8-фторантрациклины, способы их получения и содержащие их фармацевтические композиции

8-фторантрациклины, способы их получения и содержащие их фармацевтические композиции

Реферат

 

Описаны новые 8-фторантрациклины формулы I, где R = Н; R₁=Н; OCH₃; R₂= Н, NH₂; R₃= ОН, NН₂; символ означает, что заместители R₂, R₃ могут находиться в осевой или экваториальной конфигурации, и группы 8-F и 9-ОН находятся в положении цис; или их фармацевтически приемлемые соли. Они проявляют необычайно высокую противоопухолевую активность. Описаны также способ получения заявленных соединений и содержащие их фармацевтические композиции. 5 с. и 1 з.п.ф-лы, 2 табл.

Описаны гликозидные производные 8-фрорантрациклинона общей формулы (1): где R выбран из группы, состоящей из H, ОН, OR₄, где R₄ выбран из группы, состоящей из CHO, COCH₃, ацильного производного, содержащего до 6 углеродных атомов; R₁ выбран из группы, состоящей из H, OH, OCH₃; R₂ выбран из группы, состоящей из H, OH, NH₂; R₃ выбран из группы, состоящей из H, OH, NH₂, остатка формулы (А) где R₅ и R₆, одинаковые или разные, выбраны из группы, состоящей из H, OH, NH₂, и символ означает, что заместители R₂, R₃, R₅ и R₆ могут находиться в осевой или экваториальной конфигурации; и где группы 8-F и 9-OH находятся в положении цис; их фармацевтически приемлемые соли, способы их получения и содержащие их фармацевтические композиции.

Уровень техники Даунорубицин (дауномицин) и 4-деметоксидаунорубицин (идарубицин) и их производные, содержащие гидроксилированную боковую цепь (доксорубицин), являются гликозидами, обладающими хорошо известными противоопухолевыми свойствами; их получение и применение уже описаны (F. Arcamone "Doxorubicin: Anticancer Аntibiotics" Medinal Chemistry Series Vol. 17, Academic press, 1981).

8-фторантрациклины - это класс антрациклинов, уже известных (см., например, ЕР-А-0436474; ЕР-А-0457215; WO 95/09173) их более высокими активностью и избирательностью по сравнению с соответствующими нефторированными соединениями.

Теперь неожиданно обнаружено (и это является объектом настоящей заявки), что когда два заместителя 8-F и 9-ОН имеют цис-стереохимию, то соответствующие производные необычайно более активны, в частности в отношении опухолевых клеток, стойких к уже известным соединениям.

Подробное описание изобретения В соответствии с настоящим изобретением предлагаются гликозидные производные 8-фторантрациклинона общей формулы где R выбран из группы, состоящей из H, OH, OR₄, где R₄ выбран из группы, состоящей из CHO, COCH₃, ацильного производного, содержащего до 6 углеродных атомов; R₁ выбран из группы, состоящей из H, OH, OCH₃; R₂ выбран из группы, состоящей из H, OH, NH₂; R₃ выбран из группы, состоящей из H, OH, NH₂, остатка формулы (А) где R₅ и R₆, одинаковые или разные, выбраны из группы, состоящей из H, OH, NH₂ и символ означает, что заместители R₂, R₃, R₅ и R₆ могут находиться в осевой или экваториальной конфигурации; и где группы 8-F и 9-ОН находятся в положении цис; их фармацевтически приемлемые соли, способы их получения и содержащие их фармацевтические композиции.

Более конкретно, в соответствии с настоящим изобретением предлагаются следующие соединения: 1) 4-деметокси-8-(R)-фтордаунорубицин (1:R = R₁ = H; R₂ =NH₂; R₃ = OH), 2) 4-диметокси-8-(R)-фтор-3'-деамино-4'-деокси-4'- аминодаунорубицин (1: R = R₁ = R₂ = H; R₃ = NH₂), 3) З-деметокси-8-(R)-фтор-3'-деамино-4'-деокси-4'- эпиаминодаунорубицин (1:R= R₁ = R₂ = H; R₃ = NH₂), 4) 4-деметокси-8-(R)-фтор-4'-эпидаунорубицин (1:R = R₁ = H; R₂ = NH₂; R₃ = OH), 5) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(дауносаминилфукозил) даунорубицинон (1:R = R₁ = H; R₃ = A; R₂ = R₆ = OH; R₅ = NH₂), 6) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(дауносаминилрамнозил) даунорубицинон (1:R = R₁ = H; R₃ = А; R₂ = R₆ = OH; R₅ = NH₂), 7) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(2'', 3'', 4''-тридеокси-4''- аминоэзапиранозилфукозил)даунорубицинон (1:R = R₁ = R₅ = H; R₂ = A; R₂ = OH; R₆ = NH₂), 8) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(2'', 3'', 4''-тридеокси-4''- аминоэзапиранозилрамнозил)даунорубицинон (1:R = R₁ = R₅ = H; R₃ = a; R₂ = OH; R₆ = NH₂), 9) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(фукозил-4'-O-фукозил) даунорубицинон (1:R = R₁ = H; R₃ = А; R₂ = R₅ = R₆ = OH), 10) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(фукозил-4'-O-рамнозил) даунорубицинон (1:R = R₁ = H; R₃ = A; R₂ = R₅ = R₆ = OH), 11) 8-(R)-фтордаунорубицин (1:R = H; R₁ = OCH₃; R₂ = H₂; R₃ = OH), 12) 8-(R)-фтор-3'-деамино-4'-деокси-4'-аминодаунорубицин (1:R = R₂ = H; R₁ = OCH₃; R₃ = NH₂), 13) 8-(R)-фтор-3'-деамино-4'-деокси-4'-эпиаминодаунорубицин (1:R = R₂ = H; R₁ = OCH₃; R₃ = NH₂), 14) 8-(R)-фтор-4'-эпидаунорубицин (1: R = H; R₁ = OCH₃; R₂ = NH₂; R₃ = OH), 15) 8 -(R)-фтор-7-(дауносаминилфукозил)даунорубицинон (1: R = H; R₁ = OCH₃; R₃ = A; R₂ = R₆ = OH; R₅ = NH₂), 16) 8-(R)-фтор-7-(дауносаминилрамнозил)даунорубицинон (1: R = H; R₁ = OCH₃; R₃ = A; R₂ = R₆ = OH; R₅ = NH₂), 17) 8-(R)-фтор-7-(2'', 3'', 4''-тридеокси-4''- аминоэзапиранозилфукозил)даунорубицинон (1:R = R₅ = H; R₁ = OCH₃; R₃ = A; R₂ = OH; R₆ = NH₂), 18) 8-(R)-фтор-7-(2'', 3'', 4''-тридеокси-4''- аминоэзапиранозилрамнозил)даунорубицинон (1:R = R₅ = H; R₁ = OCH₃; R₃ = A; R₂ = OH; R₆ = NH₂), 19) 8-(R)-фтор-7-(фукозил-4'-O-фукозил)даунорубицинон (1: R = H; R₁ = OCH₃; R₃ = A; R₂ = R₅ = R₆ = OH); 20) 8-(R)-фтор-7-(фукозил-4'-О-рамнозил)даунорубицинон (1: R = H; R₁ = OCH₃; R₃ = А; R₂ = R₅ = R₆ = OH), 21) 4-деметокси-8-(R)-фтордоксорубицин и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₃ = OH; R₁ = H; R₂ = NH₂), 22) 4-деметокси-8-(R)-фтор-3'-деамино-4'-деокси-4'- аминодоксорубицин и его сложные эфиры по C-14 (1:R = PH; R₁ = R₂ = H; R₃ = NH₂), 23) 4-деметокси-8-(R)-фтор-3'-деамино-4'-деокси-4'- эпиаминодоксорубицин и его сложные эфиры по C-14 (1:R = OH; R₁ = R₂ = H; R₃ = NH₂), 24) 4-деметокси-8-(R)-фтор-4'-эпидоксорубицин и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₃ = OH; R₁ = H; R₂ = NH₂), 25) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(дауносаминилфукозил)доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = R₆ = OH; R₃ = A; R₁ = H; R₅ = NH₂), 26) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(дауносаминилрамнозил)доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = R₆ = OH; R₃ = А; R₁ = H; R₅ = NH₂), 27) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(2'',3'',4''-тридеокси-4''- аминоэзапиранозилфукозил)доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = OH; R₃ = А; R₁ = R₅ = H; R₆ = NH₂), 28) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(2'',3'',4''-тридеокси-4''- аминоэзапиранозилрамнозил)доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = OH; R₃ = А; R₁ = R₅ = H; R₆ = NH₂), 29) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(фукозил-4'-O-фукозил) доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = R₅ = R₆ = OH; R₃ = А; R₁ = H), 30) 4-деметокси-8-(R)-фтор-7-(фукозил-4'-O-рамнозил) доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = R₅ = R₆ = OH; R₃ = А; R₁ = H), 31) 8-(R)-фтордоксорубицин и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₃ = OH; R₁ = OCH₃; R₂ = NH₂), 32) 8-(R)-фтор-3'-деамино-4'-деокси-4'-аминодоксорубицин и его сложные эфиры по C-14 (1:R = PH; R₁ = OCH₃; R₂ = H; R₃ = NH₂), 33) 8-(R)-фтор-3'-деамино-4'-деокси-4'-эпиаминодоксорубицин и его сложные эфиры по C-14 (1:R = OH; R₁ = OCH₃; R₂ = H; R₃ = NH₂), 34) 8-(R)-фтор-4'-эпидоксорубицин и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₃ = OH; R₁ = OCH₃; R₂ =NH), 35) 8-(R)-фтор-7-(дауносаминилфукозил)доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = R₆ = OH; R₁ = OCH₃; R₃ = A; R₅ = NH₂), 36) 8-(R)-фтор-7-(дауносаминилрамнозил)доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = R₆ = OH; R₃ = А; R₁ = OCH₃; R₅ = NH₂), 37) 8-(R)-фтор-7-(2'', 3'', 4''- тридеокси-4''- аминоэзапиранозилфукозил)доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = OH; R₁ = OCH₃; R₃ = А; R₅ = H; R₆ = NH₂), 38) 8-(R)-фтор-7-(2'', 3'', 4''-тридеокси-4''- аминоэзапиранозилрамнозил)доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = OH; R₁ = OCH₃; R₃ = А; R₅ = H; R₆ = NH₂), 39) 8-(R)-фтор-7-(фукозил-4'-O-фукозил)доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = R₅ = R₆ = OH; R₃ = A; R₁ = OCH₃), 40) 8-(R)-фтор-7-(фукозил-4'-O-рамнозил)доксорубицинон и его сложные эфиры по C-14 (1:R = R₂ = R₅ = R₆ = OH; R₁ = OCH₃; R₃ = A).

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли получают способом, включающим следующие стадии.

Осуществляют конденсацию между 8-фторантрациклиноном формулы (II): где R₁ - такой, как указан выше, и соединением формулы (III) где X представляет уходящую группу, способную создавать (в условиях конденсации) устойчивый карбокатион, который может взаимодействовать с гидроксилом в положении С-7 соединения (II). Такую уходящую группу целесообразно выбирать из тех групп, которые используют в реакциях гликозидирования (например, галоген, пара-нитробензоилоксигруппа); R₇ представляет H или группу OH или NH₂, подходящим образом защищенную; R₈ представляет H или группу OH или NH, подходящим образом защищенную, или остаток формулы (III'): где R₉ и R₁₀, одинаковые или разные, выбраны из H, OH и NH₂, подходящим образом защищенных.

Группы OH защищают пара-нитробензоатом или аллилоксикарбонилом.

Группы NH₂ защищают аллилкарбоксиамидом или трифторацетамидом.

Символ означает, что заместители R₇, R₈, R₉, R₁₀ могут находиться в осевой и/или экваториальной конфигурации. Конденсация между соединениями (II) и (III) дает гликозид формулы (IV) Реакцию гликозидирования осуществляют в органическом растворителе в присутствии конденсирующего агента. Конденсирующими агентами являются, например, трифторметансульфат серебра, перхлорат серебра, смеси оксида или бромида ртути, галогенида бора, ионообменной смолы, такой как Амберлит.

Предпочтительно реакцию гликозидирования осуществляют с использованием инертного органического растворителя, такого как бензол, толуол, диэтиловый эфир, тетрагидрофуран, диоксан, хлороформ, метиленхлорид или дихлорэтан и их смеси.

Температуру реакции можно изменять в пределах между -40^oC и 40^oC, предпочтительно между -20^oC и 20^oC, а необходимое для реакции время может колебаться между 5 минутами и 2 часами.

В реакционной смеси может присутствовать обезвоживающее средство, такое как активированные молекулярные сита.

Во время реакции или в ее конце к реакционной смеси может быть добавлено органическое основание, такое как пиридин, коллидин, триэтиламин.

Удаление защитных групп с групп OH и/или NH₂ в соединениях формулы (IV), чтобы получить целевые соединения формулы (I), можно изменять в соответствии с использованной защитной группой.

Когда R₇ и/или R₈, и/или R₉, и/или R₁₀ (одинаковые или разные) представляют группу NH₂, защищенную трифторацетамидом, и/или группу OH, защищенную пара-нитробензоатом, то реакцию удаления защиты осуществляют в полярном растворителе, таком как вода, метанол, этанол, пиридин, диметилформамид или их смеси, в присутствии стехиометрического или избыточного количества неорганического основания, такого как NaOH, KOH, LiOH, Ba(OH)₂ и их карбонаты. Температура реакции может колебаться в пределах от 0^oC до 50^oC, а время реакции - от 3 часов до 3 дней.

Когда R₇ и/или R₈, и/или R₉, и/или R₁₀ (одинаковые или разные) представляют группу NH₂, защищенную аллилкарбоксиамидом, и/или группу OH, защищенную аллилоксикарбонатом, то реакцию удаления защиты осуществляют в инертном растворителе и в присутствии металлического комплекса, такого как (тетракистрифенилфосфин) палладий, как описано, например, в Tetrahedron Letters, 30 (1989), 3773, или (тетракарбонил)никель, как описано, например, в J. Org. Chem. 38 (1973) 3233.

При желании соединения формулы (I), где R₁, R₂ и R₃ - такие, как указаны выше, и R представляет группу OH, могут быть получены из гликозидов формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей, где R₁, R₂ и R₃ и символ - такие, как указаны выше, и R представляет H путем бромирования атома углерода в положении 14 бромом в хлороформе с последующим гидролизом полученных описанным образом 14-бромпроизводных с формиатом натрия при комнатной температуре в течение 48 часов.

Тот же самый продукт может быть получен также путем бромирования атома углерода в положении 14 (в соответствии с описанной выше процедурой) агликона формулы (II), где R₁ - такой, как указан выше, и R представляет H. Это соединение после гидролиза, которое преобразует R в группе OH, гликозилируют соединением формулы (III), определенным выше, путем осуществления такой, как описана выше, реакции гликозидирования для получения целевого продукта.

Если это является предпочтительным, гликозиды формулы (I) могут быть преобразованы в соответствующие фармацевтически приемлемые соли, например гидрохлориды, путем обработки хлороводородной кислотой в метаноле.

Другими объектами данной заявки являются 8-фторантрациклиноны формулы (II), где группы 8-F и 9-OH находятся взаимно в положении цис и где R и R₁ - такие, как указаны выше, и способ их получения.

Способ проиллюстрирован в схеме, приведенной в конце описания.

Первой стадией является бромфторирование аллилового спирта формулы (V), где R₁ - такой, как указан выше, для получения соединения формулы (VI).

Бромфторирование соединения (V) может быть осуществлено разными способами, описанными в литературе (например, Cazz. Chim. It. 121 (1991) 537-545; J.O.C. 58 (1993) 2791-2796), для бромфторирования алкенов.

Второй стадией является образование эпоксида из бромидрина (VI) для получения соединения формулы (VII), где R₁ - такой, как указан выше. Реакция может быть осуществлена с использованием сильного основания в соответствии с известными способами, описанными в литературе в связи с этим типом реакции.

Третьей стадией является раскрытие эпоксидного цикла для получения продукта формулы (VII), где R₁ - такой, как указан выше. Способы осуществления реакции в этом случае тоже описаны в литературе, относящейся к раскрытию эпоксидного цикла с получением диола путем кислотного катализа, предпочтительно в смесях воды, минеральных кислот и инертных органических растворителей.

Четвертой стадией является реакция окисления диола (VIII) в гидроксикетон формулы (IX). Реакция окисления может быть осуществлена в соответствии с известными способами. Предпочтительными являются способы, включающие использование диметилсульфоксида, как, например, реакция Моффата и тому подобное, или комплексов пиридин-хром, как, например, хлорхромат пиридиния.

Последней стадией является преобразование фторгидроксикетона формулы (IX) в соединение формулы (II). Это может быть осуществлено известными методами, как, например, бромирование и сольволиз, при необходимости с возможной защитой кетогруппы (Can. J. Chem. 49 (1973) 2712; J.A.C.S. 98 (1976) 1969; J.A.C.S. 98 (1976) 1967).

Настоящее изобретение касается также фармацевтических композиций, содержащих в качестве активного начала антрациклингликозид формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.

Терапевтически активное количество соединения по настоящему изобретению (2-200 мг/м² поверхности тела, или 0,05-0,5 мг/кг массы тела, если продукт вводят внутривенно, или 10-200 мг/м² поверхности тела или 0,25-5 мг/кг массы тела в случае перорального введения) смешивают с инертным носителем. Могут быть использованы традиционные носители и композицию изготавливают известными методами.

Предпочтительными являются композиции, пригодные для внутривенного или перорального введения.

Соединения по настоящему изобретению полезны в лечении людей и животных. В частности, соединения по настоящему изобретению полезны в качестве противоопухолевых средств для введения терапевтически активных количеств соединения пациенту, проходящему лечение.

В частности, соединения проявили необычайную активность против плотных опухолей (например, опухоль яичника, молочной железы, легкого, матки), а также против тех, которые проявили стойкость к известным, обычно используемым противоопухолевым средствам.

Для лучшей иллюстрации (но без цели ограничения) изобретения даны следующие примеры.

Пример I.

9-(1'-Гидроксиэтил)-7,10-дигидро-6,11-дигидрокси-8- фтор-9-бром-5,1-нафтацендион (VI), R₁ = H) К суспензии 9-(1'-гидроксиэтил)-7,10-дигидро-6,11- дигидрокси-5,12-нафтацендиона ((V), R₁ = H) (9,4 г, 28 ммоль) в метиленхлориде (900 мл)э добавляли с перемешиванием при -5^oC раствор дигидротрифторида тетрабутиламмония (18,4 г при 55%, 33,6 ммоль) в метиленхлориде, после чего добавляли также при -5^oC (при этом реактор держали в темноте) N-бромсукцинимид (6,0 г, 33,6 ммоль). Реакция длилась 5 часов. Большее время реакции не дает увеличения выхода. Добавляли 10%-ный раствор NaHCO₃ до получения нейтрального pH. Органическую фазу сушили на Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали. Остаток очищали путем флэш-хроматографии с использованием CHCl₃ в качестве элюента.

Было получено 3,6 г (выход 29%) соединения (VI) (R₁ = H).

ЯМР (CDCl₃, ): 1,45 (3H, д); 3,0-3,5 (2H, кв); 3,2-3,4 (2H, кв); 3,93 (1H, м); 5,4-5,6 (1H, д); 7,90 (2H, м); 8,30 (2H, м); 13,36 (1H, с); 13,46 (1H, с).

Аналогичным образом был получен 4-метокси-9-(1'-гидроксиэтил)-7,10-дигидро-6,11-дигидрокси-8-фтор-9- бром-5,12-нафтацендион ((VI), R₁ = OCH₃).

Пример II 9-(9-1'-Эпоксиэтил)-7,10-дигидро-6,11-дигидрокси-8-фтор-5,12- нафтацендион ((VII), R₁ = H) Раствор 9-(1'-гидроксиэтил)-7,10-дигидро-6,11-дигидрокси-8- фтор-9-бром-5,12-нафтацендиона (3,6 г, 8,3 ммоль), полученный в соответствии с примером I, в 5%-ной NaOH (16 мл) оставляли перемешиваться на 2 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь обрабатывали 1 н. раствором HCl и продукт экстрагировали CHCl₃; органическую фазу сушили на Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали. Полученный остаток очищали путем флэш-хроматографии с использованием CHCl₃ в качестве элюента. Получили 1,6 г (выход 57%) указанного в заголовке соединения.

ЯМР (CDCl₃, ): 1,4 (3H, д); 2,62-3,48 (2H, кв); 2,9-3,1 (2H, кв); 3,26-3,68 (2H, м); 3,10 (1H, м); 4,80-4,96 (1H, д); 7,80 (2H, м); 8,40 (2H, м); 13,35 (1H, с); 14,42 (1H, с).

Аналогичным образом был получен 4-метокси-9-(9-1'-эпоксиэтил) -7,10-дигидро-6,11-дигидрокси-8-фтор-5,12-нафтацендион ((VII), R₁ = OCH₃).

Пример III 9-(1'-Гидроксиэтил)-7,10-дигидро-6,9,11-тригидрокси-8-фтор- 5,12-нафтацендион ((VIII), R₁ = H) К раствору 9-(9-1'-эпоксиэтил)-7,10-дигидро-8,11-дигидрокси-8- фтор-5,12-нафтацендиона (1,8 г, 4,7 ммоль), полученному в соответствии с примером II, в диоксане (700 мл) добавляли H₂O (700 мл) и затем, держа реактор в бане при 0^oC, медленно капали в полученную смесь олеум. Закончив добавление олеума, давали температуре подняться до комнатной и перемешивали раствор в течение 6 часов. Добавляли к смеси NaHCO₃ до получения нейтрального pH и продукт экстрагировали CH₂Cl₂. Органическую фазу, высушенную на Na₂SO₃, выпаривали. В результате получили указанный в заголовке продукт (1,7 г, выход 100%).

ЯМР (CDCl₃, ): 1,40 (3H, д); 2,8-3,1 (2H, кв); 3,0-3,3 (2H, кв); 4,05 (2H, кв); 5,0-5,2 (1H, кв); 7,80 (2H, м); 8,30 (2H, м); 13,30 (1H, с); 13,22 (1H, с).

Аналогичным образом был получен 4-метокси-9-(1'-гидроксиэтил) -7,10-дигидро-6,9,11-тригидрокси-8-фтор-5,12-нафтацендион ((VIII), R₁ = OCH₃).

Пример IV 9-Ацетил-8(8H)-фтор-7,10-дигидро-6,9, 11-тригидрокси-5,12- нафтацендион ((IX), R₁ = H).

9-(1'-Гидроксиэтил)-7,10-дигидро-6,9,11-тригидрокси-8-фтор- 5,12-нафтацендион (1,7 г, 4,7 ммоль), полученный в соответствии с примером III, в безводных условиях растворяли в ДМСО (90 мл), после чего к раствору добавляли смесь пиридина (1,14 мл, 14,1 ммоль) и трифторуксусной кислоты 0,83 мл, 10,8 ммоль) в ДМСО (16 мл). К смеси добавляли уксусный ангидрид (4,44 мл, 47 ммоль) и раствор оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 часов. Затем к раствору добавляли H₂O, в результате чего в осадок выпадал целевой продукт.

Путем экстрагирования посредством CHCl₃ извлекали все еще, возможно, присутствующий в растворе дополнительный продукт. Полученный указанным образом продукт очищали путем флэш-хроматографии с использованием CHCl₃ в качестве элюента. В результате получили указанное в заголовке соединение (1,2 г, выход 70%).

ЯМР (CDCl₃, ): 2,48 (3H, с); 3,18 (2H, с); 3,1-3,6 (2H, м); 3,90 (1H, с); 5,2-5,4 (1H, с); 7,82 (2H, м); 8,38 (2H, м); 13,34 (1H, с); 13,36 (1H, с).

Аналогичным образом был получен 4-метокси-9-ацетил-8(8H), фтор-7,10-дигидро-6,9,11-тригидрокси-5,12-нафтацендион ((IX), R₁ = OCH₃).

Пример V 9-Ацетил-8(8H)-фтор-10-гидро-6,7(7H), 9,11-тетрагидрокси- 5,12-нафтацендион ((II), R₁ = H).

К находящейся в колбе, снабженной устройством Дина-Старка, суспензии 9-ацетил-8(8H)-фтор-7,10-дигидро-6,9,11-тригидрокси- 5,12-нафтацендиона (1,2 г, 3,3 ммоль), полученного в соответствии с примером IV, в безводном бензоле (200 мл) добавляли этиленгликоль (5 мл) и каталитическое количество паратолуолсульфоновой кислоты (60 мг, 0,3 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником при 120^oC в течение 15 часов. Карбонильную функциональную группу в положении 13 защищали путем кетализации (ацетализации). По окончании реакции повышали температуру до комнатной с выпадением в осадок продукта, который собирали и промывали водой.

Полученный продукт бромировали в положении 7 с PHPP и AlB в CCl₄ путем нагревания с обратным холодильником при 120^oC в потоке NH₂ в течение 8 часов. Температуру реакционной смеси доводили до комнатной, отфильтровывали осадок и раствор выпаривали. Остаток гидролизовали с трифторуксусной кислотой (240 мл) и водой (60 мл) путем нагревания с обратным холодильником в течение 1 часа. Температуру доводили до комнатной, а затем снижали до 7^oC. Выпавший в осадок продукт промывали водой и высушивали. В результате получили смесь эпимеров в положении 7 (а = 70%, b = 30%). Целевой эпимер выделяли путем ВЭЖХ с получением указанного в заголовке продукта (312 мг, выход 24%).

ЯМР (CDCl₃, ): 2,50 (3H, с); 3,1-3,4 (2H, м); 3,85 (1H, д); 4,82 (1H, с); 5,04-5,22 (1H, кв); 5,50 (1H, м); 7,85 (2H, м); 8,40 (2H, м); 13,28 (1H, с); 14,54 (1H, с).

Аналогичным образом был получен 4-метокси-9-ацетил-8(8H)- фтор-10-гидро-6,7(7H),9,11-тетрагидрокси-5,12-нафтацендион ((II), R₁ = OCH₃).

Пример VI Защищенный 4-деметокси-8(R)-фтордаунорубицин (IV, R = R₁ = H, R₇ = NHCO₂CH₂CH=CH₂, R₈ = p-CO-C₆-H₄-NO₂) К раствору 9-ацетил-8(8H)-фтор-10-гидро-6,7(7H), 9,11- тетрагидрокси-5,12-нафтацендиона (77 мг, 0,2 ммоль), полученного в соответствии с примером V, и защищенного дауносамина ((III), X = R₈ = OCOC₆H₄NO₂; R₇ = NHCO₂CH₂CH= CH₂) (127 мг, 0,24 ммоль) в безводном метиленхлориде (40 мл) и безводном диэтиловом эфире (10 мл) добавляли молекулярные сита 4 ангстрем (1,2 г). К этому раствору, который держали при -10^oC под струей безводного азота, добавляли триметилсилилтрифлат (107 мг, 0,48 ммоль). Реакцию проводили при -10^oC в течение 30 минут. Раствор обрабатывали раствором NaHCO₃, органическую фазу экстрагировали, сушили на Na₂SO₄ и выпаривали. Полученный при этом неочищенный продукт очищали путем флэш-хроматографии (CHCl₃ + 1% iPrOH). Получили 61 мг (выход 40%) указанного в заголовке соединения.

ЯМР (CDCl₃, ): 1,2 (3H, д); 2,0 (2H, м); 2,5 (3H, д); 3,1-3,5 (2H, кв); 4,2-4,7 (5H, м); 5,0-5,3 (3H, м); 5,4-5,6 (2H, м); 5,8 (1H, с); 5,9 (1H, м); 7,8 (2H, м); 8,3 (6H, м); 13,7 (1H, с); 13,2 (1H, с).

Аналогичным образом был получен защищенный 8-(R)-фтордаунорубицин (IV, R = H, R₁ = OCH₃, R₇ = NHCO₂CH₂CH=CH₂, R₈ = p-CO-C₆H₄-NO₂).

Пример VII 4-Деметокси-8-(R)-фтордаунорубицингидрохлорид ((I), R = R₁ = H; R₂ = NH₂ HCl, R₃ = OH) Продукт, описанный в примере VI, необходимо подвергнуть двум реакциям удаления защиты для преобразования в соответствующее соединение 1.

Полученный в примере VI продукт (61 мг, 0,08 ммоль) суспендировали в смеси MeOH/H₂O и обрабатывали 0,5 М раствором K₂CO₃ для снятия защиты с гидроксигруппы в положении 4¹.

Полученный продукт обрабатывали Ph₃P, Тетракисом, 2-метилмасляной кислотой в CH₂Cl₂ в безводных условиях, в темноте и при комнатной температуре и после снятия защиты с аминогруппы в положении 3' получили целевое соединение (32 мг, 75%).

Солеобразование путем обработки этого соединения 0,01 н. раствором HCl дало указанное в заголовке соединение.

ЯМР (CDCl₃, ): 1,3 (3H, д); 2,0-2,2 (2H, м); 2,5 (3H, с); 3,2-3,4 (2H, м); 3,6-3,8 (2H, м); 4,4-4,5 (1H, м); 5,2-5,4 (1H, м); 5,5 (1H, м); 5,5 (1H, м); 5,7 (1H, м); 8,0 (2H, с); 8,4 (2H, с).

Аналогичным образом был получен 8-(R)-фтордаунорубицингидрохлорид (1, R = H; R₁ = OCH₃; R₂ = NH₂ HCl; R₃ = OH).

Приложение 1 Сравнительные испытания Противоопухолевую активность in vitro (см. табл.1) следующих соединений: Ia: 4-деметокси-8-(R)-фтордаунорубицина гидрохлорид (соединение формулы I, где: R = R₁ = H, R₂ = NH₂, R₃ = OH) Ib: 4-деметокси-8-(R)-фтор-3'-дезамино-4'-дезокси-4'- эпиаминодаунорубицина гидрохлорид (соединение формулы I, где: R = R₁ = R₂ = H, R₃ = NH₂), испытывали в отношении нескольких линий клеток в сравнении с соответствующими 8-(S)-фтор-аналогами: Ic: 4-деметокси-8-(S)-фтордаунорубицина гидрохлоридом, Id: 4-деметокси-8-(S)-фтор-3'-дезамино-4'-дезокси-4'- эпиаминодаунорубицина гидрохлоридом.

Использовали следующие линии опухолевых клеток человека, как DXR-чувствительные, так и DXR-устойчивые: A431 (плоскоклеточная карцинома шейки матки), H460 (крупноклеточная карцинома легкого), A2780 (карцинома яичников) и A2780/DX, MCF7 (карцинома молочной железы) и MCF7/DX, LoVo (аденокарцинома толстой кишки) и LoVo/DX Обратите внимание, что DXR обозначает доксорубицин, а клеточные линии DXR-устойчивые обозначены с помощью .../DX.

8(R)-фтор-производные Ia и Ib более цитотоксичны в отношении испытываемых клеточных линий, чем 8(S)-соединения, Ic и Id. Кроме того эта повышенная цитотоксичность еще более значительно выражена, если мы рассматриваем активность этих соединений в отношении соответствующих DXR-устойчивых опухолей.

Подобные результаты показывают прямую корреляцию между стереохимией фтора в положении C-8 агликона и цитотоксической активностью.

Приложение 2 Анализ и определение транс- и цис-8,9-фторгидриновой системы Относительную ориентацию атома фтора в отношении гидроксильных групп у C(7) и C(9) определяли, используя эксперименты с ядерным эффектом Оверхаузера (Nuclear Overhouser Effect (NOE)).

В случае агликона II, имеющего цис-8,9-фторгидриновую систему, облучение H-8 не приводило к усилению сигналов для гидроксильных водородов (OH-7 и OH-9), указывая на то, что в этом соединении протон H-8 был на противоположной стороне кольца А по отношению к двум гидроксильным группам.

С другой стороны, для агликона, имеющего транс-8,9-фторгидриновую систему, облучение H-8 давало усиление сигналов для OH-7 и OH-9, показывая, что все три из этих протонов находятся на той же самой стороне кольца А.

Все эти аргументы изложены также в статье одного из авторов изобретения (см. Lombardi P. et al., Acta Biochemica Polonica, 42, 433, 1995).

Приложение 3 Фармацевтические композиции Лиофилизованные лекарственные формы соединения Ia, 4-деметокси-8-(R)-фтордаунорубицина гидрохлорида [(I) R = R₁ = H; R₂ = NH₂; R₃ = OH; в виде соли с HCl] получали по методике, изложенной ниже.

Относительные количества различных компонентов (на флакон), взятые для приготовления формы: Соединение Ia - 10,00 мг Лактоза - 50,00 мг Вода для инъекций, достаточное количество - (q.s.) до 2,50 мл.

Соединение Ia и лактозу последовательно растворяли при перемешивании в воде для инъекций и деаэрировали пропусканием азота (примерно 90% от необходимого конечного объема воды). Затем добавляли деаэрированную воду для инъекций до получения конечного объема. В каждый флакон вставляли стерильные пробки для лиофильной сушки и флаконы загружали в аппарат для лиофильной сушки при комнатной температуре.

Раствор в сосудах замораживали при температуре -40^oC в течение 4-5 часов.

Проводили лиофилизацию, высушивая продукт на конечной стадии при температуре 43-45^oC в течение 6 - 7 часов. В завершение цикла сосуды закупоривали пневматически при пониженном давлении и закрывали алюминиевыми колпачками.

По аналогичной методике получали лиофилизованные лекарственные формы соединения Ia, содержащие 50 мг активного вещества: Соединение Ia - 50,00 мг Лактоза - 250,00 мг Вода для инъекций - q.s. до 5,0 мл.

Лиофильную сушку проводили в аппарате (тип 1, Aluglas В.V., Uithoorn, Нидерланды), имеющем номинальную производительность 50/57 мл.

Приложение 4 Биологическая активность Активность in vivo соединения Ia, 4-деметокси-8-(R)-фтордаунорубицина гидрохлорида [(I) R = R₁ = H; R₂ = NH₂; R₃ = OH; в виде соли с HCl].

Противоопухолевая активность in vivo Противоопухолевую активность соединения Ia изучали в отношении человеческих опухолей А-2780 (яичников) и А- 431 (шейка матки) пересаженных голым мышам.

Исследования по эффективности: для оценки реакции опухоли на соединение Ia его активность in vivo определяли при дозе 1,5 мг/кг при режиме введения 7дх3, чтобы оптимизировать противоопухолевую активность, принимая во внимание зависимость цитотоксического эффекта в экспериментах in vitro в клеточной культуре от времени экспозиции. В качестве лекарственного препарата для сравнения использовали доксорубицин (ДКР), применяя его в дозе (7 мг/кг) и при схеме введения (7дх3), который, как было установлено, является оптимальным режимом дозирования.

Материалы и методы Для исследований in vivo линии человеческих опухолевых клеток поддерживали с помощью серийных подкожных (п/к) пассажей фрагментов опухолей с двух сторон у взрослых бестимусных голых мышей. Регулярно производили проверку фрагментов опухоли человеческого происхождения с помощью гистологического исследования после окрашивания гематоксилином и эозином и с помощью картины электрофореза лактатдегидрогеназных изоферментов.

Бестимусным мышам (Charles River, Caico, Italy) п/к вводили фрагменты опухоли с обеих сторон (исследования эффективности) или с одной стороны (сравнительные контрольные исследования). За ростом опухолей следили путем измерений с помощью микрометра длины и ширины в определенные сроки (еженедельно или дважды в неделю). Вес опухоли (ВО) рассчитывали, используя формулу: мг = объем в мм³ = ширина² длина/2 (принимая плотность = 1), через 7/8 дней после последнего введения лекарства. Время увеличения опухоли вдвое (ВДУ) рассчитывали для каждой линии опухоли по кривой с наилучшей аппроксимацией на полулогарифмической сетке для каждой контрольной опухоли, построенной по отношению к уровню выравнивания (экспоненциальная фаза роста). В исследованиях использовали средние значения ВДУ.

Мышам, имеющим опухоли, вводили внутривенно (в/в) лекарственные средства, начиная в разные сроки при разных опухолях. Дни первой и последней инъекции были одинаковыми для двух лекарственных препаратов во всех экспериментах. Каждая экспериментальная группа состояла из, по меньшей мере, пяти опухолей.

Оценивали следующие эффекты, достигнутые с помощью лечения лекарственными препаратами: Снижение веса опухоли, % (% СВО): у мышей, получавших лечение, по сравнению с контрольными мышами, определенное через 7-10 дней после последнего введения лекарства.

Log гибели клеток (LГK) у получающих лечение мышей по формуле: (Л-К/ВДУ 3,32, где Л и К представляют количество дней, потребовавшееся у лечившихся (Л) и контрольных (К) животных для того, чтобы опухоли достигли среднего веса, точно определенного в каждом эксперименте.

Гибель от интоксикации: число умерших мышей, у которых выявлена не измеряемая масса опухоли, или мыши умерли до первой смерти в контрольной группе.

Результаты Модели карцином А-2780 (яичников) и А-431 (шейки матки), взятых от не получавшего лечения больного использовали в испытании из-за их устойчивости к доксорубицину (ДКР) и идарубицину (ИДА). В отношении этих опухолей % СВО и LГK, достигнутые с помощью использования соединения Ia, были всегда значительно превосходившими значения, полученные после лечения ДКР и ИДА (табл.2).

Формула изобретения

1. Гликозидные производные 8-фторантрациклинона формулы I где R = H, R₁ = H, OCH₃, R₂ = H, NH₂, R₃ = OH, NH₂; символ означает, что заместители R₂, R₃ могут находиться в осевой или экваториальной конфигурации; и группы 8-F и 9-ОН находятся в положении цис, или их фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединения по п.1, представляющие собой 4-деметокси-8-(R)-фтордаунорубицин, 4-деметокси-8-(R)-фтор-3'-дезамино - 4' - дезокси- 4' - эпиаминодаунорубицин, 8- (R) -фтордаунорубицин.

3. 8-Фторантрациклиноны формулы II где R₁ = H, OCH₃ и группы 8-F и 9-ОН имеют относительную стереохимию цис.

4. Способ получения соединений формулы II по п.3, согласно которому бромфторируют аллиловый спирт формулы V с получением соединения формулы VI которое путем обработки основанием преобразуют в эпоксид формулы VII который путем обработки кислотами в водном растворе преобразуют в соответствующий диол формулы VIII который окисляют во фторгидроксикетон формулы IX который, наконец, бромируют и подвергают сольволизу в положении 7 традиционными агнетами с получением агликона II.

5. Фармацевтическая композиция для ингибирования клеток опухоли, включающая активное начало в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем, отличающаяся тем, что в качестве активного начала она содержит соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль по п.1 в терапевтически активном количестве.

6. Способ ингибирования клеток опухоли, согласно которому больному вводят фармацевтически приемлемые количества соединения формулы I по п.1.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3