеры, изображенные формулой (I), являются предпочтительными, и предпочтительно чтобы они были в основном свободны от соответствующего энантиомера в такой степени, чтобы в смеси в основном содержалось менее 10% (в/в), предпочтительно менее 5% (в/в), более предпочтительно менее 2% (в/в) и наиболее предпочтительно менее 1% (в/в) соответствующего энантиомера исходя из общего веса смеси. Энантиомеры, изображенные формулой (I-1), наиболее предпочтительны, и предпочтительно чтобы они были в основном свободны от соответствующего энантиомера в такой степени, чтобы в смеси в основном содержалось менее 10% (в/в), предпочтительно менее 5% (в/в), более предпочтительно менее 2% (в/в) и наиболее предпочтительно менее 1% (в/в) соответствующего энантиомера исходя из общего веса смеси.

Особенно предпочтительными примерами соединений с формулой (I) являются: (1R,2S,3S,5S)-5-(2-бром-5,6-дихлор-1H-бензимидазол-1-ил)-3-(гидроксиметил)-1,2-циклопентандиол; (1S,2R,3R,5R)-5-(2-бром-5,6-дихлор-1H-бензимидазол-1-ил)-3-(гидроксиметил)-1,2-циклопентандиол; (+/-)-(1R^*, 2S^*, 3S^*, 5S^*)-5-(2,5,6-трихлор-1H-бензимидазол-1-ил)-3-(гидроксиметил)-1,2-циклопентандиол; (+/-)-(1R^*, 2S^*, 3R^*)-3-(2-бром-5,6-дихлор-1H-бензимидазол-1-ил)-1,2-циклопентандиол и (+/-)-(1R^*, 2S^*, 3S^*,5S^*)-5-(5,6- дихлор-2-метил-1H-бензимидазол-1-ил)-3-(гидроксиметил)-1,2- циклопентандиол и их фармацевтически приемлемые соли.

В качестве соединений по изобретению здесь обозначаются соединения с формулами (I) и (I-1) и их фармацевтически приемлемые производные.

Дальнейшим аспектом изобретения является применение соединений по изобретению в медицинской терапии, в особенности для лечения или профилактики вирусных инфекций, таких как вирусные герпесные инфекции. В настоящее время показано, что соединения по изобретению проявляют активность против инфекций вирусом гепатита B (ВГВ) и вирусом цитомегалии (ВЦМ), хотя предварительные результаты предполагают, что изобретение также может быть использовано против других герпесных вирусных инфекций, таких как ВЭГ, ВВО, ВГI и II и ВГЧ6.

Иные вирусные состояния, которые можно лечить и в соответствии с изобретением, обсуждены в приведенном выше введении.

В следующем аспекте изобретения предлагаются: а) метод лечения или профилактики гепа-ДНК-вирусной инфекции, такой как гепатит B, или герпесной вирусной инфекции, такой как ВЦМ, который включает применение к субъекту терапевтически эффективного количества соединения по изобретению.

б) Применение соединения по изобретению в производстве медикамента для лечения или профилактики любого из вышеупомянутых инфекций или состояний.

Под "фармацевтически приемлемым производным" подразумевается любая фармацевтически или фармакологически приемлемая соль, сложный эфир или соль такого эфира соединения по изобретению, или любое соединение, которое способно при применению к реципиенту давать (прямо или косвенно) соединение по изобретению, или обладающий антивирусной активностью метаболит, или его остаток.

Предпочтительные сложные эфиры соединений по изобретению включают эфиры карбоновых кислот, в которых не содержащая карбонил часть сложноэфирной группы выбрана из числа линейного или разветвленного алкила, например, н-пропила, трет-бутила, н-бутила, алкоксиалкила (например, метоксиметила), арилалкила (например, бензила), арилоксиалкила (например, феноксиметила, арила (например, фенила, необязательно замещенного галогеном, C_1-4-алкилом или C_1-4-алкокси- или аминогруппой); эфиры сульфокислот, такие как алкильные или арилалкилсульфонильные (например, метансульфонильные) эфиры аминокислот (например, L-валильные или L-изолейцильные); а также моно-, ди- и триэфиры фосфорной кислоты. Эфиры фосфорной кислоты могут далее быть этерифицированы, например, C_1-20-спиртом, или его реакционноспособным производным, или 2,3-ди(C_6-24)ацилглицерином.

Для вышеописанных сложных эфиров, если не указано иначе, любой присутствующий алкильный фрагмент предпочтительно содержит от 1 до 18 атомов углерода, особенно от 3 до 6 атомов углерода, так, как в случае пентаноата. Любой арильный фрагмент, присутствующий в этих эфирах, предпочтительно включает фенильную группу.

Все упоминания о любом из вышеназванных соединений также включают их фармацевтически приемлемые соли.

Физиологически приемлемые соли включают соли органических карбоновых кислот, таких как уксусная, молочная, винная, яблочная, изэтионовая, лактобионовая, п-аминобензойная и янтарная кислота; соли органических сульфокислот, таких как метансульфо-, этансульфо-, бензолсульфо- и п-толуолсульфокислота; а также неорганических кислот, таких как соляная, серная, фосфорная и сульфаминовая кислота.

Вышеуказанные соединения по изобретению и их фармацевтически приемлемые производные могут применяться вместе с иными терапевтическими агентами для лечения упомянутых выше инфекций или состояний. В число примеров таких дополнительных терапевтических агентов входят агенты, эффективные для лечения вирусных инфекций или связанных с ними состояний, такие как ациклические нуклеозиды (например, ацикловир), иммуномодулирующие агенты, такие как тимозин, ингибиторы рибонуклеотидной редуктазы, такие как 2-ацетилпиридин-5-[(2-хлоранилино)тиокарбонил] тиокарбогидразон, интерфероны, такие как -интерферон, 1- - D-арабинофуранозил-5-(1-пропинил)урацил, 3'-азидо-3'-дезокситимидин, рибавирин и фосфономуравьиная кислота. Соединения, являющиеся компонентами такой составной терапии, могут применяться одновременно, в виде либо раздельных, либо объединенных композиций, или в разное время, то есть последовательно, так, чтобы достигался объединенный эффект.

Соединения по изобретению, называемые здесь также активными ингредиентами, могут применяться в терапии любым подходящим способом, включая пероральный, ректальный, носовой, местный (включая сквозькожный, ротовой и подъязычный), вагинальный и парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный и внутрикожный). Следует понять, что предпочтительный способ применения может изменяться в зависимости от состояния и возраста реципиента, природы инфекции и выбранного активного ингредиента.

Как правило, подходящая доза для любого из вышеупомянутых состояний будет в диапазоне от 0,01 до 250 мг на килограмм веса тела реципиента (например, человека) в день, предпочтительно в диапазоне от 1,0 до 20 мг на килограмм веса тела в день. (Если не указано иное, все веса активных ингредиентов рассчитаны на исходное соединение с формулой (I); для их солей или сложных эфиров веса нужно пропорционально увеличить). Желаемая доза предпочтительно представляется двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью или большим количеством субдоз, применяемых через надлежащие интервалы времени в течение дня. Эти субдозы могут применяться в виде форм единичных доз, содержащих, например, 10 - 1000 мг, предпочтительно 20 - 500 мг, наиболее предпочтительно 100 - 400 мг активного ингредиента в форме единичной дозы.

В идеальном случае активный ингредиент должен применяться до достижения максимальной концентрации активного соединения в плазме от около 0,025 до около 100 мкмоль, предпочтительно от около 0,1 до 70 мкмоль, наиболее предпочтительно около 0,25 - 50 мкмоль. Это может быть достигнуто, например, путем внутривенной инъекции 0,1 - 5% раствора активного ингредиента, необязательно в физиологическом растворе, или пероральном применением в виде болюса, содержащего от около 0,1 до около 250 мг/кг активного ингредиента. Желательные уровни содержания вещества в крови могут поддерживаться непрерывным вливанием (около 0,01 - 5,0 мг/кг/ч) или путем прерывистых вливаний по приблизительно 0,4 - 15 мг/кг активного ингредиента.

Хотя активный ингредиент можно применять сам по себе, предпочтительно использовать его в виде фармацевтической композиции. Композиция по настоящему изобретению включают по меньшей мере один активный ингредиент, определенный выше, вместе с одним или более приемлемым носителем и необязательно с иными терапевтическими агентами. Каждый носитель должен быть "приемлем" в том смысле, что он совместим с другими ингредиентами композиции и не приносит вреда пациенту. В число композиций входят пригодные для перорального, ректального, носового, местного (включая сквозькожное, ротовое и подъязычное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное и внутрикожное) применения. Композиции могут быть удобно представлены в форме единичных доз и могут быть приготовлены любыми известными в фармацевтике методами. Эти методы включают стадию связывания активного ингредиента с носителем, который состоит из одного или более вспомогательных ингредиентов. Как правило, композиции получают путем равномерного и плотного связывания активного ингредиента с жидкими носителями, или с мелкодисперсными твердыми носителями, или с обоими носителями вместе, после чего при необходимости продукту придают форму.

Композиции, пригодные для сквозькожного применения, могут быть выполнены в виде отдельных пластырей, приспособленных для нахождения в тесном контакте с эпидермисом реципиента в течение длительного времени. Удобно, чтобы такие пластыри содержали активное соединение 1) в необязательно буферном водном растворе; 2) растворенное и/или диспергированное в клее или 3) диспергированное в полимере. Подходящая концентрация активного соединения составляет около 1 - 25%, предпочтительно около 3 - 15%. В особом возможном случае применения активное соединение может выделяться из пластыря методами электротранспорта или ионтофореза, как описано в общем виде в Pharmaceutigal Research, 3, (6), 318 (1986).

Композиции по настоящему изобретению, пригодные для перорального применения, могут быть представлены в виде дискретных форм, таких как капсулы, каше или таблетки, каждая из которых содержит предварительно определенное количество активного ингредиента; в виде порошка или гранул; в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкой среде; или в виде жидких эмульсий типа масло/вода или вода/масло. Активный ингредиент также может быть представлен в виде болюса, электруария или пасты.

Таблетка может быть изготовлена прессованием или формованием, необязательно с одним или более вспомогательным ингредиентом. Прессованные таблетки могут быть изготовлены прессованием на подходящем оборудовании активного ингредиента в свободно текучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанного со связующим веществом (например, с повидоном, желатиной или гидроксипропилметилцеллюлозой), смазкой, инертным разбавителем, консервантом, дезинтегрантом (например, натриевым гликолятом крахмала, сшитым повидоном, сшитой натриевой солью карбоксиметилцеллюлозы), поверхностно-активным или диспергирующим агентом. Формованные таблетки могут быть изготовлены путем формования на подходящем оборудовании смеси превращенного в порошок соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем. Таблетки могут быть необязательно покрыты защитным покрытием или содержать насечки, а также могут быть изготовлены таким образом, чтобы осуществлять медленное или контролируемое выделение используемого в них активного ингредиента, используя, например, гидроксипропилметилцеллюлозу в различных пропорциях для получения желательного профиля выделения. Таблетки необязательно могут иметь энтеросолюбильное покрытие для обеспечения выделения в частях внутренностей, отличных от желудка.

Композиции, пригодные для местного применения в полости рта, включают лепешки, содержащие активный ингредиент в корригентной основе, обычно сахарозе и акации или тарганте; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатина с глицерином или сахароза с акацией; а также жидкости для полоскания рта, содержащие активный ингредиент в подходящем жидком носителе.

Композиции для ректального применения могут быть представлены в виде суппозитория с подходящей основой, включающей, например, масло какао или салицилат.

Композиции, пригодные для вагинального применения, могут быть представлены в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или распыляемых композиций, содержащих в дополнение к активному ингредиенту известные пригодные носители.

Композиции, пригодные для парентерального применения, включают водные и неводные изотонические стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические факторы и растворенные вещества, которые делают композицию изотоничной с кровью предлагаемого реципиента; а также водные и неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующие агенты и загустители. Композиции могут быть представлены в герметичных упаковках, содержащих единичную дозу или несколько доз, например, в ампулах и пузырьках, а также могут храниться в высушенном при замораживании (лиофилизированном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекций, непосредственно перед применением. Импровизированные растворы и суспензии для инъекций могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток описанного ранее вида.

Предпочтительными композициями с единичной дозой являются композиции, содержащие дневную дозу или единицу, дневную поддозу, как описано выше, или надлежащую часть активного ингредиента.

Следует понять, что кроме ингредиентов, особо отмеченных выше, композиции по изобретению могут включать другие обычные агенты, имеющие отношение к типу рассматриваемой композиции; например, композиции для перорального применения могут включать такие дополнительные агенты, как подсластители, загустители и ароматизаторы.

Кроме того, в изобретение включен следующий схематично изображенный способ получения соединений с формулой (I) и их производных, либо самих по себе, либо в комбинации с их соответствующими энантиомерами.

Соединения с формулами (I) и (I-1), где R⁴ - галоген, например, хлор могут быть превращены в соединения с формулами (I) и (I-1), где R⁴ - SH (или S - алкил), OH (или алкокси) хорошо известными методами, например, реакцией со спиртовым раствором NaH (или NaS-алкил) или с водным раствором NaOH (или щелочным раствором алкоксида натрия) соответственно.

Таким образом, в соответствии с дальнейшим содержанием настоящего изобретения мы предлагаем способ получения соединений с формулами (I) и (I-1) как таковых или в комбинации с их зеркальными энантиомерами и их фармацевтически приемлемых производных, который включает: (A) реакцию соединения или его зеркального энантиомера а) либо с соединением с формулой R⁴CO₂H, где R⁴ - H, C_1-4-алкил или C_1-4-перфторалкил, предпочтительно при повышенной температуре, либо с соединением с формулой R⁴C(OR)₃, где R⁴ - H, C_1-4-алкил или C_1-4-перфторалкил и R - C_1-4-алкил, предпочтительно при комнатной температуре и в кислой среде, с образованием соединения с формулой (I) и (I-1), где R⁴ - H, C_1-4-алкил или C_1-4-перфторалкил; или б) с бромцианом с образованием соединения с формулой (I) или (I-1), где R⁴ - NH₂; или в) с 1,1'-карбонил-диимидазолом с образованием соединения с формулой (I) или (I-1), где R⁴ - OH; или г) с 1,1'-тиокарбонил-диимидазолом или тиомочевиной с образованием соединения с формулой (I) или (I-1), где R⁴ - SH; или (Б) а) превращение соединения с формулой (I) или (I-1), где R⁴ - водород, в дальнейшее соединение с формулой (I) или (I-1), где R⁴ - различная группа; например, путем обработки N-(Cl, Br или I) - сукцинимидом с образованием соединения, где R⁴ - Cl, Br или I; или б) превращение соединения с формулой (I) или (I-1), где R⁴ - Cl, Br или I в дальнейшее соединение с формулой (I) или (I-1), где R⁴ - различная группа, определенная выше; например, путем обработки спиртовым NaSH или соединением NaS - C_1-4-алкил, например, в спиртовом растворе, с образованием соединений, в которых R⁴ - SH или C_1-4-алкилтиогруппа соответственно; путем обработки, например, водным NaOH или спиртовым C_1-4-алкоксидом натрия с образованием соединений, в которых R⁴ - OH или C_1-4-алкоксигруппа; или путем обработки C_1-4-алкиламином или ди-C_1-4-алкиламином с образованием соединений, в которых R⁴ - C_1-4-алкиламино- или ди-C_1-4-алкиламиногруппа; или (В) реакцию соединения с формулой (где R⁴ - водород, а R⁵, R⁶ и R⁷ определены ранее) или его функционального эквивалента с соединением с формулой где R¹, R² и R³ определены выше, а L - уходящая группа, например, органическая сульфонилоксигруппа (например, п-толуолсульфонилокси- или метансульфонилоксигруппа), галоген или трифлатная (OSO₂CF₃) группа, например, в присутствии основания, такого как карбонат натрия или гидрид натрия, в растворителе, таком как диметилформамид, благоприятно при повышенной температуре, например, при 80 - 100^oC, с образованием соединения с формулой (I) или (I-1), где R⁴ - водород; с необязательным превращением соединения с формулой (I) или (I-1) в его фармацевтически приемлемое производное.

В альтернативном варианте вышеуказанного способа (С) соединение с формулой (IV) можно заменить соединением, в котором группы I и R³ заменены циклической сульфатной группой.

Предполагается, что все изображенные выше структуры представляют показанные энантиомеры, их зеркальные изомеры и их смеси. Таким образом, предполагается, что настоящее изобретение охватывает и рацематы, и чистые энантиомеры, в основном свободные от их зеркальных изомеров.

Соединение с формулой (I) или (I-1) может быть превращено в фармацевтически пригодный сложный эфир путем реакции с надлежащим этерифицирующим агентом, например, с галогенангидридом или ангидридом кислоты. Соединение с формулой (I) или (I-1), включая его сложные эфиры, можно превратить в их фармацевтически приемлемые соли обычным способом, например, обработкой нужной кислотой. Сложный эфир или его соль с формулой (I) или (I-1) можно превратить в исходное соединение, например, гидролизом.

Следующие примеры предназначены только для иллюстрации и никоим образом не для ограничения объема изобретения. Термин "активный ингредиент", использованный в примерах, означает соединение с формулой (I) или (I-1) или его фармацевтически приемлемое производное.

Пример А: Композиции для таблеток Следующие композиции А и Б были получены влажным гранулированием ингредиентов с использованием раствора повидона с последующим добавлением стеарата магния и прессованием (см. табл. 1 и 2).

Следующие композиции Г и Д были получены прямым прессованием смешанных ингредиентов. В композиции Д использовали лактозу для прямого прессования (Dairy Crest "Zeparox").

Композиция Г - мг/таблетку Активный ингредиент - 250 Прежелатинизированный крахмал NF15 - 150 - 400 Композиция Д - мг/таблетку Активный ингредиент - 250 Лактоза - 150 Авицел - 100 - 500 Композиция Е (с контролируемым выделением) Эта композиция была получена влажным гранулированием ингредиентов (см. ниже) с использованием раствора повидона с последующим добавлением стеарата магния и прессованием. - мг/таблетку (а) Активный ингредиент - 500 (б) Гидроксипропилметилцеллюлоза (Methocel K4M Premium) - 112 (в) Лактоза В.Р. - 53 (г) Повидон В.Р.С. - 28 (д) Стеарат магния - 7 - 700 Пример Б Капсульные композиции: Композиции А Капсульная композиция была получена смешиванием ингредиентов композиции Г из примера 1 и заполнением жесткой желатиновой капсулы, состоящей из двух частей. Аналогично была получена композиция Б (инфра).

Композиция Б - мг/капсулу (а) Активный ингредиент - 250 (б) Лактоза В.Р. - 143 (в) Натриевый гликолят крахмала - 25 (г) Стеарат магния - 2 - 420 Композиция В - мг/капсулу (а) Активный ингредиент - 250 (б) Макрогол 4000 В.Р. - 350 - 600 Капсулы получали расплавлением макрогола 4000 В.Р., диспергированием активного ингредиента в расплаве и заполнением расплавом жесткой желатиновой капсулы, состоящей из двух частей.

Композиция Г - мг/капсулу Активный ингредиент - 250 Лецитин - 100 Арахисовое масло - 100 - 450 Капсулы получали диспергированием активного ингредиента в лецитине и арахисовом масле и заполнением дисперсией мягких эластичных желатиновых капсул.

Композиция Д (капсулы с регулируемым выделением) Следующая композиция для капсул с регулируемым выделением была получена путем выдавливания ингредиентов а, б и в с помощью экструдера с последующим приданием экструдату сферической формы и высушиванием. Высушенные гранулы затем покрывали мембраной (г), контролирующей выделение, и помещали в жесткие желатиновые капсулы, состоящие из двух частей. - мг/капсулу (а) Активный ингредиент - 250 (б) Микрокристаллическая целлюлоза - 125 Лактоза В.Р. - 125 (г) Этилцеллюлоза - 13 - 513 Пример В: Композиция для инъекций Композиция А Активный ингредиент - 0,200 г 0,1 М раствор соляной кислоты - до pH 4,0 - 7,0 0,1 М раствор гидроксида натрия - до pH 4,0 - 7,0 Стерильная вода - до 10 мл Активный ингредиент был растворен в большей части воды (35 - 40^oC) и pH раствора доводили до величины в диапазоне от 4,0 до 7,0 соляной кислотой или гидроксидом натрия в зависимости от условий. Порцию доводили до объема водой и фильтровали через стерильный микропористый фильтр в стерильный стеклянный пузырек из темного стекла объемом 10 мл (тип 1) и затем закрывали стерильными пробками и крышками.

Композиция Б Активный ингредиент - 0,125 г Стерильный апирогенный фосфатный буфер pH 7 - до 25 мл Пример Г: Внутримышечная инъекция Активный ингредиент - 0,20 г Бензиловый спирт - 0,10 г Гликофурол - 1,45 г Вода для инъекций - до 3,00 мл Активный ингредиент растворяли в гликофуроле. Затем добавляли и растворяли бензиловый спирт и затем воду до 3 мл. После этого смесь фильтровали через стерильный микропористый фильтр и запаивали в стерильные стеклянные ампулы (тип 1) из темного стекла объемом 3 мл.

Пример Д: Сироп Активный ингредиент - 0,2500 г Раствор сорбита - 1,5000 г Глицерин - 2,0000 г Бензоат натрия - 0,0050 г Ароматизатор Peach 17.42.3169 - 0,0125 мл Очищенная вода - до 5,0000 мл Активный ингредиент растворяли в смеси глицерина и большей части очищенной воды. После этого к раствору добавляли водный раствор бензоата натрия, затем раствор сорбита и, наконец, ароматизатор. Доводили до конечного объема очищенной водой и хорошо перемешивали.

Пример Е: Суппозиторий - мг/суппозиторий Активный ингредиент (631 m)^* - 250 Твердый жир В.Р. (Witepsol H15 - Dynamit Nobel) - 1770 - 2020 ^* Активный ингредиент использовался в виде порошка, в котором по меньшей мере 90% частиц имели диаметр 631 m или менее.

Одну пятую часть продукта Witepsol H15 расплавляли в сосуде с паровой рубашкой при максимальной температуре 45^oC. Активный ингредиент просеивали через сито 2001 m и при перемешивании добавляли к расплавленной основе, используя сильверсон, оборудованный рассекающей головкой до достижения состояния тонкой дисперсии. Поддерживая температуру смеси 45^oC, к суспензии добавляли оставшееся количество Witepsol H15 и перемешивали до образования гомогенной смеси. Всю суспензию пропускали через сито из нержавеющей стали (2501 m) и при непрерывном перемешивании оставляли охлаждаться до 40^oC. При температуре от 38^oC до 40^oC 2.02 г смеси помещали в подходящие пластмассовые формы объемом 2 мл. Суппозитории оставляли охлаждаться до комнатной температуры.

Пример Е: Пессарии - мг/пессарий Активный ингредиент (631 m) - 250 Безводная декстроза - 380 Картофельный крахмал - 363 Стеарат магния - 7 - 1000 Указанные ингредиенты непосредственно смешивали и изготавливали пессарии путем непосредственного прессования полученной смеси.

Антивирусные испытания 1. Анти-ВЦМЧ Вирус цитомегалии человека (ВЦМЧ) испытывают в монослоях клеток MRC5 (из легких эмбриона человека) в многоячеечных кюветах. Активность соединений определяют испытанием на уменьшение розеток, в котором монослой клеток инфицируют суспензией ВЦМЧ. В накладке из карбоксиметилцеллюлозы создают диапазон концентраций испытуемого соединения (известной молярности). Число розеток при каждой концентрации выражают в процентах от контрольного испытания и строят кривую зависимости доза-эффект. Из этой кривой оценивают концентрацию с 50% ингибированием (IC₅₀).

Анти-ВЦМЧ активность Соединение - IC₅₀ (мкМ) Пример 4 - 1,9 Пример 13 - 1,0 2. Анти-ВГВ а. Общее описание Анти-ВГВ активность соединений формул (I) и (I-1) определяли высокопроизводительным испытанием на эффективность ассессии. Супернатанты из растущих клеток, продуцирующих ВГВ (HepG2 2.2.15, линия клеток P5A) в планшетах с 96 лунками накладывали на лунки планшета для микротитрования, покрытые специфичным моноклональным антителом по отношению к поверхностному антителу ВГВ (HBsAg). Присутствующие в супернатантах частицы вируса связываются с антителом и остаются иммобилизованными, в то время как другие инородные вещества удаляют промыванием. После этого данные частицы вируса денатурируют с выделением нитей ДНК ВГВ, которые далее увеличивают в цепной реакции полимеразы (polymerase chain reacti on PCR) и регистрируют колориметрическим анализом на захват гибрида. Количественное охарактеризование достигается путем подгонки стандартной кривой к разбавлениям клеточного супернатанта с известным содержанием ДНК ВГВ. Степень анти-ВГВ активности получается путем сравнения содержания ДНК ВГВ в контрольных супернатантах необработанных клеток и в супернатантах, содержащих соединение формулы (I) или (I-1).

6. Иммуноаффинный захват ВГВ Продуцирующие ВГВ клетки (2500 клеток/лунку) засевали в 96-луночные лотки для культур в смесь RPM1/10% эмбриональная бычья сыворотка/2 мМ глутамин (RPM1/10/2). На 1, 3, 5 и 7 день среды пополняли разбавлениями соединений с формулой (I) или (I-1) в смеси RPM1-10/2 до конечного объема 150 мкл. В каждую лунку круглодонного планшета для микротитрования добавляли пятьдесят мкл моноклонального антитела мыши anti-HBsAG (10 мкг/мл в фосфатно-солевом буферном растворе ФСБР, PBS). После инкубирования в течение ночи при 4^oC растворы отсасывали и заменяли 100 мкл 0,1% раствора БСА в ФСБР. Образцы инкубировали 2 ч при 37^oC и три раза промывали раствором ФСБР/0/0,01% Tween-20 (ФСБР/Т), используя промыватель N_ипс. После этого во все лунки добавляли микропипеткой 10 мкл 0,035% раствора Tween 20 в ФСБР. Микропипеткой в лунки переносили клеточные супернатанты (25 мкл), содержащие внеклеточный вирион ДНК; конечная концентрация Tween 20 составляла 0,01%. В два ряда лунок, которые служили в качестве кривой внутреннего стандарта для количественного охарактеризования, вносили по 25 мкл стандартных разбавлений ВГВ в смеси RPM1/10/2; планшеты герметизировали и инкубировали в течение ночи при 4^oC. Образцы 5 раз промывали смесь ФСБР/Т и два раза ФСБР, последнюю промывку отсасывали. После этого в каждую лунку микропипеткой добавляли 25 мкл раствора 0,09 н. NaOH/0,01% NP40, лунки с образцами герметизировали и инкубировали 60 мин при 37^oC. Затем образцы нейтрализовали 25 мкл раствора 0,09 н. NaOH/100 ТРИС (pH 8,3).

В. Цепная реакция полимеразы (PCR): Цепную реакцию полимеразы (Saiki, P. K. et al., Science, 239 (4839) 487-91 (1988)) проводили на образцах 5 мкл, используя приспособление для PCR фирмы Perkin Elmer. PCR выполняют в трубках "MicroAmp tubes" в конечном объеме 25 мкл. Праймеры выбирали из сохранившихся областей генома ВГВ, что было определено путем соединения нескольких последовательностей. Один праймер биотинилировали на конце в положении 5 с целью облегчения обнаружения продуктов PCR методом захвата гибридов. Все праймеры получены от Synthecell Corp., Rockville, MD 20850.

г. Обнаружение продуктов PCR методом захвата гибридов.

Продукты PCR обнаруживали олигонуклеотидными зондами, меченными пероксидазой хрена (Synthecell Corp., Rockville, MD 20850), которые образовывали гибриды с биотинилированными нитями денатурированных продуктов PCR прямо в лунках планшета для микротитрования, покрытых стрептавидином; использовался в основном метод Holodiniy, M. et Аl., BioTecnigues, 12 (1), 37 - 39 (1992). Модификации включали использование реакционных объемов PCR 25 и проведение денатурации гидроксидом натрия, а не теплом. Одновременное связывание биотинового фрагмента со связанным с планшетом стрептавидином во время гибридизации служи