3,4,4-трехзамещенные пиперидинил-n-алкилкарбоксилаты и промежуточные соединения, способ их получения и фармацевтическая композиция

3,4,4-трехзамещенные пиперидинил-n-алкилкарбоксилаты и промежуточные соединения, способ их получения и фармацевтическая композиция

Реферат

 

Описывается новый кристаллический сложный эфир (S, 3R , 4R )-4-(3-гидроксифенил)-3,4-диметил--(фенилметил)-1-пиперидин пропионовой кислоты формулы (2), где R - C₁-C₆-алкил, Z - группа, выбранная из гидрохлорида, гидробромида, сукцината и (+)-дибензоилтартрата, который может использоваться для связывания периферического опиоидного рецептора у пациента. Соединение используется для лечения таких состояний, как синдром раздражимости кишечника, идиопатический запор и диспепсия неязвенного происхождения. 5 с. и 7 з.п. ф-лы, 9 табл.

Это изобретение относится к способу получения некоторых 3,4,4-трехзамещенных пиперидинил-N-алкилкарбоксилатов, новых промежуточных соединений и родственных им соединений. В конечном счете, это изобретение дает получение стабильных кристаллических соединений и лекарственных препаратов, используемых в качестве периферических опиодных антагонистов.

Многочисленные данные показывают, что периферические опиодные пептиды и их рецепторы играют важную физиологическую роль в сократительной способности кишечника. Следовательно, желудочно-кишечные расстройства, такие как идиопатический запор и синдром болезненной раздражимости кишечника, могут быть отнесены к дисфункции синдрома промежуточного регулирования опиодного рецептора, и агенты, действующие как антагонисты по отношению к таким рецепторам, могут быть полезными для лечения пациентов, страдающих от такой дисфункции.

N-замещенные пиперидины, полученные с использованием способа и промежуточных соединений данного изобретения, применяются в качестве периферически-селективных опиодных антагонистов. В частности, одним из наиболее подходящих для этого является 3,4,4-трехзамещенный пиперидинил-N-алкилкарбоксилат-(2S, 3R,4R)([[2-[[4-(3-гидроксифенил- 3,4-диметил-1-пиперидинил]метил]-1-оксо-3-фенилпропил]амино]уксусная кислота (I).

(I) Характерный способ получения ( S,3R,4R)-4-(3-гидроксифенил-3,4-диметил- -(фенилметил)-1- пиперидин пропионовой кислоты в виде этилового эфира (2), являющегося промежуточным соединением для получения соединения (1), является известным для специалиста. Zimmerman описывает этот способ в патенте США 5250542 (включенный в ссылку). Однако этот способ дает смесь стереоизомерных продуктов, что мешает их использованию на практике в коммерческом способе. Получение нужного соединения формулы (I) требует длительного хроматографического разделения с выходом изомерного продукта всего лишь в 13%. Кроме того, каждое промежуточное соединение выделяется в виде "смолообразного" продукта из-за присутствия нежелательного изомера. "Смолообразный" продукт мешает очистке любого промежуточного соединения без хроматографии и поэтому является крайне нежелательным для коммерческих целей.

Способ данного изобретения предоставляет в настоящее время синтетический способ, обеспечивающий получение кристаллических промежуточных соединений без эпимеризации с целью облегчения коммерческого получения соединения (1) и его C₁-C₆ алкиловых эфиров.

Кроме того, способ данного изобретения дает возможность получать твердое кристаллическое вещество (1) и его C₁-C₆ алкиловые эфиры с приличными выходами. Наконец, способ синтеза данного изобретения включает получение промежуточных кристаллических соединений, обеспечивая как обогащение, так и очистку нужного продукта.

Данное изобретение обеспечивает создание крайне желательного стабильного кристаллического вещества - (2S,3R,4R) ([[2-[[4-(3-гидроксифенил)-3,4-диметил-1-пиперидинил]метил]-1- оксо-3-фенилпропил]амино]уксусной кислоты (1), которая является дигидратом.

Новые кристаллические промежуточные соединения и метод кристаллизации являются особенно важными для промышленного усовершенствования получения фармацевтически активных 3-4,4-трехзамещенных пиперидинил-N-алкилкарбоксилатов (18 и 18a ниже).

Заявляемое изобретение дает новые кристаллические соли формулы 2 в которой R является C₁-C₆ алкилом; Z^- представляет собой группу хлора, брома, сукцината, a (+) - дибензоилтартрат; с приемлемыми выходами.

Изобретение дает способ получения кристаллического моногидратного соединения 3 включающий кристаллизацию соединения 3 из растворителя, содержащего приблизительно от 50% до 75% низшего спирта и от 50% до 25% воды (по весу).

Кроме того, данное изобретение обеспечивает получение кристаллических соединений формулы 4 в которой R¹ является C₁-C₆ алкилом; соединение представляет собой соль, такую как гидрохлорид и L-малат. Гидрохлоридная форма представляет собой единственную кристаллическую форму, существующую в виде ацетонового моносольвата. L-малатные соли также представляют собой единственные соли, так как их стехиометрия зависит от растворителя кристаллизации. Стехиометрическое соотношение может включать либо по 1 молю-эквиваленту L-яблочной кислоты и соединения 4 или может содержать 3 моль-эквивалента L-яблочной кислоты и 2 моль-эквивалента соединения 4. Как здесь принято, выражение "полуторомалат" относится к отношению 3:2 L-яблочной кислоты к соединению 4.

Наконец, данное изобретение относится к кристаллическому дигидратному соединению формулы 5 Выращивание "C₁-C₅ алкил", используемое здесь, относится к разветвленной или линейной алкильной группе, содержащей от одного до шести углеродных атомов. Обычно C₁-C₆ алкильные группы представляют собой метильную, этильную, н-пропильную, изо-пропильную, бутильную, изо-бутильную, вт-бутильную, трет-бутильную, пентильную, гексильную и т.п. Другие аналогичные термины относятся к прямым или разветвленным алкильным группам с определенным числом углеродных атомов. Например, "C₁-C₃ алкил" представляет собой метил, этил, н-пропил и изопропил.

Выражение "низший спирт" относится к метанолу, этанолу, 1-пропанолу и 2-пропанолу.

Термин "инертная атмосфера" и "инертные условия" относится к условиям реакции, в которых смесь покрывается слоем инертного газа, такого как азот или аргон.

Термин "практически чистый" используется здесь для обозначения по крайней мере 90-процентного молярного содержания необходимого абсолютного стереоизомера и/или полиморфного соединения. Более предпочтительным является содержание по крайней мере 95 молярных процентов и наиболее предпочтительным - 98 молярных процентов необходимого абсолютного стереозомера и/или полиморфного соединения.

Наиболее предпочтительным является, чтобы продукт и соединения данного изобретения представляли собой соединения, существующие в виде 3R,4R-изомера, как показано в формуле 3 или 3S,4S-изомера формулы (6) Кроме того, специалисту в данной области понятно, что бензиловый заместитель располагается в хиральном центре. Данное изобретение включает как ( S,3R,4R), так и ( R,3S,4S) диастереомеры. Особенно предпочтительными соединениями данного изобретения являются такие соединения формулы 2, 3, 4 и 5, в которых конфигурация заместителей в пиперидиновом кольце представляет собой 3R, 4R и углеродный атом, соединенный с бензиловой группой, представляет собой S-конфигурацию. Специалист может выбирать соответствующие реагенты для получения противоположного энантиомера.

Термины "R" и "S" используется здесь как обычно принято использовать в органической химии для обозначения специфической конфигурации хирального центра. См. Organic Chemistry, R.T. Morrison and R.N. Boyd, 4th ed., Allyn & Bacon, Inc. , Boston (1983) стр. 138-139 и The Vocabulary of Organic Chemistry, Orchin и др. John Wiley and Sons Inc., стр. 126.

Выражение "гидролиз", используемый здесь, включает все соответствующие известные методы эфирного гидролиза, включающие кислотный, основной и энзиматические процессы.

Предложенные методы описываются ниже.

Как здесь принято, фраза "кристаллизация 3" относится к нейтрализации продукта реакции гидролиза формулы 7, в которой M⁺ является натрием, литием или калием, с обозначенными реагентами и/или растворителями и кристаллизации с использованием известных методик. Смешивание может осуществляться с использованием обычных методов перемешивания, таких как размешивание, встряхивание и т.п. Кроме того, специалисту понятно, что процессы кристаллизации могут включать затравку, резкое охлаждение, "скребление" стекла реакционного сосуда и другие, обычно используемые для этого способы.

Исходные материалы для данного изобретения могут быть получены множеством разнообразных методов, хорошо известных специалистам данной отрасли. 3-замещенные-4-метил-4-(3-гидрокси- или алканоилоксифенил)пиперидиновые производные, используемые в качестве исходных веществ в способе данного изобретения, могут быть получены с применением основного метода, предложенного Zimmerman-ом в патенте США N 4115400 (1978) и Zimmerman-ом и др. в патенте США N 4891379 (1990). Патенты США N 4115400 и 4891379 объединены здесь ссылкой. Исходное вещество для синтеза соединений данного изобретения (3R,4R)-4-(3-гидроксифенил)-3,4-диметилпиперидин может быть получено по методу Zimmerman-а патент США 5250542, включенному здесь в ссылку. Специалист должен обратить особое внимание на примере 1 ссылки Zimmerman-а 5250542.

Исходное вещество 14, полученное как описано в методике, может быть использовано в способе по схеме 1 (см. в конце описания), в которой R¹ определен выше. R² является хлоридом, бромидом, (+) - дибензоилтартратом или сукцинатом.

Как проиллюстрировано в схеме 1, соединение 14 контактирует с алкилакрилатом (R¹ акрилат) с образованием соединения 15, R¹ определен выше. Подходящими растворителями являются метанол, тетрагирофуран, этанол и другие. Наиболее подходящими растворителями являются метанол и тетрагидрофуран.

Соединение 15 подвергается депротонированию и контактированию с бензилбромидом. Депротонирование может быть осуществлено с использованием соответствующего основания. Примерами подходящих основных реагентов являются литий диизопропиламид или литий гексаметилдисилазид. Предпочтительными растворителями для реакции с основанием являются тетрагидрофуран и 1,2-диметоксиэтан. Специалисту понятно, что могут быть походящими и другие растворители. При использовании в качестве основания литий диизопропиламида (ЛДА) наиболее предпочтительным является присутствие 2 эквивалентов бензилбромида. Продукт алкилирования представляет собой смесь 1:1 ( S,3R,4R)-изомера и ( R,3R, 4R)-изомера.

Кристаллические соединения формулы 16 являются новыми уникальными. Только четыре конкретные соли формулы 16 являлись как стабильными кристаллическими солями, так и характеризовались желательным диастереомерным обогащением. Были исследованы каждая из следующих кислот при использовании четырех различных систем растворителей: HCl, HBr, (+)-дибензоил винная, янтарная, (-)ди-п-толуилвинная, (+)-ди-п-толуилвинная (-)-дибензоилвинная, (1R,3S)-(+)-камфарная, гиппуровая, бензойная, L-яблочная, D-яблочная, малоновая, D-аспаркановая, (-)-винная, (+)-винная, (-)-миндальная, (+)-миндальная, L-аскорбиновая, малеиновая, серная, уксусная, фосфорная, лимонная, молочная, п-толуолсульфоновая, D-арабаскорбиновая и L-аспартиковая. Таким образом, среди исследованных 110 кристаллических соединений только четыре стабильные кристаллические соли характеризовались как обогащенные. Обогащение и выход четырех стабильных кристаллических солей иллюстрируется в таблице 1.

Как иллюстрируется схемой 2 (см. в конце описания), соединение 16 подвергается гидролизу с образованием соединения 17. Специалисту понятно, что соединение 17 может быть использовано для получения других полезных соединений, как это иллюстрируется соединением 18a. Соединения 18a описаны в основном в патенте США 5250542 как полезные в качестве опиодных антагонистов. Прежде всего, возможно получение абсолютно чистых стереохимических изомеров (18 и 18a) без утомительного хроматографического разделения, используя новые промежуточные соединения данного изобретения.

В схеме 2 R¹ и R² определены выше. A является OR⁴ или R⁵R⁶; в которой: R⁴ является водородом, C₁-C₁₀ алкилом, C₂-C₁₀ алкенилом, циклоалкилом, C₅-C₈-циклоалкенилом, циклоалкилзамещенным C₁-C₃ алкилом, C₅-C₈ циклоалкенилзамещенным C₁-C₃ алкилом или фенилзамещенным C₁-C₃ алкилом; R⁵ является водородом или C₁-C₃ алкилом; R⁶ является водородом, C₁-C₁₀ алкилом, C₃-C₁₀ алкенилом, циклоалкилом, фенилциклоалкилзамещенным C₁-C₃ алкилом, C₅-C₈ циклоалкенилом, C₅-C₈ циклоалкенилзамещенным C₁-C₃ алкилом, фенилзамещенным C₁-C₃ алкилом или (CH₂)_q-B; или R⁵ и R⁶ вместе с N образуют насыщенное неароматическое 4-6-членное гетероциклическое кольцо; B представляет собой или NR⁷R⁸; R⁷ является водородом или C₁-C₃ алкилом; R⁸ является водородом, C₁-C₁₀ алкилом, C₃-C₁₀ алкенилом, циклоалкилзамещенным C₁-C₃ алкилом, циклоалкилом, C₅-C₈ циклоалкенилом, C₅-C₈ циклоалкенилзамещенным C₁-C₃ алкилом, фенилом или фенилзамещенным C₁-C₃ алкилом; или R⁷ и R⁸ вместе с N образуют насыщенное неароматическое 4-6-членное гетероциклическое кольцо; W представляет собой OR⁹M, MR¹⁰R¹¹ или OE; R⁹ является водородом, C₁-C₁₀ алкилом, C₂-C₁₀ алкенилом, циклоалкилом, C₅-C₈ циклоалкенилом, циклоалкилзамещенным C₁-C₃ алкилом, C₅-C₈ циклоалкенилзамещенным C₁-C₃ алкилом или фенилзамещенным C₁-C₃ алкилом; R¹⁰ является водородом или C₁-C₃ алкилом; R¹¹ является водородом, C₁-C₁₀ алкилом, C₃-C₁₀ алкенилом, фенилом, циклоалкилом, C₅-C₈ циклоалкенилом, циклоалкилзамещенным C₁-C₃ алкилом, фенилзамещенным C₁-C₃ алкилом или ; или R¹⁰ и R¹¹ вместе с N образуют насыщенное неароматическое 4-6-членное гетероциклическое кольцо; E является или R¹² является C₁-C₃ алкилзамещенным метиленом, R¹³ является C₁-C₁₀ алкилом; D представляет собой OR¹⁴ или NR¹⁵R¹⁶; R¹⁴ является водородом, C₁-C₁₀ алкилом, C₂-C₁₀ алкенилом, циклоалкилом, C₅-C₈ циклоалкенилом, циклоалкилзамещенным C₁-C₃ алкилом или C₅-C₈-циклоалкенилзамещенным C₁-C₃ алкилом или фенилзамещенным C₁-C₃ алкилом; R¹⁵ является водородом, C₁-C₁₀ алкилом, C₃-C₁₀ алкенилом, фенилом, фенилзамещенным C₁-C₃ алкилом, циклоалкилом, C₅-C₈-циклоалкенил, циклоалкилзамещенным C₁-C₃ алкилом или C₅-C₈ циклоалкенилзамещенным C₁-C₃ алкилом и R¹⁶ является водородом или C₁-C₃ алкилом; или R¹⁵ и R¹⁶ вместе с N образуют насыщенное неароматическое 4-6-членное тетроциклическое кольцо; Y является OR¹⁷ или NR¹⁸R¹⁹; R¹⁷ является водородом, C₁-C₁₀ алкилом, C₂-C₁₀ алкенилом, циклоалкилом, C₅-C₈ циклоалкенилом, циклоалкилзамещенным C₁-C₃ алкилом, C₅-C₈ циклоалкенилзамещенным C₁-C₃ алкилом или фенилзамещенным C₁-C₃ алкилом; R¹⁸ является водородом или C₁-C₃ алкилом и R¹⁹ является водородом, C₁-C₁₀ алкилом, C₃-C₁₀ алкенилом, фенилом, циклоалкилом, C₅-C₈ циклоалкенилом, циклоалкилзамещенным C₁-C₃ алкилом, C₅-C₈ циклоалкенилзамещенным C₁-C₃ алкилом или фенилзамещенным C₁-C₃ алкилом; или R¹⁸ и R¹⁹ вместе с N образуют насыщенное неароматическое 4-6-членное гетероциклическое кольцо; q равняется 1-4; m равняется 1-4.

Заместитель "A" описывается в патенте США 5250542.

Реакция гидролиза может быть завершена при использовании известных методик кислотного гидролиза. Примером одного из таких методов кислотного гидролиза является действие водного раствора кислоты в диоксане в условиях дефлегмирования. Более предпочтительным является проведение реакции гидролиза с использованием условий омыления с тем, чтобы избежать эпимеризации. Примерами омыляющих реагентов являются гидроокись лития, гидроокись натрия, гидроокись калия и т.п.

Продукт реакции гидролиза (карбоксилатная соль) подвергают регулированию до изоэлектрической точки аминокислоты, используя водную кислоту для получения амфотерного соединения 17. Кристаллизация моногидрата 17 должна быть завершена с использованием 50-75% низшего спирта и 50-25% воды.

Таблица II иллюстрирует критическую зависимость кристаллизации от приблизительного состава растворителя 1:1 для низшего спирта и воды. Выражение "смоляной ком" относится к коагуляции липкого полутвердого продукта в аморфную массу.

Как это проиллюстрировано в схеме 2, продукт 17 может быть непосредственно использован в этапе амидирования/эстерификации. Когда требуется амидирование, должна быть выбрана аминокислота с целью образования необходимых соединений формул 18 и 18a. Аминокислота подвергается действию глицинового эфира в растворителе, таком как диметилформамид или тетрагидрофуран.

В качестве сопряженного реагента используется дициклогексилкарбодиимид. В качестве вспомогательного нуклеофильного вещества добавляется N-гидроксибензотриазол. Реакция сопряжения может осуществляться в инертных условиях. Более предпочтительным является использование в качестве растворителя тетрагидрофурана в реакции пептидного сопряжения. Специалисту понятно, что могут быть эффективно использованы также и другие способы пепидного сопряжения.

Или же кристаллическая соль соединения 19 СО (свободное основание) может быть получена, как это иллюстрируется в схеме 2. Были проведены исследования по кристаллизации с использованием 17 различных кислот с тремя растворителями: этилацетат, ацетон и этанол. Из этих 51 экспериментов только L-яблочная и хлористоводородная кислоты дали кристаллические соли, стабильные при 25^oC.

Кристаллическая хлористоводородная соль получается контактированием 19 CO с безводной HCl в ацетоне. Капиллярный газохроматографический анализ показал, что соль образуется в виде моносольвата в ацетоне. Эта единственная моносольватная кристаллическая форма позволяет выделить соединение 19 в существенно чистом виде. Контактирование соединения 19 CO с безводным HCl в других растворителях дает аморфное твердое вещество без существенной очистки.

Заявители открыли, что соль L-яблочной кислоты может быть получена в виде стабильного кристаллического твердого вещества, имеющего два отношения 19 CO по отношению к L-яблочной кислоте в зависимости от растворителя кристаллизации. В том случае, когда кристаллизация осуществляется в растворителях, таких как метилэтилкетон, ацетон, ацетон/т-бутилметиловый эфир или ацетон/гептан была установлена предполагаемая стехиометрия 1:1 в 19 CO по отношению к L-яблочной кислоте. Однако, когда кристаллизация проводится в системе растворителей ацетон/этилацетат, ацетон/толуол или этанол/толуол, кристаллическая соль дает единственное стехиометрическое отношение 3:2 L-яблочной кислоты по отношению к 19 CO (полуторный малат). Такой результат является отчасти неожиданным, когда полуторный малат получается даже при отношении 1: 1 яблочной кислоты и 19 СО в определенных растворителях. Действительно, когда соединяются эквимолярные количества L-яблочной кислоты и 19 СО в растворителе или системе растворителей, образующих полуторный малат, этот полуторный малат является единственной солью, образованной с выходом около 67% в массовом равновесии 19 CO в маточном растворе. Конечно специалист ожидает, что отношение составит 1:1. Кроме того, кристаллизация полуторомалатной соли в "необразующем полуторомалата" растворителе или системах растворителей дает только кристаллическая мономалатная соль с выходом, близким к количественному, при этом избыток L-яблочной кислоты остается в маточной жидкости.

Кристаллизация полуторомалатной соли дает продукт фармацевтически приемлемой чистоты при высоком выходе, и этот продукт состоит из кристаллов с веской равномерностью кристаллической формы и величиной кристаллов. Гидрохлоридные и полуторомалатные соли могут быть использованы в качестве пролекарства, так как изобутиловый эфир легко расщепляется in vivo.

Кислотами, которые не образуют кристаллических солей, стабильных при 25^oC, являются HBr, H₂SO₄, гиппуровая, d-винная, l-винная, малоновая, янтарная, уксусная, арабаскориновая, аскорбиновая, лимонная, бензойная, молочная, (S)-(+)-миндальная и (R)-(-)-миндальная кислоты.

Продукт реакции амидирования/эстерификации или солевые формы могут быть гидролизованы с использованием стандартных методик. Предпочтительно используются методы основного гидролиза. Предпочтительными реагентами омыления являются гидроокись натрия, гидроокись калия, гидроокись лития и т.п. Наиболее предпочтительным является осуществление этапа омыления с использованием гидроокиси натрия и растворителя. Особенно предпочтительными растворителями (1:1) являются метанол:вода и (2:1) этанол:вода. Реакция прекращается при использовании кислоты, такой как хлористоводородная кислота. После нейтрализации (pH 6) твердый кристаллический дигидратный продукт 18 выделяется непосредственно фильтрацией. Выделенный продукт 18 обладает фармацевтически приемлемой чистотой без последующих этапов очистки.

Особенно ценным является дигидрат 18, так как это соединение является стабильным кристаллическим твердым веществом с равномерной кристаллической формой и размером частиц, что обеспечивает воспроизводимые скорости растворения, оно характеризуется фармацевтически желаемыми качествами.

Соединения формул 4 и 5, приведенных выше, используются для блокирования периферических опиодных рецепторов и для предотвращения периферических индуцированных препаратами опия побочных эффектов. Эти побочные эффекты индуцируются приемом млекопитающим препарата опия, такого как морфин. Индуцированные препаратом опия побочные эффекты могут включать запор, тошноту и рвоту. Таким образом, соединения данного изобретения используются для лечения одного или нескольких индуцированных препаратами опия побочных эффектов. Эти соединения могут использоваться также для лечения синдрома болезненной раздражимости кишечника, неязвенной диспепсии и идиопатического запора. Эти соединения незначительно преодолевают гематоэнцефалический барьер и поэтому не снижают опиодного эффекта на центральные (мозговые и позвоночных тяжей) опиодные рецепторы. Следовательно, эти характеристики показывают, что соединения свободны в основном от других центральных промежуточных эффектов.

Для того, чтобы определить in vivo антагонизм опиодного рецептора, была использована мышь, находящаяся под воздействием анальгезиса. Испытуемые соединения оценивались по их способности к блокированию индуцированной морфином анальгезии.

Пять мышей мужской особи CF-1 (Charles River, Portage, MI), весом приблизительно в 20 г, после голодания в течение ночи подвергались одновременно наблюдениям с точки зрения реакции на сокращение. Ответ на сокращение определялся как сокращение брюшной мускулатуры, за которым следует вытяжение задних конечностей, и индуцировался внутрибрюшным приемом 0,6% уксусной кислоты в объеме 1 мл/100 г веса тела. Период наблюдения длился 10 минут, начиная с 5-и минут после инъекции уксусной кислоты. Процент торможения сокращения высчитывался, исходя из среднего числа сокращений в контрольной (не подвергнутой лекарственному воздействию) группе. ED₅₀ определялась как доза вещества-агониста, имеющего ингибирующее значение на сокращение 50%. AD₅₀ определялась как доза антагониста, которая снижает ингибирование сокращения, создаваемое дозой сульфата морфина 1,25 мг/кг, до 50%. Каждая мышь подвергалась испытанию только один раз. Все лекарственные препараты вводились подкожно (1 мл/100 г веса) за 20 минут до инъекции уксусной кислоты.

Проводились определения периферической опиодной активности. Мыши выдерживались как минимум в течение 10 дней на 0.01 М сахариновой воде, содержащей 1 г/л сульфата морфина при среднем потреблении 3,0 г воды на мышь в день в течение по крайней мере 3 дней. Морфиновая вода удалялась за 45 минут до инъекции предполагаемого опиодного антагониста.

После приема опиодного антагониста мыши помещались в пластмассовые цилиндры, дно которых было выстлано белыми бумажными полотенцами.

Мыши подвергались визуальному наблюдению в течение 30 минут после инъекции - на наличие подергивания и поноса.

Подергивание расценивалось как позитивное, если происходило по крайней мере одно подергивание в 30 минут. Понос расценивался положительно, когда экскременты были достаточно влажными и оставляли пятна на белой бумаге, выстилающей дно цилиндра. Через 30 минут испытаний мыши возвращались в свои первоначальные клетки, снова сажались на морфиновую воду и не подвергались повторным испытаниям в течение 48 часов. Были испытаны более низкие дозы соединений антагонистов, пока не были определены пороговые дозы поноса. Понос представляет собой периферически усредненное значение стремительного, вызванного препаратом опия воздержания.

Степень воздействия на периферическую активность представленных соединений по сравнению с воздействием на центральную активность может быть определена сравнением AD₅₀ для мыши, подвергшейся испытанию на сокращение, с ED₅₀ для мыши, подвергшейся испытанию на понос. При более высоком отношении наблюдается более высокий относительный антагонизм периферических опиодных рецепторов, обусловленный конкретным соединением.

Значения AD₅₀ для соединений данного изобретения составляют свыше 8 мг/кг, в то время как значения ED₅₀ составляют ниже 1.

Кроме того, было установлено, что соединения формул 5 и 4, приведенные выше, показывают прекрасную активность в анализе связывания опиодного рецептора, которая оценивается сродством соединений к связыванию Мю-рецепторов. Этот анализ проводился в соответствии со следующей методикой.

Мужские особи крыс Spraque Dawley были умерщвлены обезглавливанием и их мозг был извлечен. Мозговая ткань с выделенным мозжечком гомогенизировалась в тефлоне и в стеклянном гомогенизаторе для тканей. Всплывшая 1, шариковая IV фракция была заморожена в азотном замораживателе при концентрации 1,33 г/мл и хранилась до использования не более пяти недель.

Увелививающиеся концентрации экспериментального соединения (от 0,1 до 1000 наномол (нМ)), буфер Krebs-Hepes pH 7,4 и тритиевый налоксон (0,5 нМ) (³H лиганд) помещались в полистирольные пробирки при комнатной температуре.

Реакция инициировалась добавлением ресуспензированной ткани, которая была предварительно термостатирована при 37^oC в течение 20 минут. Реакционная смесь термостатировалась при 37^oC на водяной бане в течение 20 минут. Реакция заканчивалась быстрой фильтрацией (Brandel cell harvester) через стеклянные фильтры Wratman GF/B, которые были предварительно пропитаны буфером Krebs-Hepes с pH 7,4. Затем фильтры промывались 2 раза 5 мл ледяного буфера Krebs-Hepes с pH 7,4. Промытые фильтры помещались в сцинциляционные ампулы, было добавлено 10 мл (Brandel) и образцы подвергались обсчету на бета-счетчике Searle D-300. Время термостатирования реакционной смеси составляло 20 минут при 37^oC. Значения K_j и K_D рассчитывались с использованием стандартных методик.

Соединения данного изобретения выявляют высокие значения желаемой активности. Значение процента замещения испытуемыми соединениями при концентрации 10 нМ было выше 75% и свыше 80% при 100 нМ. Это особенно желательно в свете значений AD₅₀ и ED₅₀, приведенных выше. Результаты показывают, что соединения данного изобретения характеризуются благоприятной активностью для использования их в лечении синдрома раздражимости кишечника и условий, относящихся к связыванию мю рецепторов.

Хотя и возможен прием соединения данного изобретения непосредственно без каких-либо составов, предпочтительно использование таких соединений в виде фармацевтических композиций, включающих фармацевтически приемлемый наполнитель и по крайней мере одно из соединений изобретения. Эффективный интервал дозировок соединений данного изобретения достаточно широк. Так, эти композиции содержат приблизительно от 0,1 процента по весу до 90,0 процентов по весу заявленных здесь соединений. Само по себе, представленное изобретение предоставляет также фармацевтические композиции, включающие соединение данного изобретения с фармацевтически приемлемым наполнителем.

При приготовлении композиций данного изобретения активный ингредиент обычно смешивается с наполнителем, который может быть носителем или разбавителем, или может быть разбавлен носителем, или включен в носитель, который может представлять собой капсулу, пакетный, бумажный или другой контейнер. В том случае, когда носитель служит в качестве разбавителя, он может быть твердым, полутвердым или жидким веществом, служащим связующим, наполнителем или средой для активного ингредиента. Таким образом, композиции могут иметь вид таблеток, пилюль, порошков, лепешек, пакетиков, облаток, элексиров, эмульсий, растворов, сиропов, суспензий, аэрозолей (как в твердой, так и в жидкой среде), суппозиториев, мягких и твердых желатиновых капсул.

Соединения данного изобретения могут вводиться трансдермально, если это желательно. Специалисту хорошо известны трансдермальные усилители проницаемости и доставляющие системы, включающие аппликации и т.п.

Примерами соответствующих носителей, наполнителей и разбавителей являются лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, маннит, крахмалы, аравийская камедь, фосфат кальция, альгинаты, силикат кальция, микрокристаллическая целлюлоза, поливинилпирролидон, целлюлоза, трагакант, желатин, сироп, метилцеллюлоза, метил- и пропилгидроксибензоаты, тальк, стеарат магния, вода и минеральное масло. Композиции могут включать также увлажняющие агенты, эмульгирующие и суспендирующие агенты, консервирующие агенты, подслащивающие вещества или облагораживающие агенты. Композиции изобретения могут быть приготовлены как для быстрого, так и отложенного или замедленного выделения активного компонента после приема его пациентом - применением хорошо известных специалисту приемов.

Композиции данного изобретения могут вводиться трансдермально с использованием известных трансдермальных поставляющих систем и наполнителей. Более предпочтительным является смешение соединения данного изобретения с усилителями проницаемости, включающими, но не ограниченными пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, монолаурат и азациклоалкан-2-оны и с включенными в аппликацию аналогичными поставляющими системами. Дополнительными наполнителями являются желатинирующие агенты, эмульгаторы и буферные вещества, которые могут быть добавлены в случае необходимости в трансдермальную композицию.

Для орального приема соединения данного изобретения могут быть в идеальном случае смешаны с носителями и разбавителями и сплавлены в таблетки или помещены в желатиновые капсулы. Соединения данного изобретения могут быть приготовлены в виде микрочастиц или микрошариков. Микрочастицы могут быть приготовлены с использованием полигликолида, полилактида или других полимеров для облегчения непрерывного выделения активного соединения или пролекарства.

Композиции готовятся предпочтительно в единичной дозированной форме, при этом каждая дозировка содержит приблизительно от 1 до 500 мг, более предпочтительно от 5 до 300 мг активного ингредиента. Другой предпочтительный интервал составляет приблизительно от 0,5 мг до 60 мг активного ингредиента на единичную дозированную форму. Термин "единичная дозированная форма" относится к физическим дискретным единицам, подходящим в качестве стандартных дозированных форм для человека и других млекопитающих, при этом каждая единица содержит предварительно определенное количество активного вещества, рассчитанная для обеспечения желаемого терапевтического эффекта в сочетании с соответствующим фармацевтическим носителем.

Специалисту понятно, что соединения данного изобретения могут быть составлены с применением других известных лекарственных препаратов. Такие составляющие могут сообщать синергический терапевтический эффект. Например, антацид может быть соединен с соединениями данного изобретения для создания желаемого желудочно-кишечного эффекта.

Для более полной иллюстрации действия данного изобретения ниже приводятся примеры составов. Примеры только иллюстрируют, но не ограничивают объем изобретения. Композиции могут использовать в качестве активных соединений любые соединения данного изобретения (композиции 1-6 см. в конце описания).

В композиции 1 ингредиенты смешиваются и помещаются в твердую желатиновую капсулу в количестве 460 мг.

В композиции 2 активный ингредиент, целлюлоза, крахмал и стеарат магния смешиваются, пропускаются через сита США с размером N 45 меш и помещаются в твердую желатиновую капсулу.

В композиции 3 ингредиенты тщательно перемешиваются и помещаются в пустую желатиновую капсулу.

В композиции 4 активный ингредиент, крахмал и целлюлоза пропускаются через сито США размером отверстий 45 меш и тщательно перемешиваются. С образующимся порошком смешивается раствор поливинилпирролидона, после чего смесь пропускается через сито США с размером отверстий 14 меш. Полученные таким образом гранулы сушатся при 50-60^oC и пропускаются через сита США в 18 меш. Натрий карбоксиметил крахмал, стеарат магния и тальк, предварительно пропущенные через сито США с отверстиями в 60 меш, затем добавляются к гранулам, которые после смешения прессуются на таблетирующей машине с получением таблеток весом 100 мг.

В композиции 5 компоненты смешиваются и прессуются в виде таблеток весом 665 мг.

В композиции 6 все твердые ингредиенты пропускают через сито. Полиэтиленгликоль расплавляют и поддерживают в расплавленном состоянии. Лекарственный препарат помещают в расплавленное связующее. Сплавленная гомогенная суспензия помещается в твердую желатиновую капсулу соответствующего веса или объема с использованием подходящего для наполнения маслообразной пасты оборудования.

Капсулы, содержащие 6 мг активного вещества, могут быть приготовлены точно, как описано выше; однако количество дигидратного соединения должно быть снижено до 6,6 мг на капсулу. Капсулы, содержащие 0,6 мг активного вещества, могут быть приготовлены, как описано выше; однако количество дигидрата должно быть снижено до 0,66 мг с 200 мг полиэтиленгликоля на капсулу.

Промежуточные соединения и способы, соответствующие данному изобретению, могут использоваться для получения соединений, характеризующихся успешной периферической опиодной антагонистической активностью. В объеме данного изобретения предлагаются определенные соединения и условия. Следующие далее условия осуществления изобретения и характеристики соединений, приведенные в виде таблицы, независимо могут комбинироваться для создания множества предлагаемых соединений и условий способа. Следующий далее перечень осуществлений данного изобретения не имеет в виду каким-либо образом ограничить объем данного изобретения.

A) Кристаллическое соединение 2 представляет собой метиленовый сложный эфир.

B) Кристаллическое соединение 2 представляет собой ( S,3R,4R)-3-[[4-(3-гидроксифенил)-3,4-диметил- -(фенилметил)-1-пиперидинпропионовую кислоту, гидрохлорид.

C) Кристаллическое соединение 2 представляет со