Избирательно действующие ингибиторы тромбина и фармацевтическая композиция на их основе

Избирательно действующие ингибиторы тромбина и фармацевтическая композиция на их основе

Реферат

 

Описываются новые избирательно действующие ингибиторы тромбина, имеющие следующую формулу I которые также эффективны при пероральном применении. Значения R¹, R⁶, R⁷, X указаны в п.1 формулы изобретения. Описывается также фармацевтическая композиция на основе соединений формулы II для подавления активности тромбина. 2 с. и 2 з.п.ф-лы, 7 табл.

Область техники.

Настоящее изобретение относится к новым избирательно действующим ингибиторам тромбина, имеющим следующую формулу (I): в которой R¹ представляет собой ацетил, замещенный арилом или арилокси, или представляет собой сульфонил, замещенный замещенным или незамещенным арилом или N-содержащей гетероциклической группой, X представляет собой группу формулы R² и R³ независимо друг от друга представляют собой водород; циклоалкил, замещенный или незамещенный карбоксилом или алкоксикарбонилом; арилалкилокси; гидрокси; или низший алкил, замещенный или незамещенный карбоксилом, алкоксикарбонилом или гидрокси, или R² и R³ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать пиперидиновую группу, замещенную карбоксилом или алкоксикарбонилом, R⁴ представляет собой водород, низший алкил или низший алкокси, R⁵ представляет собой алкансульфонил; алкоксикарбонил; алкилкарбонил; формил; низший алкил; арил, замещенный или незамещенный алкокси или галогеналкилом; или гидроксизамещенный низший алкил, и R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой водород, низший алкил или амино.

Некоторые соединения формулы (I) могут проявлять высокую ингибирующую активность по отношению к тромбину даже при пероральном применении и, таким образом, представляют большую ценность.

Настоящее изобретение также относится к способу получения соединения формулы (I) и к фармацевтической композиции для подавления активности тромбина, которая содержит соединение формулы (I) в качестве активного ингредиента.

ПРЕДПОСЫЛКИ.

Широко известно, что процесс свертывания крови включает в себя множество сложных ферментативных реакций, заключительная стадия которых включает в себя реакцию превращения протромбина в тромбин. Тромбин, полученный в результате заключительной стадии процесса свертывания крови, активирует тромбоциты и переводит фибриноген в фибрин, который затем преобразуется в высокомолекулярное вещество путем полимеризации и который приобретает поперечные сшивки благодаря действию активированного фактора крови XIII с образованием нерастворимого кровяного сгустка. Соответственно, тромбин играет важную роль в процессе свертывания крови. Тромбин также активирует факторы крови V и VIII, которые, в свою очередь, ускоряют свертывание крови по механизму обратной связи.

Таким образом, поскольку ингибиторы тромбина действуют как эффективные антикоагулянты и, в то же время, могут подавлять активацию тромбоцитов и продукцию и стабилизацию фибрина, длительное время предпринималось множество попыток найти способ предотвращения свертывания крови и лечения тромбозов различного рода, используя новое соединение, которое способно подавлять активность тромбина.

Однако соединение, способное подавлять лишь активность тромбина, ограничено в применении в качестве эффективного противосвертывающего и тромболитического средства. Причиной является тот факт, что, поскольку тромбин представляет собой одну из сериновых протеаз, а в организме человека, особенно в крови, присутствует большое количество сериновых протеаз, схожих с трипсином, обычно плазмина, то эффективный ингибитор тромбина, как правило, обладает высокой ингибирующей активностью по отношению к таким сериновым протеазам. В соответствии с такой характерной чертой тромбина, при разработке ингибиторов тромбина очень важным является, чтобы соединение-ингибитор обладало меньшей ингибирующей активностью по отношению к прототипу сериновых протеаз, такому как трипсин, чем по отношению к тромбину.

При таких условиях было проведено большое количество исследований с целью разработки избирательно действующих ингибиторов тромбина, который мог бы эффективно подавлять активность тромбина и, в то же время, обладал бы низкой ингибирующей активностью по отношению к трипсину. В результате был разработан Аргатробан (Argatroban), имеющий следующую формулу (A), производного арилсульфониларгинина (патенты США 4258192 и 4201863).

Аргатробан проявляет высокую ингибирующую активность по отношению к тромбину, которая в 250 раз превышает активность по отношению к трипсину (Biochemistry 1984, 23, с. 85-90). Однако он может быть получен только путем сложного способа синтеза. Он был выпущен в продажу в Японии в 1990 году.

В дополнение к этому, был также разработан NAPAP, имеющий следующую формулу (B), арилсульфонильного производного бензамидина.

Данное соединение может быть легко синтезировано и обладает высокой ингибирующей активностью по отношению к тромбину. Однако оно имеет недостаток в том, что ингибирующая активность по отношению к тромбину лишь в 50 раз превышает активность по отношению к трипсину (J. Biol. Chem. 1991, 266, с. 20085- 20093).

Далее, сообщалось о Ro 46-6240, имеющем следующую формулу (C), как о соединении, обладающем улучшенной избирательностью по отношению к тромбину по сравнению с трипсином. Данное соединение указывает на возможность разработки внутривенно вводимого состава благодаря его короткому периоду полужизни в крови, но не дает возможности перорального введения (J. Med. Chem. 1994, 37, 3889-3901).

В дополнение к этому, сообщалось о недавно разработанном соединении на основе пиперазида как о дающем, в некоторой степени, возможность перорального введения у крыс, но обладающем низкой избирательностью по отношению к тромбину (WO 94/18185). Таким образом, не ожидается, что такие соединения в данной области будут перспективны.

Таким образом, авторы настоящего изобретения провели всесторонние исследования в целях разработки определенного соединения, которое может быть легко синтезировано, проявляет более высокую ингибирующую активность по отношению к тромбину, чем по отношению к трипсину, и также может вводиться перорально. В результате заявители обнаружили, ингибитор тромбина формулы (I) по настоящему изобретению отвечает таким требованиям и таким образом создали настоящее изобретение.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ.

Соответственно, объектом настоящего изобретения является новый ингибитор тромбина формулы (I), как определен выше, который может быть введен перорально и который обладает высокой избирательностью по отношению к тромбину.

Другим объектом целью настоящего изобретения является способ получения ингибитора тромбина формулы (I).

Далее, еще одним объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для предотвращения свертывания крови и лечения тромбозов различного рода, которая содержит ингибитор тромбина формулы (I) в качестве активного ингредиента.

ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ.

С одной стороны, настоящее изобретение относится к новому соединению, представленному следующей формулой (I): его фармацевтически приемлемой соли, гидрату, сольвату и изомеру, в которых R¹ представляет собой ацетил, замещенный арилом или арилокси, или представляет собой сульфонил, замещенный замещенным или незамещенным арилом или N-содержащей гетероциклической группой, X представляет собой группу формулы R² и R³ независимо друг от друга представляют собой водород; циклоалкил, замещенный или незамещенный карбоксилом или алкоксикарбонилом; арилалкилокси; гидрокси; или низший алкил, замещенный или незамещенный карбоксилом, алкоксикарбонилом или гидрокси, или R² и R³ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать пиперидиновую группу, замещенную карбоксилом или алкоксикарбонилом, R⁴ представляет собой водород, низший алкил или низший алкокси, R⁵ представляет собой алкансульфонил; алкоксикарбонил; алкилкарбонил; формил; низший алкил; арил, замещенный или незамещенный алкокси или галогеналкилом; или гидроксизамещенный низший алкил, и R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой водород, низший алкил или амино.

В определении каждого заместителя соединения формулы (I) по настоящему изобретению термин "низший алкил" означает насыщенный неразветвленный или разветвленный углеводородный радикал, содержащий от 1 до 4 атомов углерода, такой как метил, этил, изопропил, изобутил, трет-бутил и т.д.; термин "аралкилокси" означает алкоксигруппу, замещенную ароматическим кольцом, таким как бензилокси и т.д.; и термин "циклоалкил" означает циклическую алкильную группу, содержащую от 3 до 8 атомов углерода, такую как циклопентил.

Среди соединений формулы (I), приведенной выше, предпочтительным является соединение, в котором R¹ представляет собой ацетил, замещенный нафтилом или нафтилокси, или представляет собой сульфонил, замещенный нафтилом или фенилом, которые могут быть замещены или не замещены от одного до четырех заместителями, выбранными из группы, включающей низший алкил, низший алкокси и диалкиламино, X представляет собой группу формулы R² и R³ независимо друг от друга представляют собой C_3-6-циклоалкил, замещенный или незамещенный карбоксилом или метоксикарбонилом; бензилокси; низший алкил, замещенный или незамещенный карбоксилом, метоксикарбонилом или гидрокси; или гидрокси, или R² и R³ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, может образовывать пиперидиновую группу, замещенную карбоксилом или метоксикарбонилом, R⁴ представляет собой водород, R⁵ представляет собой метансульфонил, этоксикарбонил, формил, этил, фенил, метилкарбонил, гидроксиэтил или фенил, который может быть замещен или не замещен трифторметилом или этокси, и R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой водород, метил или амино.

Типичный пример соединения формулы (I) по настоящему изобретению включает следующее: (S)-N-циклопентил-N-метил-3-(4-амидразонофенил)-2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-бутил-N-метил-3-(4-амидразонофенил)-2-(2- нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-циклопентил-N-пропил-3-(4-амидразонофенил)-2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-циклопентил-N-(2-бензилоксиэтил)-3-(4-амидразонофенил)-2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-циклопентил-N-бутил-3-(4-амидразонофенил)-2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-циклопентил-N-этил-3-(4-амидразонофенил)-2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-циклопентил-N-метил-3-[4-(метиламидино)фенил] -2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-циклопентил-N-метил-3-[4-(1,1-диметиламидино)фенил] -2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-циклопентил-N-метил-3-(4-амидразонофенил)-2-[(4-метокси-2,3,6-триметилбензол)сульфониламино]пропионамид, (S)-N-циклопентил-N-гидрокси-3-(4-амидразонофенил)-2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-циклопентил-N-(2-гидроксиэтил)-3-(4-амидразоно-фенил)-2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-циклопентил-N-метил-3-[4-(метиламидино)фенил] -2-[(4-метокси-2,3,6-триметилбензол)сульфониламино]пропионамид, (S)-N,N-диметил-3-(4-амидразонофенил]-2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N, N-диметил-3-[4-(1-метиламидино)фенил] -2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-циклогексил-N-метил-3-(4-амидразонофенил)-2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-N-циклопропил-N-метил-3-(4-амидразонофенил)-2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамид, (S)-3-[4-(амидразоно)фенил]-N-циклопентил-N-метил-2-(2-нафталин-1-илацетиламино)пропионамид, (S)-3-[4-(амидразоно)фенил] -N-циклопентил-N-метил-2-(5-диметиламинонафталин-1-сульфониламино)пропионамид, (S)-3-[4-(амидразоно)фенил] -N-циклопентил-N-метил-2-(5-метоксинафталин-1-сульфониламино)пропионамид, (S)-3-[4-(амидразоно)фенил]-N-циклопентил-N-метил-2-(6,7-диметоксинафталин-2-сульфониламино)пропионамид, (S)-3-[4-(метиламидино)фенил]-N-циклопентил-N-метил-2-(5-диметиламинонафталин-1-сульфониламино)пропионамид, (S)-3-[4-(амидразоно)фенил] -N-циклопентил-N-метил-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионамид, (S)-3-[4-(амидразоно)фенил] -N-циклопентил-N-метил-2-[2-(нафталин-1-илокси)ацетиламино)пропионамид, (S)-3-[4-(амидразоно)фенил] -N-циклопентил-N-метил-2-[2-(нафталин-2-илокси)ацетиламино)пропионамид, метиловый эфир {[3-(4-(амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2- сульфониламино)пропионил]метиламино}уксусной кислоты, { [3-(4-(амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил] метиламино}уксусная кислота, метиловый эфир (S)-2-{[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]метиламино}пропионовой кислоты, (S)-2-{[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино) пропионил]метиламино}пропионовая кислота, метиловый эфир (R)-2-{[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]метиламино}пропионовой кислоты, (R)-2-{[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]метиламино}пропионовая кислота, метиловый эфир (R)-2-{[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]метиламино}-3-метилмасляной кислоты, (R)-2-{[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2- сульфониламино)пропионил]метиламино}-3-метилмасляная кислота, метиловый эфир 3-{[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]метиламино}пропионовой кислоты, 3-{ [3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил] метиламино}пропионовая кислота, метиловый эфир 4-{[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]метиламино}масляной кислоты, 4-{ [3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил] метиламино}масляная кислота, метиловый эфир {[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]циклопропиламино}уксусной кислоты, { [3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил] циклопропиламино}уксусная кислота, метиловый эфир {[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]бутиламино}уксусной кислоты, { [3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил] бутиламино}уксусная кислота, метиловый эфир {[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]циклопентиламино}уксусной кислоты, { [3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил] циклопентиламино}уксусная кислота, метиловый эфир 1-{[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]метиламино}циклопентанкарбоновой кислоты, 1-{ [3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил] метиламино}циклопентанкарбоновая кислота, метиловый эфир 1-{[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]метиламино}циклопентанкарбоновой кислоты, 1-{ [3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил] метиламино}циклопентанкарбоновая кислота, этиловый эфир 2-{ [3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]метиламино}циклопентанкарбоновой кислоты, 2-{ [3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил] метиламино}циклопентанкарбоновая кислота, метиловый эфир (S)-2-{[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]метиламино}-3-метилмасляной кислоты, метиловый эфир 1-[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил]пиперидин-(R)-2-карбоновой кислоты, 1-[3-(4-амидразонофенил)-(S)-2-(нафталин-2-сульфониламино)пропионил] пиперидин-(R)-2-карбоновая кислота, [1-(4-амидразоно)бензил-2-оксо-2-(4-метилсульфонилпиперазинил)этил] амид (S)-нафталин-2-сульфоновой кислоты, [1-(4-амидразоно)бензил-2-(4-формилпиперазинил)-2-оксоэтил] амид (S)-нафталин-2-сульфоновой кислоты, [1-(4-амидразоно)бензил-2-(4-этилпиперазинил)-2-оксоэтил]амид (S)-нафталин-2-сульфоновой кислоты, [1-(4-амидразоно)бензил-2-оксо-2-(4-фенилпиперазинил)этил] амид (S)-нафталин-2-сульфоновой кислоты, [1-(4-амидразоно)бензил-2-оксо-2-[4-(3-трифторметилфенил)пиперазинил)этил]амид (S)-нафталин-2-сульфоновой кислоты, [2-(4-ацетилпиперазинил)-1-(4-амидразоно)бензил-2-оксоэтил]амид (S)-нафталин-2-сульфоновой кислоты, [1-(4-амидразоно)бензил-2-оксо-2-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазинил] этил] амид (S)-нафталин-2-сульфоновой кислоты, и [1-(4-амидразоно)бензил-2-оксо-2-[4-(2-этоксифенил)пиперазинил]этил]амид (S)-нафталин-2-сульфоновой кислоты.

Соединение формулы (I) по настоящему изобретению также может образовывать фармацевтически приемлемую соль. Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединения (I) могут включать соли добавления кислот, образованные кислотами, которые могут образовывать нетоксичную соль добавления кислоты, содержащую фармацевтически приемлемый анион, например неорганических кислот, таких как хлористоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, бромистоводородная кислота, иодистоводородная кислота и т.д., органических карбоновых кислот, таких как винная кислота, муравьиная кислота, лимонная кислота, уксусная кислота, трихлоруксусная кислота, глюконовая кислота, бензойная кислота, молочная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота и т.д., сульфоновых кислот, таких как метансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, нафталинсульфоновая кислота и т.д., и тому подобных кислот.

В дополнение к этому, поскольку соединение формулы (I) по настоящему изобретению может включать в свой состав асимметричный атом углерода, оно может находиться в виде рацемата, смеси диастереомеров и отдельного диастереомера. Все такие изомеры включены в объем настоящего изобретения. То есть, изомеры соединения формулы (I) могут быть представлены следующим образом: в котором R⁶ представляет метил или амино.

С другой точки зрения, настоящее изобретение также относится к способу получения соединения формулы (I), как определено выше.

В соответствии с настоящим изобретением, соединение формулы (I) может быть получено путем взаимодействия соединения формулы (II) с соединением формулы (III), как показано на следующей схеме реакции 1.

Схема реакции 1.

В приведенной выше схеме реакции X, R¹, R⁶ и R⁷ определены, как описано выше.

Как изображено на приведенной выше схеме реакции 1, соединение формулы (I) по настоящему изобретению может быть получено путем взаимодействия метилмеркаптопроизводного формулы (II) с производным амина формулы (III) в качестве нуклеофильного вещества. Данная реакция может быть предпочтительно проведена в присутствии растворителя. Хотя в данной реакции может быть применен любой органический растворитель, который не влияет отрицательно на ход реакции, для данной цели применяют, главным образом, спиртовой растворитель, такой как метанол, этанол, пропанол и т.д.

В приведенной выше реакции реакционные условия, включая количество реагентов, температуру реакции, время реакции и т.д., могут быть определены в зависимости от вида конкретного реагента, применяемого квалифицированным специалистом в данной области. Хотя температура реакции может варьироваться в пределах существенного интервала, как правило, особенно предпочтительным является проведение реакции при от 0^oC до 50^oC. В дополнение к этому, реакция обычно занимает от 0,5 до 5 часов и предпочтительно может быть проведена за от 1 до 2 часов.

После того, как данная реакция завершается, продукт реакции может быть отделен и очищен в соответствии с обычными методиками переработки, например хроматографией, перекристаллизацией и т.д.

Метилмеркаптопроизводные формулы (II), применяемое в качестве промежуточного продукта для получения соединения формулы (I) в схеме реакции 1, может быть получено в соответствии со схемой реакции 2 или 3, как описано ниже.

Схема реакции 2: Схема реакции 3: В приведенных выше схемах реакций X, R¹, R⁶ и R⁷ определены, как описано выше, и P представляет собой аминозащитную группу.

В дальнейшем, схемы реакций 2 и 3 пояснены конкретно.

В схеме реакции 2 сначала к C-концу соединения [1] присоединяют аминогруппу X с получением соединения [2], амино-защитную группу с N-конца которого удаляют с получением соединения [3]. Затем на лишенный защиты N-конец соединения [3] вводят группу R¹ с получением соединения [4]. Альтернативно, в соответствии со схемой реакции 3, сначала на N-конец соединения [7] вводят группу R¹, а затем к C-концу присоединяют аминогруппу X с получением соединения [4].

Конкретно, в соответствии со схемой реакции 2, к соединению формулы [1] присоединяют аминпроизводное, соответствующее заместителю X с получением соединения формулы [2] , с N-конца которого удаляют аминозащитную группу с получением соединения формулы [3]. Затем на N-конец соединения формулы [3] вводят группу R¹ с получением нитрильного производного формулы [4], которое затем насыщают сероводородом в присутствии пиридина и триэтиламина с получением тиоамидного соединения формулы [5]. Данное тиоамидное соединение затем метилируют с помощью метилирующего агента, такого как иодметан, диметилсульфат, метилтрифлат и т.д., с получением желаемого метилмеркаптосоединения формулы (II).

В соответствии со схемой реакции 3, сначала на N-конец соединения формулы [7] вводят группу R¹ путем взаимодействия соединения [7] с соединением формулы [6] и затем на C-конец полученного соединения формулы [8] вводят аминогруппу путем присоединения к соединению [8] аминпроизводного соединения, соответствующего заместителю X, с получением соединения формулы [4], которое затем подвергают той же процедуре, что и в схеме реакции 2, с получением желаемого метилмеркаптопроизводного формулы (II).

Сшивающий агент, который может быть применен для процедуры присоединения в схемах реакций 2 и 3, включает одно или несколько веществ, выбранных из группы, включающей дициклогексилкарбодиимид (ДЦК), 3-этил-3'-(диметиламино)пропилкарбодиимид (ЭДК), хлорангидрид бис-(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфиновой кислоты (БОФ-С1) и дифенилфосфорилазид (ДФФА), но не ограничивается ими.

Хотя соединения - карбоновые кислоты [1] и [7], применяемые в схемах реакций 2 и 3, могут применяться в виде свободных кислот, предпочтительно они могут применяться в виде своих реакционноспособных производных, например галогенангидридного производного или другого активированного сложноэфирного производного в целях облегчения протекания реакции. Для реакции присоединения аминового соединения с образованием амидной связи или реакции присоединения спирта с образованием сложноэфирной связи особенно необходимо активированное сложноэфирное производное карбоновой кислоты. Такие реакционноспособные производные включают обычные производные, которые могут быть получены в соответствии с методикой, обычно применяемой в данной области техники. Например включено галогенангидридное производное хлорангидрид; и активированное сложноэфирное производное включает ангидрид карбоновой кислоты, являющийся производным алкоксикарбонилгалогенида, такого как метоксикарбонилхлорид, изобутилоксикарбонилхлорид и т.д., и сшивающий агент, сложноэфирное производное N-гидроксифталимида, сложноэфирное производное N-гидроксисукцинимида, сложноэфирное производное N-гидрокси-5-норбонен-2',3'-дикарбоксиимида, сложноэфирное производное 2,4,5-трихлорфенола и т.д., но не ограничивается ими.

Эффект ингибирования тромбином соединения формулы (I) по настоящему изобретению может быть обнаружен путем определения константы диссоциации K_i, представленной следующим уравнением, в соответствии с известной методикой, описанной в литературе (Methods in Enzymology, т. 80, с. 341-361; Biochemistry 27, с. 2144-2151 (1988)).

^* [E] - концентрация свободного фермента; ^** [I] - концентрация несвязанного ингибитора; ^*** [EI] - концентрация комплекса фермент-ингибитор.

Константа диссоциации K_i обозначает степень диссоциации комплекса фермент-ингибитор тромбина. Соответственно, низкое значение константы диссоциации говорит о высокой связующей способности ингибитора тромбина по отношению к ферменту и таким образом устанавливается, что ингибитор тромбина обладает высокой ингибирующей активностью по отношению к тромбину. Такая константа диссоциации может быть определена путем взаимодействия тромбина с определенным субстратом, который дает окраску, будучи гидролизованным под действием тромбина, и последующего измерения степени развития окраски в зависимости от времени по методу спектрофотометрии.

В настоящем изобретении в качестве субстратного вещества для тромбина применяют Хромозим ТН (Chromozym ТН) (Gly-Pro-Arg-4-нитроанилидацетат), который дает окраску при действии тромбина. Хромозим ТН гидролизуется тромбином с получением желтого пара-нитроанилина. Соответственно, количество полученного таким образом желтого пара-нитроанилина может быть измерено как изменение поглощения с течением времени для определения ингибирующей активности по отношению к тромбину соединения по настоящему изобретению. Активность фермента может быть определена исходя из скорости изменения поглощения и затем может быть непосредственно связана со способностью ингибитора тромбина подавлять активность фермента (Methods in Enzymology, т. 80, с. 341-361; Biochemistry 27, с. 2144-2151, 1988).

Для определения избирательности соединения по настоящему изобретению по отношению к тромбину по сравнению с трипсином измеряют ингибирующую активность соединения формулы (I) по отношению к трипсину как значение K_i в соответствии с той же методикой, что и приведенная выше методика для определения ингибирующей активности по отношению к тромбину, а затем рассчитывают отношение активности по отношению к трипсину к активности по отношению к тромбину. В данном случае, процедура определения ингибирующей активности по отношению к трипсину существенно идентична таковой для тромбина за исключением того, что в качестве субстрата применяют N-бензоил-Val-Gly-Arg-пара-нитроанилидгидрохлорид.

Как результат определения ингибирующей активности по отношению к тромбину и трипсину соединения формулы (I) по настоящему изобретению может быть установлено, что соединение по настоящему изобретению проявляет отличную ингибирующую активность по отношению к тромбину и, более того, обладает высокой избирательностью по отношению к тромбину по сравнению с трипсином. В частности, значения избирательности соединений из Примеров 1 и 7 по отношению к тромбину по сравнению с трипсином составляют приблизительно 2900 раз и 26304 раз соответственно, тогда как значения избирательности известных ингибиторов тромбина, аргатробана (A) и NAPAP (B), составляют лишь 250 раз и 50 раз соответственно. Соответственно, может быть замечено, что соединение (I) по настоящему изобретению значительно усовершенствовано в плане избирательности по отношению к тромбину по сравнению с трипсином.

Как было указано выше, поскольку новое соединение формулы (I) по настоящему изобретению является ингибитором тромбина, который проявляет высокую ингибирующую активность по отношению к тромбину даже при пероральном введении и также обладает высокой избирательностью по отношению к тромбину по сравнению с трипсином, оно может использоваться для профилактики свертывания крови и лечения тромбозов различного рода.

Соответственно, третьим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для профилактики свертывания крови и лечения тромбоза, которая содержит соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента.

Когда соединение формулы (I) по настоящему изобретению вводят субъекту в клинических целях, суточная доза соединения (I) может варьироваться, предпочтительно, в пределах от 0,001 мг до 10 мг на 1 кг массы тела. Однако при лечении определенного пациента может быть назначена особая доза сверх указанного выше интервала доз в зависимости от конкретного применяемого соединения, массы, пола и состояния здоровья данного пациента, диеты, времени и способа введения, скорости выведения соединения, других активных компонентов, применяемых в сочетании с ним и тяжести заболеваний, подвергающихся лечению.

Соединение по настоящему изобретению может вводиться в форме препарата для инъекций или препарата для перорального применения в соответствии с поставленной целью.

Препарат для инъекций, например стерилизованные водные или масляные суспензии для инъекций, могут быть приготовлены с применением подходящего диспергирующего агента, увлажняющего агента или суспендирующего агента в соответствии с известной методикой, обычно применяемой в области приготовления препаратов для инъекций. В качестве водного растворителя, подходящего для данной цели, могут быть применены вода, раствор Рингера или изотонический раствор NaCI. В дополнение к этому, хотя стерилизованное нелетучее масло может быть применено в качестве растворителя или суспендирующей среды, любое не вызывающее раздражение нелетучее масло, включая моно- и диглицериды, может быть применено в тех же целях. Более того, в препарат для инъекций может быть добавлена жирная кислота, такая как олеиновая кислота.

Твердый препарат для перорального применения может находиться в форме капсул, таблеток, пилюль, порошков и гранул, причем состав в виде капсул или таблеток является наиболее предпочтительным. Таблетки и пилюли могут быть приготовлены, предпочтительно, в виде состава с энтеросолюбильным покрытием. При составлении твердого препарата активное соединение формулы (I) по настоящему изобретению может быть объединено с фармацевтически приемлемым носителем, например с одним или более инертных разбавителей, таких как сахароза, лактоза, крахмал и т.д., смазывающими веществами, такими как силикат магния, дезинтеграторами, связывающими веществами и тому подобным.

Одной из главных характерных черт соединения формулы (I) по настоящему изобретению является то, что соединение формулы (I) проявляет хороший фармакологический эффект, даже когда его приготавливают в форме препарата для перорального применения и затем вводят перорально. Это можно продемонстрировать исходя из результатов фармакокинетических экспериментов на крысах и собаках в качестве экспериментального животного. В таких экспериментах может быть установлено, что активное соединение по настоящему изобретению сохраняется в крови в течение продолжительного промежутка времени, будучи введено перорально. Соответственно, соединение формулы (I) по настоящему изобретению является более применимым в свете того факта, что оно может эффективно применяться в форме препарата для перорального применения.

Далее, исходя из фармакокинетических экспериментов может быть также установлено, что активное соединение по настоящему изобретению может позволять достигать желаемой цели без острой токсичности у млекопитающих, включая крысу и собаку.

Когда ингибитор тромбина по настоящему изобретению вводят с целью получить противосвертывающий и тромболитический эффекты, он может быть введен в сочетании с одним или более веществом(ами), выбранными из группы, включающей тромболитические средства и средства для подавления активности тромбоцитов. В качестве тромболитического средства, которое может быть применено для данной цели, могут быть упомянуты t-PA, урокиназа, стрептокиназа; и аспирин, тиклопидин (ticlopidin), клопидрогель (clopidrogel), моноклональное тело 7Е3 и т. д. могут быть применены в качестве средства для подавления активности тромбоцитов.

Однако следует учитывать, что препарат, содержащий активное соединение по настоящему изобретению для лечения и профилактики тромбоза, не ограничивается таковыми, описанными выше, и может включать любой препарат, применимый для данной цели.

В дальнейшем, настоящее изобретение будет пояснено более конкретно с помощью рабочих примеров. Однако следует учитывать, что примеры приведены лишь в целях пояснения настоящего изобретения и не предназначены для ограничения настоящего изобретения каким-либо образом.

Получение 1.

Получение циклопентилметиламина. К раствору циклопентанона (10 мл, 113 ммоль) в метаноле (50 мл) и воде (50 мл) добавляли метиламингидрохлорид (7,6 г, 113 ммоль) и цианоборгидрид натрия (NaBH₃CN) (7,1 г, 113 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 12 ч при pH 6. Метанол выпаривали в условиях пониженного давления и остаток охлаждали до 0^oC, доводили до pH 2, применяя 3н. соляную кислоту, и затем трижды промывали диэтиловым эфиром. Водный слой вновь охлаждали до 0^oC и затем доводили до pH 11, применяя 6н. раствор гидроксида натрия. К данной смеси добавляли ангидрид третбутилоксикарбонила (24,5 г, 113 ммоль) в диоксане (50 мл). Раствор перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре и концентрировали в условиях пониженного давления до приблизительно 30 мл. Остаток экстрагировали добавлением этилацетата и промывали водным раствором 0,5н. соляной кислоты и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением белого твердого вещества, которое затем очищали по методу колоночной хроматографии (элюент = этилацетат: гексан = 7:3 (по объему)). По завершении очистки полученный твердый продукт растворяли в растворе 4н. HCl-диоксана (60 мл) и полученный раствор перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Растворитель выпаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (13,7 г. Выход: 90,5%).

¹H ЯМР (CD₃OD, миллионные доли) : 3,50 (м, 1Н), 2,68 (с, 3H), 2,10 (м, 2Н), 1,86-1,50 (м, 6Н).

Получение 2.

Получение (S)-N-циклопентил-N-метил-3-(4-цианофенил)-2-(бутилоксикарбониламино)пропионамида.

К раствору (S)-3-(4-цианофенил)-2-(бутилоксикарбониламино)пропионовой кислоты (0,7 г, 2,14 ммоль) в диметилформамиде (ДМФ, 6 мл) добавляли 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорид (ЭДК, 0,7 г) и 1-гидроксибензо-триазолгидрат (ГОБТ, 0,4 г) при 0^oC. Смесь перемешивали до тех пор, пока они полностью не растворялись. К данной реакционной смеси добавляли соединение (0,4 г, 2,96 ммоль), полученное в Получении 1, и N-метилморфолин (1,0 мл) и затем температуру реакции медленно повышали до комнатной температуры. Реакционный раствор перемешивали в течение 3,5 часов. После завершения реакции реакционный раствор концентрировали в условиях пониженного давления для удаления летучих веществ и полученный остаток разбавляли этилацетатом, тщательно промывали водным насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, разбавленной соляной кислотой и солевым раствором, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и затем концентрировали. Остаток очищали методом колоночной хроматографии (элюент = этилацетат:гексан = 7:3 (по объему)) с получением очищенного соединения указанного в заголовке (0,65 г. Выход: 73,0%).

¹H ЯМР (CD₃OD, миллионные доли) : 7,61 (м, 2Н), 7,32 (м, 2Н), 5,48, 5,01-4,86, 4,12 (3м, 3H), 2,75, 262 (2c, 3H); 2,90-1,20 (м, 17H).

Масс (FAB, m/e): 372 (М⁺+1).

Получение 3.

Получение (S)-N-циклопентил-N-метил-3-(4-цианофенил)-2-(2-нафтилсульфониламино)пропионамида.

Соединение (0,65 г, 1,75 ммоль), полученное в Получении 2, растворяли в дихлорметане (3 мл) и затем охлаждали до -10^oC и к нему добавляли трифторуксусную кислоту (ТФУ, 1 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 5 минут, медленно нагревали до комнатной температуры, перемешивали в течение 30 минут и затем концентрировали в условиях пониженного давления для удаления летучих веществ. Остаток сушили с помощью вакуумного насоса и затем к нему добавляли 6 мл ДМФ. Смесь охлаждали до 0^oC и добавляли N,N-диизопропилэтиламин (1 мл). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение приблизительно 5 минут. После добавления 2-нафталинсульфонилхлорида (0,47 г, 2,07 ммоль) реакционную смесь перемешивали в течение одного часа для завершения реакции и затем концентрировали в условиях пониженного давления для удаления летучих веществ. Остаток разбавляли этилацетатом, промывали насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и солевым раствором, сушили над безводным сульфатом магния, фильтровали